Détection de promoteur hyperméthylation de l'île CpG de E-cadhérine dans l'estomac de détection de adenocarcinoma

cardiaque du promoteur hyperméthylation de l'île CpG de E-cadhérine dans l'adénocarcinome gastrique cardiaque
Résumé
But
hypermethylation anormale des îlots CpG associés à les gènes suppresseurs de tumeur peut conduire à une répression transcriptionnelle dans la néoplasie. Le but de cette étude était d'étudier la méthylation du promoteur et l'expression du gène E-cadhérine dans l'adénocarcinome gastrique cardiaque (GCA).
Méthodes
Une approche MSP imbriquée, la méthode d'immunohistochimie et de RT-PCR ont été utilisés respectivement pour examiner la l'état de méthylation de l'îlot 5 'CpG de la E-cadhérine, l'expression de la protéine et l'expression de l'ARNm dans les tumeurs et les tissus normaux correspondants.: Résultats
E-cadhérine a été méthylés dans 63 des 92 (68,5%) échantillons de tumeur, qui était significativement plus élevé que dans les tissus normaux (P < 0,001) correspondant. les fréquences de méthylation de stade III et IV tissus tumoraux a été significativement plus élevée que dans la phase I et de tissus tumoraux II (p = 0,01). le statut de méthylation du groupe pauvre de différenciation était significativement plus élevé que les groupes de différenciation modérés et pauvres modérés (P < 0,01). Par immunocoloration 51 de 92 tisssues tumorales démontré hétérogène, immunocoloration positive des tissus tumoraux (44,6%), significativement différents de tissus normaux appariés (P < 0,001). immunomarquage positif de stade III et IV tissus tumoraux a été significativement plus faible que la phase I et de tissus tumoraux II (P < 0,01). Pauvre groupe de différenciation était également significativement plus faible que les groupes de différenciation modérés et pauvres modérés (P < 0,05). 80 pour cent des tissus tumoraux avec un gène de la E-cadhérine méthylé a montré une expression de l'ARNm inactivée. De Conclusions
état haut de méthylation de l'îlot 5 'CpG du gène de la E-cadhérine peut être l'un des mécanismes dans le développement de l'adénocarcinome cardiaque gastrique .
Mots-clés
E-cadhérine méthylation gastrique adénocarcinome cardiaque Présentation
E-cadhérine est un M r 120.000 glycoprotéine transmembranaire exprimée sur les cellules épithéliales et est responsable de homophile, Ca 2 + -dépendante adhésion intercellulaire qui est essentielle pour le maintien de l'architecture tissulaire normale dans les tissus épithéliaux [1]. Le domaine cytoplasmique de la E-cadhérine se lie à l'a-, β-, et le y-caténines, qui sont à leur tour liés à des actines, et cette interaction est essentielle pour sa fonction [2]. interactions cellule-cellule et cellule-matrice sont fondamentalement impliqués dans la transformation néoplasique et la métastase [3, 4]. l'adhésion cellulaire défectueuse peut contribuer à une perte de contact avec l'inhibition de la croissance et de la perte d'adhérence des cellules peut expliquer la capacité des cellules cancéreuses à traverser les limites des tissus normaux et des métastases [5]. L'importance de la E-cadhérine dans le maintien de l'adhésion cellulaire implique que son dysfonctionnement peut jouer un rôle important dans la tumorigenèse. Perte d'expression de la E-cadhérine se produit dans une variété de tumeurs humaines et est supposée être une étape importante dans la progression de la formation des tumeurs et des métastases à l'invasion [6].
