Mahdollisuuksia deferasiroksi uutena hoitomuoto mahalaukun cancer

potentiaalia deferasiroksi uutena hoitomuoto mahasyövän
tiivistelmä
tausta
Rauta on keskeinen tekijä solujen lisääntymistä, kasvua ja aineenvaihduntaa. Kuitenkin liiallinen rauta ja muuttunut rauta aineenvaihduntaa voivat molemmat aiheuttaa kasvain aloittamiseen ja kasvaimen kasvua. Deferasiroksi on suun kautta rautakelaatti. Vaikka jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että Deferasiroksi on lupaava ehdokas syöpälääkkeiden, sen tehokkuutta suhteessa mahasyöpä ei ole vielä määritelty. Tämä tutkimus suoritettiin sen määrittämiseksi, deferasiroksi kykenee antituumorivaikutuksia mahasyövän solulinjoissa ja onko deferasiroksi ja sisplatiinin toimivat synergistisesti. Tool Menetelmät
Neljä ihmisen mahasyövän solulinjoissa (AGS, MKN-28, SNU-484, ja SNU-638) käsiteltiin eri pitoisuuksilla deferasiroksi määrittää IC 50 kussakin solulinjassa. Vaikutukset deferasiroksi on solusyklin arvioitiin virtaussytometrialla, ja vaikutukset deferasiroksi rauta aineenvaihduntaan, solusyklin ja apoptoosin arvioitiin Western-blottauksella. Sen määrittämiseksi, onko deferasiroksi parantaa vaikutusta sisplatiinin, AGS soluja viljeltiin läsnä ja poissa sisplatiinin.
Tulokset
Deferasiroksi inhiboivat kaikki mahalaukun syövän solulinjoja arvioitiin MTT: n määrityksissä. Koska IC 50 deferasiroksi oli alhaisin (alle 10 uM) in AGS soluissa, myöhemmät kokeet suoritettiin tämän linjan. Deferasiroksi voimistunut transferriinireseptoriproteii- 1 ilme ja laski ferroportin ilme. Lisäksi deferasiroksi aiheuttama G1 pidätystä; ilmen- tymisen lisääntymisen p21, P27, ja p53 ilmaus; ja vaimentua sykliini D1, sykliini B, ja CDK4 ilme. Lisäksi deferasiroksi aiheuttama apoptoosin, upregulated N-myc
alavirtaan säännelty geenistä 1 (NDRG1), ja vaimentua p-mTOR ja c-myc ilme. Se havaittiin myös toimivan synergistisesti sisplatiinin kanssa.
Päätelmät
Tuloksemme viittaavat siihen, että deferasiroksi voi käyttää antituumorivaikutuksia yhteydessä syöpään. Deferasiroksi vaikuttaa useisiin eri reittejä ja molekyylejä; Esimerkiksi deferasiroksi ylössäätelee NDRG1 ilmaisun estää solusykliä, downregulates mTOR ja c-myc ilmaisun, ja indusoi apoptoosia. Lisäksi, deferasiroksi näyttää lisäävän syövän vaikutukset sisplatiinin. Vaikka tehoa deferasiroksi vielä testataan tulevissa tutkimuksissa, tässä esitetyt tulokset osoittavat, että deferasiroksi on lupaava uusi syövän terapeuttista ainetta.
Avainsanat
Deferasiroksi Vatsa kasvain Sisplatiini tausta
Mahalaukun syöpä on yksi johtavia syitä syöpään liittyvien kuolemien Koreassa [1]. Vaikka potilaat mahalaukun syövän osoittavat erinomaisia ​​tuloksia, jos syöpä havaitaan varhaisessa vaiheessa, käyttökelvottoman kehittynyt ja toistuvat mahasyövistä liittyy edelleen huonosta eloonjäämisasteesta. Viime vuosikymmeninä merkittäviä parannuksia kemoterapeuttisten aineiden ovat parantuneet eloonjäämisen edennyt mahasyöpä. Äskettäin kokonaiselossaoloaika oli merkittävästi pidentynyt potilailla, joilla HER2-positiivinen kehittynyt mahalaukun tai gastroesofageaalinen risteykseen syövän käsittelemällä trastutsumabilla (HER-2 monoklonaalinen vasta-aine) yhdistelmänä tavanomaisten kemoterapia [2]. Kuitenkin yleinen eloonjääminen oli vain 13,8 kuukautta. Siksi uudet aineet kiireesti.
