Timidina fosforilase /β-tubulina expressões III prever a resposta em pacientes gástrico avançado chineses câncer que recebem de primeira linha capecitabina mais paclitaxel

Timidina fosforilase /β-tubulina expressões III prever a resposta em pacientes com câncer gástrico avançado chineses receber de primeira linha capecitabina mais paclitaxel
Abstract
Para avaliar o papel da timidina fosforilase e β-tubulina III no resultado clínico dos pacientes gástrico avançado chineses câncer que recebem de primeira linha capecitabina mais paclitaxel.
Métodos
Os dados clínicos e biópsias de tumores de tratamento antes de 33 pacientes com câncer gástrico avançado que receberam capecitabina mais paclitaxel (coorte 1, grupo experimental) e 18 pacientes que receberam capecitabina e cisplatina (coorte 2, grupo controle) no Hospital do Câncer Pequim de julho de 2003 a dezembro de 2008 foram retrospectivamente coletados e analisados ​​para a timidina fosforilase e β-tubulina III expressões por imuno-histoquímica. As relações entre expressões de biomarcadores e de resposta ou de sobrevivência foram determinadas pela análise estatística.

Resultados A idade média dos 51 pacientes foi de 57 anos (variação, 27-75) com macho 34 e fêmea 17, ea taxa de resposta , sobrevida livre de progressão mediana e sobrevivência global foi de 43,1%, 120d e 265d. Entre coorte 1, a taxa de resposta, sobrevida livre de progressão mediana e sobrevida global de β-tubulina III positivo (n = 22) e pacientes negativos (n = 11) foram 36,4% /72,7% (positivo vs negativo, P
= 0,049), 86d /237d (P
= 0,046) e 201d /388d (P
= 0,029), respectivamente; a taxa de resposta (87,5% vs 14,3%, P
= 0,01) e sobrevida livre de progressão mediana (251ºD vs 84d, P
= 0,003) em timidina fosforilase positiva & β-tubulina III pacientes negativos (n = 8) também foram significativamente maiores do que aqueles em timidina fosforilase negativo & p-tubulina III pacientes positivos (n = 7). Não houve correlação entre a β-tubulina expressão III e da resposta ou sobrevivência entre coorte 2 (n = 18)
Conclusões Online em câncer gástrico avançado chinês, timidina fosforilase positiva &.; β-tubulina III negativo pode prever a resposta e prognóstico para a capecitabina mais paclitaxel quimioterapia. Além disso avaliação prospectiva em grandes amostras devem ser realizados para confirmar estes resultados preliminares.
Fundo
O câncer gástrico continua sendo uma das causas mais comuns de morte por câncer em todo o mundo [1], especialmente na China [2]. Embora a melhoria dos métodos de diagnóstico permite que alguns pacientes para receber cura radical no início da doença, cerca de 40% dos pacientes ainda perca a oportunidade de cura radical no momento do diagnóstico, além disso, cerca de 50% dos pacientes ocorre recidiva e metástases após a operação. Para esses pacientes, a quimioterapia ainda é o principal método geral aceito no mundo. Vários agentes são agora disponível para a quimioterapia sistémica de doentes com cancro gástrico, incluindo fluoropirimidinas, platina, taxanos, e assim por diante. Mas fluoropirimidinas são fundamentais no câncer gástrico. Para pacientes com câncer gástrico avançado (AGC), a quimioterapia de combinação com dois ou três drogas é mais comum com superioridade em relação aos melhores cuidados de suporte em primeira linha ou terapia de segunda linha [3-6].
Capecitabine é um administrado por via oral agente quimioterapêutico, que foi concebido para gerar 5-fluorouracilo (5-FU), preferencialmente em tumores. É um pró-fármaco que é convertido em 5-FU nos tumores através de uma via com três etapas enzimáticas e dois metabolitos intermediários envolvidos na. No último passo enzimático, o metabolito 5'-desoxi-5-fluorouridina (5'-DFUR) é convertido em 5-FU por timidina fosforilase (TP), que é mais activo nos tecidos tumorais do que em tecidos normais [7]. Assim, a sobre-expressão de TP em tecidos tumorais podem aumentar a concentração de 5-FU e, assim, aumentar o efeito anti-cancro. As evidências atuais indicam que o nível de TP expressão pode influenciar a evolução clínica de capecitabina no câncer de pulmão de não pequenas células, adenocarcinoma gastrointestinal, câncer de mama, câncer de cabeça e pescoço, e assim por diante [8-11]. Dois grandes estudos clínicos fase III mostrou que a capecitabina pode substituir 5-FU em administração clínica [12, 13]. Também capecitabina combinado com cisplatina ou paclitaxel tem provado ser um regime de combinação eficaz usada em pacientes com câncer gástrico avançado como de primeira linha ou tratamento de segunda linha [13-15].
Taxano incluindo paclitaxel (PTX) e docetaxel, é outro agente antitumoral ativo para câncer gástrico. Taxano liga-se a p-tubulina, o que é um dos principais componentes de microtúbulos, e exerce os seus efeitos inibidores do crescimento por meio da estabilização de microtúbulos, resultando na paragem do crescimento de células tumorais na fase G2 /M [16]. Vários mecanismos têm sido propostos como responsáveis ​​pela resistência taxano: ① A sobre-expressão do gene MDR1
