Skirtumas genų ekspresija pelių skrandžio dugno trūksta tarpo ląsteles Cajal

Skirtumas genų ekspresija pelių skrandžio dugno trūksta tarpo ląsteles CAJAL
Anotacija pervežimas Background
raumenų sluoksnių pelių skrandžio dugno neturi tarpo ląsteles Cajal ties myenteric rezginio lygio ir tik turi raumenis tarpo ląsteles ir tai audinių negeneruoja elektros lėtai bangas. Iš raumenis Tarpusienio ląstelių nebuvimas W /W
V
mutantai suteikia unikalią galimybę studijuoti molekulinius pokyčius, kurie yra susiję su šių interkaliacinių ląstelių praradimo.
Metodas
geno išraiška profilis skrandžio dugno laukinio tipo ir w /w
V
pelėms buvo tiriami pelių mikrogardeliq analizės demonstruojantys 8734 elementų. Užklausti genai iš mikrogardeliq analizė patvirtino pusiau kiekybiniu atvirkštinės transkripcijos-polimerazės grandinine reakcija.
Rezultatai
dvidešimt vienas genų buvo skirtingai išreikštas laukinio tipo ir w /w pervežimas V
pelių. Vienuolika nuorašai turėjo 2,0-2,5 kartų didesnė iRNR išraišką w /w pervežimas V
skrandžio dugno, lyginant su laukinio tipo audinius. Dešimt nuorašai turėjo 2.1-3.9 kartus mažesnę raišką W /W
V
mutantai, lyginant su laukinio tipo gyvūnų. Nė vienas iš šių genų kada nors buvo įsitraukęs į kokią žarnyno judrumas funkcija.
Išvados
Šie duomenys įrodo, kad keletas svarbių genų pasikeitę į pelių dugno iš w /w pervežimas V
mutantai, kad trūksta raumenis tarpo ląsteles Cajal ir sumažino žarnyno motorinę impulso.
fone
tarpo ląstelės Cajal (TBT) yra virškinimo trakto (VT) stimuliatoriaus ląstelės ir tarpininkai žarnų motorinės neurotransmisiją virškinimo trakto [1, 2 ]. TBT Express KIT
/c-KIT parsisiųsti ir priklauso nuo signalo per genų produktų baltymų, KIT, receptoriams tirozino kinazės, kurios yra būtinos plėtros ir priežiūros ICC fenotipą [3]. Mutacijos balto-tepimas pervežimas lokuso (t W /W
V pervežimas) sumažėti KIT išraiška. Šie mutantas gyvūnai sukurti keletą TBT ties myenteric rezginio (SSD-MY) į plonąją žarną ir sumažintas TBT numeriais lygio yra susijęs su lėtai bangų aktyvumo praradimo. Vartoti į raumenis TBT (SSD-MP), esančių skrandžio, apatinė stemplės ir prievarčio sfinkteriai yra išvykęs į w /w
V
mutantas gyvūnų [4]. Sumažinti numeriai TBT taip pat buvo pranešta keliose trakto peristaltiką sutrikimų, pavyzdžiui, lėtine žarnyno pseudo-obstrukcija [5, 6], infantilus hipertrofinė prievarčio stenozė [7-9], Hirschsprungo liga [10-12], lėtai tranzito vidurių užkietėjimas ir tam tikrų formų gastroparezę [13, 14].
tarp judrumo sutrikimų ir praradimo populiacijų TBT asociacija teigia, kad išsamesnė supratimas molekulinės ir ląstelių biologijos ICC tinklų per virškinimo traktą gali padėti suprasti etiologiją kai GN motorinių patologijų. Šio tyrimo tikslas buvo apibūdinti genetinių sekų, kurios yra išreikštos TBT skrandžio, kurie gali koduoti svarbius funkcinius elementus GN stimuliatorius /variklio nervinių impulsų sistemą. Mes siekiama hipotezę, kad tokie genai gali parodyti diferencialinę išraišką į plonoji žarna laukinio tipo pelių ir W /W
V
pelių [15, 16]. Mes anksčiau nustatė penkiolika žinomų ir naujų genų, kurie buvo skirtingai išreikšta plonoji žarna laukinio tipo ir W /W
V
pelės, kuri išsivysto keletą IC-MY naudojant skirtumas genų ekspresijos metodas [17, 18].
