Diferenciálnej expresie génu v myšom žalúdočnej fundus chýba intersticiálna bunky Cajal

Diferenciálnej expresie génu v myšom žalúdočnej fundus chýba intersticiálna bunky Cajal
Abstract
pozadí
svalových vrstiev myšieho žalúdočného fundusu nemajú intersticiálna bunky Cajal na úrovni plexus myentericus a len majú intramuskulárnej intersticiálnych buniek a táto tkanivo nevytvára elektrické pomalé vlny. Absencia intramuskulárnych intersticiálnych buniek vo W /W
V
mutanty poskytuje jedinečnú príležitosť študovať molekulárne zmeny, ktoré sú spojené so stratou týchto interkalační buniek.
Metóda
gén profil expresie žalúdočné fundusu divokého typu a W /W
v
myší bola testovaná myšiam microarray analýzy zobrazovania celkom 8734 prvkov. Dopytované gény z microarray analýzy boli potvrdené pomocou semi-kvantitatívnej reverznej transkripcie-polymerázovej reťazovej reakcie.
Výsledky
dvadsaťjeden gény boli odlišne exprimované v divokého typu a W /W
v
myši. Jedenásť prepisy mal 2,0-2,5 násobne vyššia expresiu mRNA vo W /W
V
žalúdočného fundusu v porovnaní s tkanivom divokého typu. Desať prepisy mal 2.1-3.9 násobne nižšia expresiu v W /W
V
mutantov v porovnaní s typovo zvierat voľne žijúcich. Žiadny z týchto génov, ktoré kedy boli zapojené v žiadnom funkciu čriev pohyblivosti.
Závery
tieto údaje poskytuje dôkaz, že niekoľko dôležitých génov významne zmenili v myšiam fundusu W /W
v
mutantov, ktoré nemajú intramuskulárna intersticiálna bunky Cajal a znížili enterickej motora prenos nervových vzruchov.
pozadí
intersticiálna bunky Cajal (ICC) sú gastrointestinálne (GI) pacemaker bunky a sprostredkovatelia v enterosolventným motore neurotransmisie v gastrointestinálneho traktu [1, 2 ]. ICC express KIT
/c-kit stroje a sú závislé na signalizáciu pomocou proteínového produktu génu, KIT, receptor tyrozín kinázy, ktorý je nevyhnutný pre vývoj a údržbu ICC fenotypu [3]. Mutácie v bielych škvŕn
lokuse (tj. W /W
V
) majú za následok zníženú expresiu KIT. Tieto mutantný zvieratá vyvinúť niekoľko ICC na úrovni plexus myentericus (IC-MY) v tenkom čreve a zníženie počtu ICC je spojená so stratou aktivity s pomalými vlnami. Intramuskulárne ICC (IC-IM) sa nachádza v žalúdku, dolného pažerákového zvierača a pyloric chýba vo W /W
v
mutantných zvierat [4]. Znížené množstvo ICC boli hlásené aj v niekoľkých porúch GI motility, ako je chronická črevná pseudo-obštrukcie [5, 6], infantilné hypertrofickou stenóze pyloru [7-9], Hirschsprung choroba [10-12], pomaly tranzitné zápchy a niektoré formy gastroparézy [13, 14].
Spojenie medzi poruchami motility a straty špecifických populácií ICC naznačuje, že úplnejší pochopenie molekulárnej a bunkovej biológie ICC sietí v gastrointestinálnom trakte môže pomôcť v pochopení etiológie niektorých GI motorových patologických stavov. Cieľom tejto štúdie bolo charakterizovať genetické sekvencie, ktoré sú vyjadrené v ICC v žalúdku, ktoré môžu kódovať dôležité funkčné prvky neurotransmisie systému GI pacemaker /motora. sledovaný sme hypotézu, že tieto gény by mohli ukázať, diferenciálnej expresiu v tenkom čreve myší divokého typu a W /W
v
myší [15, 16]. skôr sme identifikovali pätnásť známe a nové gény, ktoré boli odlišne exprimovaný v tenkom čreve divokého typu a W /W
v
myši, ktoré rozvíjajú niekoľko IC-MY s použitím expresného metódy diferenčné génovú [17, 18].
v tejto štúdii sme predpokladali, že tam môže byť tiež diferenciálnej expresie génov v žalúdočnej fundusu W /W
v
myší, kde sa IC-IM stratené. Náš gén microarray analýzy úspešne identifikoval 21 génov, ktoré boli rozdielne vyjadrené v fundusu m /m
v
myší. Diferenciálnej expresie týchto myší bola potvrdená semi-kvantitatívne reverznej transkripcie-polymerázovej reťazovej reakcie (RT-PCR).
