Differenciális génexpresszió az egér gyomor fundus hiányzik intersticiális sejtek Cajal

differenciális génexpresszió az egér gyomor fundus hiányzik intersticiális sejtek Cajal
Abstract
alapon
Az izom rétegek rágcsáló gyomor fundus nincs intersticiális sejtek Cajal szintjén a plexus myentericus, és csak rendelkeznek intramuszkuláris intersticiális sejtek és ez a szövet nem generál elektromos lassú hullámok. Az a tény, intramuszkuláris kötőszöveti sejtek W /W katalógusa V katalógusa mutánsok egyedülálló lehetőséget, hogy tanulmányozza a molekuláris változások, amelyek kapcsolatban vannak a veszteség ezen interkalátozó sejteket. Katalógusa módszer
gén expressziós profilja a gyomor fundus a vad típusú és a W /W
V
egereken vizsgáljuk rágcsáló microarray megjelenítésére összesen 8734 elemekkel. Lekérdezett gének a microarray elemzés is megerősítette szemi-kvantitatív reverz transzkripciós polimeráz-láncreakció.
Eredmények
Huszonegy géneket eltérően expresszált vad típusú és a W /W
V katalógusa egerekben. Tizenegy átiratok volt 2,0-2,5-szor magasabb mRNS expressziójának W /W
V
gyomor fundus, ha összehasonlítjuk a vad típusú szöveteket. Tíz átiratok volt 2,1-3,9-szer alacsonyabb kifejezést W /W katalógusa V katalógusa mutánsok összehasonlítva a vad típusú állatokban. Egyik ezek a gének valaha érintettek semmilyen bélmotilitás funkciót. Katalógusa Következtetések katalógusa Ezek az adatok alátámasztják, hogy számos fontos gént jelentősen megváltoztak az egér fundusában W /W katalógusa V katalógusa mutánsok, amelyekből hiányzik intramuszkuláris intersticiális sejtek Cajal és csökkentett bélben motor ingerületátvitel. katalógusa Háttér katalógusa interstitialis sejtek Cajal (ICC) a gastrointestinalis (GI) pacemaker sejtek és a közvetítők enterális motor neurotranszmissziót a tápcsatorna [1, 2 ]. ICC expressz KIT katalógusa /c-kit katalógusa, és függ a jelző keresztül a géntermék fehérje, KIT, a receptor tirozin-kináz, amely elengedhetetlen a fejlesztési és karbantartási az ICC fenotípus [3]. Mutáció a fehér foltosodásgátló katalógusa locus (azaz W /W katalógusa V katalógusa) következtében csökken a KIT-expresszió. Ezek a mutáns állatokban kialakul néhány ICC szintjén plexus myentericus (IC-MY) a vékonybélben, és a csökkentett ICC szám van társítva a veszteség lassú hullámú aktivitást. Az intramuscularis ICC (IC-IM) található, a gyomor, a nyelőcső alsó záróizom és a pylorus hiányoznak W /W katalógusa V katalógusa mutáns állatok [4]. Csökkentett számú ICC is beszámoltak számos GI mozgékonysági rendellenességek, mint például a krónikus intesztinális pszeudo-obstrukció [5, 6], csecsemőkori hipertrófiás pylorus stenosis [7-9], Hirschsprung-betegség [10-12], a lassú-tranzit székrekedés és bizonyos formái gastroparesis [13, 14].
összefüggését motilitászavarok és a veszteség a speciális populációk ICC azt sugallja, hogy egy teljesebb megértése a molekuláris és sejtbiológiai ICC hálózatok a gyomor-bél traktus segíthet annak megértésében, hogy az etiológiája néhány GI motor megbetegedések. A cél a jelen tanulmány volt, hogy jellemezzük a genetikai szekvenciákat, amelyek kifejezett ICC a gyomor, hogy kódolhat fontos funkcionális elemei a GI pacemaker /motor neurotranszmisszió rendszer. Mi céllal a hipotézist, hogy az ilyen gének mutathatnak a differenciális expressziót a vékonybélben a vad típusú egerek és a W /W
V
egerekben [15, 16]. Mi korábban azonosított tizenöt ismert és új géneket, amelyek eltérően expresszált a vékonybélben a vad típusú és a W /W
V
egerekben, amelyek fejlesztése néhány IC-MY alkalmazásával differenciális génexpresszió módszer [17, 18].