Ces dernières années, il existe plusieurs études sur le rôle crucial de E-cadhérine dans la tumorigenèse. Il a été montré que des mutations de la lignée germinale du gène de la E-cadhérine est en relation avec gastrique familiale et le cancer colorectal [7, 8]. En outre, les mutations somatiques de la E-cadhérine ont également été trouvées dans le cancer gastrique et une perte allélique du locus de la E-cadhérine à 16q22.1 a été rapporté dans plusieurs tumeurs épithéliales telles que le sein, de l'ovaire, de l'endomètre, de la prostate et les cancers [9, 10] . A part cette modification génétique, la modification épigénétique comprennent une hyperméthylation de la région 5 'îlot CpG dans le promoteur de la E-cadhérine est également responsable de la répression de la transcription du gène [11]. Il est connu que l'hyperméthylation anormale des îlots CpG associés aux gènes suppresseurs de tumeur peut conduire à une répression transcriptionnelle dans la néoplasie [12]. En effet, le silençage de méthylation associés à la E-cadhérine représente la cause la plus courante pour son inactivation dans plusieurs cancers tels que le foie, de la prostate, du sein et de l'œsophage [13-15].
Adénocarcinome gastrique cardiaque (GCA), qui était auparavant enregistré comme cancer de l'œsophage ou de cancer de l'estomac, a été diagnostiqué de façon indépendante dans les toutes dernières années, en raison de l'amélioration du dépistage endoscopique précoce et le diagnostic pathologique. La Chine est un pays avec des régions à forte incidence de GCA, en particulier dans Taihang montagne de la Chine du Nord. Les facteurs exogènes, y compris la carence en nutrition, les habitudes de vie malsaines, la consommation d'alcool et de tabac, les infections pathogènes sont généralement considérés comme des facteurs de risque pour le développement de GCA en Chine [16-18]. Toutefois, seul un sous-ensemble des personnes exposées à des facteurs de risque exogènes énumérés ci-dessus se développerait GCA, ce qui suggère que les événements génétiques et épigénétiques multiples peut contribuer à la progression de la GCA. Il est maintenant de plus en plus reconnu que le silençage épigénétique de l'expression génique par le promoteur CpG hyperméthylation est un autre mécanisme important dans inactivant les gènes suppresseurs de tumeur et les gènes associés à des tumeurs dans les cancers [19]. Des mutations du gène E-cadhérine sont rares en GCA, donc, dans cette étude, nous avons évalué le rôle de la méthylation de l'île 5 'CpG de E-cadhérine et sa corrélation avec l'expression réduite E-cadhérine dans GCA.
Méthodes
patients et spécimens
tumeur et les échantillons de tissus normaux appariés ont été obtenus à partir de 92 patients. Ces tissus ont été divisés en deux parties parallèles, une partie a été congelé et stocké à -80 ° C jusqu'à ce que l'ARN a été extrait, l'autre partie a été fixé au formol et inclus en paraffine. Les cas étaient tous les patients hospitalisés pour un traitement chirurgical dans le quatrième hôpital affilié de l'Université médicale de Hebei entre le typage de la tumeur histologiques 2004 et 2006. a été réalisée sur la base des échantillons réséqués dans le département de pathologie du même hôpital. Tous les cancers gastriques cardiaques étaient des adénocarcinomes avec leurs epicentres à la jonction gastro-oesophagienne, à savoir de 1 cm au-dessus de jusqu'à 2 cm au-dessous de la jonction entre l'extrémité tubulaire de l'oesophage et le début de l'estomac sacculaire [20]. Information sur la classification TNM était disponible à partir d'enregistrements de l'hôpital et le diagnostic pathologique. L'étude a été approuvée par le Comité d'éthique de l'Institut du cancer du Hebei et le consentement éclairé a été obtenu à partir de tous les sujets recrutés
. Méthylation polymerase chain reaction spécifique (MSP) pour E-cadhérine méthylation du promoteur
ADN génomique à partir des adénocarcinomes gastriques cardiaques et adjacente des sections non malignes ont été isolées à partir de lames de tissu inclus dans la paraffine par des procédés standard en utilisant un procédé de digestion de proteinase K simplifiée. Pour examiner les modèles de méthylation d'ADN, on a traité l'ADN génomique avec du bisulfite de sodium, comme décrit précédemment [21]. En bref, 2 pg d'ADN ont été dénaturés avec du NaOH 2 M à 37 ° C pendant 10 minutes, suivie d'une incubation avec 3 M bisulfite de sodium, pH 5,0, à 50 ° C pendant 16 heures. Bisulfite traitée a ensuite été purifié l'ADN (Kit de nettoyage d'ADN; Promega, Madison, Wisconsin, États-Unis), incubées avec NaOH 3 M à la température ambiante pendant cinq minutes, précipité avec 10 M d'acétate d'ammonium et 100% d'éthanol, lavé à l'éthanol à 70%, et remises en suspension dans 20 pi d'eau distillée.
