l'espressione genica differenziale nel fondo gastrico murino privo di cellule interstiziali di espressione genica Cajal

differenziale nel fondo gastrico murino privo di cellule interstiziali di Cajal
Abstract
sfondo
Gli strati muscolari murine fondo gastrico non hanno cellule interstiziali di Cajal a livello del plesso mioenterico e solo possiedono cellule interstiziali intramuscolari e questo tessuto non genera onde lente elettrici. L'assenza di cellule interstiziali intramuscolari in W /W
V
mutanti fornisce un'opportunità unica per studiare i cambiamenti molecolari che sono associati con la perdita di queste cellule intercalanti.
Metodo
Il gene profilo di espressione del fondo gastrico di tipo selvatico e W /W
V
topi è stata determinata mediante l'analisi di microarray murino la visualizzazione di un totale di 8734 elementi. geni interrogati dalla analisi di microarray sono stati confermati da reazione semi-quantitativa inversa a catena della polimerasi di trascrizione-.
Risultati
Ventuno geni sono stati espressi in modo differenziale wild type e W
V
/W topi. Undici trascrizioni avevano 2,0-2,5 volte maggiore espressione di mRNA in W
V
fondo W /gastrica rispetto ai tessuti di tipo selvatico. Dieci trascrizioni avevano 2,1-3,9 espressione piega inferiore in W /W
V
mutanti in confronto con gli animali di tipo selvatico. Nessuno di questi geni sono stati mai coinvolti in ogni funzione intestinale motilità.
Conclusioni
Questi dati forniscono la prova che molti geni importanti sono notevolmente cambiate rispetto al fondo murino di W
V
/W mutanti che mancano le cellule interstiziali intramuscolari di Cajal e hanno ridotto la neurotrasmissione enterico motore.
Sfondo
cellule interstiziali di Cajal (ICC) sono gastrointestinali (GI) cellule pacemaker e gli intermediari in enterico neurotrasmissione motore nel tratto GI [1, 2 ]. ICC express KIT
/c-kit
e dipendono segnalazione tramite la proteina prodotto del gene, KIT, un recettore tirosin-chinasi, che è essenziale per lo sviluppo e il mantenimento del fenotipo ICC [3]. Le mutazioni nel bianco-avvistare
locus (cioè W /W
V
) determinare una riduzione dell'espressione KIT. Questi animali mutanti sviluppano pochi ICC a livello del plesso mioenterico (IC-MY) nel piccolo intestino e numeri ICC ridotte è associato ad una perdita di attività onde lente. ICC intramuscolare (IC-IM) trova nello stomaco, esofageo inferiore e sfinteri pilorica sono assenti in W
V
animali W /mutanti [4]. Ridotto numero di CPI sono stati segnalati anche in diversi disturbi della motilità gastrointestinale, come la pseudo-ostruzione intestinale cronica [5, 6], infantile stenosi pilorica ipertrofica [7-9], malattia di Hirschsprung [10-12], lento transito costipazione e alcune forme di gastroparesi [13, 14].
l'associazione tra disturbi della motilità e perdita di specifiche popolazioni di ICC suggerisce che una più completa comprensione della biologia molecolare e cellulare delle reti ICC all'interno del tratto gastrointestinale può aiutare a comprendere l'eziologia di alcune patologie motore GI. Lo scopo del presente studio è stato quello di caratterizzare le sequenze genetiche che si esprimono in ICC dello stomaco che può codificare importanti elementi funzionali del sistema di neurotrasmissione GI pacemaker /motore. Abbiamo perseguito l'ipotesi che tali geni potrebbe mostrare espressione differenziale nel piccolo intestino di topi wild type e W /W
V
topi [15, 16]. Abbiamo precedentemente identificato quindici noti e nuovi geni che sono state espresse in maniera differenziale nel piccolo intestino di tipo selvatico e W /W
V
topi, che si sviluppano alcuni IC-MY utilizzando un metodo di espressione genica differenziale [17, 18].
