Charakteristikos Epstein Barr viruso variantai susijęs su skrandžio karcinoma Pietų Tunisia

charakteristikų Epstein Barr viruso variantai susijęs su skrandžio karcinoma Pietų Tunise pervežimas tezės
backgroud
EBV susijusių skrandžio karcinoma (EBVaGC) turi atskirą klinikiniai požymiai ir jos paplitimas yra nevienodas visame pasaulyje rezultatai.

Norėdami nustatyti EBVaGC paplitimą Tunise, EBV užkoduota mažas RNR (Ebera) išraiška buvo vertinama 81 skrandžio karcinoma (GC) egzempliorių. Branduolinis Ebera išraiška buvo aptikta 12 iš 81 GC atvejais (14,81%) ir atitiktis tarp balų diapazone Ebera dažymo ir EBV DNR kopijų kaip sąmata QPCR skaičius yra stebimas. Kita vertus, mes nustatėme, kad EBVaGC stipriai koreliuoja su amžiumi diagnozės, ir silpnai su naviko diferenciacijos ir venų invazijos.
Be to, EBVaGC mėginiai buvo atliekami, siekiant nustatyti EBV DNR polimorfizmas. Mūsų rezultatai rodo unikalų genetinį profilį EBV padermių dėl A ir D tipų, F prototipas, apie Xho
i apribojimas svetainėje susilaikymas ir 30 bp Del-LMP1 variantas. Pagal mūsų ankstesnių tyrimų nosiaryklės karcinomą (NPC), mes pasiūlėme, kad EBV kamienai, susijusios su GC ir NPC dalijamasi tam tikrų panašumų į Tuniso pacientams.
Išvada
iš EBVaGC paplitimas yra 14.81% pietinėje Tunise ir kad bendra EBV padermės yra susijęs su tiek NPC ir GC, kurios gali skirtis nuo Azijos padermių. Todėl mūsų išvados remti tam tikrą geografinį pasiskirstymą EBV padermės, kurios neapsiriboja EBV susijusių piktybinių navikų.
Raktiniai žodžiai
Skrandžio vėžys EBV Ebera polimorfizmas Background
Skrandžio vėžio (GC) yra antra pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirties visame pasaulyje [1]. GC dažnis svyruoja nuo vieno geografinio regiono į kitą, o tai rodo, kad genetiniai ir aplinkos veiksniai, įskaitant Helicobacter pylori
infekcijos yra laikomi prisidėti prie skrandžio kancerogenezėje [2, 3]. Pietų Tunise, metinė dažnis GC svyruoja nuo 2,6 iki 4,8 /100 000 asmenų [4]. Per kelerius pastaruosius metus, daugelis ataskaitos ištirta tarp Epstein-Barr virusas (EBV) infekcijos ir GC [5-9] asociaciją. EBV susijusių GC (EBVaGC) buvo matyti iš vienodo išraiška EBV koduotas mažas RNR (Ebera) buvimą GC ląstelių [10] monokloninių EBV episomes aptikimo GC ląstelių [11] ir serumo padidinti antikūnai prieš virusinės kapsidės antigeno [12]. Iš EBVaGC dažnis svyruoja nuo 2 iki 18%, kaip pranešė ankstesnių tyrimų [13-20]. Be to, klinikiniai požymiai EBVaGC apima vyrų dominavimą, palyginti jaunesnio amžiaus ir vietą proksimalinio skrandžio [9, 21]. EBVaGC rodo mažesnę normą limfos-mazgas dalyvavimo ir yra santykinai palanki prognozė, palyginti su EBV-neigiamas vieną [22].
EBVaGC, infekcija, vėžinių ląstelių yra būdingas I tipo modelis delsos, kuriame išraiška virusinių latentinių genų yra tik Epstein-Barr branduolinės antigeno (EBNA) -1, Ebera, latentinis membranos baltymo LMP-2A ir nuorašai iš Bam
HI dešinėn rėmas (barf) -0 ir -1 [11, 23]. Nuo EBV produktų I tipo latentinė infekcija buvo įrodyta, kad būti įtraukti į EBV tarpininkaujant tumorogenesis, buvo pasiūlyta, kad onkogeninė procesas EBVaGC gali būti varoma įvairiais mechanizmais nuo įprastinių GC. Vėliau EBVaGC piktybinis navikas gali būti laikoma kitokia subjekto tarp GC, kuris reikalauja daugiau dėmesio, siekiant pagerinti pacientų priežiūrą.
