Iš deferasiroksui potencialas kaip naują terapinį modalumo skrandžio vėžio

Iš deferasiroksui potencialas kaip naują terapinį modalumo skrandžio vėžio pervežimas tezės
Background pervežimas Geležis yra labai svarbus elementas, ląstelių proliferaciją, augimui ir metabolizmui. Tačiau geležies perteklius ir pakeisti geležies apykaita yra tiek susijęs su naviko inicijavimo ir naviko augimą. Deferasiroksas yra geriamasis geležies chelatas. Nors kai kurie tyrimai rodo, kad deferasiroksą yra perspektyvi kandidatė priešvėžinių terapijų, jos veiksmingumas prieš skrandžio vėžio dar nebuvo nustatytas. Šis tyrimas buvo atliktas siekiant nustatyti, ar deferasiroksą daro priešnavikinis poveikis skrandžio vėžio ląstelių linijų ir ar Deferasirokso ir cisplatina veikia sinergetiškai.
Metodai
Keturi žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas (MAA, MKN-28, SNU-484, ir SNU-638) buvo gydomi įvairių koncentracijų deferasiroksui nustatyti IC 50 kiekvieno ląstelių linija. Į deferasiroksui dėl ląstelės ciklo poveikis buvo įvertintas tėkmės citometrijos, o deferasiroksui į geležies apykaitai, ląstelių ciklo ir apoptozės poveikis buvo įvertintas imunoblotingo. Norėdami nustatyti, ar deferasiroksą pagerina cisplatina poveikį, AGS ląstelės buvo auginamos buvimo ir nebuvimo cisplatina.
Rezultatai
deferasiroksui slopino visų skrandžio vėžio ląstelių linijų platinimu, kaip vertinama MTT tyrimus. Nuo IC 50 deferasiroksui buvo mažiausias (mažiau nei 10 mikronų) į AGS ląsteles, vėlesni eksperimentai buvo atliekami šioje eilutėje. Deferasiroksą aktyvinama transferino receptorių 1 išraišką ir sumažėjo feroportino išraiška. Be to, deferasiroksą sukeltas G1 suėmimą; aktyvinama P21, P27 ir P53 išraiška; ir downregulated cikloniniai D1 cikloniniai B ir CDK4 išraiška. Be to, deferasiroksą sukeltos apoptozės, aktyvinama N-Myc
pasroviui reguliuojama geno 1 (NDRG1) ir downregulated p-mTOR ir C-MYC išraiška. Ji taip pat buvo nustatyta, kad veikti sinergiškai su cisplatina.
Išvadas
Mūsų rezultatai rodo, kad deferasiroksą gali daryti antinavikinį poveikį, atsižvelgiant į skrandžio vėžio kontekste. Deferasiroksą paveikia įvairių būdų ir molekulių skaičių; Pavyzdžiui, deferasiroksą upregulates NDRG1 išraišką, slopina ląstelių ciklą, downregulates mTOR ir C-myc išraiška, ir indukuoja apoptozę. Be to, deferasirokso ir dėl to stiprina priešvėžinių poveikį cisplatina. Nors deferasiroksui veiksmingumas išlieka būti išbandytas būsimoms studijoms, čia pateikiamos rezultatai rodo, kad deferasiroksą yra perspektyvi romanas vėžio Terapinis agentas.
Raktiniai žodžiai
Deferasiroksas Skrandžio navikas cisplatinos faktai
Skrandžio vėžys yra viena iš priežastys, dėl kurių vėžio mirčių Korėja [1]. Nors pacientai, sergantys skrandžio vėžys šou puikių rezultatų, jei vėžys nustatomas anksti, nebenaudojamus pažangias ir pasikartojantys skrandžio vėžio vis dar siejamas su prastomis išgyvenimo. Per pastaruosius kelis dešimtmečius gerokai pagerėjo chemoterapiniais preparatais pagerėjo išlikimą išplitusiu skrandžio vėžiu. Neseniai bendras išgyvenamumas buvo žymiai ilgesnis pacientams, sergantiems HER2 teigiamas išplitusiu skrandžio ar virškinimo stemplės jungties vėžio gydymo trastuzumabu (HER-2 monokloninis antikūnas) kartu su tradicine chemoterapija [2]. Tačiau bendras išgyvenamumas buvo vos 13,8 mėnesių. Todėl, naujos agentai skubiai reikalingi.