nel presente studio abbiamo ipotizzato che ci possono essere anche espressione differenziale dei geni nel fondo gastrico di V
topi W /W
, dove si perdono IC-IM. La nostra analisi genica microarray ha identificato con successo 21 geni che sono state espresse in maniera differenziale nel fondo di
topi W /W V
. L'espressione differenziale di questi topi è stata confermata dalla reazione inversa a catena della polimerasi di trascrizione-semi-quantitativa (RT-PCR)
Metodi
Animali e Preparazione del tessuto
L'uso e il trattamento di animali da esperimento. È stato approvato dal Guideline governare Comitato esperimento su animali presso l'Università di Yamanashi Facoltà di Medicina e presso l'Università del Nevada School of Medicine. Sei maschio adulto WBB6F1 - + /+ topi (wild type) e l'età abbinati a sei maschio adulto WBB6F1-W /W
V
topi, del peso di 20 a 30 g, sono stati acquistati dal Giappone SLC Inc (Shizuoka , Giappone). Essi sono stati anestetizzati con etere o carbonio inalazione di anidride e si sono sacrificati per dislocazione cervicale. Per le analisi del gene, stomaci sono stati rimossi dall'animale e la mucosa con la sottomucosa allegato rapidamente tagliente sezionato dalla tunica muscolare
. I tessuti sono stati successivamente congelati in azoto liquido (-196 ° C). I tessuti sono stati conservati a -80 ° C fino a quando è stato preformato isolamento di RNA [18]
. RNA preparazione e l'analisi dei dati microarray Compra di analisi genica microarray, poli (A) + RNA è stato isolato da ciascun campione di tessuto da TRIZOL ( life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD, USA) e poli (A) + kit di isolamento da RNA totale (ISOGEN, Nippon gene, Tokyo, Giappone). 18 Prima di iniziare l'analisi di microarray, l'espressione genica differenziale di KIT
tra i tessuti fundica gastrici di topi wild type e quelli di W /W
V
topi mutanti sono stati confermati da semi-RT-PCR quantitativa (vedere la sezione di semi-RT-PCR quantitativa
) (Fig. 1A). Microarrays sono stati ibridati e sottoposti a scansione, e l'analisi delle immagini è stata eseguita come descritto in precedenza [19, 20]. In breve, le alterazioni nell'espressione genica sono stati valutati mediante trascrizione inversa di poli (A) + RNA in presenza di Cy3 o Cy5 fluorocromi seguito da ibridazione di topo chip GEM 1 microarray (Incyte Genomics, Inc., Porter unità Palo Alto, CA, STATI UNITI D'AMERICA). Per confermare la validità del saggio, gli esperimenti sono stati eseguiti in duplicato. I 8734 cDNA che abbiamo usato rappresentano 7854 unici geni /cluster UniGene: 3205 sono annotati e 4649 sono sequenze non annotate. Abbiamo assegnato un valore di cut-off, con una analisi della varianza, alla diapositiva microarray. I geni la cui Cy3- e intensità Cy5-segnale sono inferiori ai valori di cut-off sono stati esclusi da ulteriori indagini. Balanced espressione differenziale è stato determinato per i topi di controllo wild type contro W /W
V
topi mutanti. I valori che erano < -2.0 O > 2.0 in entrambe le due esperimenti indipendenti sono stati considerati significativi e sono stati calcolati i valori medi del rapporto di fluorescenza relativa per ogni gene. Figura 1 A. L'espressione di KIT
