significado prognóstico do HER-2 /neu superexpressão /amplificação em pacientes chineses com cancro gástrico curativa ressecado após ensaio clínico a toga

significado prognóstico do HER-2 /neu superexpressão /amplificação em pacientes chineses com cancro gástrico curativa ressecado após ensaio clínico a toga da arte abstracta
Fundo
HER-2 /neu-terapia-alvo tem sido usado com sucesso em gástrico avançado cancro, mas o papel da proteína HER-2 /neu no prognóstico de cancro gástrico não é ainda clara. Neste estudo, foi investigada a correlação entre HER-2 expressão do neu /e amplificação, bem como sua associação com a clínica resultados em pacientes com câncer gástrico curativa ressecado
Métodos
Nós construídos blocos de tissue microarray contendo >. 70% de tecido de cancro gástrico e tecido gástrico combinados adjacente normal para 227 pacientes. Expressão do /proteína neu HER-2 nestas amostras foi analisada utilizando coloração imuno-histoquímica. A amplificação de HER-2 /neu também foi analisado para as mesmas amostras utilizando fluorescência in situ
hibridação. Foram analisados ​​dados sobre características clínicas e fatores prognósticos relevantes nesses pacientes.

Resultados Das 227 amostras de câncer gástrico, 11,89% foram positivos para HER-2 /neu superexpressão /amplificação no âmbito do novo sistema de pontuação. HER-2 /neu superexpressão /amplificação foi estreitamente relacionado com o tipo de Lauren, grau de diferenciação, tamanho do tumor e metástases em linfonodos. HER-2 /neu superexpressão /amplificação previu pior sobrevida na análise univariada, mas não em um modelo de riscos proporcionais de Cox.
Conclusão
HER-2 /neu superexpressão /amplificação não foi um preditor independente para a sobrevivência em pacientes com curativo ressecado câncer gástrico.
Palavras-chave
FISH gástrica câncer HER-2 Antecedentes /neu IHC Prognosis
Embora a incidência de câncer gástrico está a diminuir em todo o mundo, ainda é relativamente alta na China, com 420.000 pacientes recém-diagnosticados a cada ano. A taxa de mortalidade de câncer gástrico na China ocupa o terceiro lugar entre todas as mortes por câncer, com 320.000 pacientes para o período de 2004 a 2005 [1]. Embora tenha havido grande melhoria no diagnóstico precoce do câncer gástrico, em combinação com a recente evolução das técnicas cirúrgicas e uso abrangente de quimioterapia e radioterapia, a taxa de sobrevida em 5 anos para o câncer gástrico permanece tão baixa quanto 20% a 30% [ ,,,0],2]. a terapia
alvejado é uma nova tendência no tratamento do câncer para melhorar a sobrevida global em pacientes com câncer. Em relação ao câncer gástrico, terapia alvo molecular também está ganhando status. terapia anti-angiogénico e terapia anti-receptor do factor de crescimento epidérmico emergiram como uma nova esperança [3], especialmente o anti-HER-2 droga, trastuzumab. De acordo com estudo clínico a toga relatado em 2010 [4], os pacientes com HER-2 /neu superexpressão tratamento com quimioterapia e trastuzumab apresentaram uma sobrevida global mediana mais significativa de 13,8 meses, sem quaisquer efeitos secundários adversos adicionais. Shitara et al
. também relataram que os pacientes que estavam HER-2 positivo com cancro gástrico avançado teve um melhor prognóstico do que pacientes que eram negativos para HER-2 quando tratadas com trastuzumab [5]. Todos estes indicam que o /terapia HER-2-alvejado neu tem um grande potencial na melhoria do tratamento do câncer gástrico.
Oncogene HER-2 /neu foi originalmente descoberto em neuroglioblastomas rato induzido quimicamente [6] e está localizado no cromossomo 17q21 e codifica uma glicoproteína transmembranar de 185kD. A proteína é composta por um domínio extracelular de ligação ao ligando de 653 aminoácidos, uma única região que atravessa a membrana de 654 a 675 aminoácidos, e um domínio citoplasmático da tirosina-quinase de proteína de 675 a 1255 aminoácidos. É um dos membros do receptor do factor de crescimento epidérmico humano (HER), que inclui a família HER-1 (receptor do factor de crescimento epidérmico), HER-2 /neu, HER-3 e HER-4 [7]. Entre estes, HER-2 /neu desempenha um papel importante no desenvolvimento normal, diferenciação e apoptose da célula. A amplificação de genes e a sobre-expressão de HER-2 /neu tem sido relatado em muitos tipos de cancro, incluindo a do ovário [8], o pulmão [9] e da próstata [10], para além da mama [11]. Por exemplo, tem sido mostrado que a sobre-expressão de HER-2 /neu foi detectada em cerca de 10% a 34% dos cancros da mama invasivos e foi associado com prognóstico pobre. Apesar de HER-2 /neu é considerada um fator prognóstico independente para o câncer de mama, o seu papel prognóstico no câncer gástrico ainda permanece controversa, pois vários estudos têm gerado resultados conflitantes [12-16].
