Características do vírus de Epstein Barr variantes associadas com o carcinoma gástrico no sul Tunisia

características dos vírus de Epstein Barr variantes associadas com o carcinoma gástrico no sul da Tunísia da arte abstracta
Backgroud
associada ao EBV gástrica Carcinoma (EBVaGC) tem características clínicas distintas e sua prevalência é variável em todo o mundo.
resultados
Para determinar a prevalência de EBVaGC na Tunísia, RNA pequeno (EBER) expressão codificado-EBV foi avaliada em amostras de 81 carcinoma gástrico (CG). A expressão EBER nuclear foi detectada em 12 dos 81 casos GC (14,81%) e de concordância entre o intervalo de pontuação de coloração EBER e o número de cópias de DNA de EBV como estimativa por qPCR e observado. Por outro lado, verificou-se que EBVaGC fortemente correlacionada com a idade no momento do diagnóstico, e fracamente com a diferenciação do tumor e invasão venosa.
Além disso, as amostras foram submetidas EBVaGC para determinar os polimorfismos de DNA EBV. Os nossos resultados mostram um perfil genético único das estirpes EBV em relação aos tipos A e D, o protótipo F, a retenção de Xho I
local de restrição e a 30 pb variante del-LMP1. De acordo com os nossos estudos anteriores sobre carcinoma da nasofaringe (NPC), que sugeriu que as estirpes EBV associadas à GC e NPC compartilhou algumas semelhanças em pacientes tunisinas.
Conclusão
A prevalência de EBVaGC é de 14,81% no sul da Tunísia e que estirpe EBV comum está associada tanto com NPC e GC que são susceptíveis de variar a partir de estirpes asiáticas. As nossas descobertas apoiam, por conseguinte, uma determinada distribuição geográfica do EBV que não é indicado para as doenças associadas a EBV. Palavras-chave

carcinoma gástrico EBV EBER polimorfismos fundo
carcinoma gástrico (GC) é a segunda principal causa de morte por cancro em todo o mundo [1]. A incidência de GC varia de uma região geográfica para outra, o que sugere que fatores genéticos e ambientais, incluindo a infecção por Helicobacter pylori
são considerados como contribuir para a carcinogênese gástrica [2, 3]. No sul da Tunísia, a incidência anual de GC varia de 2,6 a 4,8 /100 000 pessoas [4]. Nos poucos anos passados, muitos relatórios têm explorado a associação entre o vírus Epstein-Barr (EBV) e GC [5-9]. A GC associada a EBV (EBVaGC) foi evidenciada pela presença de expressão uniforme de ARN pequeno codificado por EBV (EBER) em células de GC [10], a detecção de epissomas EBV monoclonais nas células GC [11] e o aumento de soro anticorpos contra o antigénio da cápside virai [12]. A incidência de EBVaGC varia amplamente de 2 a 18% como relatado em estudos anteriores [13-20]. Além disso, as características clínicas da EBVaGC incluem predominância do sexo masculino, idade relativamente jovem e localização no estômago proximal [9, 21]. O EBVaGC mostra uma menor taxa de participação do nó de linfa e tem um prognóstico relativamente favorável em comparação com um EBV-negativa [22]. Em
EBVaGC, infecção de células de tumor é caracterizado por um padrão de tipo I de latência, na qual o expressão de genes virais latentes é restrita ao antigénio nuclear Epstein-Barr (EBNA) -1, EBER, latent membrane protein LMP-2A e transcritos a partir de Bam HI
Um quadro para a direita (BARF) -0 e -1 [11, 23]. Uma vez que os produtos de EBV do tipo I infecção latente têm demonstrado estar envolvida na tumorig�ese mediada por EBV, sugere-se que o processo oncogénico em EBVaGC poderia ser accionado por mecanismos diferentes dos de GC convencional. Posteriormente, EBVaGC malignidade pode ser considerado como uma entidade diferente entre GC que exige maior atenção para melhorar a assistência ao paciente.
O presente estudo foi realizado com o objetivo de determinar a prevalência de EBVaGC no sul da Tunísia e, posteriormente, para analisar polimorfismos EBV específicas em o tumor isolados.