gene utilizzando semi-RT-PCR quantitativa, in tessuti fundica gastrici da wild type e W /W
V
mutante topi mantenuti in condizioni di digiuno
. GAPDH
livelli sono stati misurati come controllo. immagine B. Rappresentante del DNA microarray ibridazione. Le alterazioni nell'espressione genica che sono state rappresentate dal rapporto di intensità della fluorescenza misurata con Cy3 e Cy5 fluorocromi. profili di espressione sono stati valutati mediante trascrizione inversa di poli (A) + RNA da muscoli fundica gastrici da wild type e topi
V
W /W in presenza di Cy3 o coloranti fluorescenti etichettatura Cy5 seguita da ibridazione per il mouse GEM 1 microarrays. L'immagine mostrata è stato prodotto sovrapponendo l'immagine di fluorescenza Cy5 (verde pseudo-colore che rappresenta il livello di espressione di RNA dalla tunica muscolare
di W
V
fondo /W) e l'immagine di fluorescenza Cy3 (pseudo- di colore rosso che rappresenta l'espressione di RNA dai tessuti di tipo selvatico). Gli array sono stati di contrasto con DAPI (blu). C. La conferma della affidabilità dei dati di microarray dal semi-quantitativa RT-PCR. Esempi rappresentativi di analisi RT-PCR, nei tessuti fundica da sei wild type e sei W /W
V
topi mutanti conservati in condizioni fame. Espressione del CPO
gene è stato notevolmente ridotto nel fondo di
V topi W /W
rispetto ai pari età topi wild-type, mentre il MCM7
gene ha mostrato un aumento di espressione in W /W
V
topi. D. livello di espressione relativa di CPO
(CPO
/GAPDH
) e MCM7
(MCM7
/GAPDH
) nei tessuti fundica da sei wild type e sei W /W
V
mutante topi. I dati rappresentano la media (± SD) di sei diversi esperimenti di RT-PCR utilizzando sei wild type o W
W
V
fondo RNA /come modelli.
Semi-RT-PCR quantitativa
I livelli di espressione di mRNA che sono stati diminuito o aumentato del > 2.0 volte o più, sono stati confermati da semi-RT-PCR quantitativa dal fondo di 6 di ogni topi wild type e
V
topi W /W. RT-PCR è stata eseguita come descritto in precedenza [18]. In breve, 2 mg aliquote di RNA totale trattati con DNasi I (Roche Diagnostics, Basilea, Svizzera) dai tessuti fundica topi sono stati utilizzati per sintetizzare cDNA a singolo filamento. Questi cDNA sono stati utilizzati come modelli per la PCR in un termociclatore (PerkinElmer, Shelton, CT, USA), utilizzando primer elencati nella tabella 1 o KIT
(5'-ACG ATG TCA TGA AGA CTT GCT-3 'e 5' -CTA CCC TGG AAT AGG ATG CA-3 '), e GAPDH
set di primer specifici (5'-GACAACAGCCTCAAGATCATCA-3' e 5'-GGTCCACCACTGACACTGTG-3 '). L'espressione di GAPDH
servito come controllo interno. I primer sono stati ottenuti da diversi esoni nello stesso gene, quando la corrispondente sequenza genomica del mouse era disponibile in quel momento. Le reazioni di PCR sono stati ottimizzati per numero di cicli al fine di garantire l'intensità del prodotto all'interno della fase lineare di amplification.Table 1 Set di primer utilizzato per semi-RT-PCR quantitativa.
Nome Gene
