Potencial terapéutico de la PRL-3 focalización y la importancia clínica de PRL-3 amplificación genómica en el cáncer gástrico

Potencial terapéutico de la PRL-3 focalización y la importancia clínica de PRL-3
amplificación genómica en el cáncer gástrico
Resumen Antecedentes

fosfatasa de regenerar el hígado-3 (PRL-3), ha merecido la atención como un importante de la molécula en las múltiples etapas de la metástasis. En el presente estudio, se examinaron los mecanismos que regulan la expresión de PRL-3, y se evaluó el potencial clínico de terapia dirigida-PRL-3 en el cáncer gástrico.
Métodos
-3 PRL amplificación genómica se analizó mediante la cadena de la polimerasa cuantitativa reacción y /o de fluorescencia de hibridación in situ en 77 tumores gástricos primarios. La actividad contra el cáncer de PRL-3 inhibidor (1-4-bromo-2-bencilideno rodamina) de tratamiento se evaluó frente a las células cancerosas con diferente estado genético y expresión.
Resultados
PRL-3 amplificación genómica está estrechamente concordantes con alta nivel de su expresión de la proteína en las líneas celulares, y se encontró en 20% (8/40) de los tumores primarios humanos con su expresión, que eran todos fase III /IV de la enfermedad (40%, 8/20), pero en ninguno (0 /37), entre los que no tienen expresión. Además, PRL-3 amplificación genómica se asoció con el estado de los ganglios linfáticos metastásicos, lo que lleva a la etapa avanzada y por lo tanto los resultados pobres en pacientes con metástasis en los ganglios linfáticos (P = 0,021)
. PRL-3 pequeños ARN de interferencia fuertemente reprimida propiedades metastásicas, incluyendo la proliferación celular, la invasión y la formación de colonias independiente del anclaje. Aunque ni la amplificación ni expresión genómica nivel PRL-3 era responsable de la sensibilidad al tratamiento inhibidor de la PRL-3, el inhibidor mostró una eficacia contra el cáncer dependiente de la dosis, y la apoptosis inducida notablemente en todas las líneas celulares ensayadas con PRL-3 expresión.
Conclusiones
que tenemos para la primera vez, demostraron que PRL-3 amplificación genómica es uno de los mecanismos predominantes inducir su expresión, especialmente en la etapa más avanzada, y que la terapia PRL-3-dirigida puede tener un gran potencial contra el cáncer gástrico con su expresión.
Palabras clave
PRL-3 del cáncer gástrico amplificación genómica terapia dirigida ganglio linfático Antecedentes
cáncer gástrico (CG) es el cuarto cáncer más común y la segunda causa principal de muerte relacionada con el cáncer en todo el mundo [1 ]. Las recientes mejoras en las herramientas y los métodos de diagnóstico han facilitado la detección de GC temprano y por lo tanto una excelente supervivencia a largo plazo. Sin embargo, los pacientes con enfermedad avanzada en el momento del diagnóstico siguen siendo pobres resultados. La metástasis es un proceso de varias etapas, que implica la invasión local, la difusión, y el restablecimiento en órganos distantes, y es el principal determinante de la mortalidad [2]. Por lo tanto, una mejor comprensión de la metástasis puede abrir el camino a una serie de estrategias terapéuticas innovadoras en GC. Empresas El proteína tirosina fosfatasas (PTP) forman una gran familia de enzimas que sirven como componentes reguladores clave en las vías de transducción de señales [3] . Las fosfatasas de la regeneración del hígado (PRL-1, -2, y -3), que pertenecen a una pequeña clase de PTP superfamilia, tienen un motivo prenilación COOH-terminal único, que afecta críticamente su localización y función celular [4]. PRL-3 se identificó en primer lugar para ser específicamente sobre-expresado en metástasis hepáticas derivadas de cáncer colorrectal [5], y, posteriormente, su sobreexpresión fue documentada en diversos tipos de tumores, incluyendo GC [6]. PRL-3 puede promover la invasión del cáncer, la migración, el crecimiento y la angiogénesis, ya sea a través de la desfosforilación que es catalizada por el dominio catalítico o de localización a la membrana de plasma dirigida por COOH-terminal motivo prenilación [7-9]. Por lo tanto, PRL-3 ha merecido la atención como una molécula crucial en las múltiples etapas de la metástasis y, por tanto, como una nueva diana terapéutica. Por otro lado, los mecanismos que inducen PRL-3 de expresión no están totalmente aclarados. La amplificación de regiones genómicas que contienen oncogenes es el principal mecanismo de su consiguiente sobreexpresión y el desarrollo del cáncer, y por lo tanto tiene importancia para terapias dirigidas [10]. PRL-3
amplificación del gen explica en parte la sobre-expresión en el cáncer colorrectal y cáncer de esófago [5, 11]. Sin embargo, la relación entre la amplificación genómica y GC sigue siendo difícil de alcanzar en los puntos tanto mecanicistas y de vista terapéutico. En el presente estudio se analizaron las características de PRL-3
amplificación genómica en GC, y se evaluó el potencial clínico de terapia dirigida-PRL-3.
Métodos
líneas celulares o muestras de tejido
la línea celular MKN7 GC fue proporcionado amablemente desde el teléfono del Centro de recursos para el Instituto de Investigación Biomédica de Desarrollo, Envejecimiento y cáncer de la Universidad de Tohoku (Sendai, Japón). Otros siete líneas de células GC (GCIY, AZ521, KATOIII, SH10, H111, MKN74, y NUGC4) fueron adquiridos de RIKEN de bio Center (Ibaraki, Japón). Estas líneas celulares cubren los dos tipos principales de GC [12], tipo intestinal (MKN7, MKN74, AZ521, y las células H111) y (GCIY, KATOIII, SH10, y células NUGC) de tipo difuso [13-15]. Se establecieron MKN7, NUGC4, y AZ521 células de los ganglios linfáticos metástasis (MNV), y las células MKN74 eran de metástasis hepática. Se establecieron células KATOIII y GCIY de derrame pleural metastásico y ascitis, respectivamente. Se establecieron células H111 y SH10 del xenotrasplante. células C2C12 del músculo esquelético normal se compraron de DS Pharma Biomedical Co., Ltd (Osaka, Japón). células AZ521 y C2C12 fueron cultivadas en medio DMEM (Gibco, Carlsbad, CA) suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS). Las otras células se cultivaron en medio RPMI1640 (GIBCO) suplementado con 10% FBS. 1-4-bromo-2-bencilideno rodanina se adquirió de Calbiochem Corp (San Diego, CA), que se identificó como un inhibidor de la PRL-3 a través de selección de alto rendimiento usando la biblioteca química de Corea química Bank, y se inhibe la actividad de fosfatasa PRL-3 [dieciséis]. De hecho, la fosforilación de KRT8, proteína, inducida por mutante catalíticamente inactiva de PRL-3 PRL-3-que interactúan, pero no por el tipo salvaje, se confirmó mediante un tratamiento inhibidor de PRL-3 de una manera dependiente de la dosis [17]. Por otra parte, la eficacia contra el cáncer de tratamiento inhibidor de PRL-3 también mostró ser similar a la de ARNsi tratamiento en el cáncer de esófago o cáncer colorrectal [11, 17].
Fuera de 173 fijado con formalina, embebido en parafina, la serie de muestras de tejido donde hemos evaluado previamente estado de expresión de PRL-3 utilizando tinción inmunohistoquímica (IHC) en GC [6], 77 emparejados pares de tejidos tumorales primarios y los correspondientes tejidos de mucosa normal fueron seleccionados al azar de los pacientes con etapas diferenciales de acuerdo con la 13 ª edición de la Clasificación japonesa de carcinoma gástrico (JCGC) [18]; 40 pares con positiva expresión de PRL-3 (10 pacientes en estadio I, 10 en II, 10 en III, y 10 en la zona IV) y 37 pares con expresión negativa (10 pacientes en estadio I, 10 en la Segunda, 9 en III, y 8 en IV). Todos los pacientes fueron sometidos a una gastrectomía de acuerdo con las directrices de tratamiento del cáncer gástrico en Japón [19], y los exámenes histopatológicos se realizaron de acuerdo con el JCGC. El 6 ª edición de la Unión Internacional Contra el Cáncer (UICC) /También se utilizó la clasificación TNM [20]. La Tabla 1 muestra la información detallada sobre 77 pacientes. Todas las muestras de tejido fueron recogidos en el Hospital de la Universidad de Kitasato, y el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes. El presente estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la correlación de Kitasato University.Table 1 entre la amplificación del gen PRL-3 y variables clínico en 77 pacientes con cáncer gástrico