Metódy Zvieratá a
Príprava tkaniva
použitie a spracovanie experimentálnych zvierat bol schválený v pokyne upravujúce experimentu výbor Animal na University of Yamanashi School of Medicine a na University of Nevada School of Medicine. Šesť dospelých mužov WBB6F1 - + /+ myší (divokého typu) a veku uzavreté šesť dospelý muž WBB6F1-W /W
V
myší, s hmotnosťou 20 až 30 g, boli zakúpené z Japan SLC, Inc. (Shizuoka , Japonsko). Ktoré boli anestéziu éterom alebo oxidom uhličitým pri vdýchnutí a usmrtia cervikálnou dislokáciou. Pre analýzu génu, žalúdky boli odstránené zo zvieraťa a sliznice s priloženým submukóze rýchlo ostré členitý z tunica muscularis
. Tkanivá boli následne zmrazené v tekutom dusíku (-196 ° C). Tkanivá boli uchovávané pri -80 ° C, kým bolo vykonané Izolácia RNA [18].
RNA Príprava a Microarray analýza dát
Pre analýzu génovej microarray, poly (A) + RNA bola izolovaná z každej vzorky tkaniva pomocou TRIzolu ( life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD, USA) a Poly (a) + Isolation Kit z celkovej RNA (ISOGEN, Nippon Gene, Tokyo, Japonsko). 18 Pred začatím microarray analýzy, diferenciálnej génovej expresie KIT
medzi žalúdočným fundusu tkaniva myší divokého typu a tí W /W
v
mutantný myši bola potvrdená semikvantitatívny RT-PCR (pozri časť Semi-kvantitatívna RT-PCR
) (obr. 1A). Mikročipy boli hybridizovány a skenované a analýza obrazu bola vykonaná, ako bolo opísané skôr [19, 20]. Stručne povedané, zmeny v génovej expresie bola hodnotená reverzný transkripciou poly (A) + RNA v prítomnosti Cy3 alebo Cy5 fluorochrómy nasledované hybridizáciou na myšiach GEM 1 microarray čipov (Incyte Genomics, Inc., Porter Pohon Palo Alto, CA, USA). K potvrdeniu platnosti teste experimenty boli vykonané duplicitne. V 8734 cDNA sme použili predstavovať 7854 unikátnych génov /UniGene klastre: 3205 sú komentované a 4649 sú bez vysvetliviek sekvencie. pridelený sme hodnotu cut-off, pomocou analýzy variance, aby mikromaticovému snímke. Gény, ktorých Cy3- a Cy5 intenzity signálu boli nižšie ako limitné hodnoty boli vyradené z ďalšieho skúmania. Vyvážený diferenciálnej expresie bola stanovená na myšiach kontrola divokého typu oproti W /W
v
mutovaných myší. Hodnoty, ktoré boli < -2,0 Alebo > 2.0 na oboch dvoch nezávislých experimentoch boli považované za významné, a priemerné hodnoty pomerného podielu fluorescencie pre každý gén boli vypočítané. Obrázok 1 A. Expresia génu KIT
pomocou semi-kvantitatívnej RT-PCR, v žalúdočných fundusu tkanivách z divokého typu a W /W
V
mutant myšou udržiavaných nalačno
podmienok. GAPDH
hladiny boli merané ako kontrola. B. Obrázok vyjadrujúce DNA microarray hybridizácia. Zmeny v génovej expresii, ktoré boli zastúpené pomerom intenzity fluorescencie meranej pomocou Cy3 a Cy5 fluorochrómy. Expresné profily boli hodnotené reverzný transkripciou poly (A) + RNA z žalúdočného fundusu svalov z divokého typu a W /W
V
myší v prítomnosti Cy3 alebo Cy5 fluorescenčných farbív pre označovanie nasleduje hybridizácia myšou GEM 1 mikročipy. Obraz je ukázané bol vytvorený navrstvením fluorescenčné obraz Cy5 (pseudo-zelenej farbe, ktorá predstavuje hladinu expresie RNA z tunica muscularis