Geležis yra esminė ląstelių proliferacijos, augimui ir metabolizmui. Tačiau geležies perteklius ir pakeisti geležies apykaita buvo susijęs su naviko inicijavimo ir naviko augimo [3]. Epidemiologiniai tyrimai parodė, kad didelės geležies vartojimas yra susijęs su padidėjusia rizika susirgti storosios žarnos vėžiu, [4]. Daugelis vėžinių ląstelių pakeisti geležies apykaitą, nes piktybinių ląstelių reikalauja daugiau geležies nei normalios ląstelės. Norėdami padidinti nepastovaus geležies baseinas, vėžio ląstelės buvo įrodyta, kad upregulate su transferino receptorių 1 (TFR1) ir hepcidino išraiška, be to, downregulating feroportino išraiška [3].
Deferasiroksui (Exjade®), žodinis tridentatinis geležies ( fe 3+) chelantas, greitai absorbuojamas iš žarnyno ir yra santykinai ilgas pusinės eliminacijos laikas (8 iki 16 val.) Taigi, vieną kartą per parą, gali pasiekti ilgalaikių vaistinio preparato koncentraciją kraujyje pakanka ne transferino jungiasi geležies plazmos prapūtimo. Nors deferasiroksą buvo susijęs su kai kurių nepageidaujamų poveikių, tokių kaip virškinamojo trakto sutrikimų, odos išbėrimą ir toksinio poveikio inkstams, ji gana gerai toleruojamas. Todėl deferasiroksą šiuo metu dažniausiai naudojami geležies chelatas už geležies pertekliaus gydymui ligos [5].
Neseniai keli tyrimai tyrė deferasiroksui potencialą antineoplastine agentas. Deferasiroksą buvo pranešta slopina NF-κB veiklą kraujo mėginių iš pacientų, sergančių mielodisplaziniu sindromas ir leukemijos ląstelių linijos [6]; Be to, deferasiroksą taip pat buvo įrodyta, kad slopinant mTOR kelią į mieloleukemija ląstelių [7]. Dėl klinikinių duomenų, vienas atvejis parodė, kad deferasiroksą gydymas pasiekusi visišką remisiją pacientams, sergantiems chemoterapija ugniai ūmaus monocitine leukemija [8]. Be to, post-hoc analizė daugiacentrio teismą paaiškėjo, kad deferasiroksą pagerėjo hematologiniai parametrai pacientams, sergantiems mielodisplaziniu sindromas [9]. Šiuo metu, dauguma pranešimų apie deferasiroksui kaip priešnavikiniam agentas jau hematologinių piktybinių navikų; tik keletas tyrimų buvo siekiama solidinių navikų. Neseniai, deferasiroksą buvo parodyta, kad slopina plaučių ir stemplės vėžio ląstelių augimą in vitro ir in vivo [10, 11]. Tačiau deferasiroksui dėl skrandžio vėžio poveikis dar nebuvo nustatomas, ir mechanizmas, pagal kurį deferasiroksą daro savo antinavikinį poveikį, menkai suprantama. Todėl šis tyrimas buvo atliktas siekiant ištirti, ar deferasiroksą daro priešnavikinis poveikis skrandžio vėžio ląstelių linijų, taip pat ar deferasiroksą veikia sinergiškai su cisplatina.
Metodai
ląstelių kultūros
Keturi žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas (MAA, MKN-28, SNU-484, ir SNU-638) buvo gauti iš Korėjos ląstelių linijos bankas. Visos ląstelės buvo auginamos RPMI 1640 terpėje, turinčioje 10% vaisiaus galvijų serumo ir antibiotikų V (100 V /ml penicilino ir 100 mikrogramų /ml streptomicino) drėgnoje 5% CO 2 inkubatorių 37 ° C temperatūroje.