que codifica P-glicoproteína capaz de efluxo de taxanos e outros medicamentos catiónicos, impedindo assim a retenção de drogas [17]; ② mutação de ponto no tubulina foi identificada como sendo responsável pela resistência taxano [18, 19]. ③ A sobreexpressão selectiva de isotipos de p-tubulina é um outro mecanismo de resistência [20]. Até agora, pelo menos sete isotipos beta-tubulina distintas (classes I, II, III, IVa, IVb, V e VI) foram relatados em humanos, com um padrão de distribuição complexa em vários tecidos [20]. Algumas pesquisas descobriram a presença de classe III β-tubulina (β-tubulina III, TUBB3) inibiu a montagem de subunidades p-tubulina promovidas pelo paclitaxel [21] e TUBB3 expressa em algumas células de paclitaxel-resistentes [22]. Muitos estudos pré-clínicos demonstraram altos níveis de expressão de TUBB3 estão associados com a resistência de paclitaxel no cancro do pulmão humano [23], do cancro do ovário [22], o cancro da próstata [24] e do cancro da mama [25] linhas celulares. Em estudos de câncer de pulmão, câncer de mama e câncer de ovário, há relações inversas entre a expressão TUBB3 e eficácia paclitaxel ou prognóstico de pacientes [26-28]. Database Já que a meta de paclitaxel é p-tubulina e estudo relataram que havia mutações raras em β-tubulina para câncer gástrico (sem mutações foram encontradas em 50 amostras de tumores) [29], consideramos que a superexpressão de TUBB3 foi o mecanismo mais provável de resistência paclitaxel em câncer gástrico. Este estudo foi desenhado para demonstrar as implicações clínicas do TP e expressões TUBB3 em capecitabina mais quimioterapia paclitaxel para pacientes com câncer gástrico avançado, e para identificar potenciais preditores para pacientes com câncer gástrico tratados com capecitabina com paclitaxel.
Métodos
Pacientes Elegibilidade
Todos os pacientes deste estudo foram coletados retrospectivamente como seguintes critérios: pacientes tinham confirmado histologicamente adenocarcinoma gástrico metastático e pelo menos uma lesão mensurável de acordo com os critérios de avaliação de resposta em diretrizes tumores sólidos [30]; pacientes foram tratados com capecitabina com paclitaxel ou cisplatina no departamento gastrointestinal do Hospital do Câncer Pequim de julho de 2003 a dezembro de 2008, e que tinha concluído pelo menos dois ciclos de quimioterapia; sem qualquer quimioterapia, exceto para neoadjuvante ou quimioterapia adjuvante (quimioterapia adjuvante concluída em 12 meses) foi feito; todos os pacientes foram submetidos a biópsia endoscópica do estômago primária antes da quimioterapia
regimes de tratamento
de primeira linha regimes de quimioterapia com capecitabina com paclitaxel ou cisplatina foram administradas a pacientes da seguinte forma:. capecitabina (Roche Laboratories Inc., Nutley, NJ) foi administrado por via oral a uma dose de 1250 mg /m 2 duas vezes por dia a partir dia1 (D1) para dia14 (D14) do ciclo de 3 semanas; paclitaxel (Hainanhaiyao Co., Ltd., China) foi administrado numa dose de 80 mg /m 2 por um i.v. de 180 min infusão em D1 e D8 de cada ciclo; cisplatina (Qilu Pharmaceutical CO., LTD., China) foi dado a uma dose de 80 mg /m 2 por um i.v. de 240 min infusão do d1 de cada ciclo. O tratamento foi mantido até progressão da doença ou toxicidade inaceitável ou pacientes /decisão dos médicos.
Avaliação Response
resposta quimioterápico foi avaliada a cada dois meses por tomografia computadorizada (TC) de acordo com os Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST) critério. Os pacientes foram classificados por resposta completa (CR), resposta parcial (PR), a doença estável (SD), e doença progressiva (DP). pacientes CR e PR foram definidos como respondedores, SD e pacientes com DP como não respondedores. A sobrevida livre de progressão (PFS) e sobrevida global (OS) foram calculados a partir do primeiro dia de terapia para a progressão da doença e morte por qualquer causa, respectivamente.
Análise imuno-histoquímica para TP e TUBB3
Todas as amostras de tumor foram retrospectivamente recolhido a partir de pacientes, e dois passo método de imuno-histoquímica (IHQ) foi utilizado para detectar e TP TUBB3 em secções de tumores. Formalina-fixo secções de tecido parafina-embedded com 4 mm de espessura foram desparafinados em xileno e hidratados em álcoois graduados. Após recuperação de antigénio em tampão de citrato 0,01 M (pH 6,0), as secções foram tratadas com o líquido de peroxidase endógena confinando (Pequim COWIN Biotech Co., Ltd., Lot. CW0117) durante 10 min. As secções foram lavadas e incubadas com TUBB3 e TP (Pequim COWIN Biotech Co., Ltd.) anticorpos monoclonais durante 60 min, respectivamente. Após lavagem em solução salina tamponada com fosfato (PBS), as secções foram incubadas com o tipo geral de IgG-HRP Polímero (Pequim COWIN Biotech Co., Ltd., Lot. CW0117) durante 10 min, seguido por cromogénico 3,3'-diaminobenzidina tetracloridrato dihidrato (DAB) para cerca de 2-7min. Finalmente, os cortes foram conterstained com hematoxilina para 1 min, seguido por desidratadas em álcoois graduados, apuradas em xileno e cobertas com lamelas. Cada experimento incluiu controle negativo. Os cortes foram examinados e marcado por dois patologistas profissionais independentes do departamento de patologia, sem qualquer conhecimento deste estudo. proteína TP foi distribuído no citoplasma e nuclear, TUBB3 no citoplasma. A coloração foi classificada para a intensidade de coloração de acordo com a descrição anterior [31]. Resumidamente, a intensidade da coloração (1, fraco; 2, moderada; 3, forte) e a percentagem de células coradas (1, 0% ~ 10%; 2, 11% ~ 50%; 3, 51% ~ 100%) foram calculados . Por fim, foram considerados os níveis de expressão a ser positivo ou negativo com base na pontuação coloração mediana (intensidade marcar mais pontuação percentual) da seguinte forma: negativo para pontuação ≤ 3, positiva para a pontuação > 3. Análise Estatística