adesione No.
Forward Primer

Reverse Primer
EST
AA185701
CGA AAG CCT TGA TGA GGT AG
TAG GAA AAC AGG CGT CAC TG
EST
AA166336
GAA GAA AAG GCT GCA GAT CG
CAA GAG GCA AAG AGC AAT CC
EST
AA021806
CAC GAA TTG CAG GAC TAC CT
ACC TGC ACT GTA GGC TGA GT
MCM7
Q61881
GCC CAC TGG ATT GTG AAG a
AGG AGA CTG GTC CAC ACC AC
P160 ROCK2

U58513
AAG AAC CTG TCA AGC GTG GT
TCC AGG GTC ATC TGG AGT TC
EST
W18585
AGA CTT GGT GGC AGA GGA GA
GCA GCT CAT GAC AGA ACA CC
EST
AA403748
CCT AAA GCA ACC CAA CCT GA
TAG CCT TAT GGG ACC TGG TG
BST1 /BP3
Q64277
GAT TTC TTG AGC TGG TGT CG
AAA ACC CTC TCG TGG GAT AG
EST
AA024250
CAG ATA GAG CAA GGG ATG GA
CTG AGC CCA AAC CAG TAG AA
RBP2

Q08652
GAC GAA GGA CCA AAA AA TGG
CGG TGA AAT CCA GGT CGT AG
EST
W46016
AGC AAC AAC AGC TGG ACT TC
ACC TTC TGT TTG GTG CTG AG
BP1 /6C3
S30398
TAT CGG CCT CAT CTA ACC AG
ATC TTC AAG CAG CAC CTG AC
EST
AI552444
CAT GCG ATA CTG GAA CAT GA
TGA CTC CAA ATA GCC CTC AG
EST
AA108876
TGG AGC AAG AGA GGA AAG TG
CTA GAC CTG AGC TTG CCT TG
EST
AA049294
ACG TGG AGA AAG TTC TCG TG
GCA ATA GTG TCA CCG AAT CC
EST
AA254777
GCC CTG GAG TTG AGA CTG TA
TGA CAA GCT GCA CAG TAA CC
RHAMM
AF031932 GCA GAA GGA GGA GCA GAG TG
GCA GTG ACG TCC CTC AGA CT
EST
AA002293
AAG TCT TTG TGT GGG CTG AG
AGG AAG CTT CGT CTC TCC a
EST
AI595081
CAC CAG GAT GTC TGC CTA CT
CCG AGA TCA TGT TCT TCA CC
CPO
D16333
GAA GAC CAA GAT GGA GCT GA
CAG AAA GAT TCC CAT GAA CG
EST
AA000304
TTC ATC TGC TGC TCC TTC TC
TTA TAG ACC TTC CCG CAC AG
Risultati
analisi di microarray e semi -quantitative RT-PCR
per identificare i geni che possono essere selettivamente associati con IC-IM, abbiamo confrontato gene pattern di espressione nei tessuti fundica gastrici derivati ​​da wild type e vendere V
topi W /W che utilizzano un metodo gene microarray [19, 20]. fundus murino senza tessuti epiteliali derivati ​​da wild type e W /W
V
topi mantenuti in condizioni di digiuno
sono stati usati per creare poli (A) + mRNA per l'analisi di microarray con il mouse GEM 1 microarray . I risultati di questo esperimento, mettendo in evidenza i geni che sono stati riproducibile diminuito o aumentato del > 2,0 volte o più, sono riportati in Tabella 2 e Fig. 1B. Diversi geni noti e nuovi sono stati espressi in modo differenziato nel fondo di W /W
V
topi (> 2.0 equilibrata espressione differenziale). Per confermare i profili di espressione differenziale, abbiamo ulteriormente esaminato i livelli di espressione di mRNA murino fundica derivati ​​da tipi selvatici e W /W
V
topi mantenuti in condizioni di digiuno
come modelli, utilizzando semi-quantitativa analisi RT-PCR (dati rappresentativi sono stati mostrati in Fig. 1C, 1D. Tutti i set di primer utilizzati per la conferma stati elencati nella Tabella 1). L'espressione di dieci geni è stata notevolmente ridotta nel fondo gastrico di W /W
V
topi rispetto ai topi wild type età corrispondente. Un altro undici geni hanno mostrato un aumento di espressione in digiunava W /W
V
mice.Table 2 Analisi dell'espressione genica nel fondo di tipo selvatico e
V topi
W /W
Gene Nome
W rapporto W /
V
/tipo selvatico (a)
adesione No.