Materiais e métodos
características do paciente
Um total de 81 carcinomas gástricos primários foram coletados, entre janeiro de 1999 e dezembro de 2009, de pacientes submetidos à ressecção cirúrgica radical no Departamento de Cirurgia do Aparelho digestivo do Habib Bourguiba Hospital universitário (Sfax, Tunísia). Todos os pacientes deram consentimento informado antes da coleta da amostra de acordo com as diretrizes institucionais. Nenhum dos pacientes tinha quimioterapia pré-operatório ou pós-operatória. parâmetros clínico-patológicos, tais como sexo, idade, localização anatômica, tipo histológico, estágio patológico, tamanho do tumor e invasão venosa foram avaliados através da revisão de prontuários e registros patológicas. No momento da cirurgia, a idade dos pacientes variou de 18 a 94 anos (média de 59,58 anos). A localização anatômica do tumor foi determinada de acordo com a localização predominante da lesão como cárdia (n = 8), o corpo (n = 22), e antro (n = 48). Os subtipos histológicos foram classificados de acordo com os critérios de Lauren [24] como tipo intestinal (n = 47) e tipo difuso (n = 34), mas também da Organização Mundial de Saúde como pouco diferenciado (n = 43), moderadamente diferenciado (n = 26) e bem diferenciado (n = 9). O estágio clínico da doença foi determinada de acordo com o tumor, nó e classificação metástase (TNM) do American Joint Committee on Cancer [25]. Nossa coorte contém 9 pacientes em estágio I ou II e 47 pacientes em estágio III ou IV.
Hibridização in-situ
EBV foi identificado pela expressão de pequeno RNA codificado-EBV (EBER). Resumidamente, in situ
hibridação (ISH) ensaio foi realizado em 3 uM secções de parafina de bloco com EBV sondas de oligonucleótidos complementares ao EBER-1 e -2 de acordo com as instruções do fabricante (kit de detecção de PNA ISH, Dako Cytomation). Os sinais de hibridização foram visualizados com diaminobenzidina (DAB) e sinal positivo nuclear foi reconhecida como coloração nuclear castanho escuro sob microscopia de luz. Como controlo positivo, foi utilizado seção de um tecido NPC EBER-positivo conhecido. A coloração foi pontuada desde 1 a 3 de acordo com a percentagem de núcleos de células coradas em secções de tecido. Pontuação 3 foi atribuído quando o sinal positivo foi observado em mais de 75%, valor 2 em 75 a 50% e pontuação 1 em menos de 50% das células.
Extracção de ADN
O DNA foi extraído a partir fixado em formalina, parafina tecidos incorporados. Após a identificação do tumor em hematoxilina-eosina manchadas de slides, áreas tumorais foram raspadas a partir de 40 mm de espessura cortes de parafina. Os materiais coletados foram de-encerado por lavagem em xileno e lavado em etanol. tecidos secos foram digeridas com proteinase K na presença de SDS a 55 ° C durante a noite, seguido de extracção com fenol /clorofórmio, como descrito anteriormente [26]. A quantidade de ADN foi verificada por meio de espectrofotometria e armazenado a -20 ° C para posterior utilização.
PCR-RFLP e sequenciação
cinco regiões do genoma do EBV foram alvo de análise de polimorfismo por PCR, RFLP ou sequenciação. Os polimorfismos estudados englobam o tipo A ou B no gene EBNA-3C, o tipo de D C ou na região /I1 BamHI-W1, o protótipo F ou variante F na região BamHI-F, a perda de um Xho
local I no primeiro exão do BNLF1gene (Xho
variante de perda de I) e a eliminação de 30 pb na terceira exão do mesmo gene (30 pb variante del-LMP1). A genotipagem foi realizada em ADN de doentes GC EBV-positiva e, como controlo, analisamos 10 amostras de DNA a partir da mucosa da nasofaringe positivos para o EBV.