Dabartinis tyrimas buvo atliktas, siekiant nustatyti EBVaGC paplitimą pietų Tunise, o vėliau analizuoti konkrečius EBV polimorfizmai navikas izoliatai.
medžiagos ir metodai
pacientų charakteristikos
A 81 pirminių skrandžio karcinoma viso buvo surinkta, nuo 1999 sausio iki 2009 gruodžio iš pacientų, kuriems buvo atlikta radikali chirurginė rezekcija tuo departamentas virškinimo chirurgijos Habib Bourguiba universitetinė ligoninė (Sfax, Tunisas). Visi pacientai davė informuoti pritarimą MĖGINIŲ ĖMIMAS pagal įstaigoje patvirtintas gaires. Nė vienas iš pacientų prieš operaciją ar pooperaciniam chemoterapija. Klinikos-patologinis parametrus, tokius kaip lytis, amžius, anatomijos svetainėje, histologinio tipo, patologinės etape, naviko dydžio ir venų invazijos buvo įvertintos peržiūrint medicinos diagramas ir patologinių įrašus. Tuo operacijos metu, pacientų amžius svyravo nuo 18 iki 94 metų (vidurkis: 59.58 metų). Anatominė svetainę naviko buvo nustatytas pagal vyraujantį vietą pakenkimų, kaip Cardia (n = 8), korpusas (n = 22), ir Ertmė (n = 48). Histologinės potipių buvo klasifikuojami pagal Lauren [24] kriterijai, kaip žarnyno tipą (N = 47) ir difuzinio tipo (n = 34), bet ir Pasaulio sveikatos organizacijos, kaip blogai diferencijuota (n = 43), vidutiniškai diferencijuoti (N = 26) ir gerai diferencijuoti (n = 9). Klinikinis ligos stadijoje buvo nustatomas atsižvelgiant į naviko, mazgas ir metastazės (TNM) klasifikaciją Amerikos jungtinio komiteto vėžio [25]. Mūsų kohortos yra 9 pacientai, esant I ir II stadijos ir 47 pacientus, kuriems yra III arba IV stadijos.
In situ hibridizacija
EBV buvo atpažinti pagal EBV koduotas mažas RNR (Ebera) išraiška. Trumpai tariant, in situ hibridizacijos
(ISH) Analizės buvo atliktas 3 mkm parafino blokas skyriuose EBV Oligonųkleotidų zondai papildančių Ebera-1 ir -2 pagal gamintojo nurodymus (PNA ISH aptikimo KIT, Dako Cytomation). Hibridizacijos signalai buvo ryškinamos su diaminobenzidinu (DAB) ir teigiamo branduolinės signalas buvo pripažintas tamsiai rudos branduolinės dažymo pagal šviesos mikroskopu. Kaip teigiamą kontrolę, buvo naudojamas skyriuje iš žinomo Ebera teigiamas NPC audinio. Dažymo pelnytas nuo 1 iki 3 pagal dažytų ląstelių branduolių procentais audinių pjūvių. Balas 3 buvo priskirta, kai teigiamas signalas buvo stebimas daugiau nei 75%, rezultatas 2, 75 iki 50% ir rezultatas 1 per mažiau nei 50% ląstelių.
DNR ekstrakcija
DNR buvo išskirta iš formalino fiksuotas, parafino įterptųjų audiniuose. Po auglio identifikavimą hematoksilinu-eozinas tamsintas skaidres, navikinės teritorijos buvo pavogta iš 40 mkm storio parafino skyriuose. Surinkti medžiagos buvo de-vašku plaunant į ksileno ir perskalauti etanolio. Džiovinti audiniai buvo suardomas su proteinazės K, dalyvaujant SDS 55 ° C temperatūroje per naktį, po to fenolis /ekstrahuojant chloroformu, kaip aprašyta anksčiau [26]. DNR kiekis buvo tikrinamas spektrofotometru ir laikomas -20 ° C tolesniam naudojimui.