Šiame tyrime mes iškėlė hipotezę, kad taip pat gali būti skirtumas išraiška genų skrandžio dugno ir w /w
V
pelėms, kur IC-MP yra prarastas. Mūsų genas Mikrogardelė analizė sėkmingai nustatė 21 genų, kurie buvo diferencijuotai pareikštus w /w
V
pelių dugno. Diferencialas išraiška šių pelių buvo patvirtinta pusiau kiekybiniu atvirkštinės transkripcijos-polimerazės grandinine reakcija (AT-PGR).
Metodai
Gyvūnai ir audinių paruošimas
naudojimo ir apdorojimo eksperimentinių gyvūnų buvo patvirtintas gaires reglamentuojančius gyvūnų Experiment komitetą į Jamanašio universiteto medicinos mokyklos ir Nevados universiteto medicinos mokyklos. Šeši suaugę patinai WBB6F1 - + /+ peles (laukinio tipo) ir amžius atitiko šešių suaugusiųjų vyrų WBB6F1-w /w
V
pelės, sveriantiems nuo 20 iki 30 g, buvo įsigytas iš Japonijos SLC Inc (Shizuoka , Japonija). Jie buvo anestezuoti eterio arba anglies dioksido įkvėpus ir paaukojo slankstelių dislokaciją. Dėl genų analizes, skrandžiai buvo pašalintas iš gyvūnų ir gleivinės pridedamą submucosa greitai aštrus išpjaustytų iš Apvalkalo muscularis
. Audiniai vėliau buvo užšaldyti skystame azote (-196 ° C). Audiniai buvo laikomi -80 ° C temperatūroje, kol buvo suformuota iš RNR išskyrimas [18].
RNR paruošimas ir mikrogardelių duomenų analizė
kad genų mikrogardelių analizės, poli (A) + RNR buvo išskirtas iš kiekvienos audinio mėginio, kontaktavimo pagal TRIZOL ( Gyvosios Technologies, Inc, Gaithersburg, MD, JAV) ir poli (a) + Izoliacija komplektas iš viso RNR (ISOGEN Nippon Gene, Tokijas, Japonija). 18 Prieš pradedant mikrogardeliq analizės, skirtumas genų ekspresijos KIT
tarp skrandžio fundic audinių laukinio tipo pelėms ir tiems, W /W
V
mutantas pelėms buvo patvirtinta pusiau kiekybiniam RT-PCR (Žr pusiau kiekybinis RT-PCR skyrių
) (1 pav.). Mikrogardelių buvo hibridizuoti ir nuskaityti, ir vaizdas analizė buvo atlikta, kaip aprašyta anksčiau [19, 20]. Trumpai tariant, keičiant genų ekspresijos vertino atvirkštinės transkripcijos iš poli (A) + RNR į Cy3 ar Cy5 akivaizdoje liuminoforais po hibridizacijos pelių GEM 1 microarray lustai (Incyte genomika, Inc., porteris diskas Palo Alto, CA, JAV). Patvirtinti, kad atliekant bandymą galiojimo, eksperimentai buvo atliekami du kartus. Į 8734 kDNR, kuriuos mes naudojome atstovauti 7854 unikalių genus /UniGene grupes: 3205 yra komentuojami ir 4649 yra unannotated sekas. Mes priskiriamas ribines vertes, naudojant dispersinės analizės, į mikrogardeliq skaidrę. Genai, kurių Cy3- ir Cy5-signalo intensyvumas buvo mažesnis nei ribinės vertės buvo pašalintas iš tolesnio tyrimo. Subalansuota skirtumas išraiška buvo nustatytas kontrolės laukinio tipo pelėmis, lyginant su V W /
V
mutantas pelėms. Vertybės, kurios buvo < -2,0 Arba > 2,0 abiejose dviejų nepriklausomų eksperimentų buvo laikomas svarbiu ir buvo skaičiuojamos vidutinės vertės santykinio fluorescencijos santykis kiekvieno geno. 1 pav A. išraiška KIT