Rauta on olennainen tekijä solujen lisääntymistä, kasvua ja aineenvaihduntaa. Kuitenkin liiallinen rauta ja muuttunut raudan aineenvaihduntaa on yhdistetty kasvaimen aloittamiseen ja kasvaimen kasvua [3]. Epidemiologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että on paljon rautaa saanti liittyy lisääntynyt paksusuolen syövän riskiä [4]. Monet syöpäsolut muuttavat raudan aineenvaihduntaa koska pahanlaatuisia soluja vaativat enemmän rautaa kuin normaalit solut. Lisätä labiileja rauta-allas, syöpäsolut on osoitettu upregulate ilmentymisen transferriini-reseptori 1 (TFR1) ja hepcidin lisäksi vähen- tämisessä ferroportin ilmaisun [3].
Deferasiroksi (Exjade®), suun kautta kolmihampainen rauta ( Fe 3+) kelaattorin, imeytyy nopeasti suolistosta ja sillä on suhteellisen pitkä puoliintumisaika (8-16 h). Täten kerran päivässä annostus voi saavuttaa kestävää verenkierrossa olevasta lääkkeestä tasoa riittää huuhteluilman kuin transferriini-sidottu plasman rauta. Vaikka deferasiroksi on liittynyt joitakin haitallisia vaikutuksia, kuten maha-suolikanavan häiriöt, ihottuma, ja munuaistoksisuus, se on suhteellisen hyvin siedetty. Näin ollen, deferasiroksi on tällä hetkellä yleisimmin käytetty rautaa kelatoiva hoitoon raudan ylikuormitus taudin [5].
Viime aikoina useat tutkimukset ovat tutkineet mahdollisuuksia deferasiroksi kuin kasvainten vastaisen aineen. Deferasiroksi on raportoitu estävän NF-KB: n aktiivisuuden verinäytteistä potilailta, joilla oli myelodysplastinen oireyhtymä ja leukemiasolulinjoja [6]; Lisäksi deferasiroksi osoitettiin myös tukahduttaa mTOR väylän myeloidileukemiasolut [7]. Mitä kliiniset tiedot, yhdessä tapauksessa raportti osoitti, että deferasiroksi hoito saavuttaa täydellisen remission potilailla kemoterapiaa tulenkestävä akuutti monosyyttileukemian [8]. Lisäksi post hoc analyysi monikeskustutkimus paljasti, että deferasiroksi parani hematologisia parametrejä potilailla myelodysplastista oireyhtymää [9]. Tällä hetkellä useimmat raportit deferasiroksi kuin kasvainten vastaisen aineen olleet hematologisia syöpiä; vain muutamia tutkimukset ovat keskittyneet kiinteitä kasvaimia. Äskettäin deferasiroksi on osoitettu estävän kasvua keuhkojen ja ruokatorven syöpä soluja sekä in vitro että in vivo [10, 11]. Kuitenkin vaikutus deferasiroksi mahalaukun syöpä ei ole vielä määritetty, ja mekanismi, jolla deferasiroksi kykenee sen tuumorin vastaista vaikutusta on edelleen huonosti ymmärretty. Siksi tämä tutkimus tehtiin tutkia deferasiroksi kykenee anti-kasvain vaikutuksia mahasyövässä solulinjoissa ja onko deferasiroksi vaikuttaa synergistisesti sisplatiinin. Tool Menetelmät
Soluviljely
Neljä ihmisen mahasyövän solulinjoissa (AGS, MKN-28, SNU-484, ja SNU-638) saatiin Korean Cell Line Bank. Kaikki solut viljeltiin RPMI 1640 -elatusaineessa, joka sisälsi 10% naudan sikiön seerumia ja antibiootteja (100 U /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä), kostutetussa 5% CO 2-inkubaattorissa 37 ° C: ssa.
