Potenciál Deferasirox ako nové terapeutické modality v karcinómu žalúdka

Potenciál Deferasirox ako nové terapeutické modality u rakoviny žalúdka
abstraktné
pozadia
Iron je kľúčovým prvkom pre bunkovú proliferáciu, rast a metabolizmus. Avšak, nadbytok železa a zmenený metabolizmu železa sú spojené so začatím nádorov a rastu nádorov. Deferasirox je ústne chelátor železa. Aj keď niektoré štúdie ukázali, že deferasirox je sľubným kandidátom pre protirakovinových terapií, jeho účinnosť proti rakovine žalúdka nebola stanovená. Táto štúdia bola vykonaná za účelom zistenia, či deferasirox vykazuje protinádorové účinky na žalúdočné rakovinových bunkových línií a či Deferasirox a cisplatiny synergicky.
Metódy
štyri ľudských bunkových línií karcinómu žalúdka (AGS, MKN-28, SNU-484, a SNU-638) boli ošetrené rôznymi koncentráciami Deferasirox pre určenie IC 50 pre každú bunkovú líniu. Účinky na deferasirox bunkového cyklu bola hodnotená prietokovou cytometriou, a účinky Deferasirox na metabolizmus železa, bunkového cyklu a apoptóza bola hodnotená metódou Western blot. Na určenie, či deferasirox zvyšuje účinok cisplatiny, AGS bunky boli kultivované za prítomnosti a neprítomnosti cisplatiny.
Výsledky
Deferasirox inhibuje proliferáciu všetkých žalúdočných nádorových bunkových línií ako je hodnotená testami MTT. Vzhľadom k tomu, IC 50 Deferasirox bola najnižšia (pod 10 uM) v bunkách AGS, následné experimenty boli vykonávané v tomto odbore. Deferasirox upregulován transferinový receptor 1 expresiu a zníženie ferroportin expresie. Okrem toho, deferasirox indukované G1 zatknutie; stimulovaná p21, p27 a p53; a downregulated cyklin D1, cyklin B, a CDK4 expresie. Okrem toho, deferasirox indukovaná apoptóza, up-regulovaná N-myc
po prúde regulovanú génovú 1 (NDRG1), a downregulated p-mTOR a c-myc expresie. Bolo tiež zistené, že pôsobí synergicky s cisplatinou.
Závery
Naše výsledky naznačujú, že deferasirox môže pôsobiť protinádorové účinky v súvislosti s rakovinou žalúdka. Deferasirox ovplyvňuje celý rad rôznych ciest a molekúl; Napríklad, deferasirox upreguluje expresiu NDRG1, inhibuje bunkový cyklus, downreguluje mTOR a c-myc expresie, a indukuje apoptózu. Okrem toho sa zdá, že deferasirox zosilnenie účinku protinádorových cisplatiny. Aj keď je účinnosť Deferasirox zostáva byť testované v ďalších štúdiách, výsledky tu uvedené ukazujú, že deferasirox je sľubná nové protirakovinové terapeutické činidlo.
Kľúčové
Deferasirox žalúdku nádor Cisplatina pozadí
rakovina žalúdka je jedným z z hlavných príčin úmrtí súvisiacich s rakovinou v Kórei [1]. Aj keď pacienti s rakovinou žalúdka vykazujú vynikajúce výsledky, ak je zistená rakovina čoskoro, neuskutočniteľnosť pokročilých a opakujúce sa žalúdočné rakoviny sú stále spojené s chudobnými prežitie. V posledných niekoľkých desaťročiach, podstatné zlepšenie chemoterapeutík zlepšili prežitie liečbu pokročilého karcinómu žalúdka. V poslednej dobe, celkové prežívanie bolo významne predĺžený u pacientov s pokročilým žalúdka alebo pažeráka rakoviny spojovacie HER2 pozitívnou reakciou s trastuzumabom (HER-2) monoklonálna protilátka v kombinácii s bežnou chemoterapiou [2]. Avšak celkové prežívanie bolo len 13,8 mesiaca. Preto sa nové agenti sú naliehavo potrebné.