Une approche imbriquée PCR a été utilisée pour déterminer l'état de méthylation au sein de l'E-cadhérine îlot CpG dans l'exon 1 (séquence -126 pb à +144 pb par rapport à début de la transcription, numéro d'accès GenBank D49685 ) qui a été publié précédemment [15]. Dans le premier tour de PCR, 100 ng d'ADN traité au bisulfite ont été amplifiés. Les amorces de séquençage étaient 5'-GTTTA GTTTTGGGGAGGGGTT-3 '(sens) et 5'-ACTAC TACTCCAAAAACCCATAACTAA-3' (anti-sens) ainsi que les conditions de cyclage étaient un cycle de 95 ° C pendant 5 min, suivie de 30 cycles de 95 ° C pendant 30 s, 50 ° C pendant 30 s, 72 ° C pendant 30 s et une extension finale à 72 ° C pendant 5 min. La taille du produit après la première réaction de PCR était de 270 pb. Pour le second tour de PCR, ce produit a été dilué à 1: 50 dans l'eau, et 2 ul de la dilution ont été utilisées pour MSP. des séquences d'amorces nichées pour E-cadhérine pour la réaction méthylée 5'-TG ont été TAGTTACGTATTTATTTTTAGTGGCGTC-3 '(sens) et 5'-CGAATACGATCGAATCGAACCG-3' (anti-sens) et des séquences d'amorces pour la réaction étaient 5'-méthylée TGGTTGTAGTTATGTATTTATT TTTAGTGGTGTT-3 '(sens) et 5'-ACACCAAATA CAATCAAATCAAACCAAA-3' (anti-sens). les paramètres de la PCR étaient comme indiqué ci-dessus, sauf que les températures d'annelage pour les réactions méthylées et non méthylées ont été 64 ° C et 62 ° C, respectivement. Les tailles des produits des réactions méthylées et non méthylées ont été de 112 et 120 pb, respectivement. La lignée cellulaire de cancer du sein MDA-MB-231, ce qui démontre la méthylation et le silençage de l'E-cadhérine et de réactifs blancs ont été utilisés comme témoins positifs et négatifs. Le plus immunohistochimique pour la E-cadhérine
expression de la E-cadhérine a été déterminée par immunocoloration en utilisant la méthode à l'immunoperoxydase complexe avidine-biotine, qui a été effectuée sur des coupes histopathologiques parallèles de la section de tumeur inclus dans la paraffine et les tissus normaux appariés. La peroxydase endogène a été bloquée avec 3% de peroxyde d'hydrogène pendant 10 minutes, suivie d'une récupération de l'antigène à micro-ondes pendant neuf minutes à 98 ° C en mM de tampon citrate de sodium 10 (pH 6,0) et incubées dans 2% de sérum de cheval normal pour minimiser la liaison non spécifique. Les lames ont été séquentiellement incubées avec un anticorps monoclonal primaire, un anticorps de souris anti-E-cadhérine (dilution 1: 100 dans du tampon phosphate salin, Santa Cruz, sc-8426) pendant une nuit à 4 ° C, un anticorps secondaire biotinylé pendant 30 min à 37 ° C et réactif ABC pendant 45 min à 37 ° C. 0,5% 3,3'-diaminobenzidine (Sigma, St Louis, MO) a été utilisé comme chromogène. Pour un témoin négatif, l'anticorps primaire a été remplacé par de l'IgG de souris. Diapositives avec la muqueuse gastrique normale ont été utilisés comme un contrôle positif.