Reagenssit ja vasta
Deferasiroksi (Exjade®) lahjoitti Novartis (Basel, Sveitsi). Vuohen polyklonaalinen anti-NDRG1 (N-myc
alavirtaan säännelty geeni 1) (luettelonro. Ab37897) ja kanin polyklonaalista anti-ferroportin (luettelonro. Ab85370) vasta-aineet ostettiin Abcam (Cambridge, UK). Anti-TFR1 hiiren monoklonaalisia vasta-aineita (luettelonro. 136800) saatiin Life Technologies (Carlsbad, CA, USA), ja FeSO 4 ostettiin Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Anti-p53, anti-P27, p21, sykliini A, sykliini B, sykliini D1, sykliini E, CDK2, CDK4, CDK6, c-myc, pro-kaspaasi 3, ja BAX vasta ostettiin Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Anti-p-mTOR ja pro-kaspaasi 8-vasta-aineita saatiin Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA).
Kasvun inhibitiotesti
Kasvun estäminen mitattiin MTT: tä (3- [4,5-dimethylthiazol- 2-yyli] -2,5-difenyylitetratsoliumbromidi), kuten aiemmin on kuvattu [12]. Lyhyesti, solut siirrostettiin (2 x 10 3 solua /kuoppa) 96-kuoppaisille mikrotiitterilevyille (Nunc, Roskilde, Tanska) ja inkuboitiin 37 ° C: ssa 24, 48 tai 72 h. MTT-liuosta (50 ui) Sigmalta (2 mg /ml PBS: ssä) lisättiin kuhunkin kuoppaan, ja levyjä inkuboitiin vielä 4 h 37 ° C: ssa. Tämän inkuboinnin jälkeen MTT-liuos imettiin pois. Liuottamiseksi formatsaanikitei- muodostuneet kiteet elinkelpoisten solujen, 200 ui DMSO: ta lisättiin kuhunkin kuoppaan. Levyjä ravisteltiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa, ja kunkin kuopan absorbanssi 595 nm: ssä luettiin välittömästi skannaus monikuop- spektrofotometrillä (Bio-Rad, iMarkTM mikrolevylukijaa).
Määrittämiseksi pitoisuus deferasiroksi vaaditaan tappamaan 50% soluista (IC 50), AGS, MKN-28, SNU-484, ja SNU-638-soluja käsiteltiin 0, 1, 10, 50, ja 100 uM deferasiroksi 24, 48, ja 72 h. Näitä tuloksia käytettiin valita mahalaukun solulinja, jolla on suurin herkkyys deferasiroksi kaikki myöhemmissä kokeissa.
Solusyklianalyysiä
jälkeen 24 tunnin inkubointi AGS soluja 0, 10, ja 100 uM deferasiroksi 37 ° C, solut pestiin kahdesti PBS: llä, kiinteä yön yli 70% etanolilla, pestiin PBS: llä ja värjättiin 50 ug /ml propidiumjodidia (PI), joka sisältää RNaasi A: ta 50 ug /ml. DNA-sisältö solujen (10000 solua /koeryhmä) analysoitiin käyttäen FACSCanto II virtaussytometrillä (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) varustettuna BD FACSDivaTM ohjelmisto (v6.1.3). Prosenttiosuudet solupopulaatioiden kussakin solusyklin vaiheessa (G1, S, tai G2 /M) laskettiin DNA: n määrä histogrammeja.