localizzazione subcellulare (b)
Cytoband (c)
EST
2.5
AA185701
EST
2.5
AA166336
EST
2.4
AA021806
MCM7
: Fattore licenze replicazione del DNA
2.4
Q61881
nucleo
7q21.3-q22.1
P160 ROCK2
: proteine ​​Rho-chinasi associata
2.3
U58513
citoscheletro
2p24
EST
2.3
W18585
EST
2.3
AA403748
BST1 /BP3
: ADP-ribosil ciclasi 2 Precursore
2.0
Q64277
membrana
4p15
EST
2.0
AA024250
RBP2
: binding protein 2 retinolo, cellulare
2,0
Q08652
citoplasma
3q23
EST
2.0
W46016
BP1 /6C3
: Glutamyl Aminopeptitase
- 2.1
S30398
membrana
16
EST
-2.2
AI552444
EST
-2.3
AA108876
EST
-2.4
AA049294
EST
-2.4
AA254777
RHAMM
: Hyaluronan-Mediated motilità Receptor
-2.5
AF031932
membrana
5q33.2-qter
EST
-2.5
AA002293
EST
-3.4
AI595081
CPO
: coproporphyrinogen ossidasi
-3.6
D16333
mitocondri
3q12
EST
-3.9
AA000304
(a) l'espressione differenziale bilanciato per il controllo wild type topi vs W /W
V
topi mutanti. Valori che sono stati diminuito o aumentato del > 2 volte o più in entrambe le due esperimenti indipendenti sono stati considerati significativi ed i valori medi sono stati calcolati. Tutti i risultati sono stati confermati con semi-RT-PCR quantitativa utilizzando tessuti fundica da sei wild type e sei W /W
V
topi mutanti. (B) Localizzazione subcellulare determinato dal programma sorgente http: //. Fonte Stanford edu.. (C) localizzazione cromosomica umana del gene.
Discussione
Un confronto di geni differenzialmente espressi dal fondo di W /W
V
topi utilizzando l'analisi DNA microarray hanno rivelato che l'espressione di undici geni trascrizioni erano significativamente up-regolati in W /W
V
topi, mentre dieci geni trascritti sono stati drasticamente soppressi in questi animali. Abbiamo confermato questi risultati con semi-RT-PCR quantitativa dei tessuti da sei ciascuno di wild type e vendere V
topi W /W. I dati ottenuti da questi esperimenti suggeriscono che l'espressione dei geni sono stati specificatamente regolata in W /W
V
topi.
Gli undici geni che erano up-regolati nel fondo gastrico di W /W
V
topi sono stati identificati come MCM7
, P160 ROCK2
, BST1 /BP3
, RBP2
, e altri sette trascrizioni non annotate. MCM7 è un omologo di mammifero del lievito proteina nucleare MCM2 /CDC47, che è pensato per svolgere un ruolo importante in due fasi fondamentali del ciclo cellulare, cioè, insorgenza di replicazione del DNA e divisione cellulare [21, 22]. P160 ROCK2, che è un isoenzima di ROCK1 è un obiettivo per la piccola GTPasi, Rho [23]. ROCK2 è una chinasi serina /treonina che regola cytokinesis, contrazione della muscolatura liscia, la formazione di fibre di stress di actina e adesioni focali, e l'attivazione della risposta elemento siero FOS [24]. La up-regolazione di p160 ROCK2 può avere un effetto compensare la perdita di meccanismi ICC-dipendente nel fondo gastrico. Il BST1 /BP3, un midollo osseo cellule stromali antigene di superficie, è un glicosil-fosfatidilinositolo variabile glicosilata (GPI) molecola linked che è selettivamente espressa da B precoce e le cellule T lignaggio e una sottopopolazione di cellule reticolari discreta negli organi linfoidi periferici. Essa si esprime anche sul confine pennello di cellule epiteliali intestinali, la superficie luminale dei tubuli renali di raccolta e le cellule mieloidi mature [25]. Questa proteina dovrebbe appartenere alla famiglia ciclasi ADP-ribosil [26]. RBP2 cellulare è un abbondante proteina 134-residuo presente nel piccolo epitelio intestinale [27]. Si pensa di partecipare alla diffusione e /o il metabolismo intracellulare della vitamina A e appartengono ad una famiglia di proteine ​​che contiene la proteina gli acidi grassi del fegato. La vitamina A è una vitamina liposolubile necessario per la crescita, la riproduzione, la differenziazione dei tessuti epiteliali, e la visione. Mammiferi dipendono assorbimento intestinale di questa vitamina per la loro sopravvivenza. RBP2, che si limita in gran parte al piccolo enterociti intestinale, probabilmente gioca un ruolo importante nell'assorbimento intestinale e /o il metabolismo della vitamina A [27].