Železo je základným prvkom pre proliferáciu buniek, rast a metabolizmus. Avšak, nadbytok železa a zmenený metabolizmu železa sú spojené s iniciácii nádoru a rastu nádoru [3]. Epidemiologické štúdie ukázali, že vysoký príjem železa je spojená so zvýšeným rizikom rakoviny hrubého čreva [4]. Mnoho rakovinové bunky mení metabolizmus železa, pretože malígne bunky vyžadujú viac železa, ako normálne bunky. Pre zvýšenie labilná železa bazéna, boli rakovinové bunky bolo preukázané, že spôsobí zvýšenie expresie receptora transferínu 1 (TFR1) a hepcidin, okrem downregulating ferroportin expresie [3].
Deferasirox (Exjade®), čo je orálny tridentátní železa ( fe 3 +) chelatačné činidlo, je rýchlo absorbovaný z čreva a má relatívne dlhý polčas (8-16 h). Tak, podávanie raz denne môže dosiahnuť trvalé plazmatických hladín liekov dostatočné pre vychytávania non-transferínu-viazanej plazmy železa. Aj keď deferasirox je spájaný s niektorými nežiaducimi účinkami, ako sú gastrointestinálne poruchy, kožné vyrážky a renálnej toxicity, je pomerne dobre znáša. Z tohto dôvodu, deferasirox je v súčasnej dobe najčastejšie používa chelátor železa pre liečenie chorôb železa preťaženiu [5].
V poslednej dobe niekoľko štúdií sa zaoberalo potenciál Deferasirox ako anti-neoplastické činidlo. Deferasirox bola označená na inhibíciu NF-kB aktivity v krvných vzorkách od pacientov s myelodysplastickým syndrómom a leukemické bunkové línie [6]; Okrem toho deferasirox Bolo tiež preukázané potláčať mTOR v myeloidných leukemických buniek [7]. Čo sa týka klinických údajov, jeden prípad správa ukázala, že liečba deferasirox dosiahnutá kompletná remisiu u pacientov s chemoterapiou refraktérnou akútnej monocytární leukémia [8]. Okrem toho, post hoc analýza multicentrickej štúdii bolo zistené, že deferasirox zlepšenie hematologických parametrov u pacientov s myelodysplastickým syndrómom [9]. V súčasnej dobe sa väčšina hlásení Deferasirox ako anti-neoplastické činidlo boli v hematologických malignít; len málo štúdií sa zamerala na solídnych nádorov. V poslednej dobe, deferasirox bolo preukázané, že inhibujú rast pľúc a karcinóm pažeráka buniek, a to ako in vitro, tak in vivo [10, 11]. Avšak, účinok Deferasirox na rakovinu žalúdka ešte nebola stanovená, a mechanizmus, ktorým deferasirox uplatňuje svoje protinádorové účinky zostáva zle pochopený. Preto sa táto štúdia bola vykonaná za účelom zistiť, či je deferasirox vykazuje protinádorové účinky na žalúdočné rakovinových bunkových línií, a tiež to, či deferasirox pôsobí synergicky s cisplatinou.
Metódy
bunkovej kultúre
štyri rakovina žalúdka u bunkové línie (AGS, MKN-28, SNU-484 a SNU-638) boli získané z kórejskej bunkovej línie Bank. Všetky bunky boli kultivované v médiu RPMI 1640 obsahujúcom 10% fetálneho hovädzieho séra a antibiotiká (100 U /ml penicilínu a 100 ug /ml streptomycínu), vo zvlhčenej 5% CO 2 inkubátora pri teplote 37 ° C.
činidiel a protilátky
Deferasirox (Exjade®) bol darovaný firmou Novartis (Bazilej, Švajčiarsko). Kozie polyklonálne anti-NDRG1 (N-myc
downstream génu regulovaného 1) (katalóg č. Ab37897) a králičie polyklonálne anti-ferroportin (katalóg č. Ab85370) protilátky boli zakúpené od abca (Cambridge, UK). Anti-TFR1 myší monoklonálne protilátky (katalógové č. 136800) boli získané od spoločnosti Life Technologies (Carlsbad, CA, USA), a FeSO 4 bol zakúpený od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Anti-p53, anti-p27, p21, cyklin A, cyklin B, cyklin D1, cyklin E, CDK2, CDK4, CDK6, c-myc, pre-kaspasy 3 a BAX protilátky boli zakúpené od Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Anti-p-mTOR a pre-kaspasy 8 protilátky boli získané od firmy Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA).