genas naudojant pusiau kiekybinis AT-PGR, skrandžio fundic audinių iš laukinio tipo ir w /w pervežimas V
mutantas pelės prižiūrimų nevalgius
sąlygomis. GAPDH
lygiai buvo matuojami kontrolei. B. atstovas vaizdas DNR mikrogardeliq hibridizacijos. Pasikeitimai genų ekspresiją, kad buvo atstovaujama fluorescencijos intensyvumas matuojamas naudojant Cy3 ir Cy5 liuminoforais santykis. Ekspresijos profiliai buvo įvertintos atvirkštinės transkripcijos iš poli (A) + RNR iš skrandžio fundic raumenų iš laukinio tipo ir w /w
V
pelių iš Cy3 arba Cy5 liuminescencinių ženklinimo dažų, ir po to hibridizacijos pelių GEM 1 mikrogardelių. Vaizdas rodomas buvo pagamintas perkeliant į Cy5 fluorescencijos vaizdas (pseudo spalvos žalia, kuris atstovauja išraiška lygį RNR iš Apvalkalo muscularis
W /W
V pervežimas dugno) ir Cy3 fluorescencijos vaizdas (pseudo spalvos raudona, kuri atstovauja RNR išraišką nuo laukinio tipo audinių). Masyvai buvo counterstained su DAPI (mėlyna). C. patvirtinimas mikrogardelių duomenų patikimumą pagal pusiau kiekybiniam RT-PGR. Reprezentacinės pavyzdžiai AT-PGR atliekama analizė, fundic audinių iš šešių laukinio tipo ir šešių w /w pervežimas V
mutantas pelės prižiūrimi pagal bado sąlygomis. Išraiška CPO pervežimas geno buvo žymiai sumažintas atsižvelgiant į w /w
V
pelėmis, lyginant su metų dugno -iasis laukinių rūšių pelėms, kadangi MCM7
genas parodė išraiška padidėjo W /W
V
pelių. D. Santykinis išraiška lygis CPO
(CPO
/GAPDH pervežimas) ir MCM7
(MCM7 pervežimas /GAPDH
) į fundic audinių iš šešių laukinio tipo ir šešių W /W
V
mutantas pelėms. Duomenys atstovauti vidurkis (± SN) šešių skirtingų RT-PGR eksperimentus naudojant šešių laukinio tipo arba W
/W
V
dugno RNR kaip šablonus.
Pusiau kiekybinis AT-PGR
mRNR ekspresijos, kad buvo sumažintos arba padidintos >lygiai; 2,0 karto arba daugiau, buvo patvirtinta pusiau kiekybiniam RT-PGR iš dugno 6 kiekvienos laukinio tipo pelėms ir w /w
V
pelių. RT-PGR buvo vykdomi, kaip aprašyta anksčiau [18]. Trumpai tariant, 2 mikrogramų mėginiai iš visų RNR gydomiems dezoksiribonukleazės I (Roche Diagnostics, Bazelis, Šveicarija) nuo pelių fundic audiniuose buvo naudojami sintetinti vieno kryptis kDNR. Šie kDNR buvo naudojami kaip šablonų PGR A termocikleriu (PERKINELMER, Shelton, CT, JAV), naudojant išvardytus 1 lentelėje arba RINKINIU
(pradmenis 5'-ATG ACG TBS TGA AGA CTT GCT-3 "ir 5" -CTA CCC TGG AAT AGG ATG CA-3 '), ir GAPDH
specifines pradmenų rinkiniai (5'-GACAACAGCCTCAAGATCATCA-3' ir 5'-GGTCCACCACTGACACTGTG-3 '). Išraiška GAPDH
tarnavo kaip vidaus kontrolės. Praimeriai gautas iš skirtingų egzonų toje pačioje geno, kai atitinkamas pelės genomo seka buvo tuo metu. PGR reakcijos buvo optimizuotas ciklų skaičių, siekiant užtikrinti produkto intensyvumą per tiesinės fazės amplification.Table 1 PRIMER aibes pusiau kiekybiniam RT-PGR.