Western blot-analyysi
AGS soluja inkuboitiin 0, 10, ja 100 uM ja deferasiroksi 37 ° C: ssa 24 tuntia. Solut pestiin PBS: llä, suspensoitiin uudelleen lyysipuskuriin [50 mM Tris (pH 7,5), 1% NP-40, 2 mM EDTA, 10 mM NaCl: a, 20 ug /ml aprotiniinia, 20 ug /ml leupeptiiniä ja 1 mM fenyylimetyylisulfonyylifluoridia fluoria], ja pantiin jäihin 20 min. Proteiinit lysaateissa (20-30 ug) erotettiin 10-15% SDS-polyakryyli- denaturointia geelit ja siirrettiin nitroselluloosamembraaneille 90-120 min. Ei-spesifinen sitoutuminen estettiin 5% rasvaton maito 1 h, ja kalvoja inkuboitiin sitten yön yli primaarisilla vasta-aineilla (kaikki 1: 1000 laimennos). Vasta-aineet ja niihin liittyvät prosessit, joita käytettiin tutkimaan olivat seuraavat: anti-TFR1 ja anti-ferroportin raudan aineenvaihduntaa; anti-p53, P27, P21, sykliini A, sykliini B, sykliini D1, sykliini E, CDK2, CDK4 ja CDK6 että solusyklin; anti-pro-kaspaasi 3, pro-kaspaasi 8, pro-kaspaasi 9, ja BAX apoptoosin; anti-NDRG1 etäpesäkkeiden; ja anti-p-mTOR ja c-myc. Immunoreaktiivisia bändit visualisoitiin ECL kit (Intron, Korea).
Tilastollinen analyysi
Data esitetään keskiarvoina ± SEM (virhepalkkeja). Erot analysoitiin Studentin t
testiä. P
arvot < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkittäviksi.
Tulokset
vaikutus deferasiroksi kasvuun mahasyövän solulinjojen
kyky deferasiroksi kasvun estämiseksi neljän mahasyövän solulinjoissa oli määritetään MTT runsaudenmäärityksessä. AGS, MKN-28, SNU-484, ja SNU-638-soluja inkuboitiin 0, 1, 10, 50, ja 100 uM deferasiroksi 37 ° C: ssa 24, 48 tai 72 h. Deferasiroksi inhiboivat kaikki neljä mahasyövän solulinjoja on annoksesta riippuvainen ja aika-riippuvaisella tavalla (kuvio. 1a). Koska IC 50 deferasiroksi 72 tunnin oli alhaisin AGS soluissa (alle 10 uM), kaikki myöhemmät kokeet suoritettiin käyttäen näitä soluja. Kuva. 1 inhibitorinen vaikutus deferasiroksi kasvuun mahasyövän solulinjoissa. Cell elinkelpoisuus mitattiin MTT-määrityksellä. AGS, MKN-28, SNU-484, ja SNU-638-soluja inkuboitiin 0, 1, 10, 50, ja 100 uM deferasiroksi 37 ° C: ssa 24, 48 tai 72 h. Deferasiroksi hoito johti annoksesta riippuvainen ja ajasta riippuvaa kasvun estämistä kaikki neljä mahasyövässä solulinjoissa. b AGS soluja viljeltiin 10 ja 20 uM deferasiroksi joko yksin tai, kun läsnä on FeSO4 (100 uM) 48 tuntia. Inhiboivaa vaikutusta deferasiroksi purettiin FeSO4 täydentää
AGS soluja viljeltiin 10 ja 20 uM deferasiroksi joko yksin tai, kun läsnä on FeSO 4 (100 uM) 48 tuntia. Estovaikutus on deferasiroksi purettiin FeSO 4 täydennys (Fig. 1b).