Reagentų gamybai, o antikūnai
Deferasiroksas (Exjade®) buvo paaukoti Novartis (Bazelis, Šveicarija). Ožkos polikloninis kovos su NDRG1 (N-MYC
vartotojų reguliuojama geno 1) (katalogas Nr. Ab37897) ir triušių polikloninis kovos su feroportino (katalogas Nr. Ab85370) antikūnai buvo įsigytas iš Abcam (Kembridžas, Jungtinė Karalystė). Anti-TFR1 pelės monokloniniai antikūnai (. Katalogas jokių 136800) buvo gauti iš Gyvosios technologijų (Carlsbad, CA, JAV) ir FeSO 4 buvo įsigytas iš Sigma-Aldrich (St Louis, MO, JAV). Anti-P53, anti-P27, P21, cikloniniai A cikloniniai B cikloniniai D1 cikloniniai E CDK2, CDK4, CDK6, C-MYC, pro kaspazės 3 ir BAX antikūnai buvo įsigytas iš Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Anti-P-mTOR ir pro-kaspazės 8 antikūnai buvo gauti iš ląstelių Signalizacijos technologijos (Beverly, MA, JAV).
Augimo slopinimo tyrimas
augimo slopinimo buvo matuojamas MTT (3- [4,5-dimethylthiazol- 2-il] -2,5-diphenyltetrazolium bromidas), kaip buvo aprašyta anksčiau [12]. Trumpai, ląstelės buvo pasėjamos (2 × 10 3 ląstelių /gerai) 96 duobučių mikrotitravimo plokštelės (Nunc, Roskilde, Danija) ir inkubuojama 37 ° C temperatūroje 24, 48, arba 72 h. MTT tirpalą (50 pL) iš Sigma (2 mg /ml PBS) buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį, o plokštelės buvo inkubuotos už papildomą 4 h, esant 37 ° C temperatūroje. Po to, kai šio inkubatorių, MTT tirpalą buvo pripūtimo kojų. Tirpinti formazano susidariusių kristalų išskyrimą į gyvybingų ląstelių, 200 pL DMSO buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį. Plokštelės buvo purtomas 30 min kambario temperatūroje, ir kiekvieno šulinio, tuo 595 nm bangos ilgiui, absorbcija, buvo skaityti iš karto su skenavimo daugiaertmėse spektrofotometru (Bio-Rad, iMarkTM mikroplokšteles skaitytuvas).
Siekiant nustatyti deferasirokso koncentracija, kurios reikia nužudyti 50% iš ląstelių (IC 50), AGS, MKN-28, SNU-484, ir SNU-638 ląstelės buvo gydomi 0, 1, 10, 50, ir 100 pM deferasirokso už 24, 48, ir 72 val. Šie rezultatai buvo naudojamas pasirinkti skrandžio ląstelių liniją su didžiausiu jautrumu deferasirokso visiems vėlesniems eksperimentams.
Mobilusis ciklo analizė
Po 24-h inkubavimo AGS ląstelių su 0, 10 ir 100 mikromolių Deferasirokso 37 ° C, ląstelės buvo plaunama du kartus PBS, fiksuoto per naktį su 70% etanolio, išplautos su PBS, ir nudažomi su 50 mikrogramų /ml propidiumo jodido (PI), kurioje yra RNaze A esant 50 g /ml. DNR kiekis ląstelėse (10000 ląstelių /eksperimentinė grupė) buvo analizuojami naudojant FACSCanto II tėkmės citometre (Becton Dickinson, San Chosė, CA, JAV) įrengtos "BD FACSDivaTM Programinė įranga (v6.1.3). Iš ląstelių populiacijų kiekvienos ląstelės ciklo etape (G1, S arba G2 /M) procentai buvo apskaičiuotos iš DNR turinio histogramos.
