Caractéristiques du virus d'Epstein barr variantes associées à un carcinome gastrique Tunisia

Sud Caractéristiques du virus d'Epstein barr variantes associées à un carcinome gastrique dans le sud de la Tunisie
Backgroud
EBV gastrique Carcinome (EBVaGC) de Résumé a une des caractéristiques cliniques distinctes et sa prévalence est variable dans le monde entier. Résultats de
Pour déterminer la prévalence de EBVaGC en Tunisie, petit ARN (EBER) expression de EBV-codé a été évaluée dans 81 carcinome gastrique (GC) spécimens. L'expression EBER nucléaire a été détectée dans 12 des 81 cas de GC (14,81%) et la concordance entre la plage de score de EBER coloration et le nombre de copies d'ADN EBV comme estimation par qPCR est observée. D'autre part, nous avons constaté que EBVaGC une forte corrélation avec l'âge au moment du diagnostic, et faiblement avec une différenciation de la tumeur et l'invasion veineuse.
En outre, les échantillons ont été soumis EBVaGC pour déterminer les polymorphismes d'ADN VEB. Nos résultats montrent un profil génétique unique des souches EBV en ce qui concerne les types A et D, le prototype F, la rétention de Xho de site de restriction I et 30 pb variante del-LMP1. Selon nos études antérieures sur le carcinome nasopharyngé (NPC), nous avons suggéré que les souches de EBV associés au GC et NPC partagent quelques similitudes chez les patients tunisiens.
Conclusion
La prévalence de EBVaGC est de 14,81% dans le sud de la Tunisie et que souche EBV commune sont associés à la fois NPC et GC qui sont susceptibles de différer des souches asiatiques. Nos résultats confirment donc une certaine répartition géographique des souches de EBV qui ne se limite à des tumeurs malignes associées à l'EBV.
Mots-clés
Gastric cancer EBV EBER polymorphismes Contexte
carcinome gastrique (GC) est la deuxième cause de décès par cancer dans le monde [1]. L'incidence de la GC varie d'une région géographique à l'autre, ce qui suggère que des facteurs génétiques et environnementaux, y compris l'infection de Helicobacter pylori sont considérés comme de contribuer à la cancérogenèse gastrique [2, 3]. Dans le sud de la Tunisie, l'incidence annuelle de GC varie de 2,6 à 4,8 /100 000 personnes [4]. Au cours des années passées, de nombreux rapports ont exploré l'association entre Epstein-Barr Virus (EBV) et GC [5-9]. Le GC est associée à l'EBV (EBVaGC) a été mise en évidence par la présence de l'expression uniforme du petit ARN EBV codé (EBER) dans des cellules GC [10], la détection des épisomes EBV monoclonaux dans les cellules GC [11] et l'augmentation du sérum des anticorps contre l'antigène de capside virale [12]. L'incidence de EBVaGC varie considérablement d'un 2 à 18% comme indiqué par des études antérieures [13-20]. De plus, les caractéristiques cliniques de EBVaGC comprennent prédominance masculine, relativement plus jeune âge et l'emplacement dans l'estomac proximal [9, 21]. Le EBVaGC montre un taux d'envahissement ganglionnaire et a un pronostic relativement favorable par rapport à EBV négatif d'un [22].
Dans EBVaGC, l'infection des cellules tumorales est caractérisée par un modèle de type I de latence, dans laquelle le l'expression des gènes viraux latents est limitée à l'antigène nucléaire d'Epstein-Barr (EBNA) -1, EBER, protéine membranaire latente LMP-2A et transcriptions du Bam HI
Un cadre à droite (BARF) -0 et -1 [11, 23]. Étant donné que les produits EBV de type I infection latente ont été démontrés être impliqués dans tumorogénèse EBV-médiée, il a été suggéré que le processus oncogénique dans EBVaGC pourrait être entraîné par des mécanismes différents de ceux du GC classique. Par la suite, EBVaGC malignité pourrait être considérée comme une entité différente parmi les GC qui exige une plus grande attention pour améliorer les soins aux patients.
