O significado da expressão NTR1 e sua correlação com β-catenina e EGFR em câncer gástrico

O significado da expressão NTR1 e a sua correlação com β-catenina e EGFR em cancro gástrico
Resumo
fundo
Diversos relatórios indicam que o receptor de afinidade elevada de NT (neurotensina), NTR1 (receptor de neurotensina 1), em numerosas funções prejudiciais ligada a progressão neoplásica de vários tipos de cancro. Recentemente, foi também mostrado que o gene alvo é um NTR1 das vias de Wnt oncogénicos /APC relacionadas com a β-catenina /Tcf transcricional complexo e NT pode estimular a proliferação de cancro num mecanismo dependente de EGFR. Neste estudo, exploramos NTR1, β-catenina e a expressão de EGFR no cancro gástrico. Foram analisadas as possíveis associações de expressão NTR1 com fatores clínico-patológicos, prognóstico, β-catenina e EGFR.
Métodos
NTR1, β-catenina e expressão EGFR em tecidos com câncer gástrico e os tecidos normais adjacentes de 210 casos foi detectada pela imuno-histoquímica. . Foram analisadas as possíveis associações de expressão NTR1 com dados clinicopatológicas, prognóstico, β-catenina e EGFR

Resultados 1. NTR1 expressão em tecidos de tumor foi significativamente mais elevada do que nos tecidos normais adjacentes (P
< 0, 01). 2. Sua expressão foi positivamente correlacionada com o grau patológico, estádio, estádio N e estádio TNM e não foi correlacionada com o sexo, idade, tamanho do tumor e a classificação de Lauren. 3. A co-expressão de NTR1 e β-catenina nuclear foi em 53 (25,2%) de casos e expressão NTR1 foi positivamente correlacionada com a translocação nuclear β-catenina. expressão NTR1 não estava correlacionada com a expressão de EGFR, mas a um valor crítico (P
= 0,05). 4. Por teste de log-rank, maior expressão de NTR1, maior grau patológico, classificação difusão de Lauren e avançado estágio TNM mostrou pior prognóstico (P Art < 0, 05). Idade, sexo, tamanho do tumor, β-catenina e EGFR não tinha significado prognóstico. A análise multivariada de Cox mostrou que a expressão NTR1 e estadiamento clínico TNM (P Art < 0, 05). foram os fatores prognósticos independentes para pacientes com GC
Conclusão
por imuno-histoquímica, descobrimos que a alta expressão de NTR1 em amostras de GC, que mostraram um mau prognóstico, além de, expressão NTR1 foi relacionada com a invasão e migração de GC. Estes resultados fornecem novas e importantes informações sobre a progressão da GC. Este estudo indicou que NTR1 pode desempenhar um papel importante na progressão do tumor da GC e tem o seu potencial para ser um biomarcador preditivo ou um alvo molecular terapêutico em GC. A interacção entre NTR1 e β-catenina pode participar no desenvolvimento de GC. No entanto, a relação entre NTR1 e EGFR precisa ser mais investigada.
Palavras-chave
O câncer gástrico, NTR1 β-catenina, EGFR, patologia clínica, prognóstico fundo
O câncer gástrico é uma causa frequente de morte relacionada ao câncer no mundo [1]. Na China, câncer gástrico ocupa o terceiro câncer mais comum [2]. Embora o estabelecimento de rastreio, diagnóstico precoce e operação curativa tem aumentado significativamente sobrevivências, a recorrência e metástase continua sendo um grande desafio para os pacientes com câncer gástrico. o desenvolvimento do cancro gástrico é muitas vezes associada com um número de anormalidades moleculares, incluindo a inactivação dos vários genes supressores de tumores e /ou activação de vários oncogenes [3, 4], mas o mecanismo do desenvolvimento, invasão e metástase do cancro gástrico ainda não está Claro. As investigações sobre as alterações moleculares no câncer gástrico pode fornecer novos insights sobre os mecanismos responsáveis ​​pela carcinogênese estômago e levar ao desenvolvimento de biomarcadores para a detecção precoce do câncer gástrico e a previsão de seu prognóstico.
Neurotensina (NT) e seu cognato receptor (receptor neurotensina 1, NTR1) são complexos de receptores de neuropeptídeo frequentemente desregulados durante o processo neoplásico. NT é um péptido de 13-amino-ácido anteriormente reconhecido pela sua distribuição ao longo do tracto gastrointestinal [5]. Os efeitos da NT são mediados pela ligação de três receptores de neurotensina NTR-1, -2, e -3. O NTR1 e NTR2 são receptores acoplados à proteína G, enquanto que o pertence NTR3 na superfamília do receptor sortilina. As funções periféricas do NT são mediados principalmente através da sua interacção com NTR1, um receptor de afinidade elevada acoplado a uma proteína Gq /G11 [6]. Vários relatórios implicam NTR1 em numerosas funções prejudiciais associados à progressão neoplásica de vários tipos de cancro, incluindo pâncreas, da próstata, do cólon, do pulmão e cancro da cabeça e pescoço [7, 8]. In vivo e in vitro efeitos NT são abolidos pelo antagonista específico de NTR1, SR48692, o que implica que NTR1 é um mediador importante destas acções transformando [9].
NTR1 activação conduz à proliferação celular, sobrevivência, mobilidade, capacidade de invasão e em tipos específicos de células de cancro por meio de transdução de sinal através da PKC, regulada por sinal extracelular cinase 1 e 2, RhoGTPases, NF-kB, ou a activação da cinase de adesão focal [10-12]. Alguns estudos sugerem que a NT pode estimular a proliferação de muitos cancro num mecanismo dependente de EGFR, incluindo tumor neuroendócrino intestino anterior, da próstata, do cólon e os cancros do pulmão de células não pequenas [13]. Recentemente, tem sido mostrado que o gene alvo é um NTR1 das vias de Wnt oncogénicos /APC relacionadas com a β-catenina /Tcf complexo transcricional, que se sabe activar os genes envolvidos na proliferação e transformação [14] célula. A expressão de