Vakarų dėmė analizė
AGS ląstelių buvo inkubuojami su 0, 10 ir 100 mikromolių deferasirokso 37 ° C temperatūroje 24 val. Ląstelės buvo išplauti su PBS, resuspenduojamos lizės buferiniame tirpale, [50 mM Tris (pH 7,5), 1% NP-40, 2 mM EDTA, 10 mM NaCl, 20 mikrogramų /ml aprotinino, 20 mikrogramų /ml leupeptiną, ir 1 mM fenilmetilsulfonilfluoridą fluorido], ir ant ledo 20 min. Baltymų, lizatuose (20-30 mikrogramų) buvo išspręstas 10-15% SDS-poliakrilamido denatūravimo geliai ir perkelti į nitroceliuliozės membranos 90-120 min. Nespecifinių galimos aktyvios buvo blokuotos 5% lieso pieno 1 valandą, o, ir tada Membranos buvo inkubuojami per naktį su pirminių antikūnų (visi esant 1: 1000 praskiedimas). Antikūnai ir susiję procesai, kurie buvo naudojami tirti buvo taip: anti-TFR1 ir kovos su feroportino dėl geležies metabolizmo; anti-p53, p27, p21, ciklino A, ciklino B, ciklino D1, ciklino E, CDK2, CDK4, ir CDK6 už ląstelės ciklo; Anti-PRO-kaspazės 3, Pro-kaspazės 8, Pro-kaspazės 9 ir BAX už apoptozės; prieš NDRG1 už metastazių; ir anti-p-mTOR ir c-myc. Imunoreaktyvių juostos buvo ryškinamos su ECL komplektas (INTRON, Korėja).
Statistinė analizė
Duomenys pateikiami kaip reiškia ± SEM (klaida barai). Skirtumai buvo analizuojami su Stjudento t pervežimas testą. P
vertybes. ≪ 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas
rezultatai
poveikis deferasiroksui dėl skrandžio vėžio ląstelių linijų augimo
deferasirokso gebėjimas slopinti keturių skrandžio vėžio ląstelių linijų augimas buvo nustatoma pagal MTT proliferacijos tyrimu. AGS, MKN-28, SNU-484, ir SNU-638 ląstelės buvo inkubuojamos su 0, 1, 10, 50, ir 100 mikromolių Deferasiroksas 37 ° C temperatūroje 24, 48, arba 72 h. Deferasiroksą slopinamas su visais keturiais skrandžio vėžio ląstelių linijų augimą nuo dozės priklausomu ir laikas priklausomu būdu (1a. Pav). Nuo IC 50 deferasiroksui 72 h buvo mažiausias per AGS ląstelių (mažiau nei 10 mikronų), visi vėlesni eksperimentai buvo atlikti naudojant šias ląsteles. Pav. 1 slopinamojo poveikio deferasiroksui dėl skrandžio vėžio ląstelių linijų augimo. Mobilusis gyvybingumas buvo matuojamas pagal MTT. AGS, MKN-28, SNU-484, ir SNU-638 ląstelės buvo inkubuojamos su 0, 1, 10, 50, ir 100 pM deferasirokso esant 37 ° C temperatūroje 24, 48, arba 72 h. Deferasiroksą gydymas lėmė priklauso nuo dozės ir laiko priklauso augimo slopinimo visų keturių skrandžio vėžio ląstelių linijas. b AGS ląstelės buvo auginamos su 10 ir 20 mikromolių Deferasirokso vieną arba į FeSO4 (100 mikromolių) buvimas už 48 val. Slopinantis poveikis deferasiroksui buvo atstatomi FeSO4 papildas
AGS ląstelės buvo auginamos su 10 ir 20 mikromolių Deferasirokso vieną arba į FeSO 4 (100 mikromolių) buvimas už 48 val. Slopinantis poveikis deferasiroksui buvo atstatomi FeSO 4 papildas.