Solusyklianalyysiä vuonna AGS soluissa
Iron ehtyminen indusoi G1 /S pidätyksen vaikuttamalla ilmaus kriittisen molekyylejä solusyklin etenemisen kuten sykliini D1 ja p21 [13]. Vaikutukset deferasiroksi on solusyklin määritettiin fluoresenssi-aktivoitujen solujen lajittelu (FACS) käyttäen propidiumjodidia. AGS soluja inkuboitiin 0, 10, ja 100 uM deferasiroksi 37 ° C: ssa 24 tuntia. Kuten on esitetty kuviossa. 2a, käsittelemällä AGS solujen deferasiroksi 24 tuntia johti kertyminen solujen G1 vaiheen annoksesta riippuvalla tavalla (41,8% 0 uM, 53,7% 10 uM, ja 77,2% 100 uM). Tämä tulos osoittaa, että deferasiroksi indusoi G1 pidätykseen. Western blot-analyysi solusyklin-sukuiset proteiinit osoittivat, että deferasiroksi indusoi säätelyä p21, p27, ja p53, ja downregulation sykliini D1, sykliini B, ja CDK4 (Fig. 2b). Nämä tulokset viittaavat siihen, että anti-proliferatiivista vaikutusta deferasiroksi johtuu solusyklin inhibitio. Kuva. 2 vaikutus deferasiroksi solusyklin etenemistä AGS soluissa. AGS soluja inkuboitiin 0, 10, ja 100 uM deferasiroksi 37 ° C: ssa 24 tuntia. Solusyklin etenemistä analysoitiin FACS. Deferasiroksi hoitoa 24 h johti annoksesta riippuvan kertymistä AGS soluja G1 vaiheessa (41,8% 0 uM, 53,7% 10 uM, ja 77,2% 100 uM). b Western blot-analyysi solusyklin liittyvien molekyylien osoitti deferasiroksi voimistunut p21, P27, ja p53 ja vaimentua sykliini D1, sykliini B, ja CDK4
vaikutus deferasiroksi rauta aineenvaihduntaa ja muita väyliä
Raudalle sisäänotto solu, verenkierrossa rauta-transferriini-kompleksit sitoutuvat solun pinnan reseptoriin TFR1. Rauta poistuu kautta ferroportin, silitysrauta effluksipumpun joka säätelee hepcidin. Syöpäsoluissa, TFR1 ja hepcidin on osoitettu voimistuvan ja ferroportin on vaimentua, joka kumulatiivisesti johtaa kohonneisiin solunsisäisen raudan [3]. Vaikutus deferasiroksi rauta metaboliaa arvioitiin Western blot-analyysi TFR1 ja ferroportin. Taso TFR1 lisääntyi 24 tunnin kuluttua hoidon deferasiroksi. Sen sijaan, ferroportin ilmentyminen väheni (Fig. 3a). Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​aiempien tutkimusten [10, 11]. Kuva. 3 vaikutus deferasiroksi rauta aineenvaihduntaa ja muita reittejä. käsittelemällä deferasiroksi 24 tunnin johti tehostettuun TFR1 ja tason alenemiseen ferroportin. b Deferasiroksi indusoi myös apoptoosin, ilmentyminen lisääntyy NDRG1, ja vaimentua p-mTOR ja c-myc arvioituna Western blot -analyysillä
vaikutukset deferasiroksi apoptoosiin oli seuraava arvioitiin FACS ja Western blot-analyysi apoptoosin liittyviä proteiineja. Kuten on esitetty kuviossa. 2a, AGS solut käsiteltiin deferasiroksi 24 tunnin näytteillä kertyminen solujen Saharan G1 (apoptoottisten) vaihe (3,2% 0 uM, 3,3% 10 uM, ja 9,5% 100 uM). Lisäksi deferasiroksi käsittely laski ilmentymisen pro-kaspaasi 3, pro-kaspaasi 8, ja pro-kaspaasi 9 ja lisääntynyt ilmentyminen BAX (Fig. 3b). NDRG1 tiedetään olevan vaimentimen solun kasvun ja etäpesäkkeiden. Deferasiroksi lisääntynyt taso NDRG1. Lisäksi c-myc ja fosfo-mTOR ilmentyminen väheni 24 tunnin kuluttua hoidon deferasiroksi (Fig. 3b). Nämä tulokset viittaavat siihen, että deferasiroksi indusoi apoptoosia, estää etäpesäkkeiden, ja estää c-myc ja mTOR polkuja.