a jelen tanulmányban azt feltételeztük, hogy ott is lehet eltérés gének expresszióját a gyomor fundus W /W katalógusa V katalógusa egerek, ahol az IC-IM elvesznek. A gén microarray sikeresen azonosított 21 gén, amelyek eltérő módon fejeződnek ki fundusában W /W katalógusa V katalógusa egerekben. A differenciális expresszióját ezekben az egerekben megerősítette szemi-kvantitatív reverz transzkripciós polimeráz-láncreakció (RT-PCR).
Módszerek
Állatok és Tissue Előkészítés
használata és a kezelés kísérleti állatok hagyta jóvá az iránymutatás irányadó állat kísérlet bizottság a University of Yamanashi School of Medicine és a University of Nevada School of Medicine. Hat felnőtt férfi WBB6F1 - + /+ egerek (vad típusú) és korú hat kifejlett hím WBB6F1-W /W
V
egerek testtömege 20-30 g vásároltunk a Japán SLC Inc. (Shizuoka , Japán). Ezek dietil-éterrel elaltatjuk, vagy szén-dioxid-belégzéssel és leöltük nyaki diszlokáció. A gén-elemzések, gyomrukat eltávolítottuk az állat és a nyálkahártya, a mellékelt submucosa gyorsan éles kivágjuk az tunica muscularis katalógusa. A szöveteket ezt követően lefagyasztottuk folyékony nitrogénben (-196 ° C). A szöveteket -80 ° C-on, amíg izolálása RNS-szálát [18].
RNS előállítása és Microarray Data Analysis
gén microarray, poli (A) + RNS-t izoláltunk az egyes szöveti mintából TRIZOL ( Life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD, USA) és a poli (a) + Isolation Kit teljes RNS-ből (ISOGEN, Nippon Gene, Tokió, Japán). 18 megkezdése előtt microarray, differenciális génexpresszió a KIT
között a gyomor fundus szövetekben a vad típusú egerek és azok W /W
V
mutáns egereket megerősítette félkvantitatív RT-PCR-rel (Lásd a semi-kvantitatív RT-PCR-
) (1A.). Microarray hibridizáljuk és a beolvasott, és a kép analízist végeztünk a korábban leírtak szerint [19, 20]. Röviden, módosított génexpresszió értékeltük reverz transzkripciójával poli (A) + RNS-ek jelenlétében Cy3 vagy Cy5 fluorokróm majd hibridizálással egér GEM 1 mikroarray-chipek (Incyte Genomics, Inc., Porter Drive-Palo Alto, CA, USA). Annak igazolására, az érvényességét a vizsgálat A kísérleteket két párhuzamosban. Az 8734 cDNS szoktuk képviseli 7854 egyedi gének /Unigene klaszterek: 3205 kiegészítések és 4649 is el nem látott sorozatok. Mi rendelt egy cut-off érték, egy varianciaanalízis, a microarray dia. Gének, amelyek CY3- és Cy5-jel intenzitás alacsonyabb volt, mint a cut-off értékek voltak zárva a további vizsgálatot. Kiegyensúlyozott eltérés expresszió vizsgálatát kontroll vad típusú egerekben versus W /W katalógusa V katalógusa mutáns egerekben. Értékeket, amelyeket < -2,0 Vagy > 2.0 mind két független kísérlet tekintettük szignifikánsnak, és az átlagos értékek a relatív fluoreszcencia arány minden egyes gén számoltunk. 1. ábra: A. Expression of KIT katalógusa gén felhasználásával félkvantitatív RT-PCR-rel, a gyomor fundus szövetekben a vad típusú és a W /W