Mesure de l'expression de l'ARNm de la E-cadhérine
ARN a été extrait des tissus de section congelés par des méthodes standard en utilisant Trizol (Invitrogen, USA). L'ADNc a été synthétisé en utilisant l'avantage RT-pour-PCR kit (Clontech, Palo Alto, CA) avec oligo (dT) amorçage tel que recommandé dans le protocole fourni. Le gène de GAPDH a été utilisée comme témoin. Les séquences d'amorce de la E-cadhérine étaient 5 ° ‰ -CGACCCAACC CAAGAATCTA-3 ° ‰ (sens) et 5 ° ‰ -AATGGCAG GAATTTGCAATC-3 ° ‰ (antisens), la séquence primaire de GAPDH était 5 ° ‰ -GGGAAACTGTGGCGT GAT-3 ° ‰ (sens) et 5 ° ‰ -GTGGTCGTTGAGGG CAAT-3 ° ‰ (antisens), la taille du produit étaient 202 pb et 342 pb, respectivement. Les produits de PCR ont été résolus sur des gels à 2% d'agarose et les intensités de signaux ont été quantifiés en utilisant un système d'imagerie informatique. Les niveaux de transcrits de gènes ont été quantifiés comme le rapport de l'intensité du signal E-cadhérine à l'intensité de la β-actine. expression inactivé a été marqué lorsque l'expression d'un gène E-cadhérine dans l'échantillon de la tumeur était < 25% de son expression dans l'échantillon normal correspondant.
Analyse statistique
analyse statistique a été effectuée à l'aide du progiciel de SPSS10.0 (SPSS Company, Chicago, Illinois, États-Unis). test exact de Fisher et le test du chi carré ont été utilisés pour évaluer la signification statistique des différences et de comparer les associations catégorielles. Résultats Deux faces des tests ont été utilisés pour déterminer la signification, et P des valeurs inférieures à 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives pour tous les tests statistiques.
caractéristiques Sujet
Comme le montre le tableau 1, 92 patients ont été obtenus dans GCA cette recherche, dont 73 hommes et 19 femmes, l'âge variait de 38 ~ 76, 56,9 âge moyen. Tous les cas ont été classés en 4 tumeur-node-métastases (TNM) stades selon la norme UICC, 8 de la phase I (8,7%), 32 de la phase II (34,8%), 38 de stade III (41,3%), 14 de stade IV (15,2%). Selon les phases pathologiques, les cas ont été classés en 3 groupes, 42 (45,7%) du groupe modéré, 34 (36,9%) du groupe pauvre modéré et 16 (17,4%) des pauvres group.Table 1 caractéristiques cliniques et pathologiques de patients GCA

n
Groupes (%)
Sexe Homme
73 (79,3)
Femme
19 (20,7 )
moyen âge en années (SD)
56,9 (8,86)
stade TNM
I
8 (8.7)
II
32 (34,8)
III
38 (41,3)
14 (15.2)
pathologique la différenciation IV de la tumeur
modérée
42 (45,7)
pauvre modéré
34 (36,9)
pauvres
16 (17.4)
L'analyse de méthylation du gène E-cadhérine
L'analyse de méthylation a été réalisée avec succès dans toutes les tumeurs et appariés échantillons de tissus normaux (Figure 1). 10% des échantillons, l'analyse de la méthylation a été répétée pour le contrôle de la qualité. Dans 63 (68,5%) de 92 GCA tumeurs E-cadhérine méthylation a été détectée, tandis que dans 10 (10,9%) des tissus normaux appariés E-cadhérine méthylation a été détectée. La fréquence de la E-cadhérine méthylation des tissus de tumeur était significativement plus élevée que les tissus normaux appariés (P < 0,001). Lorsque stratifié pour les stades TNM, fréquence de méthylation du gène E-cadhérine des patients GCA de stade III et de stade IV (78,8%) étaient significativement plus élevés que les patients GCA avec les stades I et II (55%) (χ2 = 5,96, P = 0,01 ). Après stratification pour les stades pathologiques, les E-cadhérine fréquences de méthylation des