W /W
V
fundusu) a fluorescenčné obraz Cy3 (pseudo farebné červenej, ktorá predstavuje RNA expresiu z tkanív divokého typu). Čipy boli kontrastne zafarbený s DAPI (modrá). C. Potvrdenie spoľahlivosti dát microarray semikvantitatívny RT-PCR. Reprezentatívne príklady RT-PCR analýzou, vo fundusu tkanivách od šiestich divokého typu a šesť W /W
V
mutantných myší udržovaného vyhladovaných podmienok. Expresia génu CPO
bol výrazne znížený fundusu m /m
V
myší v porovnaní s vekom uzavreté myšou divokého typu, zatiaľ čo MCM7
gén došlo k nárastu expresie vo W /W
V
myšou. D. Relatívna úroveň expresie CPO
(CPO
/GAPDH
) a MCM7
(MCM7
/GAPDH
) vo fundusu tkanivách zo šiestich divokého typu a šesť W /W
V
mutantný myši. Údaje predstavujú strednú hodnotu (± SD) zo šiestich rôznych RT-PCR experimentoch s použitím šesť divokého typu alebo W /W
V
fundusu RNA ako šablóny.
Semi-kvantitatívna RT-PCR
úrovne expresie mRNA, ktorá bola znížená alebo zvýšená podľa > 2,0-násobný alebo vyšší, boli potvrdené semi-kvantitatívnej RT-PCR z fundusu 6 jednotlivých myší divokého typu a W /W
v
myší. RT-PCR bola vykonaná, ako bolo opísané skôr [18]. V stručnosti, 2 ug alikvótne celkových RNA liečených DNázy I (Roche Diagnostics, Basel, Švajčiarsko) z myší fundusu tkaniva boli použité pre syntézu jednoreťazcový cDNA. Tieto cDNA boli použité ako Temple pre PCR v termocykléri (Perkin Elmer, Shelton, CT, USA), za použitia primérov uvedených v tabuľke 1 alebo KIT
(5'-ATG TCA TGA ACG AGA CTT GCT-3 'a 5' -CTA CCC TGG AGG AAT ATG CA-3 '), a GAPDH
špecifických primérov (5'-GACAACAGCCTCAAGATCATCA-3' a 5'-GGTCCACCACTGACACTGTG-3 '). Expresia GAPDH
slúžila ako vnútorná kontrola. Primery boli odvodené z rôznych exónov v rovnakom génu, kedy bola k dispozícii zodpovedajúce myší genómovej sekvencie v tej dobe. PCR reakcie boli optimalizované pre počet cyklov, aby zabezpečili intenzity produktu v lineárnej fáze amplification.Table 1 primérov použité pre semi-kvantitatívne RT-PCR.
Gene Názov
prístupové č
Forward Primer
reverznej primer
spoločností EST
AA185701
CGA AAG SCS TGA GMT TGA AG
TAG GAA AAC AGG CGT CAC TG
EST
AA166336
GAA GAA GCT AAG GCA Gat CG
CAA GAG GCA AAG AGC AAT CC
EST
AA021806
CAC GAA TTG CAG GAC TAC vo CT
ACC TGC ACT GTA GGC TGA GT
MCM7
Q61881
GCC CAC TGG ATT GTG AAG na
AGG AGA CTG GTC CAC ACC AC
P160 ROCK2

U58513
AAG AAC CTG TCA AGC GTG GT
TCC AGG GTC ATC TGG AGT TC
EST
W18585
AGA CTT GGT GGC AGA GGA GA
GCA GCT CAT GAC AGA ACA CC
EST
AA403748
SCS AAA GCA ACC CAA SCS GA
TAG SCS TAT GGG TGG ACC TG
BST1 /BP3
Q64277
GAT TTC TTG AGC TGG TGT CG
AAA ACC CTC TCG TGG GAT AG
EST
AA024250
CAG ATA GAG GGG CAA ATG GA
CTG AGC CCA AAC CAG TAG AA
RBP2

Q08652
GAC GAA GGA CCA TGG AAA AA
CGG TGA AAT CCA GMT CGT AG
EST
W46016
AGC AAC AAC AGC TGG ACT TC
ACC TTC TGT TTG GTG CTG AG
BP1 /6C3
S30398
TAT CGG SCS CAT CTA ACC AG
ATC TTC AAG CAG CAC CTG AC
EST
AI552444
mačka GCG ATA CTG GAA CAT GA
TGA CTC CAA ATA GCC CTC AG
EST
AA108876
TGG AGC AAG AGA GGA AAG TG
CTA GAC CTG AGC TTG SCS TG
EST
AA049294
ACG TGG AGA AAG TTC TCG TG
GCA ATA GTG TCA CCG AAT CC
EST
AA254777
GCC CTG GAG TTG AGA CTG TA