Para avaliar a associação entre o status do seu -2 /neu e prognóstico de pacientes chineses com câncer gástrico, realizamos uma (nós pensamos "a" é melhor, isso significa que este estudo) estudo para examinar ambos expressão e amplificação do Her-2 /neu em tumores de câncer gástrico curativa ressecado e correlacionados essas medidas para os resultados clínico-patológicas e prognóstico dos pacientes.
Métodos
pacientes e coleta de informações clínico-patológico
Um total de 227 pacientes com câncer gástrico dos arquivos de patologia do Hospital Popular Yangzhong foram incluídos nesta estudo entre 2002 e 2004. Todos os pacientes (exceto os classificados como T1N0M0) foram submetidos à cirurgia curativa e receberam um regime adjuvante semelhante de quimioterapia (5-fluorouracil e cisplatina). variáveis ​​clínico-patológicas, incluindo idade, sexo, tipo histológico e estágio patológico foram recolhidos através da revisão de prontuários e registros de patologia. Desses pacientes, 157 eram homens e 70 eram mulheres, com idades entre 24 e 79 anos (mediana de 60 anos de idade). tumor sites incluídos 28 antro, 50 corpus e 149 cárdia. Os pacientes foram acompanhados a partir da data da cirurgia até a morte, ou censurado em 31 de Dezembro de 2008, que resultou em um período de acompanhamento de 1 a 108 meses (mediana de 64 meses). O estudo foi aprovado pelo Comitê étnico Institucional (equivalente a uma placa de revisão institucional). Como este foi um estudo retrospectivo utilizando amostras de tecido de arquivo, o Comité étnico institucional dispensou a necessidade de consentimento informado por escrito
Tissue construção microarray Online em breve, H &.; seções manchado-E foram feitas a partir de blocos de tumor primário para definir duas regiões tumorais representativas e tecidos gástricos normais adjacentes. regiões de tumor representativos foram definidas como áreas sólidas que contêm as células cancerosas do tumor mais de 75%, sem necrose. tecidos gástricos normais foram seleccionados aleatoriamente adjacente a um tumor com uma distância de mais do que 5 cm, evitando as zonas de sangramento. digitação do tumor e de classificação foram realizadas de acordo com critérios Lauren e da Organização Mundial da Saúde (OMS). Todos os pacientes com câncer gástrico foram encenadas usando a sétima edição do tumor metástase-(TNM) sistema de estadiamento União Internacional Contra o Câncer. cilindros de tecido (1,5 mm de diâmetro) foram, em seguida, perfurado a partir das regiões definidas do bloco usando um microarrayer tecido (Gentury, IL, EUA) e apresentado em blocos de parafina receptor. Dois conjuntos de três blocos em parafina de tissue microarray (TMA) foram feitas. Secções dos blocos de TMA resultantes foram transferidas para lâminas de vidro. Houve um total de dois conjuntos de TMA, contendo 227 tumorais manchas de tecidos e 135 pontos gástricas normais adjacentes de tecido cada, disponíveis para este estudo (colaborando com Shanghai Biochip, Xangai, China).
Imunohistoquímica
imuno-histoquímica (IHQ) coloração para HER-2 neu /foi realizado em secções de TMA. , secções embebidas em parafina fixadas em formalina foram desparafinados em xileno e reidratadas através do álcool classificados. A actividade da peroxidase endógena foi extinta por peróxido de hidrogénio a 3%, em seguida, a secção foi lavada em água e o antigénio recuperados e colocados em tampão de citrato. As secções foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato, pH 7,2. Aplicou-se o anticorpo monoclonal de ratinho contra primário humano HER-2 /neu (MAB-0198, Maxin Biotech, Fujian, China) durante 1 hora na incubadora a 37 ° C. Aplicou-se então anti-HER-2 anticorpo (Dako REAL, En Vison, coelho HRP /rato, Dako, Carpinteria, CA, EUA). solução de diaminobenzidina foi utilizada como um cromogénio.
fluorescência in situ

hibridação fluorescente in análise fluorescente (FISH) in situ
foi aplicada às secções. Amplificação do HER
-2
gene foi determinada por FISH usando um Vysis dual-cores, dual-fusion conjunto de sonda translocação comprado de Abbott Molecular Inc. (Desplaines, IL, EUA). Resumidamente, os cortes foram desparafinados, desidratados, e em seguida, incubadas em 30% de bissulfato de sódio durante 20 min a 45 ° C. Depois de ter sido lavada em 2 x SSC sódio Ácido solução tampão de citrato-clorídrico}, as lâminas foram tratadas com proteinase K a 37 ° C durante 25 min. Em seguida, a hibridação foi realizada durante a noite a 42 ° C numa câmara húmida, seguido de lavagens pós-hibridação na solução de desnaturação e 0,1% de NP-40 com 2 × SCC sódio Ácido solução tampão de citrato-} clorídrico à temperatura ambiente. Finalmente, as lâminas foram lavadas e contra-coradas com 0,2 mmol /L 4'-6-diamidino-2-fenilindole e examinado sob um microscópio confocal de varrimento laser LSM 510 (Carl Zeiss, Jena, Alemanha).