gènes du groupe modéré, faible à modéré et les pauvres étaient de 52,4%, 73,5% et 100%, la fréquence de la E-cadhérine gène méthylation du groupe pauvre significativement plus élevé que modérée et pauvres groupes -moderate (χ2 = 8,92; P = 0,003) (tableau 2). Figure 1 L'analyse de méthylation de la E-cadhérine dans le tissu tumoral (T) et de tissu normal (N) correspondante. u: indique la présence de gènes non méthylés; m: indique la présence de gènes méthylés. Cas 1 et 2: méthylation tumeur spécifique; Cas 3: la tumeur est entièrement méthylé, alors que le tissu normal correspondant a une très faible bande montrant la méthylation; Cas 4: à la fois de la tumeur et des tissus non méthylé
Table normale 2 E-cadhérine méthylation correspondant et les caractéristiques de coloration immunohistochimique des patients GCA
<. col> Groupe
état de méthylation
P
coloration immunohistochimique
P
M
U
-
+
stade TNM
I 4
4 2
6
II
18
14
13
9
III
29
9
26
12
IV
12 2
0.015a
10 4
0.002a
la différenciation pathologique de la tumeur
modérée
22
20
20 2
pauvres modéré
25
9
18
16
pauvres
16
0
13 3
de 0.022b 0.003b de
une valeur P de stade III et IV patients contre stade I et II, les patients, b valeur de P pauvres un groupe de différenciation contre immunocoloration des groupes modérés et pauvres-modérés de la E-cadhérine gène
Comme le montre le tableau 2, la coloration est hétérogène dans les tissus tumoraux 51, les cellules tumorales avec une diminution membraneuse coloration E-cadhérine ont été mélangées avec des cellules tumorales montrant une forte coloration membraneuse (Figure 2). Fréquence de l'expression de la protéine était de 44,6% dans les tissus tumoraux, alors que les échantillons de tissus normaux appariés ont tous montré une forte coloration diffuse E-cadhérine membraneuse. Fréquence de l'expression de la protéine était significativement différente entre la tumeur et les tissus normaux appariés (P < 0,001). Lorsque stratifié pour les stades TNM, Fréquence de la E-cadhérine protéine du gène expression de stade III et les tissus tumoraux IV (30,8%) était significativement inférieur à celui de la phase I et les tissus II de tumeur (62,5%) (χ2 = 9,21, P = 0,002) . Fréquence de la E-cadhérine protéine du gène expression du groupe pauvre nettement inférieur à celui des groupes modérés et pauvres modérée (χ2 = 5,23, P = 0,022). Figure 2 E-cadhérine immunocoloration dans les tissus GCA. A: coloration positive (tissu normal). B:. Coloration négative (tissu GCA) expression de l'ARNm
pour les niveaux de la E-cadhérine gène de la transcription ont été déterminés dans les 32 échantillons sélectionnés GCA congelés par analyse RT-PCR (Figure 3). Les 32 échantillons GCA dont 2 de la phase I, 2 de la phase II, 8 de stade III et 8 de la phase IV de cas où la tumeur était méthylé et 12 cas (2 de stade I, 4 stades II, 4 de la phase III et 2 de stade IV) avec le gène cadhérine E-méthylé. Un fragment de 202 pb de la transcription du gène E-cadhérine a été produite, avec un fragment GAPDH de 342 pb de la transcription en tant que témoin. 16 (1 de la phase II, 7 de stade III et 8 de stade IV) des cas (80%) de l'expression de l'ARNm inactivé ont été observées dans 20 échantillons de tumeurs avec le gène E-cadhérine méthylé, l'autre 4 (2 de la phase I, 1 stade II, 1 III) cas de stade a montré une expression positive. 12 échantillons de tumeurs avec gène E-cadhérine non méthylé ont tous montré une expression positive du gène E-cadhérine. Figure 3 Analyse de l'ARNm de la E-cadhérine dans les tissus tumoraux. 1: 100 pb marqueur d'ADN 2,4,5,6,9: expression de l'ARNm positif 3,7,8:. Rapport