PCR- RKIP ir sekos
Penki regionai EBV genomo buvo skirti už Polimorfizmas analizės PGR, RFIP ar sekos. Tirti polimorfizmas apimti A arba B tipo į EBNA-3C geno, pateikiama C arba D tipo į BamHI-W1 /I1 regionas, prototipą F arba F variantas į BamHI-F regione, pranešė apie Xho nuostolius
Aš svetainė pirmoje egzono iš BNLF1gene (Xho
i-nuostolių variantas) ir 30 bp išbraukta trečiame egzono to paties geno (30 BP del-LMP1 variantas). Genotipo buvo atliktas DNR GC pacientų EBV-teigiamas ir valdymo, analizuojame 10 DNR mėginius iš nosiaryklės gleivinės teigiamas EBV.
PGR amplifikacija buvo atliktas 200 ng DNR galutinis reakcijos mišinio iš 50 įxL kuriame yra 0,2 mkm iš kiekvienas gruntas, 200 mkm iš dNTP, 2 mm MgCl2, 1x PGR buferio ir 1 vienetas Taq DNR polimerazės (Fermentas). Grunto sekas ir PGR produktų dydis rodomi lentelė 1.Table 1 santrauka pradmenų sekas, apimančių EBV tipus ir variantus
EBV genų ir regionai
(tipuose ar variantuose )
Primer sekas (5'-3 ')
Prekės dydis (bp)
EBNA-3C genas
(A tipo arba B)
F : AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT
R GGCTCGTTTTTGACGTCGGC
produktai PGR
153: A tipo
246: B tipo
BamH1-W regionas pervežimas (tipas C arba D) pervežimas F: ACCTGCTACTCTTCGGAAAC
R TCTGTCACAACCTCACTGTC
PGR + Bam
HI virškinimas
205: C tipo
130 + 75: D tipo
BamH1-f regionas
(f variantas)
f: TCCCACCTGTTACCACATTC
R GGCAATGGGACGTCTTGTAA
PGR + Bam
HI virškinimas
198 f variantas
127 + 71: f variantas
Exon 1 iš BNLF1 genų
(Xhol variantas)
F: ACAATGCCTGTCCGTGCA
R AGAAACACGCGTTACTCT
PGR + Xho
Aš virškinimą
497: Xho
I-
340 + 157: Xho
I +
Exon 3 BNLF1 genų
(30bpdel-LMP1)
F TGGAGGGAGAGTCAGTCAGGC
R ATTGACGGAAGAGGTTGAAAAC
PGR produktų
224: 30bpdel-LMP1
254: WT-LMP1
F Persiųsti gruntas
R: atvirkštinė gruntą
C /d ir f /f, geno tipą, remiantis BamHI
virškinimo kiekvieno PGR produkto. Fermentinio reakcijos buvo atliekamas galutinis tūris 20 pL, kurių sudėtyje yra 10 pL PGR produkto, 1x virškinimo buferio ir 10 vienetų BamHI
fermento (Fermentas). Po nakties inkubacijos 37 ° C temperatūroje, produktai buvo analizuojamos remiantis 2% agarozės gelyje ir vizualizuojami etidžio bromido dažymo, pagal UV apšvietimas. Tos pačios sąlygos Aukščiau aprašytos buvo vertinamas siekiant nustatyti Xhol Svetainės pirmoje egzono iš BNLF1gene. DNR iš B95.8 (GenBank prisijungimas No.V01555) ir C666-1 ląstelių linijos (GenBank prisijungimas Nr ABV54173) buvo naudojami kaip kontrolės EBV tipų ir variantų. C666-1 ląstelių linija kilęs iš Kinijos NPC, kad priglaudžia /C tipų, F variantas, Xho
Aš nuostolių variantas ir 30 bp Del-LMP1 variantas.
DNR sekos buvo atliktas išgrynintus PGR produktų trečioji Exon nuo BNLF1 geno naudojant SV gelis gryninimo rinkinį (PROMEGA). Ciklo sekos buvo atliekama naudojant ABI PRISM Didelis Dažų Terminatorius ciklas Sequencing rinkinį (Applied BIOSYSTEMS) pagal gamintojo instrukcijas. Visi sekos buvo atlikta BI-kryptingai. Tuomet sekvenavimo rezultatai buvo palyginti su EBV sekų B95.8 (GenBank prisijungimas No.V01555), kinų NPC (CaO saugos standartus [27], C666-1 ląstelių (GenBank prisijungimas Nr ABV54173) ir NPC10 biopsijos [28] ir Tuniso NPC pavyzdžiai (CV4, CV5 ir CV6 [29]).