Synergistinen vaikutus deferasiroksi ja sisplatiinin
Sen arvioimiseksi, onko deferasiroksi voisi voimistaa sisplatiinin, AGS soluja viljeltiin tai ilman sisplatiinia, ja niiden elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT-määritystä. Sisplatiini 48 tuntia vähensi elinkykyisten solujen lukumäärä, joilla on IC 50 5-10 uM. Sen määrittämiseksi, onko deferasiroksi kohdistaa synergistinen vaikutus sisplatiinin kanssa, AGS-soluja käsiteltiin 0, 2,5, 5, 10, ja 20 uM deferasiroksi joko yksin tai, kun läsnä on kiinteän pitoisuuden sisplatiinin (5 uM) 48 tuntia. Kuten on esitetty kuviossa. 4a, b, AGS solut käsiteltiin deferasiroksi ja sisplatiinin oli huomattavasti suurempi lasku solujen elinkelpoisuus verrattuna soluihin käsitelty joko deferasiroksi tai sisplatiinia yksinään (P
< 0,01). Nämä tulokset viittaavat siihen, että deferasiroksi parantaa sisplatiini estoa AGS solujen kasvua. Kuva. 4 synergistinen vaikutus deferasiroksi ja sisplatiinin. a, b AGS-soluja käsiteltiin 0, 2,5, 5, 10, ja 20 uM deferasiroksi, joko yksin tai, kun läsnä on kiinteän pitoisuuden sisplatiinin (5 uM) 48 tuntia. AGS solut käsiteltiin deferasiroksi ja sisplatiinin osoitti merkittävää vähenemistä solujen elinkelpoisuus verrattuna soluihin käsitelty joko deferasiroksi tai sisplatiinia yksinään
tutkimiseksi molekyylitason mekanismeista em Western blot-analyysiä käytettiin arvioimaan tasot eri molekyylien AGS solut, joita käsiteltiin deferasiroksi (5 uM), sisplatiinia (5 uM), tai molempia. Yhdistelmä deferasiroksi ja sisplatiinin johti ylösajon NDRG1, p21, ja p53. Sitä vastoin, tämä yhdistelmä johti downregulation fosfo-mTOR, ferroportin, ja pro-kaspaasi 9. Nämä havainnot viittaavat siihen, että deferasiroksi voimistaa syövän vaikutukset sisplatiinin läpi eri reittiä (Fig. 5). Kuva. 5 Molecular mekanismeja synergistisen vaikutuksen. Western blot analyysi suoritettiin lysaattien AGS käsiteltyjen solujen deferasiroksi (5 uM), sisplatiinia (5 uM), tai molemmat 24 tuntia. Yhdistelmä deferasiroksi ja sisplatiinin indusoi säätelyä NDRG1, p21, ja p53, lisäksi downregulation fosfo-mTOR, ferroportin, ja pro-kaspaasi 9
Keskustelu
Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että deferasiroksi inhiboi leviämisen mahalaukun syöpäsoluja. Deferasiroksi havaittiin myös aiheuttavan G1 pidätystä; upregulate p21, P27, ja p53 ilmaus; ja downregulate sykliini D1, sykliini B, ja CDK4 ilme. Deferasiroksi indusoi myös apoptoosin voimistunut NDRG1 ja vaimentua p-mTOR ja c-myc. Nämä tulokset viittaavat siihen, että deferasiroksi kykenee antituumorivaikutuksia mahalaukun syöpäsoluissa kautta eri reittejä. Erityisesti meidän tiedot osoittavat, että deferasiroksi muuttaa rauta aineenvaihduntaa, estää solusyklin etenemistä, vaikuttaa mTOR signalointi ja etäpesäkkeiden polkuja, ja indusoi apoptoosia. Lisäksi, deferasiroksi näyttää voimistaa anti-proliferatiivista vaikutusta sisplatiinin mahasyöpä soluissa.