La présente étude a été menée dans le but de déterminer la prévalence de EBVaGC dans le sud de la Tunisie, puis d'analyser les polymorphismes EBV spécifiques la tumeur isole. Matériaux et méthodes
caractéristiques de patients
Un total de 81 carcinomes gastriques primaires ont été recueillies, entre Janvier 1999 et Décembre 2009 de patients ayant subi une résection chirurgicale radicale à la chirurgie de Habib Bourguiba Département de digestive Hôpital Universitaire (Sfax, Tunisie). Tous les patients ont donné leur consentement préalable en connaissance de prélèvement des échantillons selon les directives institutionnelles. Aucun des patients ont eu une chimiothérapie pré-opératoire ou post-opératoire. paramètres clinico-pathologiques tels que le sexe, l'âge, le site anatomique, le type histologique, le stade pathologique, la taille de la tumeur et l'envahissement veineux ont été évalués par l'examen des dossiers médicaux et des dossiers pathologiques. Au moment de la chirurgie, l'âge des patients variait de 18 à 94 ans (moyenne: 59,58 ans). Le site anatomique de la tumeur a été déterminé en fonction de la position prédominante de la lésion en tant que cardia (n = 8), le corps (n = 22) et de l'antre (n = 48). Les sous-types histologiques ont été classés selon les critères de Lauren [24] comme type intestinal (n = 47) et type diffus (n = 34), mais aussi de l'Organisation mondiale de la santé mal différenciées (n = 43), modérément différenciés (n = 26) et bien différencié (n = 9). Le stade clinique de la maladie a été déterminée en fonction de la tumeur, les ganglions et les métastases (TNM) classement de l'American Joint Committee sur le cancer [25]. Notre cohorte contient 9 patients au stade I ou II et 47 patients au stade III ou IV.
Hybridation in-situ
EBV a été identifié par l'expression de petits ARN EBV-codé (EBER). En bref, l'hybridation de l'in situ (ISH) essai a été réalisé sur 3 um sections de paraffine séquencés avec des sondes VEB d'oligonucléotides complémentaires de la EBER-1 et -2, selon les instructions du fabricant (PNA kit de détection ISH, Dako Cytomation). Les signaux d'hybridation ont été visualisées avec de la diaminobenzidine (DAB) et le signal nucléaire positif a été reconnu comme une coloration nucléaire brun foncé en microscopie optique. Comme contrôle positif, la section d'un tissu connu EBER positif NPC a été utilisé. La coloration a été reçu entre 1 et 3 selon le pourcentage de noyaux de cellules colorées dans des coupes tissulaires. Score 3 a été attribuée lorsque le signal positif a été observée dans plus de 75%, score 2 dans 75 à 50% et le score 1 à moins de 50% des cellules. Extraction d'ADN

l'ADN a été extrait de la formaline fixe, de la paraffine tissus intégrés. Après identification de la tumeur sur-éosine teinté hématoxyline diapositives, les zones tumoraux ont été grattées de 40 um sections de paraffine épaisses. Les matériaux collectés ont été dé-cirés par lavage dans le xylène et rincés dans de l'éthanol. les tissus séchés ont été digérées avec la proteinase K en présence de SDS à 55 ° C pendant une nuit, suivie d'une extraction au phénol /chloroforme comme décrit précédemment [26]. La quantité d'ADN a été contrôlée par un spectrophotomètre et stocké à -20 ° C pour une utilisation ultérieure.
PCR- RFLP et les cinq régions de séquençage du génome de l'EBV ont été ciblées pour l'analyse du polymorphisme par PCR, RFLP ou par séquençage. Les polymorphismes étudiés comprennent le type A ou B dans le gène EBNA-3C, C ou du type D dans la région /I1 Bam HI-W1, le prototype F ou f variante dans la région Bam HI-F, la perte d'une Xhol
I site dans le premier exon du BNLF1gene (Xho
variante I-loss) et la suppression de 30 pb dans le troisième exon du même gène (30 pb variante del LMP1). Le génotypage a été effectué sur de l'ADN de patients atteints de GC-EBV positives et en tant que témoin, on analyse 10 échantillons d'ADN provenant de la muqueuse du nasopharynx positif pour l'EBV.