TGA CAA GCT GCA CAG TAA CC
Rham
AF031932 GCA GAA GGA GGA GCA GAG TG
GCA GTG ACG TCC CTC AGA CT
EST
AA002293
AAG TCT TTG TGT GGG CTG AG
AGG AAG CTT CGT CTC TCC AT
EST
AI595081
CAC CAG Gat GTC TGC CTA CT
CCG AGA TCA TGT TCT TCA CC
CPO
D16333
GAA GAC CAA GAT GGA GCT GA
CAG AAA GAT TCC CAT GAA CG
EST
AA000304
TTC ATC TGC TGC TCC TTC TC
TTA tag ACC TTC CCG CAC AG
Výsledky
Microarray analýza a Semi množstevné RT-PCR
K identifikácii génov, ktoré môžu byť selektívne spojené s IC-IM, porovnali sme génovej expresie vzory v žalúdočnom fundusu tkanivách odvodených od divokého typu a m /m
v
myší s využitím metóda génovej microarray [19, 20]. Myšou fundus bez epiteliálnych tkanív odvodených od divokého typu a W /W
v
myši udržiavanej nalačno
podmienky boli použité na vytvorenie poly (A) + mRNA pre microarray analýzy pomocou myši GEM 1 microarray , Výsledky tohto experimentu s dôrazom na gény, ktoré boli opakovateľne zvýšiť alebo znížiť pomocou > 2,0-násobný alebo vyšší, sú uvedené v tabuľke 2 a na obr. 1B. Niekoľko známych a nové gény boli odlišne exprimované vo fundusu W /W
v
myší (viac ako 2,0 vyvážený rozdielna expresie). Pre potvrdenie diferenciálnej expresné profily, my ďalej skúmané hladiny expresie v myšiam fundusu mRNA odvodenej od divokých typov a W /W
V
myši udržiavané nalačno
podmienok ako šablóny, pomocou semi-kvantitatívnej RT-PCR analýza (Reprezentatívna údaje boli znázornené na obr. 1C, 1D. Všetky súbory primérov použité pre potvrdenie boli uvedené v tabuľke 1). Expresie desiatich génov bola významne znížená v žalúdku fundusu W /W
V
myší v porovnaní s myšami divokého typu vekových uzavreté. Ďalších jedenásť génov preukázali zvýšenie expresie u hladujúcich W /W
v
mice.Table 2 Analýza génovej expresie v fundusu divokého typu a m /m
V
myšou
Gene Name
W W pomer /
V
/divokého typu (a)
prírastkové č
bunkovej umiestnenia (b)
Cytoband (c)
EST
2,5
AA185701
EST
2,5
AA166336
EST
2.4
AA021806
MCM7
: DNA replikácie licencií Factor
2,4
Q61881
jadro
7q21.3-q22.1
P160 ROCK2
: Rho-pridružené proteínkináza
2,3
U58513
cytoskelet
2p24
EST
2.3
W18585
EST
2.3
AA403748
BST1 /BP3
: ADP-ribosyl cyklázy 2 prekurzorom
2,0
Q64277
membrány
4p15
EST
2,0
AA024250
RBP2
: viažuci retinol proteín 2, bunkový
2,0
Q08652
cytoplazmy
3q23
EST
2.0
W46016
BP1 /6C3
: glutamyl Aminopeptitase štáty - 2,1
S30398
membrána
16
EST
-2,2
AI552444
EST
-2,3
AA108876
EST
-2,4
AA049294
EST
-2,4
AA254777
RHAME
: Hyaluronan sprostredkovaná Pohyblivosť receptor
-2,5
AF031932
membrány
5q33.2-qter
EST
-2,5
AA002293
EST
-3,4
AI595081
CPO
: Coproporphyrinogen oxidázy
-3,6
D16333
mitochondrií
3q12
EST
-3,9
AA000304
(a) Balanced rozdiel výraz pre ovládanie myšou divokého typu vs W /W
V
mutovaných myší. Hodnoty, ktoré boli znížené, alebo sa zvýšili o > 2-násobný alebo vyšší v oboch dvoch nezávislých experimentoch boli považované za významné, a priemerné hodnoty boli vypočítané. Všetky výsledky boli potvrdené semi-kvantitatívnej RT-PCR s použitím fundusu tkaniva zo šiestich divokého typu a šesť W /W
V
mutantných myší. (B) bunkové umiestnenie určí zdrojový program http: //. Source Stanford edu .. (D) ľudské chromozomálnej lokalizácie génu.
