Желудочный стимуляция: влияние электрических параметров на опорожнение желудка в контроле и диабетических крыс
резюме
Справочная информация
Целью данного исследования было проверить влияние различных частот и амплитуд импульсов во время желудочной стимуляции (GS) на желудочную опорожнение у крыс
Методы
GS проводили в 2-х группах лапаротомию крыс:. здоровых контрольных животных и крыс с острым диабетом. Эффекты четырех частот импульса (0,5, 1, 10, 20 Гц) и трех амплитуд импульсов (5, 20, 40 мА) были испытаны. Объемы из желудка после орально-желудочный инстилляции питательного раствора, сравнивали с результатами, полученными у животных без GS. . Значения Внутрижелудочная рН оценивали при базальных условиях и после того, как ОО
Результаты В обеих группах, Г.С. увеличилась опорожняется объемы по сравнению с условиями без стимуляции (р &ЛТ; 0,05) для частот импульса выше 0,5 Гц. Увеличение частоты пульса ускоряется опорожнение желудка (р &л; 0,01) с плато на уровне около 10 Гц. Увеличение амплитуд импульсов привело к увеличению объемов опорожненными только тогда, когда частота импульсов составляла 1 Гц (р ≪ 0,04), тогда как противоположный эффект наблюдался при 20 Гц (р ≪ 0,04). Наиболее эффективные комбинации для улучшения опорожнения желудка по сравнению с исходными условиями были 10 Гц с 5 или 20 мА. Общий эффект GS на опорожнение желудка по сравнению с исходными условиями без стимуляции, была больше у больных сахарным диабетом, чем у контрольных крыс (р ≪ 0,05). Во время стимуляции, внутрижелудочной значения рН не отличались от базальных условий во время голодания или после еды в области контроля и диабетических крыс.
Выводы
Хотя и частота импульсов и амплитуды следует учитывать при GS, частота, как представляется, наиболее важным пункт. Возможность увеличения опорожнение желудка с помощью электрической стимуляции у больных сахарным диабетом крыс предполагает потенциальные клинические применения для этого метода.
Введение
Электростимуляция желудка (GS) может быть подходящим лечение в gastroparetic пациентов, которые не реагируют на прокинетическим наркотиков и /или противорвотные препараты [1]. Тем не менее, наиболее эффективные электрические параметры для индукции желудка эффекты двигателя не были четко определены. Предыдущие исследования показали, что как длительность импульса и частота может быть важно учитывать: короткие длительности импульса менее 0,5 мс стимуляции очный нервной системы [2] в то время как большие значения ширины импульса выше 1,5 мс и низких частот преимущественно стимулирует гладкую мускулатуру. Большие значения ширины импульса, поставляемые с низкой частотой, близкой к родной медленной частоты волны способствуют медленные волны у здоровых неоперированных желудках [3-6]. Тем не менее, эти раздражений не усиливают двигательную функцию желудка [3]. С другой стороны, более высокие частоты импульсов (0,5 Гц) увеличивают желудочную индекс моторную без какого-либо существенного влияния на опорожнение желудка [4, 7]. Предыдущее исследование в vagotomized собаках показали, что частота стимуляции была критической демонстрацией того, что GS с 20 Гц индуцированных желудочных сокращений и повышенной опорожнением желудка, в то время как 6 Гц имел никакого эффекта [8]. Не
Целью данного исследования было исследовать влияние на опорожнение желудка более высоких частот и амплитуд импульсов, чем использовались ранее [3-7]. Тесты проводились в двух группах крыс: здоровых крыс с неоперированной желудка, и у крыс с острым диабетом, чтобы оценить, индуцирует ли GS эффект двигателя в этом заболевании. Действительно, при сахарном диабете, гастропарезу, которые могут быть отменены желудочной стимуляции, часто (от 30 до 50% больных) [9], и связан с отклонениями в желудочном миоэлектрических активностью, таких как bradygastria, tachygastria или смешанный или неспецифическими dysrythmias [10]. Кроме того, концентрации глюкозы в крови влияют на моторику желудка и опорожнение желудка во время гипергликемии медленнее, чем во время гипогликемии [11].