NTR1 e a sua relação com o EGFR e β-catenina no cancro gástrico não foram relatados. Neste estudo, exploramos NTR1, β-catenina e a expressão de EGFR no cancro gástrico. Foram analisadas as possíveis associações de expressão NTR1 com fatores clínico-patológicos, prognóstico, β-catenina e EGFR.
Métodos
Pacientes
Um total de 210 pacientes com diagnóstico histológico de adenocarcinoma gástrico invadir a camada submucosa ou mais profundo foram retrospectivamente incluído neste estudo. Todos os pacientes receberam a gastrectomia curativa com dissecção de linfonodos em nosso departamento de Wuxi Hospital Filiado Popular para Nanjing University Medical (Wuxi, China) entre janeiro de 2011 e dezembro de 2011. Nenhum paciente foi submetido à quimioterapia ou radioterapia antes da cirurgia. Uma amostra não-canceroso distante combinados (5 cm de distância da lesão) foi também obtido a partir de cada doente e utilizado como um controlo. As características clinicopatológicas dos pacientes incluíram idade, sexo, tamanho do tumor, grau patológico, a classificação de Lauren, estágio TNM e estado dos linfonodos metástases.
A idade média dos pacientes era de 64 anos, variando de 34 a 90 anos. Havia 160 machos e 50 fêmeas (3,2: 1). De acordo com a diferenciação de tumor, havia 93 (44,3%) e moderada tumores bem diferenciados e 117 (55,7%) tumores indiferenciados e pobres. De acordo com o estágio de TNM, 51 (24,3%) pacientes estavam em T1-2 palco, enquanto os 159 (75,7%) pacientes esquerdos estavam em T3-4 palco. 157 (74,8%) pacientes foram positivas e 53 (25,2%) foram negativos para metástases linfonodais. Houve 63 (30,0%) a fase I-II e 147 (70,0%) pacientes fase III-IV. Follow-up de informação, incluindo a evolução dos pacientes e o intervalo de tempo entre a data da ressecção cirúrgica e a data da morte relacionada ao câncer, foi coletado. Nesses casos perdidos para follow-up e morreu de outros que não o câncer gástrico causas foram consideradas como dados censurados para a análise de sobrevivência. O estudo foi aprovado pelos nossos comités de ética locais. As amostras foram obtidas com consentimento informado, em conformidade com o padrão ético da Declaração de Helsinki de 1975, revisada em 2000.
Imuno-histoquímica
fatias de parafina foram tratados de acordo com o kit imuno-histoquímica EnVision, e os resultados foram analisados ​​usando um duplo método cego. Dois patologistas avaliaram independentemente pontuações. PBS, em vez do anticorpo primário, foi utilizado como controlo negativo. Para NTR1 (anticorpo policlonal, Abcam, utilizando uma concentração de /ml 5 ug) de coloração, o grau de expressão foi classificado como negativo (coloração positiva de < 10% das células tumorais), positiva (coloração positiva de ≥10% e < 50% das células tumorais), ou fortemente positiva (coloração positiva envolvendo ≥50% das células tumorais) [15] de acordo com
Aust et al.,. [16], uma avaliação semi-quantitativa da β-catenina (. Anticorpo monoclonal, o MAB-259, Fuzhou Maixin Biotech Co., Ltd, pré-diluída) translocação nuclear foi realizada calculando a percentagem de núcleos positivos como se segue: 0; 1: 0 a 5%; 2: 5 a 25%; 3: até 25%, e um cut-off de > 5% de núcleos β-catenina positivo (pontuação de 2 ou mais) foi considerada significativa para a translocação nuclear da proteína
EGFR (anticorpo monoclonal, RMA-0554. , Fuzhou Maixin Biotech. Co., Ltd., a reactividade de pré-diluída) foi pontuada como 0 se não havia reactividade membranoso dentro do tumor, ou como 1+, 2+, 3+ ou dependendo da intensidade acima do nível de fundo [17 ]. A pontuação de 1+ a 3+ foi definido como positivo e o placar de 0 foi definido como negativo [18].
Análise estatística
Todos os dados foram analisados ​​usando SPSS 18.0. x 2 testes (ou teste exato de Fisher) foram usados ​​para amostras classificadas como percentagens; A análise de Spearman foi utilizado para determinar a correlação entre duas variáveis. Tanto o método de Kaplan-Meier eo teste de log-rank foram utilizados para análise variante única, e um modelo de Cox foi utilizado para analisar as relações entre as taxas de sobrevivência e múltiplas variáveis. P Art < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.
Resultados
expressão NTR1 em tecidos tumorais foi significativamente maior do que em tecidos normais adjacentes e foi positivamente correlacionada com o grau patológico, estádio, estádio N e estádio TNM
De acordo com os critérios estabelecido para a imunocoloração, 71,0% (149/210) dos tumores foram positivas para a coloração NTR1. Apenas 28 (13,3%) casos foram positivos na mucosa gástrica normal adjacente. A título de o x 2-teste, expressão NTR1 de tecidos de tumor foi significativamente maior (P
< 0,01) (Fig. 1). FIG. 1 Expressão de NTR1 em tecidos de cancro gástrico (200 ×). expressão NTR1 fortemente positiva em (a) e do tipo difuso intestinal- (b) de tecidos de câncer gástrico; expressão NTR1 negativo na mucosa gástrica (c)
normal adjacente por meio de análise de Spearman, expressão NTR1 foi positivamente correlacionada com o grau patológico (Fig. 2), estágio T, fase N e estádio TNM e não se correlacionou com o sexo, idade, tamanho do tumor e a classificação de Laurén (Tabela 1). FIG. 2 Expressão de NTR1 no tipo intestinal de tecidos de câncer gástrico (200 ×). NTR1 expressão positiva no bem diferenciada do tipo intestinal de tecidos de cancro gástrico (a); expressão fortemente positiva NTR1 em mau diferenciada intestinal-tipo de tecidos de câncer gástrico (b)
Tabela 1 características clínico-patológicas e da expressão de NTR1 em 210 pacientes com câncer gástrico
item
NTR1 intensidade Expressão