L'amplification par PCR a été réalisée sur 200 ng d'ADN dans un mélange réactionnel final de 50 pi contenant 0,2 pM de chaque amorce, 200 uM de dNTP, 2 mM de MgCl2, du tampon 1X PCR et 1 unité de Taq ADN polymerase (Fermentas). Les séquences d'amorce et de la taille des produits de PCR sont indiqués dans le Tableau 1 Résumé des 1.Table séquences d'amorces englobant les types EBV et les variantes
gènes d'EBV et les régions
(types ou des variants )
séquences d'amorce (5'-3 ')
taille du produit (pb)
EBNA-3C gène
(type A ou B)
F : AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT
R: PCR les produits de GGCTCGTTTTTGACGTCGGC
153: type A
246: type B
BamH1-W région
(type C ou D)
F: ACCTGCTACTCTTCGGAAAC
R: PCR + Bam
TCTGTCACAACCTCACTGTC
HI digestion
205: type C
130 + 75: Type D
BamH1-F région
(f variante)
F: TCCCACCTGTTACCACATTC 'R: GGCAATGGGACGTCTTGTAA
PCR + Bam HI
digestion
198: F variante
127 + 71: f variante
Exon 1 de BNLF1 gène
(Xhol variante)
F PCR + Xho de AGAAACACGCGTTACTCT
je digestion
497: Xho
I-
340 + 157: Xho
I +
Exon 3 BNLF1 gène
(30bpdel-LMP1)
F: R TGGAGGGAGAGTCAGTCAGGC: ATTGACGGAAGAGGTTGAAAAC
produits de PCR
224: 30bpdel-LMP1
254: wt-LMP1
F: amorce sens
R: Reverse primer
le C /D et F /f typage est basée sur la digestion de BamHI de chaque produit de PCR. Les réactions enzymatiques ont été réalisées dans un volume final de 20 ul contenant 10 ul de produit de PCR, un tampon de digestion 1X et 10 unités de Bam HI de l'enzyme (Fermentas). Après incubation pendant une nuit à 37 ° C, les produits ont été analysés sur gel d'agarose à 2% et visualisés par coloration au bromure d'éthidium, sous illumination UV. Les mêmes conditions décrites ci-dessus ont été évalués afin d'identifier le site de Xhol dans le premier exon du BNLF1gene. L'ADN de B95.8 (GenBank No.V01555) et la lignée cellulaire C666-1 (GenBank n ° ABV54173) ont été utilisées comme contrôle pour les types et variantes EBV. La lignée de cellules C666-1 dérivé d'un APN de Chine qui abrite les types A /C, la variante f, la variante I de perte de Xhol et 30 pb variantes del LMP1.
Le séquençage de l'ADN a été effectué sur les produits de PCR purifiés de le troisième exon du gène BNLF1 gel en utilisant le kit de purification SV (Promega). Le séquençage de cycle a été effectuée en utilisant le kit de séquençage de cycle ABI PRISM Big Dye Terminator (Applied Biosystems) selon les instructions du fabricant. Toutes les séquences ont été réalisées de manière bidirectionnelle. Les résultats du séquençage ont ensuite été comparés avec les séquences EBV de B95.8 (GenBank adhésion de No.V01555), PNJs chinois (cellules Cao [27], les cellules C666-1 (GenBank n ° ABV54173) et NPC10 biopsie [28] et tunisiens spécimens NPC (CV4, CV5, CV6 et [29]) par PCR quantitative en temps réel.

Q-PCR de dosage ciblant la région Bam HI-W du génome de l'EBV a été réalisée sur les échantillons 12 EBV-positifs présentant une coloration nucléaire et 6 VEB échantillons négatifs. les réactions ont été réalisées sur un ™ système de PCR en temps réel iCycler iQ (Bio-Rad), en utilisant des amorces flanquant la région Bam HI-W du génome de l'EBV et la sonde TaqMan comme décrit précédemment [30]. aliquote de 1 pg l'ADN a été utilisé pour l'amplification dans un volume réactionnel total de 25 ul contenant 300 nM de chaque amorce, 25 nM de sonde TaqMan, 1 x tampon PCR, 2 mM MgCl2, 200 pM de chaque dNTP et 1 unité de GoTaq Hot Start polymerase (Promega). la courbe standard a été préparé en utilisant des dilutions en série de 10 fois du plasmide recombinant pGEMT /BamHI-W. Les échantillons ont été analysés en double et la moyenne des résultats pour calculer la charge virale EBV exprimée en copies par réaction.