V
mutáns egerek alatt tartjuk éheztetett katalógusa feltételekkel. GAPDH
mértünk, mint a kontroll. B. képviselője kép DNS microarray hibridizáció. Változások a génexpresszióban, amelyek képviselik az arány a fluoreszcencia-intenzitása mértük Cy3 és Cy5 fluorokróm. Expressziós profilok értékeltük reverz transzkripciójával poli (A) + RNS-ek származó gyomor fundus izmok a vad típusú és a W /W
V
egerek jelenlétében Cy3 vagy Cy5 fluoreszcens jelölés festékek, majd hibridizálással egér GEM 1 microarray. A képen látható állította elő rátenni a Cy5 fluoreszcens kép (ál-zöld színű, amely képviseli expressziós szintje RNS a tunica muscularis katalógusa W /W katalógusa V katalógusa szemfenéki), és a Cy3 fluoreszcens kép (ál piros színű, amely képviseli az RNS expresszió a vad típusú szövetek). A tömbök voltak ellenfestjük DAPI-t (kék). C. megerősítése megbízhatóságát microarray adatok félig kvantitatív RT-PCR-rel. Jellegzetes példák a RT-PCR elemzést, fundus szöveteket a hat vad típusú és hat W /W
V
mutáns egerek alatt tartjuk kiéhezett körülmények között. Expression of a CPO katalógusa gén jelentősen csökkent a fundus W /W
V
egerekben, összehasonlítva az azonos életkorú vad típusú egerekben, míg a MCM7
gén növekedést mutatott expressziót W /W
V katalógusa egerekben. D. relatív expressziós szintje CPO katalógusa (CPO katalógusa /GAPDH katalógusa) és MCM7 katalógusa (MCM7 katalógusa /GAPDH katalógusa) a fundus szövetekben hat vad típusú és hat W /W
V katalógusa mutáns egerekben. Az adatok jelentik az átlagos (± SD) hat különböző RT-PCR kísérletekben hat vad típusú vagy W
/W
V
fundus RNS templátként való alkalmazásával.
Félig kvantitatív RT-PCR-rel
A szintek az mRNS-expresszió, amelyek csökkenteni vagy növelni a > 2,0-szeres vagy ennél nagyobb, megerősítették a szemikvantitatív RT-PCR-re fundus 6 az egyes vad típusú egereken és W /W
V
egerekben. RT-PCR-t végeztünk a korábban leírtak szerint [18]. Röviden, a 2 ug aliquot teljes RNS-ek kezelt DNáz I (Roche Diagnostics, Bázel, Svájc) az egerekből fundus szöveteket használtunk szintetizálni egyszálú cDNS-eket. Ezeket a cDNS-eket alkalmaztunk templátként PCR-ben egy thermal cycler (Perkin-Elmer, Shelton, CT, USA), a primerek alkalmazásával az 1. táblázatban felsorolt ​​vagy készlet katalógusa (5'-ATG ACG TCA TGA AGA CTT GCT-3 'és 5' -CTA CCC TGG AAT AGG ATG CA-3 '), és a GAPDH
specifikus láncindító (5'-GACAACAGCCTCAAGATCATCA-3' és 5'-GGTCCACCACTGACACTGTG-3 '). Expression of GAPDH katalógusa szolgált belső kontrollként. Primereket származó különböző exonok az ugyanazon gén, amikor a megfelelő egér genomiális szekvencia állt rendelkezésre abban az időben. A PCR-reakciókat optimalizálva a ciklusok számát, hogy a termék intenzitás belül lineáris fázisa amplification.Table 1 Primer készletek használt félkvantitatív RT-PCR-rel.