Inhibícia rastu test inhibície rastu
bola meraná MTT (3- [4,5-dimethylthiazol- 2-yl] -2,5-difenyltetrazoliumbromid), ako bolo opísané skôr [12]. V stručnosti, bunky boli schovať (2 x 10 3 buniek /jamku) na 96-jamkové mikrotitračné doštičky (Nunc, Roskilde, Dánsko) a inkubované pri 37 ° C počas 24, 48, alebo 72 hodín. MTT roztok (50 ul) od firmy Sigma (2 mg /ml v PBS) sa pridá do každej jamky a doštičky boli inkubované po dobu ďalších 4 hodín pri teplote 37 ° C. Po tejto inkubácii sa MTT roztok sa odsaje. Na rozpustenie formazánu kryštály v životaschopných buniek, 200 ul dimetylsulfoxidu sa pridá do každej jamky. Doštičky boli trepanie počas 30 minút pri teplote miestnosti, a absorbancia každej jamky pri 595 nm bola okamžite čítať s viacerými okienkami, snímacie spektrofotometra (Bio-Rad, iMarkTM reader).
Pre stanovenie koncentrácie Deferasirox potrebnú na zabíjanie 50% buniek (IC 50), AGS, MKN-28, SNU-484, a SNU-638 bunky boli ošetrené s 0, 1, 10, 50 a 100 uM Deferasirox o 24, 48, a 72 h. Tieto výsledky boli použité pre výber žalúdočné bunkové línie s maximálnou citlivosťou na deferasirox pre všetky následné experimenty.
Bunkového cyklu analýza
Po 24 h inkubácii AGS buniek s 0, 10 a 100 um Deferasirox pri 37 ° C ° C boli bunky dvakrát premyté PBS, fixovali cez noc s 70% etanolom, premytá PBS a farbené 50 ug /ml propidium jodidu (PI), ktorý obsahuje RNase a pri 50 ug /ml. Obsah DNA buniek (10000 buniek /experimentálna skupina) boli analyzované za použitia prietokového cytometra FACSCanto II (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) vybaveného BD FACSDivaTM softvéru (v6.1.3). Percentuálny podiel bunkových populácií v jednotlivých fázach bunkového cyklu (G1, S alebo G2 /M) boli vypočítané z histogramov obsahu DNA.
Western blot analýza
AGS bunky boli inkubované s 0, 10 a 100 uM Deferasirox pri teplote 37 ° C počas 24 hodín. Bunky boli premyté PBS, resuspendované v lyzačním pufri [50 mM Tris (pH 7,5), 1% NP-40, 2 mM EDTA, 10 mM NaCl, 20 ug /ml aprotinínu, 20 ug /ml leupeptinu a 1 mM fenylmethylsulfonyl fluorid], a umiestni sa na ľade počas 20 min. Proteíny v lyzátu (20-30 ug) boli rozdelené na 10 až 15% SDS-polyakrylamidových géloch a prenesené denaturácia na nitrocelulózové membrány na 90-120 minút. Nešpecifické väzbové miesta boli blokované 5% odtučneným mliekom po dobu 1 hodiny, a membrány potom boli inkubované cez noc s primárnymi protilátkami (všetky v riedení 1: 1000). Protilátky a súvisiace procesy, ktoré boli použité na prešetrenie boli nasledovné: anti-TFR1 a anti-ferroportin pre metabolizmus železa; anti-p53, p27, p21, cyklin A, cyklin B, cyklin D1, cyklin E, CDK2, CDK4 a CDK6 pre bunkového cyklu; anti-pre-kaspasy 3, pre-kaspázy 8, pre-kaspázy 9, a Bax pre apoptózu; anti-NDRG1 pre metastázy; a anti-p-mTOR a c-myc. Imunoreaktívnych pásy boli vizualizované pomocou ECL kitu (IntronA, Kórea).