Analyse statistique
L'analyse statistique a été réalisée avec SPSS 13.0 logiciel de statistique pour Windows (SPSS Inc., Chicago, Illinois, États-Unis ). Résultats de P-valeur inférieure à 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
Prévalence de EBVaGC et d'association avec des caractéristiques clinico-pathologiques
Quatre-vingt un des spécimens de GC ont été testés pour la positivité de l'EBV en utilisant le EBER in situ
hybridation. La fréquence des EBVaGC était de 14,8% (12 sur 81), dans lequel le signal positif EBER a été limitée aux noyaux des cellules de carcinome (figure 1). Les échantillons ont EBVaGC un pourcentage variable de cellules tumorales colorées représentant plus de 75% dans les six cas (score 3), entre 50 et 75% dans les trois cas, et moins de 50% dans les trois cas restants. Les cas EBVaGC ont été associés à l'âge au moment du diagnostic (P = 0,009
, tableau 2). En effet, 9 des 12 patients atteints de EBVaGC étaient âgés entre 45 à 60 ans. Par ailleurs, une tendance à l'association n'a été observée avec une différenciation de la tumeur et l'invasion veineuse que la valeur statistiquement significative n'a pas été atteinte (P
= 0,07 et p = 0,09 respectivement
, tableau 2). Figure 1: Détection du virus Epstein-Barr (petits ARN codé Ebers) par hybridation in situ dans des tissus de carcinome gastrique. R: H & E coloration. B: EBER intense coloration positive (immuno-score 3+) dans les noyaux des cellules tumorales (grossissement × 40). C: EBER modérée coloration positive (immuno-score 2+) dans les noyaux des cellules tumorales (grossissement × 40). D: EBER faible coloration positive (immuno-score 1+) dans les noyaux des cellules tumorales (grossissement × 40). E: Contrôle positif représenté par un tissus connus EBER positifs NPC (grossissement × 40). F: les tissus de carcinome gastrique négatifs pour EBER (de grossissement × 10)
Tableau 2 Corrélation entre EBVaGC et paramètres clinico-pathologiques
Caractéristiques cliniques
N
EBV expression *


négatif (%)
positif (%)

Homme sexes
48
42 (87,5)
6 (12,5)
Femme
33
27 (81,8)
6 (18.2)
p
-value
0,47
Age
< 45
17
17 (100)
0 (0)
45-60
30
21 (70)
9 (30)
> 60
34
31 (91,2)
3 (8.8)
p
-value
0,009
TNM
I-II
9
9 (100)
0 (0)
III-IV
47
40 (87,1)
7 (14,9)
p
-value
0,216 Site
Anatomical

Antrum
48
41 (85,4)
7 (14,6)
Body
22
19 (86,4)
3 ( 13.6)
Cardia 8
6 (75)
2 (25)
p
-value
0,72
Différenciation
Pauvre
43
36 (83,7)
7 (16,3)
Modéré
26
25 (96,2)
1 (3,8)
bien
9
6 (66,7)
3 (33,3)
p
-value
0,075
Type Lauren
Intestinal
47
38 (80,9) 9
(19.1)
dIFFUSE
34
31 (91,2)
3 (8.8)
p
-value
0,197 taille
Tumor
< 5 cm
9
8 (88,9)
1 (11.1)
> 5 cm
65
54 (83,1)
11 (16,9)
p
-value
0,658
invasion Venous
Negatif
61
54 (88,5)
7 (11.5)
Positif
18
13 (72,2)
5 (27,8)
p
-value
0,09
* expression a été déterminée par VEB EBER hybridation in situ. cas négatifs présentaient un score = 0 et positifs cas ont montré un score = 1+ à 3+ évaluation
quantitative de l'EBV dans GC
test Q-PCR a été effectuée sur 18 échantillons de carcinome gastrique. parmi eux 12 affichés EBER positivité restreinte aux cellules noyaux et 6 ont été négatifs.