Rauta on välttämätön solujen eloonjäämistä, mutta voi myös aiheuttaa soluvaurioita tuottamalla reaktiivisia happiradikaaleja [14]. Vaikka taso solunsisäisen rauta on tiukasti säädeltyä normaaleissa soluissa, taso solunsisäisen rautaa on kohonnut syöpäsoluissa lisääntyneen ilmentymisen TFR1 ja hepcidin ja vähentää ilmentymistä ferroportin [3]. Koska ylimäärä rautaa ja muuttaa raudan aineenvaihdunnassa voivat johtaa kasvaimen aloittamista ja kasvua, rautakelaattorit uskotaan lupaavia syöpälääkkeet. Useita rivejä todisteet tukevat ajatusta, että rautakelaattorit ovat mahdollisia syöpähoidoissa. Ensinnäkin, kohonneita solunsisäisiä raudan tiedetään edistävän DNA-synteesiä. Koska rauta on olennainen aktiivisuuden ribonukleotidireduktaasin, on keskeinen entsyymi DNA-synteesiin, rauta on tärkeä rooli solujen lisääntymisen [15]. Siksi lisääntynyt raudan lisäämään ribonukleotidireduktaasiaktiivisuuden aktiivisuutta kasvainsoluja. Toiseksi, rauta ehtyminen voi aiheuttaa G1 /S pidätyksen ja apoptoosin [13]. Sykliini D1 sitoutuu CDK4 ja CDK6, mikä johtaa G1 /S progressiota fosforylaatioon retinoblastoomaproteiinia (RB). Tämä fosforylaatio puolestaan ​​johtaa vapauttaa transkriptiotekijän E2F alkaen RB. Rauta ehtyminen tiedetään vähentävän sykliini D1 ja CDK ilme. Kolmanneksi, liiallinen solun rauta voi ajaa Wnt-signalointireitin, jonka tiedetään olevan tärkeä syövän etenemistä [16].
Teimme tämän tutkimuksen tutkia deferasiroksi kykenee antituumorivaikutuksia yhteydessä syöpään. Valitsimme Deferasiroksi ulos lukuisista kaupallisesti saatavilla rautakelaattorit koska sen suun saatavuus ja lievästi myrkyllisiä. Vaikka täsmälliset mekanismit, joilla deferasiroksi kykenee sen syöpälääkkeen vaikutuksia tutkitaan edelleen, me arveltu, että deferasiroksi estää solusyklin etenemistä perustuu aiempiin tutkimuksiin [11, 17]. Huomasimme, että deferasiroksi aiheuttama G1 pidätyksen säätelemällä p21 ja p27 ja vähen- tämisessä sykliini D1 ja CDK4. Nämä havainnot tukevat hypoteesia, että deferasiroksi kykenee sen antineoplastisia vaikutuksia säätelemällä solukierron etenemistä.
Rautakelaattorit voi indusoida NDRG1, joka on tunnettu metastaattinen vaimennin, erilaisia ​​ihmisen syövissä [18-20]. Mekanismi, jolla NDRG1 vaimentaa etäpesäkkeiden on tällä hetkellä epäselvä, vaikka NDRG1 on osoitettu estävän solujen vaeltamiseen ja hyökkäyksen ilmentymisen moduloimiseksi useita adheesiomolekyylien [21]. NDRG1 ilmentyminen on osoitettu olevan merkittävästi pienempi syöpäkudoksessa verrattuna viereiseen normaaliin kudokseen; Lisäksi NDRG1 ilmentyminen on osoitettu korreloivan käänteisesti kanssa metastaasin joidenkin syöpien, kuten paksusuolen ja peräsuolen syöpä [22, 23]. Kuitenkin poikkeavia tuloksia on saatu koskien mahdollista yhdistys NDRG1 kanssa syövän etenemiseen. Mielenkiintoista, NDRG on osoitettu rooli solusyklikontrollin. Erityisesti NDRG1 ilmentyminen ylössäädellään kautta p53-välitteisen induktion ja NDRG1 voivat myös aiheuttaa G1 /S pidätyksen säätelemällä p21 [24]. Olemme havainneet, että deferasiroksi makkaasti ekspressiotasot NDRG1, p53, ja p21. Vaikka emme määrittämään solujen vaeltamiseen tai tutkia etäpesäkkeitä in vivo esillä olevassa tutkimuksessa, meidän havainnot viittaavat siihen, että deferasiroksi ehkä estää kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden. Oletamme, että mekanismi, jolla deferasiroksi kykenee sen kasvaimen vastainen vaikutus voi liittyä NDRG1.