Abbiamo anche confermato la down-regolazione di dieci geni in W /W
V
topi: BP1 /6C3
, RHAMM
, CPO
, e altri sette EST non annotate. Il murino β-linfociti differenziazione antigene, BP1 /6C3 è stato caratterizzato come glutamil aminopeptidase, che è segnalato per servire come marker delle cellule-differenziazione delle linee lymphomyelocytic e possono essere coinvolte nella attivazione delle cellule, trasduzione del segnale, e l'adesione cellula-matrice. Si è espressa anche dalle cellule endoteliali dei capillari, la placenta, e le cellule epiteliali dell'intestino e tubuli renali prossimali [28]. RHAMM
codifica per una proteina recettore acido ialuronico [29]. Quando acido ialuronico si lega al RHAMM, la fosforilazione di un certo numero di proteine ​​compreso chinasi di adesione focale pp125-FAK verifica [30]. Questo è un passo necessario per lo smontaggio dei contatti focali e la successiva motilità. CPO è il sesto enzima della via biosintetica dell'eme. Questa proteina solubile è localizzata nello spazio intermembranico dei mitocondri e catalizza la conversione di due gruppi propionato, nelle posizioni due e quattro di coproporphyrinogen III a due gruppi vinilici di protoporfirinogeno IX [31]. E 'stato riferito che coproporfiria (deficit CPO) pazienti hanno mostrato la costipazione e coliche anomala che sono i principali sintomi di questa malattia [32]. Marcata elevazione coproporphyria nelle feci differenziato la condizione dal tipo svedese in cui porfirine fecali sono di solito normali e da porfiria variegata in cui sia coproporphyrin e frazioni protoporfirinogeno sono aumentati nelle feci [33].
In 21 geni identificati, abbiamo determinato la localizzazione subcellulare e la mappatura cromosomica umana dei 7 geni conosciuti che utilizzano il programma di origine http:.. //fonte Stanford edu (Tabella 2). Questi geni hanno mostrato una varietà di localizzazione cellulare di cui 3 membrana citoplasmatica 2, 1 mitocondriale e 1 proteine ​​nucleari. Ulteriori analisi di questi geni ci potrebbero consentire di chiarire non solo il loro rapporto con il KIT, un recettore tirosina chinasi, ma anche gli aspetti molecolari del sistema gastrointestinale pacemaker.
Abbiamo precedentemente identificato quindici geni che sono state espresse in maniera differenziale nell'intestino tenue di wild type e W /W
V
topi che si sviluppano alcuni IC-MY utilizzando un metodo di espressione genica differenziale [17, 18]. ™ @ Nessuno di questi 15 geni sono stati trovati nella lista dei 21 geni che sono stati espressi in modo differenziato il fondo gastrico di tipo selvatico e
V
topi W /W che si sviluppano alcuni IC-IM utilizzando un microarray cDNA. Come abbiamo confermato l'espressione genica differenziale di KIT
tra il piccolo intestino /gastrici tessuti fundica di wild type e quelli di W
V
topi W /mutante da semi-RT-PCR quantitativa, la nostra sperimentale sistema in grado di rilevare aberrazione genetica con
topi W /W V
. Pertanto i nostri risultati potrebbero riflettere la differenza dell'entità cellulare di due tipi di ICC, IC-MY e IC-IM, o la differenza della composizione cellulare tra il piccolo intestino e fundus. Per fornire la prova conclusiva, che supportano queste speculazioni, profilo di espressione di mRNA utilizzando purificato da isolate cellule interstiziali singoli potrebbe essere molto utile nel prossimo studio.
Al momento non sappiamo se questi geni sono importanti per il funzionamento del pacemaker gastrico /apparato neurotrasmissione o erano down o up-regolati a seguito della perdita di CPI. Questi dati, tuttavia, forniscono una chiara evidenza genetica sistemica che diversi importanti proteine ​​che hanno un ruolo nel ciclo cellulare, cytokinesis e la formazione di citoscheletro, metabolismo cellulare, metabolismo dell'ossigeno, adesione cellulare, e lo sviluppo e la differenziazione delle cellule intestinali sono notevolmente cambiate rispetto al fondo gastrico di W /W topi
V
. Generazione di animali transgenici che mostrano sovraespressione tessuto-specifica dei geni candidati, nonché gli animali knockout gene potrebbe essere utile per chiarire il ruolo di ciascun gene della motilità gastrointestinale.