Gene Név Matton hozzáférési száma Matton Forward Primer katalógusa
Fordított Primer Matton EST katalógusa AA185701 katalógusa CGA AAG CCT TGA GGT TGA AG katalógusa TAG GAA AAC AGG CGT CAC TG katalógusa EST katalógusa AA166336 katalógusa GAA GAA AAG GTC GCA GAT CG katalógusa CAA GAG GCA AAG AGC AAT CC katalógusa EST katalógusa AA021806 katalógusa CAC GAA TTG CAG GAC TAC CT katalógusa ACC TGC ACT GTA GGC TGA GT katalógusa MCM7 Matton Q61881 katalógusa GCC CAC TGG ATT GTG AAG itt
AGG AGA CTG GTC CAC ACC AC katalógusa P160 ROCK2
katalógusa U58513 katalógusa AAG AAC CTG TCA AGC GTG GT katalógusa TCC AGG GTC ATC TGG AGT TC katalógusa EST katalógusa W18585 katalógusa AGA CTT GGT GGC AGA GGA GA katalógusa GCA GTC CAT GAC AGA ACA CC katalógusa EST katalógusa AA403748 katalógusa CCT AAA GCA ACC CAA CCT GA katalógusa TAG CCT TAT GGG ACC TGG TG katalógusa BST1 /BP3 Matton Q64277 katalógusa GAT TTC TTG AGC TGG TGT CG
AAA ACC CTC TCG TGG GAT AG katalógusa EST katalógusa AA024250 katalógusa CAG ATA GAG CAA GGG ATG GA
CTG AGC CCA AAC CAG TAG AA katalógusa RBP2 katalógusa
Q08652 katalógusa GAC ​​GAA GGA CCA AAA TGG AA katalógusa CGG TGA AAT CCA GGT CGT AG katalógusa EST katalógusa W46016 katalógusa AGC AAC AAC AGC TGG ACT TC katalógusa ACC TTC TGT TTG GTG CTG AG katalógusa BP1 /6C3 Matton S30398 katalógusa TAT CGG CCT CAT CTA ACC AG
ATC TTC AAG CAG CAC CTG AC katalógusa EST katalógusa AI552444 katalógusa CAT GCG ATA CTG GAA CAT GA
TGA CTC CAA ATA GCC CTC AG katalógusa EST katalógusa AA108876 katalógusa TGG AGC AAG AGA GGA AAG TG katalógusa CTA GAC CTG AGC TTG CCT TG katalógusa EST katalógusa AA049294
ACG TGG AGA AAG TTC TCG TG katalógusa GCA ATA GTG TCA CCG AAT CC katalógusa EST katalógusa AA254777 katalógusa GCC CTG GAG TTG AGA CTG TA katalógusa TGA CAA GTC GCA CAG TAA CC katalógusa RHAMM Matton AF031932 GCA GAA GGA GGA GCA GAG TG
GCA GTG ACG TCC CTC AGA CT katalógusa EST katalógusa AA002293 katalógusa AAG TCT TTG TGT GGG CTG AG katalógusa AGG AAG CTT CGT CTC TCC AT katalógusa EST katalógusa AI595081 katalógusa CAC CAG GAT GTC TGC CTA CT katalógusa CCG AGA TCA TGT TCT TCA CC katalógusa CPO Matton D16333 katalógusa GAA GAC CAA GAT GGA GTC GA
CAG AAA GAT TCC CAT GAA CG katalógusa EST katalógusa AA000304 katalógusa TTC ATC TGC TGC TCC TTC TC katalógusa TTA TAG ACC TTC CCG CAC AG katalógusa Eredmények katalógusa Microarray Analysis and Semi -quantitative RT-PCR
gének azonosítása, amelyek szelektíven kapcsolódó IC-IM, összehasonlítottuk génexpressziós mintázatok a gyomor fundus szövetekben származó vad típusú és a W /W
V
felhasználásával egérben egy gént microarray módszer [19, 20]. Rágcsáló fundus nélkül epiteliális szövetek származó vad típusú és a W /W
V
egerek alatt tartjuk éheztetett
körülményeket alkalmazzuk generálására poli (A) + mRNS microarray az egér segítségével GEM 1 microarray . Ezen kísérlet eredményei az, kiemelve a gének, amelyek reprodukálhatóan csökkent vagy növekedett > 2,0-szeres vagy ennél nagyobb, táblázatban mutatjuk be a 2. és ábra. 1B. Számos ismert és új géneket eltérő módon fejeződnek ki fundusában W /W katalógusa V katalógusa egerek (> 2,0 kiegyensúlyozott eltérés kifejezése). Hogy megerősítsék a differenciális expressziós profilok, mi tovább vizsgálták az expressziós szintre in rágcsáló fundus mRNS származó vad típusú és a W /W