Pontuação de imuno-histoquímica e fluorescência in situ
hibridação
HER-2 imunocoloração foi marcado usando o seguinte sistema de pontuação adotado por Hofmann no ensaio clínico toGA: marcar 0, nenhuma coloração da membrana ou < 10% de células coradas; 1+, /reactividade membranoso quase imperceptível fraco em 10% das células ou superior ou reactividade em apenas uma parte da membrana celular; 2+, fraca a moderada reactividade membranosa completa ou basolateral em 10% das células tumorais ou superior; e 3+, forte reactividade membranosa completa ou basolateral em 10% das células tumorais ou superior. Dezenas de 0 e 1+ foram considerados negativos para HER-2 superexpressão /neu, e dezenas de 3+ foram considerados positivos. Dezenas de 2+ foram considerados superexpressão se FISH confirmou amplificação [4, 17]. A amplificação do gene foi definida como núcleos de células de cancro que exibem uma proporção de HER-2 /neu para CEP17 (sonda centromérica 17) ≥2, ou quando foi observado um agrupamento de sinal de HER-2 /neu.
Todas as amostras sobre as secções de TMA cancros gástricos foram avaliados por dois patologistas de forma independente para determinar dezenas de IHC. Para opiniões discordantes, as amostras foram re-examinados pelos dois patologistas para alcançar uma pontuação de consenso. Análise
Estatística
Os dados categóricos foram analisados ​​utilizando χ
2 e estatísticas. A probabilidade de sobrevivência por diferentes subgrupos foi calculada pelo método de Kaplan-Meier, ea significância estatística foi analisada por meio do teste de log-rank. A análise multivariada foi realizada utilizando-se o modelo de riscos proporcionais de Cox com ajuste para co-variáveis ​​para identificar indicadores prognósticos primárias que foram independentemente associados com a sobrevivência. Todas as estatísticas foram em frente e verso, em um nível significativo de P Art < 0,05, utilizando o pacote de software estatístico SPSS para Windows (versão 13.0, SPSS, Inc., Chicago, IL, EUA)
Resultados <. br> HER-2 /neu estado a expressão da proteína e variáveis ​​clinicopatológicas em 227 casos de carcinoma gástrico
Her 2-expressão de proteína /neu em tecidos de cancro gástrico foi determinada por IHQ para 227 pacientes. Como mostrado na Figura 1, a imunocoloração revelou que a expressão foi detectada apenas nas membranas celulares de células de tumor mas não nas células epiteliais gástricas normais adjacentes. Destes 227 tumores, 189 casos (83,41%) teve 0; 4 casos (1,75%) teve 1+; 11 casos (4,80%) teve 2+; e 23 casos (10,04%) teve 3+. Entre 11 casos de 2+, 4 casos (36,4%) foram positivos para a amplificação. Portanto, 27 casos (11,89%) tiveram HER-2 /neu superexpressão. A correlação entre HER-2 /neu níveis de expressão de proteína e variáveis ​​clínico-patológicas estão resumidos na Tabela 1. Em comparação com tumores sem a superexpressão, tumores de câncer gástrico com HER-2 /neu superexpressão mostrou predominantemente bem ou histologia moderadamente diferenciado pela classificação da OMS ( P
< 0,05) e um tipo de histologia intestinal pela classificação Lauren (P
< 0,05). HER-2 superexpressão /neu também foi associado com o tamanho do tumor e metástases em linfonodos (P Art < 0,05). No entanto, há diferenças nos níveis de expressão por idade, sexo, localização do tumor, profundidade de invasão, estágio TNM, invasão de vasos ou tipo Borrmann foram encontrados para todos (P Art > 0,05). A Figura 1 imuno coloração para expressão de HER-2 /neu em amostras de tumores de pacientes com cancro gástrico. (A) coloração da membrana no epitélio gástrico normal para HER-2 /neu (0+). (B) coloração da membrana fraco em > 10% células tumorais (1+). (C) coloração da membrana completa moderada em > 10% de células tumorais (2+). (D) membranas completas forte coloração em > 10% de células tumorais (3+). (H & E; ampliação original, × 4, × 40)
Tabela 1 Comparação de características clinicopatológicas de acordo com HER-2 superexpressão /amplificação
características clínicopatológicos
HER-2 superexpressão /amplificação <. br>
HER-2 /neupositive (n = 27)
HER-2 /neunegative (n = 200)
P
Idade
0,151 Art < 65 anos
18
96
≥65 anos
9
104 Sexo seguro
0,765
masculino
18
139
fêmea de 9
61
Lauren
0,001
intestinal 26
118
difundir
0
49
mista
1

• Pré-operatório multidetectores-row tomografia computadorizada de preparo de verificação para câncer gástrico linfática spread
• A associação entre a duração da quimioterapia adjuvante à base de fluoropirimidina e sobrevivência no estágio II ou III cancro gástrico