Amplificação por PCR foi realizada em 200 ng de ADN numa mistura de reacção final de 50 uL contendo 0,2 uM de cada iniciador, 200 ^ M de dNTP, MgCl2 2 mM, 1X tampão de PCR e 1 unidade de polimerase de ADN de Taq (Fermentas). As sequências dos iniciadores e o tamanho dos produtos de PCR são apresentados na Tabela 1 Resumo 1.Table de sequências iniciadoras que abrangem os tipos de EBV e variantes
genes de EBV e regiões
(tipos ou variantes )
As sequências dos iniciadores (5'-3 ')
tamanho do produto (pb)
EBNA-3C gene
(tipo A ou B)
F : AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT
R: GGCTCGTTTTTGACGTCGGC
produtos de PCR
153: tipo A
246: tipo B
BamH1-W região
(tipo C ou D)
F: ACCTGCTACTCTTCGGAAAC
R: TCTGTCACAACCTCACTGTC
PCR + Bam
HI digestão
205: tipo C
130 + 75: tipo D
BamH1-F região
(variante f)
F: TCCCACCTGTTACCACATTC
R: GGCAATGGGACGTCTTGTAA
PCR + Bam
HI digestão
198: F variante
127 + 71: f variante
Exon 1 de BNLF1 gene
(variante XhoI)
F: ACAATGCCTGTCCGTGCA
R: AGAAACACGCGTTACTCT
PCR + Xho
I digestão
497: Xho
I-
340 + 157: Xho
I +
Exon 3 de BNLF1
gene (30bpdel-LMP1)
F: TGGAGGGAGAGTCAGTCAGGC
R: ATTGACGGAAGAGGTTGAAAAC
produtos de PCR
224: 30bpdel-LMP1
254: wt-LMP1
F: iniciador directo
R: iniciador reverso
o C /D e F /F tipagem é baseada na digestão de BamHI
de cada produto de PCR. As reacções enzimáticas foram realizadas num volume final de 20 ul contendo 10 ul de produto de PCR, digestão tampão 1X e 10 unidades de BamHI
enzima (Fermentas). Após incubação durante a noite a 37 ° C, os produtos foram analisados ​​num gel de agarose a 2% e visualizados por coloração com brometo de etídio, sob iluminação UV. As mesmas condições descritas acima foram avaliados para identificar o local Xhol
no primeiro exão do BNLF1gene. DNA de B95.8 (GenBank No.V01555 adesão) e a linha celular C666-1 (GenBank N ° ABV54173) foram utilizados como controlo para os tipos de variantes e EBV. A linha celular derivada de um C666-1 NPC chinês que abriga tipos A /C, variante F, Xho
variantes de perda de I e 30 pb variantes del-LMP1. A sequenciação de ADN foi realizada em
os produtos de PCR purificados de o terceiro exão do gene BNLF1 utilizando o kit de purificação em gel de SV (Promega). Cycle Sequencing foi realizada utilizando o kit de sequenciação do ciclo ABI PRISM Big Dye Terminator (Applied Biosystems) de acordo com as instruções do fabricante. Todas as sequências foram realizadas bi-direcional. Os resultados de sequenciamento foram então comparadas com as sequências de EBV de B95.8 (GenBank No.V01555 adesão), NPCs chinês (células Cao [27], as células C666-1 (GenBank No. ABV54173) e NPC10 biópsia [28] e da Tunísia espécimes NPC (CV4, CV5, e CV6 [29]).
PCR quantitativo em tempo real
Q-PCR ensaio de direccionamento na região BamHI-W do genoma do EBV foi realizada nas amostras de 12 EBV-positiva que exibem coloração nuclear e amostras negativas 6 EBV. as reacções foram realizadas em um conjunto de tempo real ™ sistema de PCR iCycler iQ (Biorad), utilizando iniciadores que flanqueiam a região BamHI-W do genoma de EBV e sonda TaqMan como descrito anteriormente [30]. aliquota de 1 ug O DNA foi usado para a amplificação num volume total de reacção de 25 ul contendo 300 nM de cada iniciador, 25 nM de sonda TaqMan, 1x tampão de PCR, 2 mM de MgCl2, 200 uM de cada dNTP e 1 unidade de GoTaq Hot Start polimerase (Promega). a curva padrão foi preparada utilizando diluições de 10 vezes em série do plasmídeo recombinante pGEMT /BamHI-W. As amostras foram testadas em duplicado e os resultados em média para calcular EBV carga viral expressa em cópias por reacção.
Análise estatística
análise estatística foi realizada com o programa de software estatístico SPSS 13.0 para Windows (SPSS Inc., Chicago, Illinois, EUA ). P-valor inferior a 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.