Ląstelės ciklo analizė AGS ląstelių
Geležinis išeikvojimas sukelia G1 /S areštus įtakos kritinių molekulių ekspresiją ląstelių ciklo progresavimo (1b pav.) pvz ciklino D1 ir p21 [13]. Į deferasiroksui poveikis ląstelės ciklo lėmė fluorescencijos aktyvintų ląstelių rūšiavimo (FACS), naudojant propidiumo jodido. AGS ląstelės buvo inkubuojamos su 0, 10 ir 100 pM Deferasirokso 37 ° C temperatūroje 24 val. Kaip parodyta Fig. 2a, gydymas AGS ląstelių, turinčių deferasiroksui 24 h pradėta į ląstelių kaupimosi G1 etapo, skirto nuo dozės priklausomu būdu (41,8%, esant 0 mkm, 53,7% po 10 mikromolių, ir 77,2%, esant 100 mikronų). Šis rezultatas rodo, kad deferasiroksą skatina G1 suimti. Vakarų dėmė analizė ląstelės ciklo susijusių baltymų parodė, kad deferasiroksą paskatino p21, p27 ir p53, ir ciklino D1, ciklino B downregulation ląstelę ir CDK4 (pav 2b.). Šie rezultatai rodo, kad anti-proliferacinis poveikis deferasiroksui yra dėl to, ląstelių ciklo slopinimo. Pav. 2 Poveikis deferasiroksui apie ląstelių ciklo progresavimo AGS ląsteles. a AGS ląstelės buvo inkubuojamos su 0, 10 ir 100 pM Deferasirokso 37 ° C temperatūroje 24 val. Ląstelinį ciklą buvo analizuojami FACS. Deferasiroksą gydymas 24 h buvo nuo dozės priklausomu kaupimo AGS ląstelių G1 fazės (41,8% 0 pM, 53,7% po 10 mikromolių, ir 77,2%, esant 100 mikronų). b Vakarų dėmė analizė ląstelės ciklo susijusių molekulių parodė, kad deferasiroksą aktyvinama p21, p27 ir p53 ir downregulated ciklino D1, ciklino B, ir CDK4
poveikis deferasiroksui geležies apykaitai ir kitų būdų
geležies patekimą į ląstelių, cirkuliuojančių geležies transferino kompleksai jungiasi prie ląstelės paviršiaus receptorių TFR1. Geležinis išeina per feroportino, geležies ištekėjimo siurblio, kuris reglamentuoja hepcidino. Be vėžio ląsteles, TFR1 ir hepcidino buvo įrodyta, kad būti aktyvinama ir feroportino yra downregulated, kuris bendrai padidėti koncentracija ląstelėje geležies [3]. Iš deferasiroksui į geležies apykaitai poveikis buvo įvertintas Vakarų blot analizė TFR1 ir feroportino. Iš TFR1 lygis padidėjo po 24 h gydymo deferasiroksui. Priešingai, feroportino išraiška sumažėjo (3a pav.). Šie rezultatai sutampa su ankstesnių tyrimų [10, 11]. Pav. 3 Poveikis deferasiroksui geležies apykaitai ir kitų būdų. Gydymo su deferasiroksui 24 val lėmė aukštesnio laipsnio TFR1 ir lygis sumažėjo feroportino. b Deferasiroksas taip pat sukeltos apoptozės, aktyvinama NDRG1 ir downregulated p-mTOR ir C-myc vertinant pagal Vakarų blot analizė Viesbutis The Deferasirokso poveikį apoptozės buvo šalia įvertino FACS ir Vakarų blot analizė apoptozės susijusių baltymų. Kaip parodyta Fig. 2a, AGS ląstelės gydomi deferasiroksui 24 val eksponuojami ląstelių į pietus G1 (apoptozės) etapo kaupimosi (3,2% 0 m, 3,3%, esant 10 mikromolių, ir 9,5% esant 100 mikromolių). Be to, deferasiroksą gydymas sumažino PRO-kaspazė 3, PRO kaspazė 8, ir pro-kaspazė 9 išraišką ir padidino BAX (pav. 3b) išraiška. NDRG1 yra žinoma, kad ląstelių augimas ir metastazės slopintuvas. Deferasiroksą padidino NDRG1 lygį. Be to, c-myc ir fosfo-mTOR išraiška sumažėjo po to, kai 24 valandas nuo gydymo su deferasirokso (pav. 3b). Šie rezultatai rodo, kad deferasiroksą indukuoja apoptozę, slopina toli metastazes, ir slopina C-Myc ir mTOR kelius.