Diskusia
Porovnanie odlišne exprimovaných génov z fundusu W /W
v
myši pomocou analýzy DNA microarray bolo zistené, že expresia jedenásť gény prepisy výrazne vzrástli-regulovaný W /W
v
myši, zatiaľ čo desať génov prepisy boli výrazne potlačený u týchto zvierat. Potvrdili sme tieto výsledky s semikvantitatívny RT-PCR tkanív zo šiestich každého z divokého typu a m /m
v
myší. Dáta získané z týchto experimentov ukazujú, že expresie génov bola špecificky upravená v W /W
v
myší.
Jedenásť gény, ktoré boli up-regulované v žalúdočnej fundusu W /W
v
myši boli identifikované ako MCM7
P160 ROCK2
, BST1 /BP3
RBP2 stroje a ďalších siedmich bez vysvetliviek prepisov. MCM7 je cicavcov homolog kvasinkového proteínu jadrového MCM2 /CDC47, ktoré sa predpokladá, že hrajú dôležitú úlohu v dvoch zásadných krokoch bunkového cyklu, a to, počiatok replikácie DNA a delenie buniek [21, 22]. P160 ROCK2, ktorý je ISOZYME ROCK1 je cieľom pre malé GTPáza, Rho [23]. ROCK2 je serín /treonín kináza, ktorá reguluje cytokinezi, kontrakcie hladkého svalstva, tvorbu aktinových stresových vlákien a fokálnej adhézie, a aktiváciu odozvy v sére prvku FOS [24]. Up-regulácia P160 ROCK2 môže mať kompenzačné vplyv na stratu mechanizmov ICC závislých v žalúdočnej fundu. BST1 /BP3, kostnej drene stromálne bunky povrchového antigénu, je variabilne glykozylovaný glykozyl-fosfatidylinozitol (GPI), viazaná molekula, ktorá je selektívne exprimovaný skoro B a T buniek a počtu riadkov diskrétne subpopulácie retikulárnych buniek v periférnych lymfoidných orgánoch. To je tiež exprimovaný na kefkovitý leme črevného epitelu, luminální povrch obličkových tubulov a zrelých myeloidných buniek [25]. Tento proteín má patriť k ADP-ribosyl cyklázy rodiny [26]. Bunková RBP2 je hojný 134-zvyšok proteín prítomný v malom črevného epitelu [27]. Predpokladá sa, že podieľať sa na príjme a /alebo intracelulárnu metabolizmus vitamínu A a patrí do rodiny proteínov, ktorý obsahuje mastné pečene proteín viažuci kyseliny. Vitamín A je vitamín rozpustný v tukoch potrebná pre rast, reprodukciu, diferenciáciu epitelových tkanív a videnie. Cicavce sú závislé na črevnú absorpciu tohto vitamínu pre ich prežitie. RBP2, ktorá je obmedzená prevažne na tenkého čreva erytrocytoch, čo pravdepodobne hrá dôležitú úlohu v črevnej absorpcii a /alebo metabolizmu vitamínu A [27].