Resultados
Prevalência de EBVaGC e associação com características clínico-patológicas
Oitenta e um espécimes de GC foram testadas para a positividade EBV usando o EBER in situ
hibridação. A frequência de EBVaGC foi de 14,8% (12 de 81) na qual o sinal positivo EBER foi restrita aos núcleos de células de carcinoma (Figura 1). Os espécimes EBVaGC têm uma percentagem variável de células de tumor coradas mostrando mais do que 75% em seis casos (contagem 3), entre 50 e 75% em três casos e menos de 50% nos três casos restantes. Os casos EBVaGC foram associados com a idade no momento do diagnóstico (P
= 0,009, Tabela 2). Com efeito, 9 dos 12 pacientes com EBVaGC tinham idades entre 45 a 60 anos de idade. Além disso, uma tendência para uma associação foi observada com diferenciação tumoral e invasão venosa como o valor estaticamente significativo não foi atingido (P
= 0,07 e P = 0,09
respectivamente, Tabela 2). Figura 1 Detecção de Epstein-Barr codificado pequenos RNAs (Ebers) por hibridação in situ nos tecidos do carcinoma gástrico. A: H & E de coloração. B: coloração EBER Intense positiva (imuno-score 3+) nos núcleos das células tumorais (ampliação original × 40). C: coloração moderada EBER positiva (imuno-pontuação 2+) nos núcleos das células do tumor (ampliação original × 40). D: coloração EBER fraco positiva (imuno-score 1+) nos núcleos das células tumorais (ampliação original × 40). E: Controlo positivo representado por um conhecido tecidos NPC Eber-positivo (aumento original x 40). F: tecidos de carcinoma gástrico negativas para EBER (ampliação original × 10)
Tabela 2 Correlação entre EBVaGC e os parâmetros clínico-patológicos
Características Clínicas
N
EBV expressão *


negativa (%)
positivo (%)

Sexo
Masculino
48
42 (87,5)
6 (12,5)
Feminino
33
27 (81,8)
6 (18,2)
p
-valor
0,47
Idade
< 45
17
17 (100)
0 (0)
45-60
30
21 (70)
9 (30) Art > 60
34
31 (91,2) Sims 3 (8,8)
p
-valor
0,009
TNM
I-II
9
9 (100)
0 (0)
III-IV
47
40 (87,1)
7 (14,9)
p
-valor
0,216 local
Anatomical
Antrum
48
41 (85,4)
7 (14,6)
corpo
22
19 (86,4) Sims 3 ( 13.6)
Cardia
8
6 (75) Página 2 (25)
p
-valor
0,72
Diferenciação
Pobre
43
36 (83,7)
7 (16,3)
Moderado
26
25 (96,2)
1 (3.8)
Bem
9
6 (66,7) Sims 3 (33,3)
p
-valor
0,075
tipo Lauren
intestinal
47
38 (80,9)
9 (19.1)
difusa
34
31 (91,2) Sims 3 (8,8)
p
-valor
0,197 tamanho
Tumor
< 5 cm
9
8 (88,9)
1 (11,1) Art > 5 cm
65
54 (83,1)
11 (16,9)
p
-valor
0,658
invasão venosa
Negatif
61
54 (88,5)
7 (11,5)
Positif
18
13 (72,2)
5 (27,8)
p
-valor
0,09
* expressão EBV foi determinada por EBER hibridização in-situ. casos negativos apresentaram uma pontuação = 0 e positivos casos mostraram uma pontuação = 1+ a 3+ avaliação
quantitativa de EBV no GC
ensaio Q-PCR foi realizada em 18 amostras de carcinoma gástrico.; entre os quais 12 exibida positividade EBER restrita a células núcleos e 6 foram negativos.