Genų Vardas
prisijungimas Nr
Persiųsti gruntas
Nemokama Reverse gruntas
EST
AA185701
CGA AAG BMT TGA GGT TGA AG
TAG GAA AAC AGG CGT CAC TG
EST
AA166336
GAA GAA AAG GCT GCA Gat cG
CAA GAG GCA ARG AGC AAT CK
EST
AA021806
ŠMC GAA TTG PVG GAA Tac CT
ACC TGC AKTAS GTA GGC TGA GT
MCM7
Q61881
Persijos ŠMC TGG PGS GTG AAG ne
AGG AGA KTG GTC ŠMC ACC AC
P160 ROCK2

U58513
ARG AAC KTG TBS AGC GTG GT
TCC AGG GTC, ATC TGG AGT TC
EST
W18585
AGA CTT GGT GGC AGA GGA GA
GCA GCT CAT GAA AGA PPK CK
EST
AA403748
BMT AAA GCA ACC CAA BMT GA
TAG BMT TAT ggg ACC TGG TG
BST1 /BP3
Q64277
GAT TTC TTG AGC TGG TGT CV
AAA ACC BTK TCG TGG GAT AG
EST
AA024250
PVG ATA GAG CAA ggg ATG GA
CTG "AGC CCA AAC PVG TAG A.
RBP2

Q08652
GAA GAA GGA CCA AAA TGG AA pervežimas CGG TGA AAT CCA GGT CGT AG
EST
W46016
AGC AAC AAC AGC TGG aktas TC
ACC TTC TGT TTG GTG CTG G.
BP1 /6C3
S30398
TAT CGG BMT CAT CTA ACC AG
, ATC TTC ARG PVG CAC CTG AC
EST
AI552444
CAT GCG ATA CTG GAA CAT GA
TGA BTK CAA ATA GCC CTC AG
EST
AA108876
TGG AGC AAG aga GGA AAG TG
CTA GAA CTG "AGC TTG BMT TG
EST
AA049294
ACG TGG AGA ARG TTC TCG TG
GCA ATA GTG TBS CCG AAT CK
EST
AA254777
Persijos KTG Gag TTG aga CTG TA
TGA CAA GCT GCA PVG TPI CK
RHAMM
AF031932 GCA GAA GGA GGA GCA GAG TG
GCA GTG ACG TCC CTC AGA CT
EST
AA002293
AAG TCT TTG TGT ggg CTG AG
AGG ARG CTT CGT CTC TCC ne
EST
AI595081
ŠMC PVG Gat GTC TGC CTA CT
CCG AGA TBS TGT TCT TBS CK
CPO
D16333
GAA GAA CAA GAT GGA GCT GA
CAG AAA GAT TCC CAT GAA CV
EST
AA000304
TTC, ATC TGC TGC TCC TTC TC
TTA TAG acc TTC CCG CAC AG
rezultatai
mikrogardeliq analizė ir pusiau -quantitative AT-PGR
identifikuoti genus, kurie gali būti selektyviai, susijusias su IC-IM, mes palyginti genų ekspresijos modeliai skrandžio fundic audinių gautų iš laukinio tipo ir w /w
V
pelių naudojant genas Mikrogardelė metodas [19, 20]. Pelių dugnas be epitelinio audinio, gautų iš laukinio tipo ir w /w
V
pelių palaikoma nevalgius
sąlygomis buvo naudojamas generuoti poli (a) + mRNR už mikrogardelių analizės naudojant pelės GEM 1 mikrogardelių , Rezultatai šio eksperimento, pabrėžiant genus, kurie buvo atkuria sumažėjo arba padidėjo > 2,0-kartus arba didesnė, yra parodyta 2 lentelėje ir Fig. 1B. Keletas žinomų ir naujų genai buvo skirtingai išreikšta dugno W /W
V
pelėms (> 2,0 subalansuotas skirtumas išraiškos). Norėdami patvirtinti skirtumas raiškos profilius, mes toliau nagrinėjo ekspresijos lygis pelių fundic mRNR kilęs iš laukinių rūšių ir W /W