Sinerginį efektą deferasiroksui ir cisplatina
įvertinti, ar deferasiroksą galėtų sustiprinti cisplatina poveikį, AGS ląstelės buvo auginamos su arba be cisplatina ir jų gyvybingumo buvo nustatoma naudojant MTT. Gydymas su cisplatina 48 h sumažino gyvybingų ląstelių skaičių, su IC 50 5-10 mkm. Siekiant nustatyti, ar deferasiroksą daro sinergetinį efektą su cisplatina, AGS ląstelės buvo gydomi 0, 2,5, 5, 10, ir 20 pM deferasirokso vieną arba fiksuotu koncentracijos cisplatina (5 pM) 48 h buvimą. Kaip parodyta Fig. 4a, b AGS ląstelės gydomi deferasiroksui ir cisplatinos parodė žymiai didesnį sumažėjimą korinio gyvybingumo palyginti su ląstelėmis gydomų arba deferasiroksui arba cisplatina vien (p
< 0,01). Šie rezultatai rodo, kad deferasiroksą pagerina cisplatiną slopinamos AGS ląstelių augimą. Pav. 4 sinergetinį efektą nuo deferasiroksui ir cisplatina. a, b AGS ląstelės buvo gydomi 0, 2,5, 5, 10, ir 20 pM deferasirokso, atskirai arba fiksuotu koncentracijos cisplatina (5 pM) 48 h buvimą. AGS ląstelės gydomi deferasiroksui ir cisplatinos parodė reikšmingai sumažėjo ląstelių gyvybingumo, palyginus su ląstelės gydomi arba deferasiroksui ar vien cisplatina
Ištirti molekulinius mechanizmus, sukeliančius šį poveikį, Vakarų dėmė analizė buvo naudojama, siekiant įvertinti įvairių molekulių AGS lygį ląstelės gydomiems deferasirokso (5 mikronų), cisplatina (5 mikronų), arba abu. Iš deferasiroksui ir cisplatinos derinys lėmė NDRG1, p21 ir p53 ląstelę. Priešingai, šis derinys lėmė fosfo-mTOR, feroportino, ir pro-kaspazės 9. downregulation Šie rezultatai rodo, kad deferasiroksą stiprina priešvėžinis poveikį cisplatina per įvairių būdais (5 pav.). Pav. 5 molekuliniai mechanizmai sinergetinį poveikį. Western Blot analizė buvo atlikta su lizatuose apie AGS ląstelių, gydytų deferasirokso (5 mikronų), cisplatina (5 mikronų), arba tiek 24 h. Iš deferasiroksui ir cisplatinos derinys paskatino iš NDRG1, p21 ir p53 ląstelę, be fosfo-mTOR, feroportino ir pro-kaspazė 9
Diskusijos pervežimas Šiame tyrime downregulation, mes nustatėme, kad deferasiroksui slopina skrandžio vėžio ląstelių proliferacija. Deferasiroksą taip pat buvo nustatyta, kad sukelti G1 suėmimą; upregulate p21, p27 ir p53 išraišką; ir downregulate ciklino D1, ciklino B, ir CDK4 išraiška. Deferasiroksą taip pat sukeltos apoptozės, aktyvinama NDRG1 ir downregulated p-mTOR ir C-myc. Šie rezultatai rodo, kad deferasiroksą daro priešnavikinis poveikis skrandžio vėžio ląsteles per įvairius būdus. Tiksliau, mūsų duomenys rodo, kad deferasiroksą keičia geležies apykaitą, slopina ląstelinį ciklą, veikia mTOR signalizacijos ir metastazių kelius ir indukuoja apoptozę. Be to, deferasirokso stiprinti kovos su dauginimosi efektą cisplatina skrandžio vėžio ląsteles.