Štatistická analýza
Dáta sú prezentované ako priemer ± SEM (chybové úsečky). Rozdiely boli analyzované pomocou Studentov
testu. P
hodnôt. ≪ 0,05 boli považované za štatisticky významné
Výsledky
Vplyv Deferasirox na rast žalúdočných rakovinových bunkových línií
schopnosť Deferasirox inhibovať rast zo štyroch žalúdočných rakovinových bunkových línií bol sa určí testom MTT proliferačním. AGS, MKN-28, SNU-484, a SNU-638 bunky boli inkubované s 0, 1, 10, 50 a 100 uM Deferasirox pri teplote 37 ° C počas 24, 48, alebo 72 hodín. Deferasirox inhiboval rast všetkých štyroch žalúdočných rakovinové bunkové línie v závislosti od dávky a je závislý na čase (obr. 1a). Vzhľadom k tomu, IC 50 Deferasirox pri 72 hodinách bol najnižší v AGS buniek (menej ako 10 um), všetky nasledujúce experimenty boli vykonávané s použitím týchto buniek. Obr. 1 Inhibičný účinok na rast Deferasirox žalúdočných nádorových bunkových línií. životaschopnosť buniek bola meraná testom MTT. AGS, MKN-28, SNU-484, a SNU-638 bunky boli inkubované s 0, 1, 10, 50 a 100 uM Deferasirox pri teplote 37 ° C počas 24, 48 alebo 72 hodín. Liečba Deferasirox za následok na dávke závislé a časovo závislé inhibícia rastu vo všetkých štyroch žalúdočné nádorových bunkových línií. b AGS bunky boli kultivované s 10 a 20 uM Deferasirox a to buď samotné, alebo v prítomnosti FeSO 4 (100 uM) po dobu 48 hodín. Inhibičný účinok Deferasirox bola obrátená FeSO4 doplnok
AGS bunky boli kultivované s 10 a 20 uM Deferasirox a to buď samotné, alebo v prítomnosti FeSO 4 (100 uM) po dobu 48 hodín. Inhibičný účinok Deferasirox bola obrátená FeSO 4 doplnok (obr. 1b). Analýza
bunkového cyklu v bunkách AGS
vyčerpanie železa indukuje zástavu G1 /S tým, že ovplyvňujú expresiu dôležitých molekúl, progresie bunkového cyklu ako je cyklin D1 a p21 [13]. Účinky na deferasirox bunkového cyklu boli určené pre triedenie buniek aktivované fluorescenciou (FACS-) s použitím propidium jodidu. AGS bunky boli inkubované s 0, 10 a 100 uM Deferasirox pri teplote 37 ° C počas 24 hodín. Ako je znázornené na Obr. 2a, liečba AGS buniek Deferasirox po dobu 24 hodín viedlo k akumulácii buniek vo fáze G1 v spôsobom závislým od dávky (41,8% pri 0 uM, 53,7% pri 10 uM, a 77,2% pri 100 uM). Tento výsledok ukazuje, že deferasirox indukuje zástavu G1. Western blot analýza proteínov bunkového cyklu v súvislosti s ukázali, že deferasirox indukované upregulaci p21, p27, a p53, a down-reguláciu cyklin D1, cyklin B, a CDK4 (obr. 2b). Tieto výsledky ukazujú, že anti-proliferačnej účinok Deferasirox je v dôsledku inhibície bunkového cyklu. Obr. 2 Vplyv Deferasirox na progresiu bunkového cyklu v bunkách AGS. A AGS bunky boli inkubované s 0, 10 a 100 uM Deferasirox pri teplote 37 ° C počas 24 hodín. Progresia bunkového cyklu bola analyzovaná pomocou FACS. Liečba Deferasirox po dobu 24 hodín vedie k akumulácii v závislosti na dávke o AGS bunky v G1 fáze (41,8% v 0 uM, 53,7% pri 10 uM, a 77,2% pri 100 uM). b Western blot analýza molekúl bunkového cyklu v súvislosti s ukázali, že deferasirox up-regulované p21, p27, a p53 a downregulated cyklin D1, cyklin B, a CDK4
Vplyv Deferasirox na metabolizme železa a ďalšie cesty
pre vychytávanie železa do bunky, cirkulujúci železo-transferín komplexy sa viažu na receptor na povrchu buniek TFR1. Iron opúšťa cez ferroportin, žehlička efluxnej pumpy, ktorá sa riadi Hepcidin. V rakovinových bunkách, a TFR1 hepcidin bolo preukázané, že up-regulované a ferroportin je downregulated, ktorý kumulatívne viesť k zvýšeniu koncentrácie intracelulárneho železa [3]. Účinok Deferasirox na metabolizmus železa bola hodnotená pomocou Western blot analýzy TFR1 a ferroportin. Úroveň TFR1 zvýšila po 24 hodinách liečby Deferasirox. Na rozdiel od toho expresie ferroportin znížila (obr. 3a). Tieto výsledky sú v súlade s tými predchádzajúcimi štúdiami [10, 11]. Obr. 3 Vplyv Deferasirox na metabolizmus železa a ďalších ciest. ošetrenie s Deferasirox po dobu 24 h za následok zvýšené hladiny TFR1 a zníženou hladinou ferroportin. b Deferasirox tiež indukovanú apoptózu, up-regulované NDRG1 a downregulated p-mTOR a c-myc ako bolo zistené analýzou Western blot