Tiež potvrdila down-regulácia génov v desiatich W /W
v
myší: BP1 /6C3
RHAME
CPO stroje a ďalších sedem bez vysvetliviek EST. Myšou β-lymfocytárnej antigén diferenciácie, BP1 /6C3, ktorý bol charakterizovaný glutamyl aminopeptidázy, ktorý je údajne slúžiť ako bunkové diferenciačné marker lymphomyelocytic línií a môžu byť zapojené do bunkovej aktivácii, transdukcia signálu, a bunka-matrice adhézie. To je tiež vyjadrený kapilárnych endoteliálnych buniek, placenty a epiteliálnych buniek čreva a proximálnych tubuloch obličiek [28]. RHAME
kóduje proteín hyaluronan receptor [29]. Pri hyaluronan viaže na RHAME, fosforyláciou radu proteínov, vrátane ohniskovej adhézie kinázy FAK-pp125 dochádza [30]. To je nevyhnutným krokom pre demontáž ložiskových kontaktov a následné pohyblivosti. CPO je šiesta enzým heme biosyntetické dráhy. Tento rozpustný proteín je lokalizovaný v priestore intermembrane mitochondrií a katalyzuje konverziu dvoch propionátu skupín v polohách dve a štyri coproporphyrinogen III dvoma vinylovými skupinami protoporfyrinogenu IX, [31]. Bolo oznámené, že koproporfyrie (nedostatok CPO) pacientov ukázala, zápcha a abnormálne koliky, ktoré sú hlavné príznaky tohto ochorenia [32]. Výrazné zvýšenie koproporfyrie vo výkaloch odlíšené podmienku zo švédskeho typu, ktorých stolice porfyríny sú zvyčajne normálne az porfyria variegata v ktorom obaja coproporphyrin a protoporfyrinogenové frakcie sa zvýšeným v stolici [33].
V 21 génov identifikovaných, stanovili sme subcelulárnu lokalizácia a ľudskej chromozomálne mapovanie zo 7 známych génov pomocou source program http: .. //zdroj Stanford edu (tabuľka 2). Tieto gény vykazovali rôzne bunkové lokalizácie, vrátane 3 membránou, 2, 1 cytoplazmatickú mitochondriálnej a 1 jadrovými proteínmi. Ďalšie analýzy týchto génov nám mohol umožniť objasniť nielen svoj vzťah s kitom, receptorové tyrozínkinázy, ale aj molekulárnej aspekty GI kardiostimulátora systému.
Už skôr sme identifikované pätnásť gény, ktoré boli odlišne exprimovaný v tenkom čreve divoký typ a W /W
v
myší, ktoré rozvíjajú niekoľko IC-MY pomocou metódy diferenciálnej expresie génu [17, 18]. ™ @ Žiadny z týchto 15 génov boli nájdené v zozname 21 génov ktoré boli odlišne exprimované v žalúdočnej fundusu divokého typu a W /W
v
myší, ktoré sa vyvíjajú niekoľko IC-IM pomocou cDNA mikročipu. Ako sme potvrdili diferenciálnej génovej expresie KIT
medzi tenkého čreva /žalúdočné fundic tkaniva divokého typu a tie W /W
v
mutantných myší semikvantitatívny RT-PCR, naše experimentálne systém by mohol odhaliť genetickú odchýlku vo W /W
v
myší. Preto naše výsledky by mohli odrážať rozdiel bunkovej subjektu dvoch typov ICC, IC-my a IC-IM, alebo rozdiel bunkové zloženie medzi tenkým črevom a fundu. Poskytnúť presvedčivé dôkazy, ktoré podporujú tieto špekulácie, profil expresie s použitím čisteného mRNA z izolovaných jednotlivých intersticiálnych buniek môže byť veľmi užitočné v ďalšom štúdiu.
V súčasnej dobe nevieme, či tieto gény sú dôležité pre funkciu dôležité žalúdočné vodič /neurotransmisie prístroj alebo boli down-up-regulované alebo v dôsledku straty ICC. Tieto údaje však poskytujú jasné systémovú genetický dôkaz, že niekoľko dôležitých proteínov, ktoré majú role v bunkového cyklu, cytokineze a tvorbu cytoskeletu, bunkového metabolizmu, metabolizmus kyslíka, bunkovej adhézie, vývoj a diferenciáciu črevných buniek sa významne zmenili v žalúdočnej fundus W /W
v
myší. Generácia transgénnych zvierat, ktoré vykazujú tkanivovo špecifickú zvýšenú expresiu kandidátnych génov, rovnako ako gén vyraďovacej zvierat by mohli byť užitočné pre objasnenie úlohy každého génu gastrointestinálnej motility.