O número de cópias do DNA viral foi estimada pelo método de quantificação absoluta utilizando diluições em série de DNA de plasmídeo recombinante (pGEMT /BamHI-W), como padrão externo. curva padrão foi estabelecida através da representação gráfica dos plasmídeo de partida o número de cópias contra o ciclo limiar (Ct), que mostra uma quantificação linear ao longo de uma gama de 10 6 a 10 cópias por reacção.
exemplos representativos são mostrados na Figura 2 onde os casos GC10 e GC3 (Ct = 15 e 22, respectivamente) exibem forte coloração nuclear EBER Considerando GC8 (Ct = 30) exibe uma expressão fraca EBER (Figura 2). Os dados Q-PCR está em concordância com EBER in situ
resultado de hibridização. Na verdade, as 6 amostras com coloração intensa EBER (escore 3+), mostrou elevado número de cópias de ADN EBV enquanto casos com fraca expressão EBER (escore 1+) correspondeu a baixo número de cópias de DNA viral (Tabela 3). Figura 2 Determinação do ADN de EBV número de cópias por Q-PCR. Exemplos representativos de casos GC com elevada (GC10), intermediário (GC3) e baixa (GC8) DNA EBV número de cópias. A linha horizontal marca o limite utilizado para a avaliação do valor Ct.
Tabela número de cópias do DNA 3 EBV e marcação com EBER nas amostras positivas 12 EBV e 6 casos negativos
Cases GC
histológica
tipo
Tumor
site
Ct *
(média)

DNA EBV *
Cópias /ug
coloração EBER
marcar
10
intestinal
Antrum
15
6.105
3+ Sims 3
intestinal
Antrum
22
4.103
3+
12
intestinal
Antrum
23
103
3+
9
difusa
Antrum
22,8
103
3+ Página 2
intestinal
corpo
25
5.102
3+ 4
intestinal
Antrum
26
102
3+
6
intestinal
proximal
27
8,101
2+
7
difusa
corpo
28
5.101
2+
11
intestinal
proximal
28
5.101
2+
1 | intestinal
Antrum
30 Restaurant < 10
1+
5
Intestinal
Antrum
30 Restaurant < 10
1+
8
difusa
corpo
30 Restaurant < 10
1+
13
difusa
Antrum
ND
ND
0
14
difusa
corpo
ND ND

0
15
difusa
Antrum
ND
ND
0
16
difusa
Antrum
ND
ND
0
17
intestinal
Antrum
ND
ND
0
18
intestinal
corpo
ND
ND
0
* número de cópias de ADN de EBV foi estimada por Q-PCR utilizando o método de quantificação absoluta. CT: ciclo limiar. ND: Não Determinado
genotipagem de estirpes EBVaGC
Para investigar mais a EBVaGC em nossos 12 espécimes da Tunísia, examinamos o perfil genético de cepas EBV determinar diferentes tipos e variantes. Um perfil único em todas as amostras estudadas é observado (Figura 3). Ele foi caracterizado por os tipos A /D, F protótipo, a retenção de Xho I
local de restrição e 30 pb variante del-LMP1. Fazemos notar que os tipos A e B que moldam duas estirpes diferentes EBV foram encontrados em um caso de espécimes EBVaGC (Figura 3). A Figura 3 A genotipagem de estirpes EBVaGC. A: -RFLP PCR da região BamHI-F mostra a variante F (presença de duas bandas de 128 pb e 71 pb) para a linha celular C666-1 controlo (pista 1) e uma banda de 199 pb para a variante F sobre casos GC2 para GC6 (pista 2-6). B: PCR-RFLP da região /I1 BamHI-W1. Os fragmentos de DNA foram digeridos com BamHI
dando duas bandas de 139 e 67 bp (tipo D) para GC2 para GC6 (pista 2-6) ou uma banda de 245 pb (tipo C) para a linha celular C666-1 de controle ( pista 1). C: região EBNA3C. EBV estirpes dos tipos A e B correspondem ao fragmento de ADN de 153 e 246 pb, respectivamente. Caso GC6 mostra infecção dupla com ambos os tipos A e B vírus. B95.8 é um tipo A de vírus que foi utilizada como um controlo (pista 1). D: XhoI
polimorfismo do exão 1 do gene BNLF1. produto de PCR foi digerido por Xhol
para produzir duas bandas de 343 pb e 154 pb de Xhol +
variante para a GC2 GC6 (pista 2-6). A linha celular é uma C666-1 positivo de perda de Xhol
variante (pista 1).