Realaus laiko kiekybine PGR
K-PGR orientacija BamHI-W regioną EBV genomo buvo atliktas 12 EBV mėginius, kuriuose pasireiškė branduolinę dažymo ir 6 EBV neigiamus mėginius. reakcijos buvo atliekamas ant iCycler iQ ™ Realaus laiko PGR sistema (BioRed), naudojant pradmenis gretutines BamHI-W regioną EBV genomo ir TaqMan zondas, kaip apibūdinta anksčiau [30]. alikvotinės 1 mikrogramų DNR buvo naudojamas amplifikacijos nustatyta, kad visa reakcijos tūrio 25 pL, kurių sudėtyje yra 300 nm bangos ilgio kiekvieno gruntas, 25 nM TaqMan zondo, 1X PGR buferio, 2mM MgCl2, 200 mikromolių kiekvieno dNTP ir 1 vienetas GoTaq karšto paleidimo polimerazės (Promega). standartinis kreivė buvo pagamintas naudojant serijos 10-atskiedimus rekombinantinio plazmidės pGEMT /BamHI-W. Mėginiai buvo paleisti dviem egzemplioriais ir rezultatai vidutiniškai apskaičiuoti EBV viruso apkrovą, išreikštą kopijų per reakcijos.
Statistinė analizė
Statistinė analizė atlikta SPSS 13.0 statistinės programinės įrangos Windows (SPSS Inc., Chicago, Ilinojus, JAV ). P vertė yra mažesnė kaip 0,05 buvo laikomi statistiškai reikšmingas.
Rezultatai
paplitimas EBVaGC ir kartu su klinikos-patologinis savybių
aštuoniasdešimt vienas egzempliorius GC buvo analizuotos EBV pozityvumo naudojant Ebera in situ
hibridizacija. Iš EBVaGC dažnis buvo 14,8% (12 iš 81), kurioje Ebera teigiamas signalas buvo apsiriboja karcinoma ląstelių branduolių (1 paveikslas). Į EBVaGC egzemplioriai kintama dalis tamsintas vėžinių ląstelių rodo daugiau kaip 75% šešiais atvejais (Finišavo 3), tarp 50 ir 75% trimis atvejais ir mažiau nei 50% likusių trijų atvejų. Į EBVaGC atvejai buvo susiję su amžiumi diagnozės (p
= 0,009, 2 lentelę). Iš tiesų, 9 iš 12 pacientų, sergančių EBVaGC buvo vyresni tarp 45 iki 60 metų. Be to, tendencija asociacijos buvo pastebėtas su naviko diferenciacijos ir venų invazijos kaip nebuvo pasiekta statiškai reikšmingas vertė (P, pervežimas = 0,07 ir p = 0,09
atitinkamai, 2 lentelė). 1 pav aptikimas Epstein-Barr virusas užkoduota mažų RNR (Ebers) pagal in situ hibridizacijos skrandžio karcinoma audiniuose. A: O & E dažymo. B Intensyvus Ebera teigiamas dažymo (imuninės rezultatas 3+) į vėžinių ląstelių branduolių (originalas didinimas × 40). C: Vidutinis Ebera teigiamas dažymo (imuninės rezultatas 2+) į vėžinių ląstelių branduolių (originalas didinimas × 40). D: Silpnas Ebera teigiamas dažymo (imuninės rezultatas 1+) į vėžinių ląstelių branduolių (originalas didinimas × 40). El: Teigiamas kontrolinis atstovauja žinomų Ebera teigiamas NPC audinių (originalas didinimas × 40). F: Skrandžio vėžys audiniai neigiamas Ebera (originalus didinimas × 10)