Objav celých ľudských a myších génov prostredníctvom genóm projekt má prevrat biologický liek, vrátane molekulárnej diagnostiku rôznych ochorení a vývoj nových liečenie. Informácie v kombinácii s vysokou priepustnosťou technológií, ako je DNA čipu a analýzy SNP písanie urýchli objav génov citlivých alebo spôsobujú rôzne ochorenia a prispieť ku skríningu nových liekov, ktoré sa zameriavajú na tieto choroby génové produkty. V tomto zmysle je snaha projektu molekulárneho profilovania, v ktorom sa snažíme odhaliť genetickú odchýlku v modeloch chorôb zvierat, ako sú W /W
V
myši bude generovať veľmi variabilný zdroje pre ďalšie objasnenie porúch motility , Znížené počty ICC boli hlásené aj v niekoľkých porúch GI motility, ako je chronická črevná pseudo-obštrukcie [5, 6], pomaly tranzitné zápcha a niektoré formy gastroparesu [13, 14], tieto informácie gén by mal pomáhať pri vývoji nových molekulárnej cielenej terapie týchto porúch, a môže tiež identifikovať diagnostické molekulárnych markerov u týchto porúch.
Záver
identifikovali sme dvadsaťjeden gény, ktoré kódujú funkčné proteíny, ktoré sú významne up- alebo down-regulované v tunica muscularis
žalúdočné fundusu W /W
v
myší. Vzhľadom na to, že žiadna z týchto génov sa podieľa na akýkoľvek aspekt GI motility, navrhujeme, že mnoho neznáme gény by mohli byť zapojené do bunkovej zmeny, ktoré vedú k motility poruchy spojené so stratou ICC. Analýza génovej microarray je efektívna metóda pre skríning zmeny, ktoré sa vyskytujú v expresných vzoroch génov v reakcii na spontánny alebo genetických mutácií, ktoré vedú k strate určitého typu buniek. Použitie tejto techniky môže umožniť identifikáciu vzorov génovej expresie, ktoré sú spoločné pre niekoľko motility porúch, v ktorých sú stratené ICC, čím poskytuje nový pohľad na molekulárnych mechanizmov zodpovedných za selektívne stratu populácií ICC.
Poznámky
Yataro Daigo, Ichiro Takayama prispel rovnakým spôsobom na tejto práci
zoznam skratiek
BP1 /6C3 :.
glutamyl aminopeptidázy
BST1 /BP3:
strómy kostnej drene antigén 1 (alias ADP-ribosylcyclase 2 prekurzor)
CPO:
coproporphyrinogen oxidáza
DMP:
hlboké svalová plexus
EST:
expressed sequence tags
Ryby:
fluorescenčnej in situ hybridizácia

GI:
gastrointestinálne
ICC:
intersticiálna bunky Cajal
IC- DMP:
ICC na úrovni hlbokého svalového plexu
IC-IM:
intramuskulárna ICC
IC-MY :
ICC na úrovni plexus myentericus
MCM7:
údržba minichromozomu 7
MY:
myentericus plexus
P160 ROCK2:
P160 Rho-spojený, zvinutý cievku tvoriaci proteín kinázu 2
RBP2: väzba
retinol proteín 2, mobilné
RHAME:
hyaluronanu sprostredkovaná pohyblivosť receptora
RT-PCR:
reverznej transkripcie-polymerázovej reťazovej reakcia
SNP:
jedného nukleotidu polymorfizmus
deklarácia
Poďakovanie
podporované 08457165 (MF) z japonského ministerstva školstva, vedy, športu a kultúry, Japonsko a DK 57236 (pre SW) a PA1 DK41315 (k SW a KS) od National Institutes of Health, USA.
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na pôvodné predložených súborov autorov pre obrázky. Pôvodný súbor 12876_2002_51_MOESM1_ESM.ppt autorov na obrázok 1 protichodnými záujmami
Žiadne deklarované.

• Regulácia uvoľňovanie Amylin z kultivovaných králičieho žalúdka nariadenia fundusu slizničnej cells
• Zdvojenie cysta pyloroduodenálnej kanála: a vzácnu príčinou neonatálnej žalúdočné obštrukcie výtoku: prípad report