Методы
Хирургические методы
анестезиологии проводили у самцов крыс линии Sprague-Dawley в возрасте от 3 месяцев и весом от 250 до 300 г путем внутримышечных инъекций 60 мг /кг кетамина (Panpharma - Франция). Эта доза кетамина вызывает наркоз без какого-либо влияния на желудочную или кишечную время транзита у собак [12]. Два Platinium стимулирующие электроды (80 μ диаметр) (Microfil Industrie - Rennes - Франция) были имплантированы в проксимальной части желудка антрального вблизи большой кривизне (рисунок 1), в соответствии с методом Ruckebush и др
[13] , Электроды (длина: 8 см) были расположены на 1 см от привратника и зашивали 1 мм друг от друга с 2 мм туннелирования, а ось вживления электродов была перпендикулярна к оси желудка. Терминал дуоденостомия, два сантиметра дистальный от привратника, осуществляли сбор объемов из желудка. Для того, чтобы собрать все тома были удалены из желудка, двенадцатиперстной кишки сразу же лигируют ниже дуоденостомия и выше главного желчного протока, а также сосудистые и нервные пассажи были тщательно соблюдены. Для облегчения сбора сточных вод двенадцатиперстной кишки, катетер (внутренний диаметр: 2,5 мм) был вставлен на 5 мм intraluminally в проксимальной части двенадцатиперстной кишки (рисунок 1). Катетер соединяли с градуированного шприца (5 мл) для измерения объемов, собранных с помощью дуоденостомия. Эти объемы были признаны измерения опорожнения желудка. Точность измерения составляла 0,1 мл. Для того, чтобы оценить эффект стимуляции на постпрандиальной моторики желудка, 5 мл nutritient раствор Nutridoral
® (углеводы: 50%, белков: 30%, липиды: 20%; 12,5 килокалорий, Sodietal ® Ревеле. Франция) был внутрижелудочно привили посредством орально-желудочный зонд при постоянном потоке 0,5 ml.min -1 с автоматическим шприцем. Рисунок 1 Желудочный стимуляция: экспериментальная хирургическая процедура
Для изучения возможного влияния GS на secreton кислоты желудочного сока, в других группах крыс, внутрижелудочной значения рН контролировали при базальных условиях и после того, как GS (10 Гц, 20 мА). Хирургическая процедура была такой же, как описано ранее (терминал дуоденостомия с дуоденальной лигатуры) и pHmetric зонд (Инголд М3, Солал, Страсбург, Франция) был вставлен в желудке, один сантиметр проксимально по отношению к антрума. Зонд был подключен к записывающим рН (рН 60, LT1, Париж, Франция).
Руководство учреждения по уходу и использованию лабораторных животных последовало.
Животных моделях
Были исследованы две группы крыс , В первую группу вошли 50 здоровых крыс с интактной желудка (контрольная группа). Вторая группа включала 50 крыс с острым диабетом, индуцируемых внутривенные инъекции стрептозотоцин (55 мг /кг) проводили за 7 дней до экспериментов [14]. Диабет был подтвержден концентрации глюкозы в моче выше 55 ммоль /л с Multistix 8 SG ® тест (Bayer, USA), 3 и 7 дней после инъекции стрептозотоцин. Масса крыс, страдающих диабетом, не отличалась от таковых из группы контроля крыс (260 ± 12 182 ± VS 7)
Для оценки внутрижелудочной значений рН 4 группы по 6 крыс в контрольных (во время голодания или после приема пищи, при базальных или после того, как Условия работы были изучены GS), а также 4 группы по 6 крыс с диабетом методом
Шагая
нейро-стимулятора Ответить Выбрать ® (Empi -. США) был использован. Это устройство обеспечивает импульсов с электрическими параметрами, аналогичными тем, которые в настоящее время доступны с интракорпоральная кардиостимуляторами. были использованы Бифазные и ассиметричным прямоугольные импульсы. Длительность импульса была выбрана на уровне 0,2 мс на основе предыдущих отчетов, показывающих, что ниже 0,5 мс основной эффект стимуляции нерва [2], и что ширина 0,2 мс является эффективным для внутренней нервной стимуляции желудка [15]. Четыре импульсные частоты, известные для индукции стимуляции нерва (0,5, 1, 10 и 20 Гц) были выбраны [15]. Применялись три амплитуды импульсов (5, 20, 40 мА). Для каждой частоты (0,5, 1, 10 и 20 Гц), поезда 20 импульсов с интервалом в 2 секунды между каждым поездом были доставлены из-за повторяющегося стимуляция производит большие электрические и механические реакции, которые постепенно увеличиваются, как число импульсов, увеличение [15 ].