A análise do ADN de EBV foi também realizada por sequenciação parcial no terceiro exão do gene que codifica os aminoácidos 328-376 BNLF1 do proteína LMP1. A fim de confirmar a eliminação de 30 pb que codifica os aminoácidos 343-352 da proteína LMP1, o alinhamento da sequência revelou sete aminoácidos alterações em comparação com a estirpe de referência B95.8. Ele estava constantemente encontradas em códons Q334R, L338S e S366A em todas as amostras EBVaGC. As restantes substituições de aminoácidos, no entanto, foram encontrados principalmente em um ou dois espécimes EBVaGC: H358L e L359V (GC2), P360H (GC9-10) e G365R (GC6). Sobre os nossos dados anteriores sobre espécimes NPC tunisinos, encontramos resultados semelhantes sobre as três constantes aminoácidos substituições. Além disso, as estirpes albergando EBV substituição S366A aparecer mais associado para espécimes tunisinas quando comparados com aqueles definidos na China (Figura 4). Figura 4 Comparação de sequências deduzidas de aminoácidos de GC tunisina com protótipo B95.8 e sequências LMP1 publicados anteriormente: Cao: linha de células NPC de Shangai [27]; C666-1 (GenBank No. ABV54173) NPC 10 de Hong Kong [28] e espécimes NPC tunisinos: CV4, CV5, CV6 [29]. Símbolos (---) indicam supressão de aminoácidos. Online em transportadores EBV saudáveis, análise de polimorfismo mostrou também os tipos A e D, F e protótipo Xhol + variante, como semelhantes para identificar espécimes em EBVaGC (dados não mostrados).
Discussão
No presente estudo, 81 casos de GC de pacientes da região sul da Tunísia foram investigados para a presença de EBV ea prevalência de EBVaGC foi de 14,8% (12 em 81). Era sabido que a prevalência de EBVaGC varia muito de uma região geográfica para outra e a maior frequência foi observado na Alemanha (18%), enquanto que a mais baixa (3,9%) foi detectado no Peru [13-20, 31].
o EBER hibridação in situ
era o método mais fiável relatados na literatura para a detecção de EBV latente em GC. Na verdade, todos os estudos acima mencionados foram realizados seguindo este método, incluindo o nosso estudo. As proporções variáveis ​​de células de tumor que expressam nucleares mostrando EBER no nosso estudo também foram deduzidas por Truong et ai., Sugerem que estar relacionada com a infecção por EBV ocorre no processo de oncogénica EBVaGC [32]. No entanto, novas investigações devem ser realizados para esclarecer esta observação.
Além disso, mostramos que os dados heterogêneos de expressão EBER poderia ser correlacionado com o número de cópias de DNA de EBV como estimado por Q-PCR apoio que este método é confiável, relatado anteriormente [33].
com relação às características clínico-patológicos da EBVaGC, foi observada forte associação com a idade no momento do diagnóstico (P
= 0,009, Tabela 3). Na verdade, o EBVaGC foi mais encontrada no grupo de pacientes com idade entre 45 e 60 anos de idade, o que está de acordo com estudos anteriores [19, 34]. Nenhuma outra associação estatística foi encontrada, exceto uma tendência com a diferenciação do tumor e invasão venosa (P
= 0,075 e P
= 0,09, respectivamente). Relatórios anteriores indicaram que EBVaGC eram frequentes no sexo masculino, estômago proximal e tumores do tipo difuso [9, 14, 16, 35-39]. Recentemente, em uma grande meta-análise, Carmago et al., Confirma estas associações para além da idade no momento do diagnóstico [38]. Em nosso estudo, não encontramos diferença na distribuição de EBV no sexo masculino em comparação com pacientes do sexo feminino, na proximal vs estômago distal e difusa vs histotipo intestinal. Estas variações entre os dados poderia ser explicado pela contribuição de factores locais de risco na patogénese do EBV e também pelo tamanho e charasteristics da coorte.
Análise de polimorfismo dos 12 casos EBVaGC mostrar exclusivamente do tipo D, F protótipo, Xho
I-retenção e de 30 pb variante del-LMP1. Em relação ao polimorfismo do gene EBNA-3C, encontramos o tipo A em todos os casos EBVaGC e uma combinação de tipos A e B foi encontrada em apenas um caso. Estes resultados estão de acordo com estudo recente realizado em quatro casos EBVaGC da região central da Tunísia [34].