V
egerek alatt tartjuk éheztetett katalógusa feltételekkel templátként használva félkvantitatív RT-PCR analízis (reprezentatív adatokat ábrán látható. 1c, 1d. Minden primer készlet használható a nyugtázó voltak az 1. táblázatban felsorolt). Expression tíz gének jelentősen csökkent a gyomor fundus W /W
V
egerekben, összehasonlítva az életkor illesztett vad típusú egerekben. Egy másik tizenegy gén mutatott expressziójának növekedését éheztetett W /W katalógusa V katalógusa mice.Table 2 Elemzés a génexpresszió fundusában vad típusú és W /W katalógusa V katalógusa egerek
Gene Név Matton W /W katalógusa V katalógusa /vad arány (a) Matton hozzáférési szám Matton szubcelluláris helye (b) Matton Cytoband (c) Matton EST katalógusa 2.5 katalógusa AA185701 katalógusa EST katalógusa 2.5 katalógusa AA166336
EST
2,4 katalógusa AA021806 katalógusa MCM7 katalógusa: DNS replikáció Licensing Factor katalógusa 2.4 katalógusa Q61881 katalógusa nucleus katalógusa 7q21.3-q22.1 katalógusa P160 ROCK2
: Rho-asszociált protein kináz katalógusa 2,3 katalógusa U58513 katalógusa citoszkeleton katalógusa 2p24 katalógusa EST
2,3 katalógusa W18585 katalógusa EST
2,3 katalógusa AA403748
BST1 /BP3 katalógusa: ADP-ribozil cikláz 2 prekurzor katalógusa 2.0 katalógusa Q64277 katalógusa membrán katalógusa 4p15 katalógusa EST
2,0 katalógusa AA024250 katalógusa RBP2 katalógusa: retinol kötő fehérje 2 sejtes katalógusa 2.0 katalógusa Q08652 katalógusa citoplazmában katalógusa 3q23 katalógusa EST
2,0 katalógusa W46016 katalógusa BP1 /6C3 katalógusa: glutamil Aminopeptitase katalógusa - 2,1 katalógusa S30398 katalógusa membrán katalógusa 16
EST
-2,2 katalógusa AI552444 katalógusa EST katalógusa -2,3 katalógusa AA108876 katalógusa EST
-2,4
AA049294 katalógusa EST katalógusa -2,4 katalógusa AA254777 katalógusa RHAMM katalógusa: A hialuronsav által közvetített motilitás receptor katalógusa -2,5 katalógusa AF031932 katalógusa membrán katalógusa 5q33.2-qter
EST katalógusa -2,5 katalógusa AA002293 katalógusa EST
-3,4 katalógusa AI595081 katalógusa CPO katalógusa: Coproporphyrinogen oxidáz katalógusa -3,6 katalógusa D16333 katalógusa mitokondriumok
3q12 katalógusa EST katalógusa -3,9 katalógusa AA000304 katalógusa (a) Kiegyensúlyozott eltérő expressziója kontroll vad típusú egerekben vs W /W katalógusa V katalógusa mutáns egerekben. Értékeket, amelyeket csökkent vagy nőtt > 2-szeres vagy nagyobb mind két független kísérlet tekintettük szignifikánsnak, és az átlagos értékeket kiszámítottuk. Minden eredményeket megerősítette a fél-kvantitatív RT-PCR-fundus szövetekben hat vad típusú és hat W /W katalógusa V katalógusa mutáns egerekben. (B) Szubcelluláris helyét határozza meg a SOURCE programban http: //forrás. Stanford. Edu. (C) Az emberi kromoszómális lokalizáció a gént.