2 lentelė Koreliacija tarp EBVaGC ir klinikos-patologinis parametrų
klinikines charakteristikas
N
EBV išraiška *


neigiamas (%)
Teigiamas (%)

Lyčių

Vyras
48
42 (87,5)
6 (12,5)
Moteris
33
27 (81,8)
6 (18,2)
psl
-Pridėtinės
0,47
amžius
< 45
17
17 (100)
0 (0)
45-60
30
21 (70)
9 (30)
> 60
34
31 (91,2)
3 (8,8)
psl
-Pridėtinės
0,009
TNM
I-II
9
9 (100)
0 (0)
III-IV
47
40 (87,1)
7 (14,9)
psl
-Pridėtinės
0,216
Anatominis svetainė

Ertmė
48
41 (85,4)
7 (14,6)
Kūno
22
19 (86,4)
3 ( 13,6)
Cardia
8
6 (75)
2 (25)
psl
-Pridėtinės
0,72
diferenciacija pervežimas pervežimas Poor
43
36 (83,7)
7 (16,3)
Vidutinis
26
25 (96,2)
1 (3,8)
Na
9
6 (66,7)
3 (33,3)
psl
-Pridėtinės
0,075
Lauren tipas
Žarnų
47
38 (80,9)
9 (19,1)
Difuzinė
34
31 (91,2)
3 (8,8)
psl
-Pridėtinės
0,197
naviko dydis
< 5 cm
9 (88,9)
8 1 (11.1)
> 5 cm
65
54 (83,1)
11 (16,9)
psl
-Pridėtinės
0,658
Venų invazija
negatif
61
54 (88,5)
7 (11,5)
pOSITIF
18
13 (72,2)
5 (27,8)
psl
-Pridėtinės
0,09
* EBV išraiška buvo nustatomas pagal Ebera in-situ hibridizacijos. Neigiami atvejai eksponuojami rezultatas = 0 ir teigiamų atvejų parodė rezultatą = 1+ į 3+
Kiekybinis vertinimas EBV GC
K-PGR buvo atliekama 18 skrandžio karcinoma egzempliorių.; tarp jų 12 rodomas Ebera pozityvumo tik ląstelių branduoliai ir 6 buvo neigiami.
virusinė DNR kopijų skaičiaus buvo įvertintas absoliučiu kiekybinio metodo, naudojant serijos atskiesti rekombinantinio plazmidžių DNR (pGEMT /BamHI-W), o išorės standartą. Standartinė kreivė buvo įkurta braižymo pradinė plazmidės kopijų skaičius nuo slenkstinės ciklo (CT), rodo tiesinę kiekybiškai per diapazone nuo 10 nuo 6 iki 10 kopijų per reakciją.
Tipinius pavyzdžius pateikti 2 paveiksle, kai jame GC10 ir GC3 (Ct = atitinkamai 15 ir 22) parodyti tvirtą Ebera branduolinę dažymo o GC8 (Ct = 30) rodo silpną Ebera išraiška (2 paveikslas). Q-PGR duomenys yra nuoseklūs su Ebera in situ hibridizacijos
rezultatas. Iš tiesų, 6 bandiniai su intensyvaus Ebera dažymo (Finišavo 3+), parodė aukštą EBV DNR kopijų skaičiaus kadangi kai su silpna Ebera išraiškos (Finišavo 1+) atitiko mažas viruso DNR kopijos (3 lentelė). 2 pav nustatymas EBV DNR kopijų skaičių Q-PGR. Reprezentacinės pavyzdžiai GC atvejais su dideliu (GC10), tarpinis (GC3) ir mažas (GC8) EBV DNR kopijų skaičių. Horizontali linija žymi ribą, naudojamą vertinant Ct reikšmė.