Le nombre viral de copies d'ADN a été estimée par la méthode de quantification absolue en utilisant une dilution en série de l'ADN plasmidique recombinant (pGEMT /BamHI-W), en tant que norme externe. Courbe standard a été établi en traçant les plasmidique à partir du nombre de copies contre le cycle seuil (Ct), montrant une quantification linéaire sur une plage de 10 6 à 10 copies par réaction.
exemples représentatifs sont présentés sur la figure 2 où les cas GC10 et GC3 (Ct = 15 et 22 respectivement) présentent une forte coloration nucléaire EBER alors GC8 (Ct = 30) présente une expression EBER faible (Figure 2). Les données Q-PCR est en concordance avec EBER le résultat de l'hybridation in situ de. En effet, les 6 échantillons avec intense coloration EBER (score 3+), ont montré EBV nombre élevé de copies d'ADN alors que les cas avec une faible expression EBER (score 1+) correspondaient à faible nombre de copies d'ADN viral (tableau 3). Figure 2 Détermination de l'ADN EBV nombre de copies par Q-PCR. Des exemples représentatifs de cas de GC à forte (GC10), intermédiaire (GC3) et faible (GC8) nombre de copies d'ADN EBV. La ligne horizontale marque le seuil utilisé pour l'évaluation de la valeur Ct.
Tableau 3 EBV nombre de copies d'ADN et EBER score coloration dans les 12 EBV échantillons positifs et 6 cas négatifs
GC Cases
histologiques
Tapez
Tumor
site
Ct *
(moyenne)

ADN EBV *
copies /pg
EBER coloration
marquer
10
Intestinal
Antrum
15
6.105
3+ 22
4.103
3+
12
Intestinal
Antrum
23
103
3
Intestinal
Antrum 3+
9
dIFFUSE
22,8
103
3+ 2
Intestinal
Body
Antrum
25
5.102
3+ 26
102
3+
6
Intestinal
proximal de 4
Intestinal
Antrum
27
8.101
2+
7
diffuse
Body
28
5.101
2+
11
Intestinal
proximal
28
5.101
2+ 1
Intestinal
Antrum
30
< 10
1+
30
<
5
Intestinal
Antrum; 10
1+ 8
Diffuse
Body
30
< 10
1+
13
Diffuse
Antrum
ND | ND | 0
14
Diffuse
corps
ND ND de
0
15
diffuse
Antrum
ND | ND | 0
16
diffuse
Antrum
ND ND |
0
17
Intestinal
Antrum
ND | ND | 0
18
Intestinal
corps
ND | ND | 0
* nombre de copies d'ADN de VEB a été estimée par Q-PCR en utilisant la méthode de quantification absolue. Ct: Cycle de seuil. ND: Non Déterminé
génotypage des souches EBVaGC
Pour étudier plus avant la EBVaGC dans nos 12 spécimens tunisiens, nous avons examiné le profil génétique des souches de EBV déterminer les différents types et variantes. Un profil unique dans tous les spécimens étudiés est observé (figure 3). Il a été caractérisé par les types A /D, prototype F, la rétention des Xho de site de restriction I et 30 pb variante del-LMP1. Nous notons que les types A et B de mise en forme de deux souches de EBV ont été trouvées dans un cas de spécimens EBVaGC (Figure 3). La figure 3 génotypage des souches EBVaGC. R: -RFLP PCR de la région Bam HI-F montrant la variante f (présence de deux bandes de 128 pb et 71 pb) pour la lignée de cellules C666-1 de commande (piste 1) et une bande de 199 pb pour la variante F cas GC2 à CG6 (piste 2 à 6). B: PCR-RFLP de la région /I1 BamHI-W1. Les fragments d'ADN ont été digérés avec BamHI
donnant deux bandes de 139 et 67 pb (type D) pour GC2 à CG6 (piste 2 à 6) ou une bande de 245 pb (type C) pour la ligne de contrôle de cellules C666-1 ( piste 1). C: région de EBNA3C. souches EBV de type A et B correspondent au fragment d'ADN de 153 et 246 pb, respectivement. Case CG6 montre une double infection avec les deux types A et les virus B. B95.8 est un virus de type A qui a été utilisé comme témoin (piste 1). D: Xhol s polymorphisme dans l'exon 1 du gène BNLF1. produit de PCR a été digéré par Xhol
pour obtenir deux bandes de 343 pb et 154 pb + Xhol
variante pour GC2 à CG6 (piste 2 à 6). lignée de cellules C666-1 est un facteur positif de la variante de la perte Xhol (piste 1).