p
-valor *
negativo
positiva
fortemente positiva
Idade
0,302 Art < 60
15
27
23
≥60
46
53
46 Sexo seguro
0,315
Masculino
44
61
55
Feminino
17
19
14
tamanho do tumor (cm)
0,291 Art < 5
34
21
31
≥5
27
59
38
grau patológico
0,027
Bem e moderada
34
34
25
Pobres e indiferenciada
27
46
44
classificação de Lauren
0,125
intestinal
32
39
27
Difusão
18
20
24
Mixed
11
21
18
T estágio
0,001
T1-2
26
14
11
T3-4
35
66
58
N estágio
0.000
positiva
33
66
58
negativo
28
14
11
estágio TNM
0,011
I- II
28
18
17
III-IV
33
62
52
* análise de Spearman
expressão NTR1 foi positivamente correlacionada com a translocação nuclear β-catenina e não foi correlacionada com a expressão de EGFR
Usando análise imuno-histoquímica, observou-se uma co-expressão de NTS1 e β-catenina nuclear em 25,2% (53 ) de casos e expressão NTR1 foi positivamente correlacionada com β-catenina translocação nuclear (P
< 0,05) (fig. 3, 4 e 5) e não foi correlacionada com a expressão de EGFR (Fig. 6), no entanto a um valor crítico (P
= 0,05) (Tabela 2). FIG. expressão 3 β-catenina em câncer gástrico e mucosa gástrica normal adjacente (200 ×). expressão ß-catenina nuclear no câncer gástrico (a) e coloração da membrana ß-catenina nomal na mucosa gástrica normal adjacente (b)
Fig. 4 Expressão de NTR1 e β-catenina in-tipo intestinal de tecidos de câncer gástrico (200 ×). Coloração HE imagem (a), a coloração IHC de NTR1 (b), e expressão nuclear SS-catenina (c) na mesma região dos mesmos casos do tipo intestinal. × 200
Fig. 5 Expressão de NTR1 e β-catenina em difuso tipo de tecidos de câncer gástrico (200 ×). coloração IHC de NTR1 e β-catenina no mesmo caso dos casos do tipo difuso. × 200
Fig. expressão 6 EGFR em câncer gástrico e mucosa gástrica normal adjacente. expressão de EGFR positivo (escore 3+) em câncer gástrico (a) e expressão EGFR negativo na mucosa gástrica normal adjacente (b)
Tabela 2 Correlação entre NTR1 e translocação e EGFR expressão nuclear β-catenina em câncer gástrico
item
NTR1 intensidade Expressão
p
-valor *
negativo
positiva
fortemente positiva