účinky Deferasirox na apoptózy boli ďalšie hodnotené pomocou FACS a Western blot analýzu proteínov apoptózy súvisiace. Ako je znázornené na Obr. 2a, AGS bunky ošetrené Deferasirox po dobu 24 hodín vykazovali akumuláciu buniek v sub-G1 (apoptotické) fáze (3,2% pri teplote 0 uM, 3,3% pri 10 uM, a 9,5% pri 100 uM). Okrem toho liečba deferasirox znížil expresiu pre-kaspázy 3, pre-kaspázy 8, a pre-kaspázy 9 a zvýšila expresiu BAX (obr. 3b). NDRG1 je známe, že pre potlačenie bunkového rastu a metastáz. Deferasirox zvýšila úroveň NDRG1. Okrem toho, c-myc a fosfo-mTOR expresie boli znížené po 24 hodinách liečby Deferasirox (viď obr. 3b). Tieto výsledky naznačujú, že deferasirox indukuje apoptózu, inhibuje vzdialenej metastázy, a potláča c-myc a mTOR dráhy.
Synergický efekt Deferasirox a cisplatiny
Aby bolo možné posúdiť, či deferasirox by mohla zvýšiť účinok cisplatiny, AGS bunky boli kultivované s alebo bez cisplatiny a ich životaschopnosť bola stanovená použitím testu MTT. Liečba cisplatinou počas 48 h znížil počet životaschopných buniek s IC 50 5-10 uM. Na určenie, či deferasirox vykazuje synergický účinok s cisplatinou, AGS bunky boli ošetrené s 0, 2,5, 5, 10, a 20 uM Deferasirox a to buď samotné, alebo v prítomnosti stálej koncentrácie cisplatiny (5 uM) po dobu 48 hodín. Ako je znázornené na Obr. 4a, b, AGS bunky ošetrené Deferasirox a cisplatinou vykazovali významne väčší pokles v bunkovej životaschopnosti v porovnaní s bunkami ošetrenými buď deferasirox alebo cisplatinou samotnou (P Hotel &0,01). Tieto výsledky naznačujú, že deferasirox zvyšuje cisplatinu sprostredkovanú inhibíciu bunkového rastu AGS. Obr. 4 Synergický efekt Deferasirox a cisplatiny. a, b AGS bunky boli ošetrené s 0, 2,5, 5, 10, a 20 uM Deferasirox, a to buď samostatne, alebo v prítomnosti stálej koncentrácie cisplatiny (5 uM) po dobu 48 hodín. AGS bunky ošetrené Deferasirox a cisplatinou vykazovali výrazný pokles v bunkovej životaschopnosti v porovnaní s bunkami ošetrené buď deferasirox alebo samotnej cisplatiny
preskúmať molekulárne mechanizmy, z ktorých tento efekt, Western blot analýza bola použitá na posúdenie úrovne rôznych molekúl v AGS bunky ošetrené Deferasirox (5 uM), cisplatiny (5 uM), alebo obaja. Kombinácia Deferasirox a cisplatiny viedla k up-reguláciu NDRG1, p21, a p53. Naproti tomu, táto kombinácia viedla k down-regulácii fosfo-mTOR, ferroportin, a pre-kaspázy 9. Tieto výsledky naznačujú, že deferasirox zosilňuje protirakovinové účinky cisplatiny prostredníctvom rôznych dráh (obr. 5). Obr. 5 Molekulárne mechanizmy synergického efektu. Western blot analýza bola vykonaná s lyzáty AGS buniek ošetrených Deferasirox (5 uM), cisplatiny (5 uM), alebo oboje po dobu 24 hodín. Kombinácia Deferasirox a cisplatinou indukované upregulaci NDRG1, p21, a p53, navyše k down-regulácii fosfo-mTOR, ferroportin, a pre-kaspázy 9
Diskusia
V tejto štúdii sme zistili, že inhibuje Deferasirox proliferáciu buniek karcinómu žalúdka. Deferasirox bolo tiež zistené, že indukuje zástavu G1; upregulate p21, p27 a p53 prejavu; a znižuje expresiu cyklin D1, cyklin B, a CDK4 výraz. Deferasirox tiež indukovanú apoptózu, up-regulované NDRG1 a downregulated p-mTOR a c-myc. Tieto výsledky naznačujú, že deferasirox vykazuje protinádorové účinky u buniek karcinómu žalúdka prostredníctvom rôznych ciest. Konkrétne naše dáta ukazujú, že deferasirox mení metabolizmus železa, inhibuje progresiu bunkového cyklu ovplyvňuje mTOR signalizáciu a metastázy dráhy, a indukuje apoptózu. Okrem toho sa zdá, deferasirox k zosilneniu anti-proliferačnej účinok cis-platiny v nádorových bunkách žalúdka.