3 lentelė EBV DNR kopijų skaičiaus ir Ebera dažymo rezultatas per 12 EBV teigiamų pavyzdžių ir 6 neigiami atvejai
GC atvejai
histologinis
Įveskite
naviko Svetainės
ct *
(vidurkis)

Baro DNR *
kopijos /ug
Ebera dažymo
rezultatas
10
Žarnų
Ertmė
15
6,105
3+
3
žarnyno
Ertmė
22
4,103
3+
12
žarnyno
Ertmė
23
103
3+
9
Difuzinė
Ertmė
22,8
103
3+
2
Žarnų
Kūno
25
5,102
3+
4
žarnyno
Ertmė
26
102
3+
6
žarnyno
Proksimalinės
27
8,101
2+
7
Difuzinė
Kūno
28
5,101
2+
11
Žarnų
Proksimalinės
28
5,101
2+
1
Žarnų
Ertmė
30
< 10
1+
5
žarnyno
Ertmė
30
< 10
1+
8
Difuzinė
Kūno
30
< 10
1+
13
Difuzinė
Ertmė
ND
ND
0
14
Difuzinė
Kūno
ND
ND
0
15
Difuzinė
Ertmė
ND
ND
0
16
Difuzinė
Ertmė
ND
ND
0
Žarnų
17
Ertmė
ND
ND
0
Žarnų
18
Kūno
ND
ND
0
* EBV DNR kopijų skaičiaus buvo įvertintas Q-PGR naudojant absoliučią kiekybinio nustatymo metodo. KT: riba ciklas. Nd: Ne Nustatyta
genotipo EBVaGC padermių
toliau tirti mūsų 12 Tuniso egzempliorių EBVaGC, mes išnagrinėjome genetinę profilį EBV padermių lemiamas įvairių tipų ir variantų. Unikalus aprašymą visiems tirtiems egzempliorių yra stebimas (3 pav.) Jis buvo apibūdinamas a /d tipų, prototipas F išlaikymas Xho
i apribojimas svetainėje ir 30 bp Del-LMP1 variantas. Atkreipiame dėmesį, kad A ir B tipų formuojant du skirtingus EBV kamienai buvo rasta vienoje atveju EBVaGC egzempliorių (3 paveikslas). 3 pav genotipo EBVaGC padermių. A: PGR -RFLP iš BamHI-F regione, kuriame F variantas (buvimas dviejų juostų 128 bp ir 71 bp) už kontrolinės C666-1 ląstelių linijos (Lane 1) ir vienas juostos 199 bp už F variantas už atvejų GC2 į GC6 (Lane 2 iki 6). B: PGR-RFLP iš BamHI-W1 /I1 regione. DNR fragmentai buvo BamHI
prieš dvi juostas 139 ir 67 bp (D tipo) skirtas GC2 į GC6 (Lane 2 ir 6), arba vienas juostos 245 bp (tipas C) kontrolė C666-1 ląstelių linijos ( 1 takelis). C: EBNA3C regionas. EBV kamienai A ir B tipai atitinka DNR fragmento 153 ir 246 bp atitinkamai. Byla GC6 rodo dvigubą infekcija su abiejų tipų A ir B virusų. B95.8 yra A tipo virusas, kuris buvo naudojamas kaip kontrolės (takelis 1). D: Xhol
polimorfizmas egzono 1 d BNLF1 geno. PGR produktas buvo suardomas Xhol
duoti du juostų 343 bp ir 154 bp Xhol pervežimas + variantas GC2 į GC6 (Lane 2 iki 6). C666-1 ląstelių linija yra teigiamas nuostolinga Xhol
variante (Lane 1).
EBV DNR analizę taip pat buvo atlikta dalinės sekos trečią egzono iš BNLF1 geno, koduojančio amino rūgščių 328 376 LMP1 baltymų. Siekiant patvirtinti 30 bp išbraukta kodavimo Aminorūgštys 343 iki 352 LMP1 baltymų, seka išlyginimas atskleidė septynis Aminorūgštys pokyčius palyginti su nuoroda padermės B95.8. Jis buvo nuolat rasti kodonams Q334R, L338S ir S366A visose EBVaGC egzempliorių. Likusios amino rūgštys substitucijos, tačiau buvo ypač rastas vieno ar dviejų EBVaGC egzempliorių: H358L ir L359V (GC2) P360H (GC9-10) ir G365R (GC6). Dėl mūsų ankstesnius duomenis apie Tuniso NPC egzempliorių, mes nustatėme, panašius rezultatus apie tris palyginamosiomis Aminorūgštys pakeitimais. Be to, EBV padermių S366A rungtynių atrodo labiau susijęs su Tuniso egzempliorių, kai, palyginti su apibrėžta Kinijos (4 paveikslas). 4 pav palyginimas daryti išvadą, aminorūgščių sekų Tuniso GC su B95.8 prototipo ir anksčiau išleistų LMP1 sekas: Cao: NPC ląstelių linija iš Shangai [27]; C666-1 (GenBank prisijungimas Nr ABV54173) NPK 10 iš Honkongo [28] ir Tuniso NPC egzempliorių: CV4, CV5, CV6 [29]. Simboliai (---) rodo aminorūgšties naikinimui.