La scoperta di un intero geni umani e topo attraverso la progetto del genoma dovrebbe rivoluzionare la medicina biologica tra cui diagnosi molecolare di varie malattie e sviluppo di nuovi trattamenti. L'informazione combinata con la tecnologia ad alto rendimento come il DNA microarray e l'analisi di battitura SNP accelererà scoperta dei geni sensibili e causando varie malattie e contribuire allo screening di nuovi farmaci che hanno come target di questi prodotti gene-malattia. In questo senso, lo sforzo del progetto profilo molecolare in cui si cerca di scoprire aberrazione genetica in modelli di malattia animale come W /W
V
topi genereranno risorse molto variabili per un'ulteriore delucidazione dei disturbi della motilità . Come numero ridotto di CPI sono stati segnalati in diversi disturbi della motilità gastrointestinale, come la pseudo-ostruzione intestinale cronica [5, 6], costipazione lento transito e certe forme di gastroparesi [13, 14], queste informazioni gene dovrebbe aiutare lo sviluppo di terapie molecolari mirati innovativi per questi disturbi, e può anche identificare marcatori molecolari diagnostici per questi disturbi.
Conclusione
Abbiamo identificato ventuno geni che codificano proteine ​​funzionali che sono significativamente up- o down-regolato in tunica muscolare
del fondo gastrico di topi W /W
V
. Considerando che nessuno di questi geni è stato implicato in ogni aspetto della motilità gastrointestinale, suggeriamo che molti geni sconosciuti potrebbero essere coinvolti nei cambiamenti cellulari che portano a disturbi della motilità associati alla perdita di CPI. analisi Gene microarray è un metodo efficace per lo screening dei cambiamenti che si verificano nei modelli di espressione di geni in risposta a mutazioni spontanee o genetiche che portano alla perdita di un determinato tipo di cellula. L'applicazione di questa tecnica può consentire il riconoscimento di pattern di espressione genica che sono comuni ai diversi disturbi della motilità in cui ICC sono persi, fornendo così nuove informazioni sui meccanismi molecolari responsabili della perdita selettiva delle popolazioni ICC.
Note
Yataro Daigo, Ichiro Takayama contribuito in maniera uguale a questo lavoro
Elenco delle abbreviazioni
BP1 /6C3:.
glutamil aminopeptidase
BST1 /BP3:
stromali del midollo osseo antigene 1 (alias ADP-ribosylcyclase 2 precursore)
CPO:
coproporphyrinogen ossidasi
DMP:
profondo plesso muscolare
EST:
sequenza tags espresse
FISH:
fluorescenza in situ ibridazione


GI:
gastrointestinale
ICC:
cellule interstiziali di Cajal
IC- DMP:
ICC a livello del plesso profondo muscolare
IC-IM:
intramuscolare ICC
IC-MY :
ICC a livello del plesso mioenterico
MCM7:
minichromosome manutenzione 7
MY:
myenteric plesso
P160 ROCK2:
P160 Rho-associata, coiled-coil formazione di proteina chinasi 2
RBP2: vincolante
retinolo proteine ​​2, cellulare
RHAMM:
acido ialuronico-mediata dai recettori motilità
RT-PCR:
inversa a catena della polimerasi trascrizione reazione
SNP:
polimorfismo a singolo nucleotide
Dichiarazioni
Ringraziamenti
supportati da 08457165 (MF) dal Ministero della giapponese Educazione, Scienza, Sport e Cultura, il Giappone e DK 57236 (a SW) e PO1 DK41315 (a SW e KS) dal National Institutes of Health, Stati Uniti d'America.
Autori 'originali presentate file per le immagini
di seguito sono elencate le i collegamenti ai file originali presentati degli autori per le immagini. file originale 12876_2002_51_MOESM1_ESM.ppt degli autori per la figura 1 in competizione interessi
Nessuno dichiarati.

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