L'analyse de l'ADN d'EBV a également été réalisée par un séquençage partiel sur le troisième exon du gène codant pour BNLF1 acides aminés 328-376 de la protéine LMP1. Afin de confirmer le 30 pb codant pour la deletion des acides aminés 343-352 de la protéine LMP1, l'alignement des séquences a révélé sept acides aminés des changements par rapport à la souche de référence B95.8. Il a été constamment trouvé à codons Q334R, L338S et S366A dans tous les spécimens EBVaGC. Les substitutions d'acides aminés restants, cependant, ont été spécialement trouvés dans un ou deux échantillons EBVaGC: H358L et L359V (GC2), P360H (GC9-10) et G365R (GC6). En ce qui concerne nos données antérieures sur les spécimens tunisiens NPC, nous avons trouvé des résultats similaires sur les trois constantes amino-acides substitutions. En outre, les souches de EBV hébergeant la substitution S366A semblent plus associée à des spécimens tunisiens par rapport à celles définies en Chine (Figure 4). Figure 4: Comparaison des séquences déduites d'acides aminés de GC tunisien avec prototype B95.8 et séquences LMP1 précédemment publiées: Cao: lignée cellulaire NPC de Shanghai [27]; C666-1 (GenBank n ° ABV54173) NPC 10 de Hong Kong [28] et les spécimens tunisiens NPC: CV4, CV5, CV6 [29]. Symboles (---) indiquent deletion de l'acide aminé.
Chez les porteurs sains de l'EBV, l'analyse du polymorphisme a montré également les types A et D, F prototype et Xhol + variante, comme similaires pour identifier des spécimens EBVaGC (données non présentées).
Discussion
Dans la présente étude, 81 cas de GC de patients de la région sud de la Tunisie ont été étudiées pour la présence de l'EBV et la prévalence de EBVaGC était de 14,8% (12 sur 81). Il était bien connu que la prévalence de EBVaGC varie considérablement d'une région géographique à l'autre et la plus haute fréquence a été noté en Allemagne (18%), tandis que la plus faible (3,9%) a été détecté au Pérou [13-20, 31]. l'hybridation in situ de la méthode la plus fiable rapportée dans la littérature pour détecter VEB latente GC. En fait, toutes les études mentionnées ci-dessus ont été réalisés suivant cette méthode, y compris notre étude. Les proportions variables des cellules tumorales qui expriment nucléaires EBER démontrant dans notre étude ont également été déduites par Truong et al., Qui suggèrent être liée à une infection à EBV a lieu dans le processus oncogénique de EBVaGC [32]. Cependant, d'autres investigations doivent être menées afin de clarifier cette observation.
En outre, nous avons montré que les données hétérogènes d'expression EBER pourraient être en corrélation avec le nombre de copies d'ADN EBV estimée par Q-PCR soutient que cette méthode est fiable rapporté précédemment [33].
en ce qui concerne les caractéristiques clinico-pathologiques de EBVaGC, forte association avec l'âge au moment du diagnostic a été observée (P = 0,009
, tableau 3). En fait, le EBVaGC était plus fréquemment trouvée dans le groupe de patients âgés entre 45 et 60 ans, ce qui est conforme aux études précédentes [19, 34]. Aucune autre association statistique a été trouvé, sauf une tendance à la différenciation de la tumeur et l'invasion veineuse (P = 0,075
et P
respectivement = 0,09). Les rapports précédents ont indiqué que EBVaGC étaient fréquentes chez le mâle, l'estomac et les tumeurs de type diffus [9, 14, 16, 35-39] proximal. Récemment, dans une grande méta-analyse, Camargo et al., Confirme ces associations, en plus de l'âge au moment du diagnostic [38]. Dans notre étude, nous n'avons pas trouvé de différence dans la distribution de l'EBV chez les mâles par rapport aux patientes en proximal vs estomac distal et diffus vs histotype intestinal. Ces variations entre les données pourraient être expliquées par la contribution des facteurs de risque locaux dans la pathogenèse de l'EBV et aussi par la taille et charasteristics de la cohorte.
Analyse du polymorphisme des cas de EBVaGC 12 montrent exclusivement le type D, prototype F, Xho
I-rétention et le 30 pb variante del-LMP1. En ce qui concerne le polymorphisme du gène EBNA-3C, nous avons trouvé le type A dans tous les cas de EBVaGC et une combinaison de types A et B a été trouvé dans un seul cas. Ces résultats sont en accord avec l'étude récente menée sur quatre cas EBVaGC de la région centrale de la Tunisie [34].