дизайн исследования
Эксперименты начались в 2.00 вечера после 18-часового голодания и были выполнены в наркозом и лапаротомию животных. Один из наблюдателей осуществляется GS в то время как другой наблюдатель собирали объемы опустошают через небольшой катетер, соединенный с двенадцатиперстную кишку. Наблюдатель, который измерили объемы не знали, были ли стимулируется желудок или нет.
Чтобы оценить влияние электрической стимуляции на опорожнение желудка у контрольных и диабетических крыс, объемы опорожняется 15 и 30 минут после оро-желудочного закапывания сравнивали у 10 крыс, не имеющих стимуляции и 40 других крыс, у которых GS начались в конце назогастральный закапывания (рисунок 2). Каждую крысу стимулированы одной частотой импульсов (с частотой 0,5 Гц, 1 Гц, 10 Гц или 20 Гц), но с тремя амплитуд импульсов (5, 20 и 40 мА) в течение трех отдельных сессий GS. Таким образом, эффект каждой частоты импульса испытывали в группах по 10 крыс (рисунок 2). В конце каждой сессии электрических GS, электроды и двенадцатиперстной кишки катетер удаляли и лапаротомию закрывали в каждом животном. После пробуждения, животные давали есть и пить вволю. Время восстановления в период между сессиями было 3 дня. Затем на 4 й день животные голодали в течение 18 часов до начала следующей сессии стимуляции началась на 5 й день в 2 часа дня. Каждая сессия длилась от 20 до 30 минут, и вся процедура была незначительной неприятностью у крыс. Ни одно из животных не показали каких-либо потерь значительный вес тела (&GТ; 20%), отсутствие аппетита или плохое состояние тела. Рисунок 2 Количество животных в соответствии с электрическими параметрами во время желудочной стимуляции (Число животных были одинаковыми в обеих группах: контрольной и диабетических крыс)
Чтобы оценить эффект стимуляции (при частоте 20 Гц, 10 мА) на внутрижелудочной кислотности, 8 были изучены группы крыс. После 18 часов голодания, значения рН оценивали при базальных условиях в течение 30 мин в 2-х группах крыс (6 контрольных и 6 диабетических крыс), а также во время GS в течение 30 минут в 2-х других групп крыс (по 6 контрольных и 6 крыс с сахарным диабетом) , Кроме того, внутрижелудочной измерения рН проводили в течение 30 минут после закапывания 5 мл Nutridoral ®, при базальных условиях в 2-х группах животных (6 контрольных и 6 крыс с сахарным диабетом) и после GS в 2-х других групп животных (6 управления и 6 диабетических крыс).
Статистика
Данные средства и стандартная ошибка среднего (SEM). Двухсторонний-дисперсионный анализ (ANOVA) был использован для анализа влияния частот и амплитуд импульсов на объемы опустели из желудка. Один из способов, дисперсионный анализ использовали для подтверждения влияния частот импульса или амплитуд импульсов на объемы из желудка. Непараметрический критерий Уилкоксона использовали для сравнения объемов опустели из желудка: при исходных условиях по сравнению с GS, когда частота изменялась (с той же амплитудой), с разными амплитудами (с той же частотой), в контрольной группе по сравнению с диабетических крыс. Испытание непараметрический Wilcoxon также используются для сравнения внутрижелудочного значения рН у крыс без GS и у крыс с GS.
Результаты
Побочных эффектов не наблюдалось из-за GS, в частности, не произошло гладких мышц ожоги.