Geležis yra būtinas ląstelių išlikimo, bet taip pat gali sukelti ląstelių žalą generuojant reaktyvių deguonies formų [14]. Nors ląstelėje geležies lygis yra tvirtai reguliuojamas normalios ląstelės, šalinant ląstelių geležies lygis, iš pradžių padidėja vėžio ląstelių dėl padidėjusio išraiška TFR1 ir hepcidinui ir sumažinto išraiška feroportino [3]. Nuo geležies perteklius ir pakeisti geležies metabolizmo gali sukelti naviko pradžios ir augimo, geležies chelatoriai yra manoma, kad būti perspektyvus priešvėžinių medžiagų. Kai kurie faktai remti idėją, kad Geležį sujungiantys potencialūs antinavikinio terapija. Pirma, padidėjusi ląstelėje geležies yra žinoma, kad skatinti DNR sintezę. Nuo geležies yra labai svarbūs ribonukleotidreduktazei veiklos, pagrindinis fermentas DNR sintezei, geležies vaidina svarbų vaidmenį ląstelių proliferaciją [15]. Todėl, padidėjo geležies yra reikalaujama, kad padidinti ribonukleotidreduktazei veiklą neoplastinių ląstelių. Antra, geležies išeikvojimas gali sukelti G1 /S suėmimą ir sukelti apoptozę [13]. CIKLONAS D1 jungiasi prie CDK4 ir CDK6, taip sukeldamas G1 /S progresavimo per fosforilinimo Retinoblastoma baltymų (RB). Tai fosforilinimo savo ruožtu sukelia į transkripcijos faktorius E2F iš RB išleidimo. Geležinis išeikvojimas yra žinoma, kad sumažinti ciklino D1 ir CDK išraiška. Trečia, per didelis ląstelių geležies gali vairuoti WNT signalizacijos kelią, kuris yra žinomas kaip svarbus naviko progresavimo [16].
Mes atlikome šį tyrimą siekdama ištirti, ar deferasiroksą daro priešnavikinis poveikį skrandžio vėžio kontekste. Mes pasirinkome deferasiroksą iš daugelio rinkoje siūlomų Geležį sujungiantys dėl savo burnos prieinamumo ir santykinai mažo toksiškumo. Nors tikslių mechanizmų, kuriais deferasiroksą daro savo priešvėžinių poveikis vis dar tiriamos, mes iškėlė hipotezę, kad deferasiroksą slopina ląstelinį ciklą remiantis ankstesniais tyrimais [11, 17]. Mes nustatėme, kad deferasiroksui sukeltas G1 areštus upregulating p21 ir p27 ir downregulating ciklino D1 ir CDK4. Šie duomenys paremti mūsų hipotezę, kad deferasiroksą daro savo antinavikiniais poveikį reguliuojant ląstelinį ciklą.
Geležį sujungiantys gali indukuoti NDRG1, žinoma metastazavusiu slopintuvas išraišką, į žmogaus vėžio [18-20] įvairovė. Mechanizmas, kuriuo NDRG1 slopina metastazes kas neaišku, nors NDRG1 buvo slopina ląstelių migraciją ir invazija moduliuoja iš adhezijos molekulių [21] skaičius išraiška. NDRG1 išraiška buvo įrodyta, kad būti žymiai mažesnis vėžio audinyje lyginant su gretimuose normaliuose audiniuose; Be to, NDRG1 išraiška buvo įrodyta, kad būti atvirkščiai koreliuoja su kai kurių vėžio formų, tokių kaip prostatos ir gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio [22, 23] metastazių. Tačiau prieštaringi rezultatai buvo gauti dėl galimo asociacijos NDRG1 su naviko progresavimo. Įdomu tai, kad NDRG turi įrodytą vaidmenį ląstelių ciklo kontrolę. Tiksliau, NDRG1 išraiška yra aktyvinama per p53 tarpininkaujant indukcijos ir NDRG1 taip pat gali sukelti G1 /S areštus upregulating p21 [24]. Mes nustatėme, kad deferasiroksą upregulates ekspresijos lygį NDRG1, p53 ir p21. Nors mes ne bandinys ląstelių migraciją arba ištirti metastazių in vivo Šio tyrimo, mūsų rezultatai rodo, kad deferasiroksą galėtų slopinti auglio augimą ir metastazes. Mes iškėlė hipotezę, kad mechanizmas, pagal kurį deferasiroksą daro savo priešnavikinis poveikis gali apimti NDRG1.