Sveikiems EBV vežėjų, polimorfizmas analizė parodė, taip pat A ir D tipų, prototipą F Xhol + variantas, kaip panašius nustatyti į EBVaGC egzempliorių (duomenys neparodyti).
Diskusijos
Šiame tyrime buvo tiriami dėl EBV buvimą ir EBVaGC paplitimą 81 atvejai GC iš pacientų Pietų regiono Tuniso buvo 14,8% (12 iš 81). Ji buvo gerai žinoma, kad EBVaGC paplitimas labai skiriasi nuo vieno geografinio regiono į kitą ir aukščiausias dažnis buvo pažymėta Vokietijoje (18%), o mažiausias vienas (3,9%) buvo aptiktas Peru [13-20, 31].
Apie Ebera in situ hibridizacijos
buvo patikimiausias būdas pranešė literatūroje aptikti slaptąją EBV GC. Iš tikrųjų, visi aukščiau minėti tyrimai buvo atlikti taip šį metodą, įskaitant mūsų tyrimo. Kintamosios proporcijos branduolinių vėžinių ląstelių, kurios išreikšti Ebera rodomi mūsų tyrime taip pat buvo išvestas Truong et al., Kurie rodo, sietinas su EBV infekcijos pasitaiko onkogeninių proceso EBVaGC [32]. Tačiau tolesni tyrimai turi būti atliekami siekiant išaiškinti šį pastebėjimą.
Be to, mes parodėme, kad nevienalyčių duomenys Ebera išraiška gali būti susieta su EBV DNR kopijų skaičius, apskaičiuotas Q-PGR remti, kad šis metodas yra patikimas kaip pranešta anksčiau [33].
ryšium su CLINICO patologiniai bruožai EBVaGC, buvo pastebėtas stiprus ryšys su amžiumi diagnozės (P
= 0,009, 3 lentelė). Tiesą sakant, EBVaGC buvo dažniau nustatyta pacientams amžiaus grupei tarp 45 ir 60 metų, o tai atitiko ankstesnių tyrimų [19, 34]. Jokia kita statistinė asociacija buvo nustatyta, išskyrus tendencija su naviko diferenciacijos ir venų invazijos (P, pervežimas = 0,075 ir p
= 0,09 atitinkamai). Ankstesnės ataskaitos parodė, kad EBVaGC buvo dažna vyrų, proksimalinės skrandžio ir navikų difuzinio tipo [9, 14, 16, 35-39]. Pastaruoju metu, didelis meta-analizuoti, Carmago ir kt., Patvirtina šias asociacijos papildomai prie amžiaus diagnozės [38]. Mūsų tyrimo duomenimis, neradome skirtumą tarp EBV paskirstymo Vyriška palyginti su pacienčių, visų proksimalinės vs distalinės skrandžio bei pasklidosios vs žarnyno histotype. Šios tarp duomenų variacijos galima paaiškinti vietos rizikos veiksnių indėlį į EBV patogenezę, o taip pat pagal dydį ir charasteristics iš kohortos.
Polimorfizmas analizė 12 EBVaGC atvejais rodo tik tipo D, prototipą F, Xho
Aš išlaikymas ir 30 bp del-LMP1 variantas. Kalbant apie EBNA-3C geno polimorfizmas, mes nustatėme, kad tokio tipo visose EBVaGC atvejais ir A ir B tipų derinys buvo rastas tik vienu atveju. Šie duomenys yra susitarusi su neseniai atlikto tyrimo dėl keturių EBVaGC atvejais iš centrinio regiono Tuniso [34].
A ir prototipo F tipo dominavimą, taip pat buvo parodyta ankstesniuose pranešimuose nepriklausomai geografinės kilmės EBVaGC kaip pietų Kinija [35], Pietų Japonija [40], ir Lotynų Amerikos šalyse [41]. Įdomu tai, kad variantas-f buvo ypač aprašyta NPC susijęs EBV padermių pietų Azijoje [42]. Šioje srityje, kad C tipo ir nuostolių Xhol
variantu vyravimas buvo stebimas pacientams, sergantiems EBVaGC ar NPC [35, 40], priešingai nei mūsų dabartinės išvados ir ankstesnių duomenų apie Tuniso NPC pacientų [29, 43].