expressão ß-catenina Nuclear
0,034
negativo
42
60
36
positiva
19
20
33
EGFR expressão
0,050
negativo (escore 0)
29
24
21
positiva (pontuação 1-3 +)
32
56
48
* análise de Spearman expressão
superior de NTR1, maior grau patológico, classificação e TNM fase de difusão de Lauren mostrou pior prognóstico e alta expressão NTR1 e TNM estágio clínico foram os fatores prognósticos independentes para pacientes com GC
Nós realizadas análise de sobrevivência NTR1 em 210 casos de câncer gástrico com os dados de acompanhamento. Os 1 ano e 3 anos as taxas de sobrevivência de 210 casos foram 78,9% e 68,0%. Os pacientes com maior expressão NTR1 mostraram um prognóstico mais desfavorável do que aqueles sem expressão (P Art < 0, 01) (Fig. 7). Pelo teste de log-rank, maior expressão de NTR1 (P
= 0,000), maior grau patológico (P
= 0,014), difusão de Lauren classificação (P
= 0,004), avançado estágio T (P
= 0,026), estadiamento TNM (P
= 0,000), e estágio N (P
= 0,000) mostraram pior prognóstico e idade, sexo e tamanho do tumor não tinha significado prognóstico. A análise multivariada de Cox mostrou que os seguintes fatores foram os fatores prognósticos independentes para pacientes com GC: expressão NTR1 e estadiamento clínico TNM (P Art < 0, 05) (Tabela 3). FIG. 7 curvas de sobrevida global dos pacientes com câncer gástrico, de acordo com os resultados imunocoramento NTR1. maior expressão de NTR1 (P
= 0,000) apresentaram pior prognóstico
Tabela forma variável 3 fator de múltipla Cox modelo de regressão de câncer gástrico
item
B
SE

Wald
df
Sig.a
Exp (B)
95,0% CI para Exp (B)

Baixa
superior
NTR1 Expressin Intensidade
0,444
0,186
5.686
1

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