acordo com TP e os níveis de expressão de proteína TUBB3, os pacientes foram divididos em dois grupos (positivos e negativos). As relações entre TP, expressões TUBB3 e reacção à capecitabina mais paclitaxel ou cisplatina foram analisados ​​utilizando o teste exato de Fisher. curvas de Kaplan-Meier e teste log rank foram utilizados para analisar a associação entre os níveis de biomarcadores e sobrevivência de expressão. A análise estatística foi feita usando SPSS 13.0 (SPSS Inc, Chicago, Illinois, EUA).
Resultados
dados demográficos do paciente
Cinquenta e um pacientes foram incluídos no estudo entre julho de 2003 a dezembro de 2008 no nosso hospital com macho 34, do sexo feminino 17, idade média de 57 anos (intervalo 27-75 anos). Trinta e três pacientes (sexo masculino 20, sexo feminino 13, idade média 57 anos [faixa de 27-74 anos]) receberam capecitabina mais paclitaxel com uma mediana de 6 ciclos de quimioterapia (coorte 1) e dezoito pacientes (sexo masculino 14, sexo feminino 4, idade média 57 anos [Faixa de 42-75 anos]) receberam capecitabina e cisplatina, com uma mediana de 6 ciclos de quimioterapia (coorte 2). As características dos 51 pacientes são apresentados na Tabela 1 1.Table dados demográficos do paciente e as características clínicas
Característica
Cohort 1 (n = 33)
coorte 2 (n = 18)
total (n = 51)

No. de Pacientes
%
No. de Pacientes
%
No. de Pacientes
%
Sexo Masculino

20
60,6
14
77,8
34
66,7
feminino
13
39,4 4
22,2
17
33,3
Idade, anos
Median
57
57
57
Faixa
27-74
42-75
27-75
KPS
90-100
23
69,7
14
77,8
37
72,5
70-80
10
30,3 4
22,2
14
27,5
Sites de doença metastática
fígado
12
36,4
6
33,3
18
35,3
Lung
1

• Classe III β-tubulina é um marcador preditivo de quimioterapia baseada em taxano na recorrente e metastático gástrica cancer
• Associação de expressão diminuída de RASSF1A com metilação do promotor no cancro gástrico primário de pacientes da região central da China