geriau apibrėžti EBVaGC padermių genotipą ir palyginti juos su tais, susijęs su NPC, mes atlikti dalinio seka egzono 3 BNLF1 geno ir palyginti juos prototipo B95-8 ir kiti skelbiami sekas iš Azijos ir Tuniso NPC EBV atmainos [29, 43]. Q334R, L338S ir L338P buvo rasti visų mūsų EBV izoliatų ir jau buvo pranešta EBV padermių, susijusią su kilmės NPC iš Kinijos ar Tunise [29, 44]. Tačiau S366A yra specifinė EBV izoliatų susijęs su Tuniso NPC ir GC .. Iš tiesų, ir remiantis ankstesnio pranešimo Edwardsas et al., [44] aprašoma septynis filogenetiškai skirtingas padermes LMP1, mes galime pasiūlyti, kad Tuniso izoliatai sudaro papildomą grupę su tam tikru parašu (T366A), bet ši hipotezė turi patvirtinimą sekos visą BNLF1 geno Minėtų štamų. Pasak šios datos, mes rekomenduojame, kad polimorfizmas į BNLF1 geno yra papildomas argumentas atitiktų kiti EBV polimorfizmas (D tipo, prototipas F ir Xhol +) remti EBV padermių skirtingumas tarp dviejų geografinių regionų.
Ant kita vertus, mes aprašėme anksčiau
kitiems del-LMP1 variantus (69 bp ir 81 bp išbraukta aprėpiančių codons 334-353 ir 345-371, atitinkamai) į Tuniso NPC pacientų [29, 43]. Šie variantai buvo nerastas ir buvo nustatyta tik 30 BP del-LMP1 variantas visose Kaip jau pranešta Chen et al EBVaGC atvejais., Dideliame atlikto tyrimo dėl Kinijos GC pacientų [35].
Mūsų polimorfizmo analizę EBV izoliatų sveikų vežėjų atskleidė identišką genotipą tiems EBVaGC ir NPC rodo, kad bendrieji kamienai yra geografiškai paskirstyta, bet nėra susijęs su konkrečiu piktybinių navikų. Tiesą sakant, EBV susijęs piktybinių navikų galima koreliuoja su variacijos galimos imuninės pripažinimo skirtingų populiacijų ir atskirų asmenų, kaip pasiūlė Edwards et al [44].
Išvada
į EBVaGC paplitimą pacientams iš Pietų Tunisas yra 14,8%, kuris yra diapazone su pateiktų duomenų. EBVaGC buvo daugiausia randama pacientų amžiaus grupei nuo 45 iki 60 metų, ir kad EBV DNR lygyje atspindi Ebera statusą skrandžio karcinoma.
Be to, EBV kamienai, susijusios su Tuniso pacientams, sergantiems GC ar NPC pasidalinti tam tikrų panašumų rodo, kad tikriausiai tas pats EBV padermė yra susijęs su abiejų navikų. Iš viso, mūsų rezultatai palaiko kitokį geografinį pasiskirstymą EBV padermių, bet ne jų apribojimas asocijuota piktybinių navikų.
Deklaracijos
Padėka
šis darbas parėmė Tuniso ministerijos aukštojo mokslo ir mokslinių tyrimų dotacijos , Norime padėkoti ponui M Jaoua už sekos objektų.
Autorių originalios pateikti failai vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių originalus pateiktų failų vaizdų. 12985_2011_1593_MOESM1_ESM.tiff autorių originalų failą 1 pav 12985_2011_1593_MOESM2_ESM.tiff autorių originalų failą 2 pav 12985_2011_1593_MOESM3_ESM.tiff Autorių originalaus failo 3 pav 12985_2011_1593_MOESM4_ESM.tiff Autorių originalus failas 4 paveiksle konkuruojančių interesų
autoriai deklaruoja, kad jie neturi konkuruojančius interesus.

• In integrinų susietų kinazės padidėjimas ne bažnytinės teisės suteikia NF-κB tarpininkaujant augimo privalumus skrandžio vėžio ląstelių aktyvuojant ERK1 /2
• Epstein-Barr virusu užkrėstų skrandžio adenokarcinoma išreiškia nematomus ir lizės virusinėmis nuorašai ir turi atskirą žmogaus genų ekspresijos profilio