PRL-3 amplificación del gen

variables
número total
negatividad
positividad
p
valor


número gratis (%)

número gratis (%) guía empresas
PRL-3 de expresión
0,006
negatividad
37
37 gratis (100 ): perfil 0
(0)
positividad
40
32 gratis (80) página 8 gratis (20): perfil Edad (años) 0,726
Hotel < 60
34
30 gratis (88)
4 de (12)
≥60
43
39 gratis (91)
4 gratis (9)
Sexo Masculino
0.710

51
45 gratis (88) página 6 gratis (12)
Mujer
26
24 gratis (92)
2 (8)
linfático permeación
0.343
Ausencia
15
15 gratis (100)
0
(0)
Presencia
62
54 gratis (87) página 8 gratis (13)
vascular permeación
0,263
ausencia
25
24 gratis (96)
1 gratis (4) Presencia

52
45 gratis (87) página 7
(13) La diferenciación

0,134
Bueno y moderada
31
30 gratis (97)
1 gratis (3)
Pobre
46
39 gratis (85) página 7 gratis (15)
profundidad de la invasión
0,006 *
T1 (m sm)
15
15
(100)
0
(0)
T2 (mp y ss): perfil 35
33 gratis (94)
2 (6)
T3 (SE): perfil 19
16 gratis (84) página 3 gratis (16)
T4 (SI) página 8 página 5 gratis (63)
3 gratis (38)
metástasis de ganglios linfáticos
0,022
Ausencia
29
29 gratis (100)
0
(0)
Presencia
48
40 gratis (83) página 8 gratis (17)
JCGC estado de los ganglios linfáticos †
0,004 *
N0
29
29
(100)
0
(0)
N1
21
20 gratis (95)
1 gratis (5)
N2
20 página 14 gratis (70) página 6 gratis (30)
ganglios linfáticos distantes N3 y página 7 página 6 gratis (86)
1

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