в нестимулированных крыс, объемы опустели из желудка через 30 минут после окончания назогастральный закапывания были у больных сахарным диабетом крыс ниже, чем в контрольной группе (0,5 ± 0,1 против 0,8 ± 0,2 мл, р &л; 0,03)
Два дисперсионного анализа (ANOVA ) показали, что изменение частоты следования импульсов (p ≪ 0,01) и по амплитуде импульсов (р ≪ 0,04), пострадавших объемы освобожденные из желудка в контрольной группе и у диабетических крыс
в обоих контролей и диабетических крыс, объемы из желудка. после того, как электрическое стимулирование, были больше, чем те, без стимуляции (р &ЛТ; 0,05), за исключением того, когда частота импульсов составляла 0,5 Гц (фиг.3, 4). Кроме того, разница между объемами, собранных в нестимулированных крыс и у крыс, перенесших стимуляцию коррелировала с длительностью GS и был больше, после того, как 30, чем через 15 минут GS (р ≪ 0,04) .. Рисунок 3 Объемы опорожнения желудка во время стимуляции у контрольных крыс 15 мин: 15 мин после начала стимуляции желудка 30 мин: 30 мин после начала желудочных Values стимуляции представляют собой среднее ± SEM (*) р ≪ 0,05, (†) р &л; 0,02 против условий базальных без стимуляции (‡) р &л; 0,05: 10 Гц против 1 Гц, 20 Гц против 1 Гц (€) р &л; 0.05: 40 мА против 5 мА Рисунок
4 Объемы опорожнения желудка во время стимуляции желудка у больных диабетом крыс 15 мин: 15 мин после начала стимуляции желудка 30 мин: 30 мин после начала стимуляции желудка Значения представляют собой среднее ± РЭМ тест Вилкоксона: (*) р &л; 0,05, (†) р &л; 0,02 против условий базальных без стимуляции (‡) р &л; 0,05: 10 Гц против 1 Гц /20 Гц против 1 Гц (п) р &ЛТ; 0.03: 10 Гц против 1 Гц (€) р &ЛТ; 0,05: 40 мА против 5 мА
Один дисперсионный анализ (ANOVA) показал, что более крупные объемы были собраны из дуоденостомия, как частота пульса увеличивается (от 1 Гц до 20 Гц), но этот эффект зависел от амплитуд импульсов наблюдается только для амплитуды импульса 5 мА (р &л; 0,01) (рисунок 3). Для 20 мА, объемы, собранные из дуоденостомия в контрольной группе были выше 10 Гц, чем 1 Гц (р &л; 0,05). Для 40 томов мА не отличались с частотой 1 Гц, 10 Гц или 20 Гц (рисунок 4). В течение 5 и 20 мА, объемы были выше у крыс, страдающих диабетом с 10 Гц до 1 Гц (р &ЛТ; 0,03, P ≪ 0,05). (Фигура 4)
как в контрольных и диабетических крыс, увеличение амплитуд импульсов было различные эффекты на опорожнение желудка в зависимости от частоты стимуляции. Один дисперсионный анализ показал, что объемы из желудка увеличивается, когда частота импульсов составляла 1 Гц (р ≪ 0,04 в контрольной группе, р &ЛТ; 0,03 в диабетической группе), а также объемы уменьшается, когда частота импульсов составляла 20 Гц (р ≪ 0,04 в контрольной группе, р &ЛТ; 0,03 в диабетической группе) (рисунки 3, 4). Для 10 Гц, амплитуды импульсов не имели никакого влияния на объемы опустели из желудка.
Когда частота импульсов и амплитуда оценивались одновременно, наиболее эффективные комбинации для повышения опорожнение желудка по сравнению с исходными условиями без стимуляции, были частотой 10 Гц с амплитуде импульса 5 или 20 мА (3 и 4).
Сравнение контрольных и диабетических крыс
влияние GS на опорожнение желудка по сравнению с исходными условиями без стимуляции был более выражен у больных сахарным диабетом, чем у контрольных крыс, потому что освобождающиеся объемы были выше у крыс с диабетом в контрольной группе, в частности, с 10 Гц, со всеми амплитуд импульсов (р &ЛТ; 0,05 - р &ЛТ; 0,01) (рисунок 5). Рисунок 5 Увеличение суммы опустели во время стимуляции желудка по сравнению с базальных условиях без стимуляции в контрольных и диабетических крыс приведены средние значения ± SEM тест По Вилкоксона (*) р &л; 0.05 (†) р &л; 0,01 по сравнению с контроль
Влияние GS на желудочную секрецию
в условиях голодания или после еды, GS не имели никакого влияния на желудочную секрецию кислоты в контроле или диабетических крыс, независимо от частоты импульсов и амплитуды импульсов (рисунок 6). Рисунок 6 Значения Внутрижелудочная рН во время стимуляции желудка (10 Гц, 20 мА) и без желудочных значений стимуляции представляют собой средние значения ± SEM
Обсуждение
GS с короткими ширины импульса и частоты заметно выше, чем спонтанной частоте медленной волны повышенной Опорожнение желудка жидкий питательный раствор в обоих здоровых и диабетических крыс. Модель острого диабета был выбран потому, что недавние наблюдения указывают на то, что гипергликемия вызывает необратимое ухудшение опорожнения желудка [16] из-за bradygastria, или реже, tachygastria или неспецифические dysrythmias [10, 11]. При хроническом диабете, неврологические изменения, включая повреждения межузельным клетки Кахалем также играют определенную роль в патогенезе замедленное опорожнение желудка [17].