La prédominance de type A et prototype F a également été présentés dans les rapports précédents, indépendamment de l'origine géographique des EBVaGC que dans le sud Chine [35], le sud du Japon [40], et les pays d'Amérique latine [41]. Fait intéressant, la variante-f a été décrite notamment dans le NPC associé souches EBV de l'Asie du sud [42]. Dans ce domaine, une prédominance de type C et la perte-Xhol
variante a été observée chez les patients avec EBVaGC ou NPC [35, 40], contrairement à notre constatation actuelle et les données antérieures sur les patients tunisiens NPC [29, 43].
pour mieux définir le génotype des souches EBVaGC et les comparer avec ceux associés à l'APN, nous avons réalisé le séquençage partiel de l'exon 3 du gène BNLF1 et les avons comparés au prototype B95-8 et d'autres séquences publiées à partir de l'Asie et souches tunisiennes NPC EBV [29, 43]. Le Q334R, L338S et L338P ont été trouvés dans les isolats tous nos EBV et ont déjà été signalé dans les souches de EBV associés au PNJ originaires de Chine ou de la Tunisie [29, 44]. Cependant, le S366A est spécifique à EBV isolats associés à l'APN tunisien et GC .. En effet, et sur la base du rapport précédent de Edwards et al. , [44] décrivant sept souches phylogénétiquement distinctes de LMP1, nous pouvons proposer que les isolats tunisiens constituent un groupe supplémentaire avec une signature spécifique (T366A), mais cette hypothèse a besoin de confirmation par séquençage du gène BNLF1 entier dans ces isolats. Selon cette date, nous suggérons que le polymorphisme du gène BNLF1 constitue un argument supplémentaire en ligne avec les polymorphismes d'autres EBV (type D, prototype F et Xhol +) supportant la dissemblance des souches EBV entre les deux régions géographiques.
Sur la D'autre part, nous avons décrit précédemment
autres variantes del-LMP1 (69 pb et 81 pb codons suppression couvrant 334-353 et 345-371, respectivement) chez les patients NPC tunisiens [29, 43]. Ces variantes sont introuvables et seulement 30 pb variante del-LMP1 a été identifié dans tous les cas de EBVaGC comme déjà rapportées par Chen et al., Dans une vaste étude menée sur des patients du GC chinois [35].
Notre analyse du polymorphisme de l'EBV isolats chez les porteurs sains ont révélé un génotype identique à ceux de EBVaGC et NPC suggérant que les souches communes sont réparties géographiquement, mais pas associés à une tumeur maligne spécifique. En fait, le développement de l'EBV associé malignités pourrait être corrélée à la variation de la reconnaissance immunitaire potentielle des populations et des individus distincts, tel que proposé par Edwards et al [44].
Conclusion
La prévalence de EBVaGC chez les patients du sud La Tunisie est de 14,8%, ce qui est à portée avec les données déclarées. Le EBVaGC a été principalement trouvé dans le groupe des patients âgés de 45 à 60 ans et que le niveau d'ADN de EBV refléter l'état EBER dans le carcinome gastrique.
En outre, les souches de EBV associés aux patients tunisiens avec GC ou NPC partagent certaines similitudes suggérant que probablement la même souche de EBV sont associés à des tumeurs. Déclarations de l'ensemble, nos résultats soutiennent les différents répartition géographique des souches EBV, mais pas leur restriction à une tumeur maligne associée.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par une subvention du ministère tunisien de l'Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique . Nous tenons à remercier M. M Jaoua pour les installations de séquençage.
Auteurs fichiers originaux soumis pour les images
Voici les liens vers les auteurs originaux soumis les fichiers pour les images. de fichier d'origine pour la figure 1 12985_2011_1593_MOESM2_ESM.tiff Auteurs Auteurs 12985_2011_1593_MOESM1_ESM.tiff fichier d'origine pour la figure 2 12985_2011_1593_MOESM3_ESM.tiff Auteurs 'fichier d'origine pour la figure 3 12985_2011_1593_MOESM4_ESM.tiff Auteurs fichier d'origine pour la figure 4 Intérêts concurrents
Les auteurs déclarent qu'ils avoir aucun conflit d'intérêts.

• Une augmentation de la kinase liée aux intégrines confère non canoniquement avantages de la croissance de NF-kB à médiation par les cellules cancéreuses gastriques par activation de ERK1 /2
• adénocarcinome gastrique virus d'Epstein-barr infectés exprime transcrits viraux latents et lytiques et a un virus de l'expression du gène humain profile