Chine expression négative de l'ARNm de est un pays à forte incidence du cancer du tube digestif qui, y compris l'œsophage carcinome, cancer de l'estomac et de l'adénocarcinome gastrique cardiaque (GCA). GCA, qui était auparavant enregistré comme cancer de l'œsophage ou de cancer de l'estomac, a été diagnostiqué de façon indépendante dans les toutes dernières années, en raison de l'amélioration du dépistage endoscopique précoce et le diagnostic pathologique. Il a été suggéré par plusieurs données épidémiologiques que l'incidence de GCA est en augmentation ces dernières années. Certaines recherches ont montré que le mécanisme clinique et des symptômes de GCA est différent du cancer de l'estomac, mais similaire au cancer de l'œsophage. Le mécanisme exact de l'apparition de GCA ne sait pas pour le moment. Il est généralement admis que le facteur héréditaire qui irrite l'apparition d'une tumeur comprenant deux mécanismes, la génétique et épigénétique mécanisme. Des anomalies génétiques de proto-oncogènes et gènes suppresseurs de tumeur sont des changements bien connus qui sont fréquemment impliqués dans la pathogenèse du cancer. Cependant, épigénétique inactivation de certains gènes suppresseurs de tumeur par aberrante méthylation du promoteur est fréquemment observé dans plusieurs cancers et peut jouer un rôle central dans la tumorigenèse. Bien que des anomalies génétiques sont associés à des changements dans la séquence d'ADN, les événements épigénétiques peuvent entraîner des changements dans l'expression des gènes qui se produisent sans changements dans la séquence d'ADN. Si les gènes suppresseurs de tumeur sont affectés, il se traduit généralement par silençage transcriptionnel et, par conséquent, l'inactivation de ce gène. Il peut alors conférer des avantages de croissance à ces cellules qui favorisent le développement du cancer [22].
En tant que membre de l'adhérence cellulaire et moléculaire, la E-cadhérine jouer un rôle important dans le maintien de l'adhésion cellulaire et son dysfonctionnement peut entraîner tumorigenesis.6 Le biologique conséquences de son dysfonctionnement comprennent la perturbation de l'adhésion intercellulaire et la dépréciation des transactivation ß-caténine médiée [23]. À ce jour, cependant, les mécanismes de régulation responsables de niveaux modifiés de protéines E-cadhérine dans GCA n'a pas été élucidé. Il a été rapporté que l'hyperméthylation de la E-cadhérine a été associée à un cancer gastrique et un adénocarcinome œsophagien [21, 24]. Cependant, il n'y a pas d'autre rapport au sujet de la relation entre Ecadherin méthylation et la tumorigenèse de GCA. Dans cette étude, nous avons montré que l'hyperméthylation de l'île 5 'CpG du promoteur E-cadhérine est survenue fréquemment dans les tissus GCA (68,5%) et que ce changement de méthylation a été associée à une expression réduite de la protéine E-cadhérine. Nos données suggèrent que le silençage épigénétique du promoteur de la E-cadhérine par l'intermédiaire d'une hyperméthylation peut être l'un des mécanismes essentiels pour l'inactivation de ce gène dans GCA. silençage génique associée à une hyperméthylation est médiée par des protéines méthyliques liaison qui se lient à cytosines méthylés et recrutent un complexe de protéines qui répriment la transcription, y compris les histones désacétylases [25].