V
pelės prižiūrimi nevalgius
kaip šablonų sąlygomis, naudojant pusiau kiekybinis RT-PGR analizė (tipinių duomenų buvo parodyta Fig. 1C, 1D. Visi pradmenų rinkiniai, skirti patvirtinimo buvo pateikta 1 lentelėje). Išraiška dešimt genų buvo žymiai sumažintas skrandžio dugno W /W
V
pelės negu tokio pat amžiaus atitiko laukinio tipo pelėms. Dar vienuolika genai parodė išraiška padidėjo nevalgymo W /W
V
mice.Table 2 analizė genų ekspresijos į laukinio tipo ir w /w
V
pelių dugno
Gene vardas
W /W
V
/laukinio tipo santykis (A)
prisijungimas Nr
pavienių ląstelių tyri- mas vieta (b)
Cytoband (c)
EST
2,5
AA185701
EST
2,5
AA166336
EST
2.4
AA021806
MCM7
: DNR replikacijos Licencija faktorius
2,4
Q61881
branduolys
7q21.3-q22.1
P160 ROCK2
: Ro susijusių baltymų kinazės
2,3
U58513
Citoskeletas
2p24
EST
2.3
W18585
EST
2.3
AA403748
BST1 /BP3
: ADP ribozilas ciklazę 2 pirmtako
2,0
Q64277
membranos
4p15
EST
2.0
AA024250
RBP2
: retinolis surišantis baltymas 2, korinio
2,0
Q08652
citoplazma
3q23
EST
2.0
W46016
BP1 /6C3
: glutamiltranspeptidazė Aminopeptitase UAB - 2,1
S30398
membrana
16
EST
-2,2
AI552444
EST
-2,3
AA108876
EST
-2,4
AA049294
EST
-2,4
AA254777
RHAMM
: hialuronano tarpininkaujant judančių receptorių
-2,5
AF031932
membranos
5q33.2-qter
EST
-2,5
AA002293
EST
-3,4
AI595081
CPO
: Coproporphyrinogen oksidazės
-3,6
D16333
mitochondrijas
3q12
EST
-3,9
AA000304
(a) Subalansuota skirtumas išraiška kontrolė laukinio tipo pelių vs W /W
V
mutantas pelėms. Vertybės, kurios buvo sumažintos arba padidintos > 2-kartus arba didesnis abiejų dviejų nepriklausomų eksperimentų buvo laikomas svarbiu ir vidutinės vertės buvo apskaičiuotos. Visi rezultatai buvo patvirtinti su pusiau kiekybiniam RT-PGR naudojant fundic audinius nuo šešių laukinio tipo ir šešių w /w pervežimas V
mutantas pelėms. (B) pavienių ląstelių tyri- mas vieta nustatoma pagal kodo programa http: //. Šaltinis Stanfordo edu ".. (C) Žmogaus chromosomų lokalizacijos geno.
Diskusijos
A skirtingai išreikštas genų palyginimą iš dugno W /W
V
pelėms, naudojant DNR mikrogardeliq analizė parodė, kad išraiška vienuolika genai nuorašai buvo gerokai iki reguliuojama W /W
V
pelės, o dešimt genų nuorašai buvo smarkiai slopino šių gyvūnų. Mes patvirtino šiuos rezultatus su pusiau kiekybiniam RT-PGR audinių nuo šešių kiekvienas laukinio tipo ir w /w
V
pelių. gauti iš šių eksperimentų duomenys rodo, kad išraiška genuose buvo specialiai reglamentuoja W /W
V
pelių.