A predominância do tipo A e protótipo F também foi mostrado em relatórios anteriores, independentemente da origem geográfica dos EBVaGC como no sul China [35], Japão sul [40], e os países da América Latina [41]. Curiosamente, a variante-f foi especialmente descrito na NPC associado EBV do sul da Ásia [42]. Nesta área, observou-se uma predominância do tipo C e perda de XhoI
variante em pacientes com EBVaGC ou NPC [35, 40], em contraste com o nosso presente constatação e os dados anteriores sobre doentes com NPC tunisianos [29, 43].
para melhor definir o genótipo de cepas EBVaGC e compará-los com aqueles associados com o NPC, foi realizado o sequenciamento parcial do exon 3 do gene BNLF1 e comparou-os com o protótipo B95-8 e outros publicaram sequências da Ásia e tunisinos estirpes NPC EBV [29, 43]. O Q334R, L338S e L338P foram encontrados em toda a nossa EBV isola e já foram relatados em cepas EBV associadas ao NPC originário da China ou da Tunísia [29, 44]. No entanto, o S366A é específico para EBV isolados associados tunisino NPC e GC .. Na verdade, e com base no relatório anterior de Edwards et al. [44], descrevendo sete cepas filogeneticamente distintos de LMP1, podemos propor que os isolados da Tunísia constituem um grupo complementar com uma assinatura específica (T366A), mas esta hipótese necessita de confirmação por sequenciação de todo o gene BNLF1 nestes isolados. De acordo com esta data, sugerimos que o polimorfismo no gene BNLF1 constituem um argumento adicional em linha com os polimorfismos outros EBV (tipo D, protótipo F e XhoI +) de apoio a dissimilaridade do EBV entre as duas regiões geográficas.
Na Por outro lado, temos descrito anteriormente
outras variantes del-LMP1 (69 pb e 81 pb códons exclusão abrangendo 334-353 e 345-371, respectivamente) em pacientes NPC tunisianos [29, 43]. Estas variantes não foram encontrados e apenas a 30 pb variante del-LMP1 foi identificado em todos os casos EBVaGC como já relatados por Chen et al., Em um grande estudo realizado em pacientes GC chineses [35].
Nossa análise de polimorfismo de EBV isolados em portadores saudáveis ​​revelou um genotipo idêntico aos dos EBVaGC e NPC sugerindo que as estirpes comuns estão geograficamente distribuídas, mas não associado com um tumor maligno específico. Na verdade, o desenvolvimento de doenças malignas associadas EBV pode ser correlacionada com a variação no reconhecimento imunológico potencial em populações distintas e os indivíduos, tal como proposto por Edwards et ai, [44].

Conclusão A prevalência de pacientes em EBVaGC de sul a Tunísia é de 14,8%, que é na faixa com os dados reportados. O EBVaGC foi predominantemente encontrada no grupo de pacientes com idade de 45 a 60 anos de idade e que o nível de DNA EBV refletir o status EBER no carcinoma gástrico.
Além disso, cepas EBV associados aos pacientes da Tunísia com GC ou NPC compartilham algumas semelhanças, sugerindo que provavelmente a mesma estirpe de EBV estão associados com ambos os tumores. No total, nossas descobertas sustentam a diferente distribuição geográfica do EBV, mas não a sua restrição a uma malignidade associada.
Declarações
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por uma bolsa do Ministério da Ensino Superior e Investigação Científica da Tunísia . Queremos agradecer Mr M Jaoua para as instalações de sequenciamento.
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Abaixo estão os links para os autores' arquivos submetidos original para imagens. 'arquivo original para a figura 1 12985_2011_1593_MOESM2_ESM.tiff Autores' 12985_2011_1593_MOESM1_ESM.tiff Autores arquivo original para a figura 2 12985_2011_1593_MOESM3_ESM.tiff Autores 'arquivo original para a figura 3 12985_2011_1593_MOESM4_ESM.tiff Autores' arquivo original para a figura 4 Conflito de interesses
Os autores declaram que têm interesses conflitantes.

• Um aumento da quinase ligada a integrina não confere vantagens de crescimento canonicamente NF-kB mediada por células cancerosas para gástricas através da activação de ERK1 /2
• adenocarcinoma gástrico vírus de Epstein-Barr infectados expressa transcritos virais latentes e líticos e tem um perfil distinto expressão do gene humano