Можно выдвинуть гипотезу о том, что больше перстной сточные воды при электрической стимуляции было связано с раздражением секреции желудочной кислоты, а не моторики и что повышенное количество жидкости, собранной через дуоденостомия была лишь отражением повышенной секреции кислоты. Тем не менее, в данном исследовании, мы проверили, что GS не оказывает влияния на секрецию желудочного сока в любом управления или диабетических крыс, во время поста и во время постпрандиальной периода. Несмотря на то,
нескольких предыдущих исследований оценивали влияние GS на двигателе или миоэлектрические структуры желудка нет результаты, показывающие, что эти параметры могут быть изменены путем стимуляции, не имея significante влияния на опорожнение желудка. Таким образом, объективные критерии для оценки влияния GS был объем питательного раствора из желудка и собирали с помощью терминала дуоденостомия, а не манометрических или электромиографических желудка моделей [3, 4, 8]. Этот метод был выбран, чтобы обеспечить более объективное измерение опорожнение желудка по сравнению с предыдущими радиологических исследований [8], а также оценить влияние стимуляции на опорожнение желудка. Дуоденостомия ликвидировали питательного опосредованной небольшой обратной связи кишечника в опорожнение желудка [18, 19]. Даже если дуоденостомия проводили в обоих нестимулированных и стимулированных животных, так что эти две группы можно было бы сравнить Г.С., возможно, имели менее выраженный эффект на опорожнение желудка у животных с интактным двенадцатиперстную кишку. Эти эффекты были получены после того, как одного единственного вида пищи в то время как опорожнение желудка зависит от состава калорийности пищи [20]. Таким образом, наши результаты не могут быть распространены на все виды пищи.
Это исследование подтверждает, что и частота импульсов и амплитуда влияние эффектов стимуляции, но эта частота кажется более важным, чем амплитуда. Действительно, частота стимуляции быстрее, чем 0,5 Гц необходимо изменить опорожнение желудка. Это может объяснить discrepencies между нашего исследования и предыдущих исследований, проведенных у собаки и человека, который использовал более низкие частоты и пришел к выводу, что GS не имел никакого эффекта [3, 5]. Эти предыдущие исследования показали, что стимуляция с частотой, близкой к спонтанному желудочного кардиостимулятора только увеличило частоту медленной волны без какого-либо влияния на желудочную сокращений [3, 5], индекс двигателя [4, 7] или опорожнения [3]. Затем, в контрольной группе, частоты пульса в диапазоне от 1 до 10 Гц увеличили объемы из желудка. Чем больше эффект более высоких частот подтверждает предыдущие выводы, содержащиеся в vagotomized собак [8] и у собак с неоперированных желудках [7]. Это увеличение частоты пульса также наблюдалось у человека [2, 22] наше исследование предполагает, что клинический интерес увеличения частоты выше 10 Гц может быть ограничено, так как более высокие частоты не ускоряют опорожнение желудка, как подтверждено отсутствие существенной разницы в опустошенных объемах от 10 до 20 Гц. В нашем исследовании, 10 Гц, которая, как известно, чтобы стимулировать интрамуральные нервы и иметь эффект двигателя во время стимуляции желудка [15], казалось, лучшим частота.
Приращения амплитуды импульсов увеличена также опорожнение желудка, но эти эффекты приращений амплитуда зависят от частоты импульсов: увеличение амплитуды улучшения опорожнения желудка для частоты ниже 20 Гц в то время как он имел обратный эффект на более высоких частотах. В этом исследовании, в отличие от других [3, 5, 21, 22], мы проверили электрические параметры, которые стимулируют внутренние нервы [2, 15], а не гладкие клетки желудка. Действительно, клеток гладких мышц шагание только было показано, что изменения медленные волновые характеристики без какого-либо влияния на антральных шипы, желудочных сокращений или опорожнения желудка [3, 5, 23]. Таким образом, мы выбрали длительность импульса менее 0,5 мс, так как короткие импульсы преимущественно стимулируют интрамуральные нервов [2]. Из-за короткого ширины импульса, электростимуляция должна была быть выполнена на достаточно высоких частотах, чтобы получить эффект двигателя [8]. Серии импульсов были введены, так как при раздражении частотах, близких к тем, выбранный в данном исследовании, повторяющиеся раздражений обеспечивают больший отклик, чем полученный постепенным увеличением как частоты стимуляции и числа импульсов [15]. Двадцать импульсов на поезд были использованы, так как это было показано, чтобы быть более эффективным на протяжении обоих электрических и механических реакций, чем более короткие поезда импульсов [15]. Таким образом, из-за характеристик электрических параметров в этой работе [2], механизм участвует в ускорении опорожнения желудка, вероятно, внутренняя нейронный механизм в стенке желудка.
