O potencial terapêutico da PRL-3 segmentação e relevância clínica da PRL-3
amplificação genómica no câncer gástrico da arte abstracta
Fundo
fosfatase de regenerar o fígado-3 (PRL-3) tem merecido atenção como um importante molécula em múltiplos passos de metástase. No presente estudo, foram examinados os mecanismos que regulam a expressão de PRL-3, e avaliou o potencial clínico da terapia PRL-3-alvo no cancro gástrico.
Métodos
PRL-3 amplificação genómica foi analisada utilizando cadeia quantitativa da polimerase de reacção e /ou hibridação in situ fluorescente em 77 tumores gástricos primários. A actividade anti-cancro da PRL-3 inibidor (1-4-bromo-2-benzilideno rodanina) tratamento foi avaliado contra as células cancerosas com diferente estado genética e expressão.
Resultados da PRL-3 amplificação genómica foi intimamente concordante com alta nível da sua expressão da proteína em linhas celulares, e foi encontrado em 20% (8/40) entre os tumores primários humanos com a sua expressão, que foram todos fase III /IV doença (40%, 8/20), mas em nenhum (0 /37) entre aqueles sem expressão. Além disso, PRL-3 amplificação genómica foi associado com o estado do linfonodo metastático, levando ao estágio avançado e os resultados assim, pobres em pacientes com metástase ganglionar (P
= 0,021). PRL-3 pequeno ARN interferente robustamente reprimido propriedades metastáticas, incluindo a proliferação celular, invasão e a formação de colónias independentes de ancoragem. Embora nem o nível de expressão genómica de amplificação nem PRL-3 foi responsável pela sensibilidade a PRL-3 tratamento com inibidor, o inibidor mostrou eficácia anticancerígena dependente da dose, e a apoptose induzida notavelmente em todas as linhas celulares testadas com expressão de PRL-3.
conclusões
temos pela primeira vez, demonstrado que a PRL-3 amplificação genómica é um dos mecanismos predominantes induzindo a sua expressão, especialmente no estágio mais avançado, e que a terapia alvo PRL-3, podem ter um grande potencial contra o cancro gástrico com a sua expressão.
Palavras-chave
PRL-3 câncer de amplificação genómica gástrica terapia direcionada linfonodo fundo
câncer gástrico (CG) é o quarto câncer mais comum ea segunda principal causa de morte relacionada ao câncer em todo o mundo [1 ]. As recentes melhorias em ferramentas de diagnóstico e métodos têm facilitado a detecção de GC cedo e, assim, excelente sobrevivência a longo prazo. No entanto, pacientes com doença avançada no momento do diagnóstico permanecem pobres resultados. A metástase é um processo de várias etapas, envolvendo a invasão local, difusão e re-estabelecimento para órgãos distantes, e é o principal determinante da mortalidade [2]. Assim, uma melhor compreensão da metástase pode abrir caminho a uma série de estratégias terapêuticas inovadoras em GC.
As proteína tirosina fosfatases (PTPs) formar uma grande família de enzimas que servem como componentes reguladores-chave nas vias de transdução de sinal [3] . As fosfatases de regeneração do fígado (PRL-1, -2, e -3), pertencentes a uma pequena classe de PTP superfamília, tem um motivo prenilação COOH-terminal única, que afecta criticamente a sua localização e função celulares [4]. PRL-3 foi primeiramente identificada como sendo especificamente sobre-expressos em metástases hepáticas derivadas de cancro colo-rectal [5], e, subsequentemente, a sua sobre-expressão foi documentada em diversos tipos de tumores, incluindo GC [6]. PRL-3 pode promover a invasão do cancro, migração, crescimento, e a angiogénese, quer através de desfosforilação que é catalisada pelo domínio catalítico ou para a localização da membrana de plasma dirigido por motivo prenilação do terminal COOH [7-9]. Deste modo, a PRL-3 tem merecido atenção como uma molécula crucial nas várias etapas de metástases e, por conseguinte, como um novo alvo terapêutico. Por outro lado, os mecanismos de indução da expressão de PRL-3 não está totalmente esclarecido. A amplificação de regiões genómicas contendo os oncogenes é o principal mecanismo de sobre-expressão e a sua consequente o desenvolvimento de cancro, e, portanto, tem importância para terapias específicas [10]. PRL-3
gene amplificação explica parcialmente a sobre-expressão no câncer colorretal e câncer de esôfago [5, 11]. No entanto, a relação entre a amplificação genómica e GC permanece indefinida nos pontos tanto mecânica e de vista terapêutico. No presente estudo, nós examinamos as características de 3 PRL-
amplificação genómica em GC, e avaliou ainda mais o potencial clínico de terapia PRL-3-alvo.