Megbeszélés
összehasonlítása differenciálisán expresszált gén a szemfenéki a W /W
V
egerek felhasználásával DNS microarray elemzés feltárta, hogy a kifejezés a tizenegy gének mRNS szignifikánsan up-szabályozott W /W katalógusa V katalógusa egerekben, míg tíz gén átiratokat drámaian lecsökken ezekben az állatokban. Mi megerősítette ezeket az eredményeket a szemi-kvantitatív RT-PCR szövetek hat minden vad típusú és W /W katalógusa V katalógusa egerekben. Nyert adatok ezek a kísérletek arra utalnak, hogy a gének expressziója specifikusan szabályozott W /W
V
egerekben.
A tizenegy gének, amelyek fel-szabályozott a gyomor fundus a W /W
V katalógusa egereket azonosították MCM7 katalógusa, P160 ROCK2 katalógusa, BST1 /BP3 katalógusa, RBP2 katalógusa, és újabb hét el nem látott átiratát. MCM7 egy emlős homológja az élesztő nukleáris fehérje MCM2 /CDC47, amely úgy gondolják, hogy fontos szerepet játszik a két alapvető lépéseket a sejtciklus, nevezetesen beállta DNS replikáció és a sejtosztódás [21, 22]. P160 ROCK2, ami egy izoenzim az ROCK1 egy cél a kis GTPáz, Rho [23]. ROCK2 egy szerin /treonin-kináz, amely szabályozza a citokinézis, simaizom összehúzódás, a formáció a aktin stressz rostok és fokális összenövések, és az aktiválás a FOS szérum válasz elem [24]. A fel-szabályozása P160 ROCK2 lehet a kompenzáló hatása a veszteséget ICC-függő mechanizmusok a gyomor fundus. A BST1 /BP3, egy csontvelő-kötőszöveti sejt felületi antigén, egy változóan van glikozilezve glikozil-foszfatidilinozitol (GPI) -hez kötődő molekula, amely szelektíven expresszálódik a korai B és a T Lineage sejtek és diszkrét szubpopuláció retikuláris sejtek a perifériás limfoid szervekben. Azt is expresszálódik kefeszegélymembránjaiban intesztinális epiteliális sejtek, a luminális felületén vese gyűjtőcsatorna és az érett mieloid sejtek [25]. Ezt a fehérjét kéne tartoznak ADP-ribozil cikláz család [26]. Cellular RBP2 egy bőséges 134-maradék fehérje jelen van a vékonybél epitélium [27]. Úgy gondolják, hogy részt vegyenek a felvétel és /vagy intracelluláris anyagcsere A-vitamin, és tartozik a fehérje család, amely tartalmazza a máj zsírsav-kötő fehérje. Az A-vitamin egy zsírban oldódó vitamin elengedhetetlen a növekedés, szaporodás, differenciálódás hámszövetekben és a látást. Emlősök függ bél vitamin felszívódását a túlélésük. RBP2, amely korlátozódik nagyrészt a vékonybél enterocita, valószínűleg fontos szerepet játszik a bél abszorpció és /vagy anyagcsere-vitamin [27].
Azt is megerősítette a down-regulációja tíz gén W /W
V katalógusa egerek: BP1 /6C3 katalógusa, RHAMM katalógusa, CPO katalógusa, és újabb hét el nem látott EST. A rágcsáló β-limfocita-differenciálódási antigén, BP1 /6C3, jellemzői a glutamil-aminopeptidáz, amely a jelentések szolgál sejt-differenciálódási markere lymphomyelocytic leszármazási vonalak és érintett lehet a sejt-aktiválás, a jel transzdukció, és a sejt-mátrix tapadás. Azt is kifejezett kapilláris endothel sejtek, placentában és a hámsejtek a bél és a proximális vesetubulusokban [28]. RHAMM
kódol hialuronán receptor fehérje [29]. Amikor hialuronán kötődik RHAMM, a foszforiláció számos fehérjét, beleértve a fokális adhéziós kináz pp125-fak jelentkezik [30]. Ez egy szükséges lépés szétszerelés fokális kapcsolatok és az azt követő mozgékonyságát. CPO a hatodik enzim a hem bioszintézis útvonal. Ez oldható fehérje lokalizálódik a intermembrán terében mitokondriumok és katalizálja a két propionát csoportok pozíciókban két és négy coproporphyrinogen III két vinilcsoportok protoporfirinogén IX-[31]. Azt jelentették, hogy coproporphyria (CPO hiány) betegnél a székrekedés és rendellenes kólika, amelyek fő tünetei a betegség [32]. Jelzett emelkedés coproporphyria a székletben differenciált feltétele a svéd típusú, amelyben széklet porfirineket általában normális és kever porphyria, amelyben mind coproporphyrin és protoporfirinogén frakciókat növekedett a széklet [33].