Коротких импульсов ширины, используемые в данном исследовании, требуют достаточного амплитуды импульсов, чтобы вызвать эффект двигателя [2]. В наших животных, увеличение амплитуды импульса (40 мА против 5 мА) привело к увеличению объемов опорожняется только при 1 Гц. При более высоких частот импульса, увеличение амплитуд импульсов приводит к уменьшению опорожнения желудка. Это может быть потому, что сочетание высоких параметров стимуляции (амплитуды и частоты) не способны индуцировать транслируемые схваток НФА это не удалось ускорить опорожнение желудка. Предыдущие исследования показали, что, когда частота пульса увеличивается, амплитуды импульсов должна быть уменьшена, чтобы получить эффекты двигателя [8]. Некоторые из наших повышенных амплитуд импульсов может быть произведено пилорического замыкание в некоторых животных, когда были использованы более высокие частоты.
В нашем исследовании влияние ГС на опорожнение желудка по сравнению с базальными условиях без стимуляции была выше у крыс, страдающих диабетом, чем в контрольной группе. Ранее наблюдался лучший эффект для GS в диабетических крыс, чем в интактном желудке, так как частоты от 0,2 до 0,5 Гц увеличилась опорожнение желудка жидкостей и твердых веществ [7, 24-26]. Этот больший эффект у больных сахарным диабетом крыс можно объяснить более медленным опорожнение желудка при базальных условиях без стимуляции по сравнению с контрольной группой, связанная с эффективным желудочной мышечной réponse во время GS
В заключение GS с заметно более высокими частотами импульсов, чем те, которые обычно используются (около спонтанное желудка частота кардиостимулятор) увеличилась опорожнение желудка в контроле и диабетических крыс. Наши результаты показывают, что увеличение частоты пульса является более эффективным, чем увеличение амплитуды импульсов, чтобы получить эффекты двигателя. Безопасность высоких частот при хронической стимуляции у бодрствующих животных теперь должны быть подтверждены, даже если предыдущие исследования использовали 50 Гц без побочных эффектов [27]. Наши результаты свидетельствуют о том, что стимуляция желудка у человека может иметь больший эффект двигателя при более высоких частотах импульсов, чем те, которые ранее использовались [5, 21-23]. Недавнее клиническое исследование с интракорпоральной стимулятора с использованием низкой частоты (0,2 Гц), показали, что тошнота и рвота эпизодов уменьшились у больных сахарным диабетом и идиопатических gastroparetic пациентов [28]. Полезность высоких частот импульсов в человеке, чтобы ускорить опорожнение желудка и функциональное улучшение должны быть уточнены. GS в человеке может быть использован, потому что никакое взаимодействие не было продемонстрировано между желудочной и кардиостимуляторов [29]. Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования, чтобы продемонстрировать механизмы действия этого типа высоких частот GS.
Декларациях
Благодарности
Авторы благодарят профессора Жака Benichou, biostatistician за его ценную помощь в рассмотрении биостатистических результатов и Ричард Медейрус за его советы в редактировании рукописи.
авторов оригинальные файлы, представленные на изображениях
Ниже приведены ссылки на авторов оригинальных представленных файлов для изображений. 'Исходный файл для фигурного 1 12893_2002_9_MOESM2_ESM.xls Авторского 12893_2002_9_MOESM1_ESM.ppt авторов исходного файла для фигурного 2 12893_2002_9_MOESM3_ESM.xls Авторского исходного файла для фигурного 3 12893_2002_9_MOESM4_ESM.xls Авторского исходного файла для исходного файла рисунок 4 12893_2002_9_MOESM5_ESM.xls Авторского на рисунке 5 Исходный файл 12893_2002_9_MOESM6_ESM.xls авторов на рисунке 6