vienuolikos genus, kurie buvo iki-reguliuojama skrandžio dugno W /W
V
pelėms buvo identifikuoti kaip MCM7
, P160 ROCK2
, BST1 /BP3 pervežimas, RBP2
, o kitas septynerius unannotated nuorašai. MCM7 yra žinduolių homologas iš mielių branduolinės baltymų MCM2 /CDC47, kuris, kaip manoma, vaidina svarbų vaidmenį dviem svarbiais žingsniais ląstelės ciklo, ty prasidėjęs DNR replikacijos ir ląstelių dalijimąsi [21, 22]. P160 ROCK2, kuris yra iš ROCK1 izofermentų yra tikslas mažame GTPase, Rho [23]. ROCK2 yra serino /treonino kinazės, kuris reguliuoja citokinezė, lygiųjų raumenų susitraukimą, dėl aktino streso pluošto ir židinio sąaugų susidarymo, o FOS reagavimo serumas elementas [24] aktyvacijos. Up-reguliavimas P160 ROCK2 gali turėti kompensacinį poveikį už TBT priklausoma mechanizmų nuostolių skrandžio dugno. BST1 /BP3, kaulų čiulpų stromos ląstelių paviršinių antigenų, yra įvairiai glikozilinamas glikozilfosfatidilinzitolio fosfatidil (GPI) -susijęs molekulė, kuri yra pasirinktinai išreiškė anksti B ir T linijos? Ląstelių ir atskirą pogrupį iš Tinklinės ląstelių periferinių limfinių organų. Jis taip pat išreiškė ant šepečio sienos žarnyno epitelio ląstelių, luminal paviršiaus inkstų kanalėliuose rinkti ir brandžių kaulų čiulpais ląstelių [25]. Šis baltymas, kaip manoma, priklauso ADP-ribozilas ciklazės šeimos nariai [26]. Mobilieji RBP2 yra gausu 134 išspaudų baltymas, esantis plonojo žarnyno epitelio [27]. Manoma, kad dalyvauti sugerties ir /arba viduląstelinė metabolizmo vitamino A ir priklauso baltymų šeimos, kuriame kepenų riebiųjų rūgščių-surišantį baltymą. Vitaminas A yra riebaluose tirpių vitaminų būtinas augimui, reprodukcijai, diferenciacijos epitelio audinius ir vizija. Žinduoliai priklauso nuo žarnyno absorbcijos šio vitamino kurių išgyvenimą. RBP2, kuris iš esmės apsiriboja tik mažas žarnyno enterocitus tikriausiai vaidina svarbų vaidmenį žarnyno absorbcijos ir /arba metabolizmo vitamino A [27].
Mes taip pat patvirtino, žemyn reguliavimą dešimt genų W /W
V
pelės: BP1 /6C3
, RHAMM
, CPO
, ir dar septyni unannotated miškuose. Pelių β-limfocitų diferenciacija antigenas, BP1 /6C3 buvo apibūdinamas kaip glutamilo aminopeptidaze, kuris pranešė, kad tarnauti kaip mobiliojo diferenciacijos žymuo lymphomyelocytic linijų ir gali būti dalyvauja ląstelių aktyvacija, signalo perdavime, ir ląstelė-matricos sukibimo. Ji taip pat išreikšta kapiliarų endotelio ląstelių, placentos, ir epitelinių ląstelių žarnyne ir proksimalinės inkstų kanalėlių [28]. RHAMM
koduoja hialuronano receptorių baltymų [29]. Kai hialuronano jungiasi prie RHAMM, iš baltymų skaičių fosforilinimo įskaitant židinio sukibimo kinazės pp125-FAK vyksta [30]. Tai būtinas žingsnis išardymo židinio kontaktų ir vėliau judrumui. CPO yra šeštoji fermentas iš hemo biosintezės. Tai tirpus baltymas yra lokalizuota į intermembrane erdvėje mitochondrijas ir katalizuoja dviejų propionato grupių pertvarkymo dviejų ir keturių coproporphyrinogen III dviejų vinilo grupių protoporfirinogeno IX [31] pozicijas. Buvo pranešta, kad coproporphyria (CPO trūkumas) pacientai parodė užkietėjimas ir nenormalus dieglius kurie yra pagrindiniai simptomai šios ligos [32]. Pažymėti iškilimas coproporphyria su išmatomis diferencijuoti būklę iš Švedijos tipo, kurioje išmatų porfirinai paprastai normalus ir iš Pstrokacić porfirija, kurioje tiek coproporphyrin ir protoporfirinogeno frakcijos padidėjo išmatose [33].