Métodos
celular linhas e amostras de tecidos
a linha de células GC MKN7 foi gentilmente fornecido a partir do celular Resource Center for Biomedical Research Institute do Desenvolvimento, Envelhecimento e Câncer, Universidade de Tohoku (Sendai, Japão). Sete outras linhas de células de GC (GCIY, AZ521, KatoIII, SH10, H111, MKN74, e NUGC4) foram adquiridos a partir de RIKEN Bioresource Center (Ibaraki, Japão). Estas linhas celulares cobrir os dois principais tipos de GC [12], tipo intestinal (MKN7, MKN74, AZ521, e as células H111) e tipo difuso (GCIY, KatoIII, SH10, e células NUGC) [13-15]. MKN7, NUGC4 e AZ521 células foram estabelecidas a partir de metástase ganglionar (LNM), e as células MKN74 eram de metástase hepática. células KATOIII e GCIY foram estabelecidas a partir de efusão pleural metastática e ascite, respectivamente. células H111 e SH10 foram estabelecidos a partir do xenotransplante. As células C2C12 de músculo esquelético normal foram adquiridos a partir do DS Pharma Biomedical Co., Ltd. (Osaka, Japão). AZ521 células C2C12 e foram cultivadas em meio DMEM (GIBCO, Carlsbad, CA) suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS). As outras células foram cultivadas em meio RPMI1640 (Gibco) suplementado com FBS a 10%. 1-4-bromo-2-benzilideno rodanina foi comprado a Calbiochem Corp. (San Diego, CA), que foi identificado como um inibidor da 3-PRL através de alto rendimento utilizando rastreio de biblioteca química da Coreia Chemical Bank, e inibiu-3 PRL actividade de fosfatase [16]. Com efeito, a fosforilação de KRT8, PRL-3-interagindo proteína, induzida por mutante cataliticamente inactivo da PRL-3, mas não pelo do tipo selvagem, foi confirmada por PRL-3 tratamento com inibidor de uma forma dependente da dose [17]. Além disso, a eficácia anticancerígena de PRL-3 tratamento inibidor também demonstrou ser semelhante ao tratamento de siARN em cancro do esófago ou do cancro colo-rectal [11, 17].
De 173, série de amostras de tecido embebidas em parafina e fixado em formalina, onde que previamente avaliadas status de expressão PRL-3, utilizando coloração imuno-histoquímica (IHQ) em GC [6], 77 pares combinados de tecidos tumorais primárias e os correspondentes tecidos de mucosa normais foram selecionados aleatoriamente de pacientes com estágios diferenciados de acordo com o 13
ª edição da Classificação japonesa de carcinoma gástrico (JCGC) [18]; 40 pares com positiva expressão PRL-3 (10 pacientes em estágio I, 10 na segunda, 10 na III, e 10 na IV) e 37 pares com expressão negativa (10 pacientes em estágio I, 10 na segunda, 9 no III, e 8 em IV). Todos os pacientes foram submetidos a gastrectomia acordo com as diretrizes de tratamento de câncer gástrico no Japão [19], e os exames histopatológicos foram realizados de acordo com o JCGC. A 6 th edição da União Internacional Contra o Câncer (UICC) /classificação TNM também foi utilizado [20]. A Tabela 1 apresenta as informações detalhadas em 77 pacientes. Todas as amostras de tecido foram coletadas no Hospital Universitário de Kitasato, e o consentimento informado foi obtido de todos os pacientes. O presente estudo foi aprovado pelo Comitê de Kitasato University.Table 1 Correlação entre a amplificação do gene PRL-3 e variáveis clínico-patológicas em 77 pacientes com câncer gástrico
Ética
|
amplificação do gene PRL-3
|
Variáveis
número total
negatividade
positividade
p
valor
|
|
Número
(%)
Número
(%)
|
PRL-3 expressão
0,006
negatividade
37
37
(100 )
0 (0)
positividade
40
32
(80)
8
(20)
Idade (anos)
0,726 Art < 60
34
30
(88) 4
(12)
≥60
43
39
(91)
4
(9)
Sexo
0,710
Masculino
51
45
(88)
6
(12)
Feminino
26
24
(92) Página 2
(8)
linfática permeação
0,343
Ausência
15
15
(100)
0
(0)
Presença
62
54
(87)
8
(13)
Vascular permeação
0,263
ausência
25
24
(96)
1
| 
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