A 21 azonosított gének, meghatároztuk a sejten belüli lokalizációja és a humán kromoszomális leképező a 7 ismert gének felhasználásával forráskódú program a http: //forrás. Stanford. edu (2. táblázat). Ezek a gének mutattak különböző celluláris lokalizáció, köztük 3 membrán, 2 citoplazma, 1 mitokondriális és 1 nukleáris fehérjéket. További elemzések ezen gének lehetővé tenné számunkra, hogy tisztázzák a nem csak a kapcsolatuk a KIT, a receptor tirozin-kináz, hanem a molekuláris aspektusait GI pacemaker rendszer.
Mi korábban azonosított tizenöt géneket, amelyek eltérő módon fejeződnek ki a vékonybélben a vad típusú és W /W katalógusa V katalógusa egerekben, amelyek fejlesztése néhány IC-MY egy differenciális génexpresszió módszer [17, 18]. ™ @ Egyik 15 gént találtak a listán a 21 gén amelyek eltérő módon fejeződnek ki a gyomor fundus a vad típusú és a W /W
V
egerekben, amelyek fejlesztése néhány IC-IM alkalmazásával cDNS-microarray. Ahogy megerősítette differenciális génexpresszió KIT
között a vékonybélben /gyomor fundus szövetekben a vad típusú és a W /W
V
mutáns egerek által félkvantitatív RT-PCR-rel, a mi kísérleti rendszer észleltünk genetikai aberráció W /W katalógusa V katalógusa egerekben. Ezért eredményeink tükrözik a különbség a celluláris egység kétféle ICC, IC-MY és IC-IM, vagy a különbség a sejtösszetételének között vékonybél és fundus. Ahhoz, hogy a meggyőző bizonyíték, amely támogatja ezeket a spekulációkat, expressziós profil tisztított mRNS izolált egyetlen kötőszöveti sejtek nagyon hasznos lenne a következő tanulmány.
Jelenleg nem tudjuk, hogy ezek a gének fontos funkciója a gyomor pacemaker /neurotranszmisszió készülékkel vagy voltak lefelé vagy felfelé szabályozott eredményeként a veszteség ICC. Ezek az adatok azonban világos szisztémás genetikai bizonyíték arra, hogy több fontos fehérjéket, amelyeknek szerepük sejtciklus, citokinézis és képződését citoszkeleton, celluláris metabolizmusban, oxigén-anyagcsere, sejtadhézió, valamint fejlesztési és differenciálódását bél sejtek jelentős mértékben változik a gyomor fundus a W /W katalógusa V katalógusa egerekben. Generation transzgenikus állatok, amelyek azt mutatják szövet-specifikus overexpressziója a jelölt gének, valamint a gén knockout állatok hasznos lehet megvilágítását lehetővé tevő szerepe az egyes gén a gasztrointesztinális motilitás.