Železo je nevyhnutné pre prežitie buniek, ale môže tiež spôsobiť poškodenie buniek tým, že tvoria reaktívne formy kyslíka [14]. Hoci úroveň intracelulárneho železa je prísne regulovaná v normálnych bunkách, hladina intracelulárneho železa je zvýšená v rakovinových bunkách v dôsledku zvýšenej expresie TFR1 a hepcidin a zníženie expresie ferroportin [3]. Vzhľadom k tomu, nadbytku železa a zmeneného metabolizmu železa môže viesť k iniciácii a rast tumoru, chelátormi železa sa predpokladá, že sú sľubné protinádorovej liečbe. Niekoľko línií dôkazov podporujú myšlienku, že chelátormi železa sú potenciálne protinádorová terapeutiká. Po prvé, je známe, zvýšenie hladiny intracelulárneho železa podporovať syntézu DNA. Vzhľadom k tomu, železo je nevyhnutné pre činnosť ribonukleotid reduktázy, kľúčový enzým pre syntézu DNA, železo zohráva dôležitú úlohu v proliferácii buniek [15]. Z tohto dôvodu je potrebné väčšie železo, aby sa zvýšil ribonukleotid reduktázy aktivitu v nádorových bunkách. Po druhé, vyčerpanie železa môže spôsobiť zástavu G1 /S a apoptózu [13]. Cyklin D1 sa viaže na CDK4 a CDK6, čo sa prejavilo v G1 /S progresii cez fosforyláciu proteín retinoblastomem (RB). Táto fosforylácia zase vedie k uvoľneniu transkripčný faktor E2F od RB. vyčerpanie Železo je známe, že znižujú cyklin D1 a expresie CDK. Po tretie, nadmerné bunkovej železo môže riadiť Wnt signalizácie, ktorá je známa, že je dôležité pre progresiu nádoru [16].
Tejto štúdie na preskúmanie, či deferasirox vykazuje protinádorové účinky v súvislosti s rakovinou žalúdka Vykonali sme. Vybrali sme deferasirox z mnohých komerčne dostupných chelátormi železa vzhľadom k jeho perorálnu dostupnosť a relatívne nízku toxicitu. Hoci presné mechanizmy, ktorými deferasirox účinkuje proti rakovine sú ešte byť vyšetrovaný, my sme predpokladali, že deferasirox inhibuje progresiu bunkového cyklu na základe predchádzajúcich štúdií [11, 17]. Zistili sme, že deferasirox indukované G1 zatknutie upregulating p21 a p27 a downregulating cyklin D1 a CDK4. Tieto nálezy podporujú hypotézu, že deferasirox vykonáva svoj antineoplastickými účinky tým, že reguluje progresiu bunkového cyklu.
Chelátor železa môže vyvolať expresiu NDRG1, čo je známy metastatického ochranný obvod, v rôznych ľudských nádorových ochorení [18-20]. Mechanizmus, ktorým NDRG1 potláča metastázy je v súčasnej dobe nejasná, aj keď NDRG1 bolo preukázané, že inhibuje migráciu a inváziu buniek moduláciou expresie radu adhéznych molekúl [21]. NDRG1 expresie bolo preukázané, že v nádorových tkanivách v porovnaní s priľahlou normálnou tkanivom výrazne nižšia; Okrem toho, NDRG1 expresie bolo preukázané, že je nepriamo úmerná metastázy niektorých druhov rakoviny, ako je rakovina prostaty a hrubého čreva [22, 23]. Avšak, boli výsledky rozchádzajú v súvislosti s možnou združenia NDRG1 s progresie nádoru. Je zaujímavé, že NDRG preukázala svoje úlohu v kontrole bunkového cyklu. Konkrétne, NDRG1 expresie je up-regulovaná prostredníctvom p53 sprostredkovanú indukciu, a NDRG1 môže tiež indukovať G1 /S zatknutie upregulating p21 [24]. Zistili sme, že deferasirox zvyšuje reguláciu hladiny expresie NDRG1, p53, a p21. Aj keď sme nemali assay migráciu buniek alebo skúmať metastáz in vivo v tejto štúdii, naše výsledky naznačujú, že deferasirox môže byť schopný inhibovať rast nádoru a metastáz. Predpokladáme, že mechanizmus, ktorým deferasirox uplatňuje svoje protinádorové účinky môžu zahŕňať NDRG1.