21 nustatytų genų, mes lėmė pavienių ląstelių tyri- mas lokalizavimą ir žmogaus chromosomų žemėlapių iš 7 žinomų genų naudodami kodo programa http:.. //šaltinis Stanford edu "(2 lentelė). Šie genai parodė, kad mobiliojo ryšio lokalizavimo įvairovę, įskaitant 3 membrana, 2 citoplazmos, 1 mitochondrijų ir 1 branduolinių baltymų. Daugiau analizė šių genų gali leis mums išsiaiškinti ne tik jų santykius su KIT, per receptorius tirozino kinazės, bet ir molekuliniais aspektų GN stimuliatoriaus sistemos.
Mes anksčiau nustatė penkiolika genų, kurie buvo skirtingai išreikšta plonoji žarna nuo laukinio tipo ir W /W
V
pelių, kurios pasireiškia keletą IC-MY naudojant skirtumas genų ekspresijos metodas [17, 18]. ™ @ Nė vienas iš šių 15 genų buvo rasta 21 genų sąrašo kad buvo skirtingai išreikštas skrandžio dugno laukinio tipo ir w /w pervežimas V
pelių, kurios plėtoja keletą IC-IM naudojant kDNR mikrogardeliq. Kaip mes patvirtino diferencialo genų ekspresiją KIT
tarp plonoji žarna /skrandžio fundic audinių laukinio tipo ir tų w /w pervežimas V
mutantas pelių pusiau kiekybiniam RT-PCR, mūsų eksperimentinis sistema gali aptikti genetinę aberacijas w /w
V
pelių. Todėl mūsų rezultatai gali atspindėti ląstelių subjekto dviejų rūšių prieauginį, IC-mano ir IC-IM, arba ląstelių sudėties tarp plonosios žarnos ir dugno skirtumą. Norėdami pateikti įtikinamų įrodymų, kurie paremtų šias spekuliacijas, saviraiškos profilį naudojant išvalytą mRNR iš izoliuotų vienos Tarpusienio ląstelių gali būti labai naudinga, kitą tyrimą.
Šiuo metu mes nežinome, ar šie genai yra svarbūs iš pareigų skrandžio stimuliatorius /impulso aparatu ar buvo Down arba iki reguliuojama kaip ICC praradimo rezultatas. Šie duomenys, tačiau teikti aiškią sisteminę genetinę įrodymų, kad keli svarbūs baltymai, kurie vaidmenis ląstelės ciklo, citokinezė ir formavimas citoskeleto, ląstelių medžiagų apykaitą, deguonies apykaitą, ląstelių sukibimą ir plėtros ir diferencijavimo žarnyno ląstelės žymiai pasikeitė skrandžio dugno W W /
V
pelių. Karta transgeninių gyvūnų, kurie rodo audinių specifinių raiška kandidato genų, taip pat genų nokautas gyvūnams gali būti naudinga išaiškinant kiekvieno geno virškinamojo trakto motorikai vaidmenį.
Į visą žmogaus ir pelės genų atradimą per genomo projektas turėtų perversmą biologinį vaistą, įskaitant molekulinės diagnozuoti įvairias ligas ir kurti naujus gydymo. Informacija kartu su didelio našumo technologijas, tokias kaip DNR microarray ir SNP spausdinimo analizės spartės atradimą genų imlių arba sukelia įvairias ligas ir prisidėti prie patikros naujų vaistų, kurie skirti šiuos ligos genų produktų. Šia prasme, molekulinės profiliavimas projekto pastangų, kurioje mes stengiamės atrasti genetinę aberacijas gyvūnų ligų modelių, tokių kaip W /W
V
pelės sukurs labai kintamas išteklių tolesniam išaiškinimo judrumo sutrikimų , Kaip sumažinti numeriai TBT taip pat buvo pranešta keliose trakto peristaltiką sutrikimų, pavyzdžiui, lėtine žarnyno pseudo-obstrukcija [5, 6], lėtai tranzito užkietėjimas ir tam tikrų formų gastroparezę [13, 14], tai genų informacija turėtų padėti plėtrą naujų molekulinės orientuojasi terapijos šių sutrikimų, taip pat gali nustatyti diagnostikos molekulinius žymenis šiems sutrikimams.