Deferasiroksi on osoitettu lisäävän sytotoksista vaikutusta sisplatiinin ruokatorven syöpään solulinjoissa. Lisäksi, sisplatiini-resistentit solut käsiteltiin pienellä pitoisuudella deferasiroksi (5 uM) yhdistelmänä sisplatiinin kanssa osoittivat merkittävää vähenemistä solun elinkelpoisuuden verrattuna käsiteltyjen solujen deferasiroksi tai sisplatiiniin yksin [10]. Huomasimme, että yhdistelmä deferasiroksi (5 uM) ja sisplatiinin (5 uM) indusoi merkittävän laskun solujen elinkelpoisuutta. Lisäksi tämä yhdistelmähoito johti ylösajon NDRG1, p21 ja p53 ja downregulation fosfo-mTOR. Tuloksemme viittaavat siten siihen, että deferasiroksi voi mahdollisesti parantaa syövän vastaista vaikutusta sisplatiinin mahalaukun syöpäsoluja. Lisäksi p53-NDRG1-p21 ja mTOR reitit voivat olla mukana synergiavaikutuksesta deferasiroksi sisplatiinin.
Tämä tutkimus ei ole useita rajoituksia. Ensinnäkin rajoitettu Tutkimuksemme syöpään solulinjoissa eikä suorita mitään in vivo kokeissa. Lisäksi, ekspression solusyklin liittyvien proteiinien arvioitiin vain Western-blottauksella. Yksityiskohtaisempia tietoja olisi saatu immunosaostuksella ja kinaasimäärityksiä. Määrittämään kasvaimen vastainen vaikutus deferasiroksi lisäkokeita mukaan lukien in vivo olisi tarpeen. Kuitenkin, tämä on ensimmäinen tutkimus tutkimaan kasvaimen vastainen vaikutus deferasiroksi vastaan ​​mahasyövässä.
Päätelmät
Lopuksi, olemme huomanneet, että deferasiroksi indusoi anti-kasvain vaikutuksia mahalaukun syövän soluihin eri reittejä. Erityisesti deferasiroksi voimistunut NDRG1, esti solusyklin etenemistä, vaimentua mTOR ja c-myc ilmaisun, ja indusoi apoptoosin. Lisäksi deferasiroksi voimisti syövän vaikutukset sisplatiinin. Vaikka tehoa deferasiroksi on vahvistettava tulevissa tutkimuksissa, tuloksemme osoittavat, että Deferasiroksi on lupaava syövän vastaisen terapeuttista ainetta, ja se voi myös olla tehokas kemoterapia herkistävä.
Julistukset
Kiitokset
työtä tukivat tutkimuksen rahasto Hanyang yliopiston (HY-2013-MC).
Open AccessThis artikkeli jaetaan ehtojen mukaisesti Creative Commons Nimeä 4.0 International License (http: //creativecommons. org /lisenssejä /by /4. 0 /), joka mahdollistaa rajoittamattoman käytön, jakelun, ja lisääntyminen tahansa mediassa, kunhan annat asianmukaiset luottoa alkuperäinen kirjoittaja (t) ja lähde, antaa linkin Creative Commons lisenssin, ja ilmoittaa, jos muutoksia tehtiin. Creative Commons Public Domain Dedication luopuminen (http: //creativecommons. Org /public domain /nolla /1 0 /) sovelletaan toimitetut tiedot tässä artikkelissa, ellei toisin mainita.
Kilpailevat edut
kirjoittajat ilmoittavat, että heillä ei ole kilpailevia intressejä.
Tekijät osuudet
JC ja YL osallistui suunnittelu ja analyysi nykyisen tutkimuksen. JC kirjoitti paperille. JK suorittaneen molekyylitutkimukset. YW, JU, BP vaikutti koostumuksessa paperin. Kaikki kirjoittajat lukea ja hyväksyi käsikirjoituksen.

• Samanaikainen komposiitti lisämunuaisen pheochromocytoma, useita mahalaukun stroomakasvaimet ja pseudohermaphrodism potilaalla von Recklinghausens tauti
• Iris etäpesäke mahalaukun adenokarsinoomaa