Deferasirox bolo preukázané, že zvýšenie cytotoxického účinku cisplatiny v pažeráku nádorových bunkových línií. Okrem toho, cisplatiny rezistentné bunky ošetrené s nízkou koncentráciou Deferasirox (5 uM) v kombinácii s cisplatinou vykazovali významné zníženie bunkovej životaschopnosti v porovnaní s bunkami ošetrenými deferasirox alebo cisplatinou samotnou [10]. Zistili sme, že kombinácia Deferasirox (5 uM) a cisplatinou (5 uM), indukuje výrazný pokles v bunkovej životaschopnosti. Okrem toho, táto kombinovaná liečba viedla k up-reguláciu NDRG1, p21, a p53 a down-reguláciu fosfo-mTOR. Naše výsledky teda naznačujú, že deferasirox môže potenciálne zvýšiť protirakovinové účinky cisplatiny do buniek karcinómu žalúdka. Okrem toho, že p53-NDRG1-p21 a mTOR cesty môžu byť zapojené do synergického účinku Deferasirox s cisplatinou.
Táto štúdia však majú rad obmedzení. Po prvé, sme obmedzené naše štúdie žalúdočné rakovinových bunkových línií a nevykonávala žiadne experimenty in vivo. Okrem toho, expresia proteínov bunkového cyklu súvisiacich bola posudzovaná pomocou Western blotting. Podrobnejšie informácie by sa získali imunoprecipitačními a kinázových testoch. Ak chcete určiť protinádorový účinok Deferasirox, by bolo potrebné ďalšie experimenty vrátane in vivo štúdii. Avšak, toto je prvá štúdia vyšetrovať protinádorové účinky Deferasirox proti rakovine žalúdka.
Závery
Na záver sme zistili, že deferasirox indukované protinádorové účinky u buniek karcinómu žalúdka prostredníctvom rôznych ciest. Konkrétne deferasirox stimulovaná NDRG1, potlačený progresiu bunkového cyklu, mTOR downregulated a C-myc expresie a indukovanú apoptózu. Okrem toho, deferasirox zosilnený účinky protirakovinové cisplatiny. Hoci účinnosť Deferasirox treba potvrdiť v ďalších štúdiách, naše výsledky ukazujú, že deferasirox je sľubná protirakovinové terapeutické činidlo a môže byť tiež účinným chemoterapia senzibilizátor.
Vyhlásenie
Poďakovanie
Táto práca bola podporená tým, . výskumný fond Hanyang University (HY-2013-MC)
Otvoriť AccessThis článok je distribuovaný pod podmienkami 4.0 Medzinárodná licencie Creative Commons (http: //. Creative Commons org /licencie /od /4. 0 /), ktorý umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, ak budete venovať náležitú úver na pôvodného autora (y) a zdroje, poskytnúť odkaz na licencie Creative Commons, a uviesť, či boli vykonané zmeny. Venovanie vzdanie Creative Commons Public Domain (http: //. Creative Commons org /public domain /nula /1 0 /) sa týka údajov, ktoré boli k dispozícii v tomto článku, ak nie je uvedené inak
Konkurenčné. záujmy
autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy. príspevky
autorov
JC a YL podieľali na návrhu a analýzy súčasného výskumu. JC napísal na papier. JK vykonáva molekulárnej štúdie. YW, JU, BP prispel v zložení papiera. Všetci autori čítať a schválený rukopis.

• Súčasné kompozitný nadobličiek feochromocytóm, viac žalúdka stromálne nádory a pseudohermaphrodism u pacientov s von Recklinghausens disease
• Iris metastáza adenokarcinóme žalúdka