A felfedezése egy teljes emberi és egér gének keresztül a genom projekt várhatóan forradalmasítja biológiai gyógyszer, beleértve a molekuláris diagnosztika a különböző betegségek és fejlődését az új kezelés. Az információ kombinálva nagy teljesítményű technológia, mint a DNS chip és az SNP gépelési elemzés felgyorsítja felfedezése gének hajlamos vagy ami a különböző betegségek és hozzájárul a szűrés új gyógyszerek kifejlesztését célzó ezen betegség-gén termékeket. Ebben az értelemben, az erőfeszítés, a molekuláris profilalkotás projekt, amelyben megpróbáljuk felfedezni a genetikai aberráció állatbetegség modellek, mint a W /W katalógusa V katalógusa egerek generál nagyon változó források további megvilágításához motilitászavarok . Például a csökkentett számú ICC is beszámoltak számos GI mozgékonysági rendellenességek, mint például a krónikus intesztinális pszeudo-obstrukció [5, 6], lassan tranzit székrekedés és bizonyos formái gastroparesis [13, 14], ezek a gén információt kell támogatást a fejlesztés új molekuláris célzott terápiák ezek a rendellenességek, és azt is azonosítani diagnosztikai molekuláris markerek ezekben a betegségekben.
Következtetés
azonosítottunk huszonegy kódoló gének funkcionális fehérjék, amelyek jelentősen felfelé vagy lefelé szabályozni tunica muscularis Vélemények a gyomor fundus W /W katalógusa V katalógusa egerekben. Tekintettel arra, hogy ezek egyike sem gének szerepet játszik minden szempontból bélmozgás, azt sugallják, hogy sok ismeretlen gének is be lehetne vonni a celluláris változások vezetnek motilitászavarok elvesztésével kapcsolatos ICC. Gene microarray elemzés egy hatékony módszer a szűrés a változásokat, amelyek előfordulnak a expressziós mintázatát gének válaszul spontán vagy genetikai mutációk, melyek a veszteség egy specifikus sejttípus. Alkalmazása ez a technika lehetővé teheti elismerését minták génexpressziós, amelyek közösek a több motilitási rendellenességek, amelyekben az ICC elvesznek, és ezáltal új betekintést a molekuláris mechanizmusok felelős a szelektív elvesztését ICC populációk.
Megjegyzések
Yataro Daigo, Ichiro Takayama hozzájárult egyaránt ezt a munkát. katalógusa rövidítések jegyzéke katalógusa BP1 /6C3: katalógusa glutamil aminopeptidáz
BST1 /BP3:
csontvelő-kötőszöveti antigén 1 (alias ADP-ribosylcyclase 2 prekurzor)
CPO: katalógusa coproporphyrinogen oxidáz
DMP: katalógusa mély izmos plexus
EST:
kifejezett szekvencia jelölés
FISH: katalógusa fluoreszcens in situ hibridizáció katalógusa katalógusa Matton GI: katalógusa gasztrointesztinális
ICC: katalógusa intersticiális sejtek Cajal
IC- DMP:
ICC szintjén a mély izom plexus
IC-IM: katalógusa intramuszkuláris ICC
IC-MY
ICC szintjén plexus myentericus
MCM7: katalógusa minikromoszóma karbantartás 7
MY: katalógusa myenterikus plexus
P160 ROCK2: katalógusa P160 Rho-asszociált, coiled coil alkotó protein kináz 2
RBP2: katalógusa retinol kötő protein 2, celluláris
RHAMM: katalógusa hialuronán által közvetített motilitás receptor
RT-PCR:
reverz transzkripciós polimeráz lánc reakció
SNP: katalógusa egypontos nukleotid polimorfizmus
nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás
Támogató 08457165 (MF) a japán Minisztérium Oktatási, Tudományos, Sport és Kulturális, Japán és DK 57236 (SW) és PO1 DK41315 (SW és KS) a National Institutes of Health, USA. katalógusa Szerzők eredeti beküldötteknek képeket
Lentebb linkek a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12876_2002_51_MOESM1_ESM.ppt A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti versengő érdekek katalógusa Nincs bejelentett. Katalógusa

• Rendelet amylin felszabadulását a tenyésztett nyúl gyomor fundus nyálkahártya sejtekben
• Sokszorosítása cysta pylorusszűkületben csatorna: ritka oka újszülött gyomor kivezető akadály: egy esetismertetés