Deferasiroksui buvo įrodyta, kad padidinti citotoksinis poveikis cisplatina stemplės vėžio ląstelių linijas. Be to, cisplatinos atsparus ląstelės gydomi mažo koncentracijos deferasiroksui (5 mkm) kartu su cisplatina parodė, kad gerokai sumažėjo ląstelių gyvybingumo, palyginti su ląstelėmis gydomų deferasiroksui arba cisplatina vien [10]. Mes nustatėme, kad deferasiroksui (5 mkm) ir cisplatina (5 mkm) derinys sukėlė reikšmingai sumažėjo ląstelių gyvybingumą. Be to, šis kombinuotas gydymas lėmė NDRG1, p21 ir p53 ląstelę ir fosfo-mTOR downregulation. Mūsų rezultatai, todėl, rodo, kad deferasiroksą potencialiai gali padidinti priešvėžinį poveikį cisplatina skrandžio vėžio ląsteles. Be to, p53-NDRG1-P21 ir mTOR keliai gali būti įtraukti į sinergetinį poveikį deferasiroksui su cisplatina.
Šis tyrimas turėjo keletas apribojimų. Pirma, mes apribojo mūsų studiją skrandžio vėžio ląstelių linijų ir neatliko jokių in vivo eksperimentų. Be to, ląstelių ciklo susijusių baltymų išraiška buvo įvertintas tik Vakarų blotingo metodu. Išsamesnė informacija galėjo būti gauta Imunoprecipitacijos ir kinazės tyrimus. Nustatyti priešnavikinį efektą deferasirokso, papildomi eksperimentai įskaitant in vivo tyrimo turėtų būti reikalinga. Nepaisant to, tai pirmasis tyrimas, tirti priešnavikinis poveikis deferasiroksui prieš skrandžio vėžio.
Išvados
Taigi, mes nustatėme, kad deferasiroksui sukeltas priešnavikinis poveikis skrandžio vėžio ląsteles per įvairius būdus. Tiksliau, deferasiroksą aktyvinama NDRG1, slopinamas ląstelės ciklo progresavimo, downregulated mTOR ir C-MYC išraišką, ir sukeliama apoptozė. Be to, deferasiroksą sustiprėti priešvėžinis poveikis cisplatina. Nors deferasiroksui veiksmingumas turi būti patvirtinta būsimoms studijoms, mūsų rezultatai rodo, kad deferasiroksą yra perspektyvi kovos su vėžiu Terapinis agentas taip pat gali būti veiksminga chemoterapija jautrikliui.
Deklaracijos
Padėka
šis darbas buvo remiami . tyrimų fondas Hanyang universiteto (HY-2013-MC)
Atviras AccessThis straipsnis yra platinamas pagal Creative Commons Attribution 4.0 Tarptautinės licencijos sąlygomis (http: //. creativecommons org /licencijos /pagal /4. 0 /), kuris leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi, bet kokioje laikmenoje, jei jūs suteikiate atitinkamą kreditą pirminio autoriaus (-ių) ir šaltinį, pateikti nuorodą į Creative Commons "licenciją, ir nurodyti, ar atliktus pakeitimus. Creative Commons Public Domain, Dedikacija atsisakymas ( "http: //. Creativecommons org /viešo naudojimo režimas /nulinio /1. 0 /) taikoma duomenys, pateikiami šiame straipsnyje, jeigu nenurodyta kitaip
konkuravimas. Pomėgiai Viesbutis The autorių pareiškiu, kad jie neturi jokių konkuruojančių interesų.
autorių indėlį
JC ir YL dalyvavo projektuojant ir analizuojant šio tyrimo. JC rašė popierių. JK atlikti molekulinius tyrimus. YW, BĮ BP prisidėjo popieriaus sudėtį. Visi autoriai skaityti ir patvirtintas rankraštį.

• Kartu sudėtinis antinksčių feochromocitoma, daug skrandžio stromos navikai ir pseudohermaphrodism pacientui su von Recklinghausens disease
• Vilkdalgis metastazės skrandžio adenocarcinoma