Dans notre étude, nous avons constaté que dans la majorité des cas nous avons examiné, la méthylation cadhérine E-tumeur était spécifique. Cependant, 10 cas dans lequel le changement de méthylation était présent à la fois dans la tumeur et les tissus normaux appariés provenant du même patient. Compte tenu de la sensibilité du MSP imbriqué, il est possible que les échantillons d'apparence normale contenaient une cellule rare de cancer qui est indétectable par histomorphologie. En raison de la limitation de l'échantillon, nous n'avons pas étudié la méthylation de la E-cadhérine dans les tissus cardia normaux. Cependant, le tissu oesophagien normale n'a pas montré aberrant E-cadhérine méthylation dans certaines études [21] et dans les études précédentes enquêtes E-cadhérine méthylation dans différents types de tumeurs, les tissus normaux de la moelle osseuse, du sein, de la thyroïde, et la muqueuse buccale étaient non méthylé [ ,,,0],14, 26]. Ces données suggèrent fortement que la E-cadhérine méthylation du promoteur est un événement aberrant. Le fait que nous ne détectons méthylation dans les tissus normaux appariés sur des patients dont la tumeur a également été méthylée correspondante est compatible avec l'hypothèse selon laquelle le cancer chez ces individus est né d'un précurseur clonale méthylé. Dans une étude de la progression néoplasique dans l'oesophage de Barrett, une hyperméthylation du gène p16 suppresseur de tumeur a été détectée dans les échantillons pathologiques d'apparence normale obtenues à partir d'un patient qui a développé plus tard dysplasie [27]. Par conséquent, l'inactivation épigénétique des gènes suppresseurs de tumeur peut être un signe précoce de la tumorigenèse.
Nos résultats ont montré que l'expression de la protéine de Ecadherin dans les tissus tumoraux significativement inférieure à celle dans les tissus normaux appariés, cependant, la coloration immunohistochimique a également montré une coloration membraneuse normale de E -cadherin dans certains échantillons de tumeurs avec E-cadhérine méthylation. Il y a plusieurs raisons possibles pour les événements. Tout d'abord, Cela est probablement dû au fait que la coloration immunohistochimique n'a pas été aussi sensibles que la PCR pour détecter les sous-populations de cellules avec la méthylation des gènes et donc la régulation négative de la E-cadhérine. D'autre part, les tissus tumoraux peuvent se mélanger certains tissus normaux et ont présenté une coloration peuvent membraneuse normal de la E-cadhérine. Troisièmement, le gène méthylation hétérogène ou une méthylation de l'allèle peut être une raison importante. Dans nos études, nous avons constaté que l'état de méthylation des tissus tumoraux que les deux ont montré l'expression de protéine positive et hyperméthylation étaient incomplètes méthylation Ecadherin. En outre, il a été démontré que la méthylation de l'ADN qui supprime l'expression du gène principalement dans le niveau de transcription et la densité des îlots CpG méthylation est liée au degré de suppression de transcription [28]. promoteur Dicky peut être complètement supprimée par la baisse de la méthylation de densité, cependant, lorsque le promoteur a été renforcée par enhanser, fonction de la transcription sera récupérée. Dans notre étude, nous avons aussi trouvé l'expression d'ARNm positif dans certains échantillons de tumeurs avec gène E-cadhérine méthylés. Elle en partie en raison du fait que le degré de méthylation du promoteur a été insufficent pour supprimer la E-cadhérine transcription. Dans l'ensemble, notre étude suggère que le silençage épigénétique du promoteur E-cadhérine via hypermethylation peut être l'un des mécanismes d'inactivation de la E-cadhérine en GCA.
Déclarations
Remerciements
Nous remercions les patients et les sujets témoins pour prendre part à cette étude.
soutenue par des subventions de la fondation de la province du Hebei des sujets distinctifs considérables.

• Signification clinique du système uPA dans le cancer gastrique avec métastases péritonéales
• spécifique du virus de la méthylation des gènes humains dans des cellules de cancer de l'estomac d'Epstein-Barr