Išvada
Mes nustatėme dvidešimt vienas genus, kurie koduoja funkcinius baltymus, kurie yra gerokai aukštyn arba žemyn reglamentuoja Apvalkalo muscularis
iš skrandžio dugno ir w /w
V
pelių. Turint omenyje, kad nė vienas iš šių genų buvo įsitraukęs į kokią nors virškinamojo trakto peristaltiką aspektu, mes rodo, kad daug nežinomų genai gali būti įtraukti į korinio ryšio pokyčių, kurie veda į peristaltikos sutrikimų, susijusių su TBT praradimo. Genų Mikrogardelė analizė yra veiksmingas metodas atrankos pokyčius, atsirandančius išraiškos būdus genų reaguojant į spontaniškai arba genetines mutacijas, kurie veda prie tam tikro tipo ląstelių praradimo. Taikant šį metodą, gali leisti pripažinti modelių genų ekspresiją, kurios yra bendros kelių judrumo sutrikimų, kurioje TBT yra prarastas, tokiu būdu suteikiant naujų įžvalgų molekulinius mechanizmus, atsakingų už atrankinio praradimo TBT gyventojų.
Pastabos
Yataro Daigo, Ichiro Takayama prisidėjo vienodai prie šio darbo
santrumpų sąrašas
BP1 /6C3.
glutamiltranspeptidazė aminopeptidazę
BST1 /BP3:
kaulų čiulpų stromos antigenas 1 (slapyvardis ADP ribosylcyclase 2 pirmtakas)
CPO: Rīga, coproporphyrinogen oksidazės
DMP: Rīga gili raumenų rezginys
miškuose: Rīga, išreikšti seka žymės
Žuvys:
fluorescencijos in situ hibridizacijos


GN: Rīga, virškinimo
TBT: Rīga, tarpinėse ląstelės Cajal
IC- DMP: Rīga, TBT ties gilia raumenų rezginio
IC-MP lygio: Rīga, raumenis TBT
IC-MY : Rīga, TBT Pasibaigus myenteric rezginio
MCM7 lygio: Rīga, minichromosome priežiūra 7
Mano: Rīga, myenteric rezginys
P160 ROCK2: Rīga, P160 Ro-susijusi, susukti-ritė formavimo baltymų kinazės 2
RBP2: Rīga, retinolis privalomas baltymas 2, korinio
RHAMM: Rīga, hialuronano tarpininkaujant judrumas receptorių
AT-PGR: Rīga, atvirkštinės transkripcijos-polimerazės grandinės reakcija
SNP: Rīga, vieno nukleotido polimorfizmo
deklaracijų
Padėka
Palaikomi iki 08457165 (MF) iš Japonijos ministerijos Švietimas, mokslas, sporto ir kultūros, Japonija ir Danija 57.236 (su SW) ir PO1 DK41315 (iki SW ir KS) iš National Institutes of Health, JAV.
Autoriai "originalas pateiktas failai vaizdų
Žemiau yra nuorodos į autorių originalių pateiktų failų vaizdų. 12876_2002_51_MOESM1_ESM.ppt Autorių originalus failas skaičius 1 konkuruojančių interesų
Nėra deklaruotus.

• Reguliavimas amilinas atleidimo nuo kultūringas triušio skrandžio fundic gleivinės cells
• Dubliavimo cista ir prievarčio ir dvylikapirštės žarnos kanalo: retas priežastis naujagimių skrandžio išleidimo obstrukcija: byla report