Effekter av myentericus denervering på ekstracellulære matrise fiber og mastcellefordeling i normal mage og mage lesions

Effekter av myentericus denervering på ekstracellulære matrise fiber og mastcellefordeling i normal mage og mage lesjoner
Abstract
Bakgrunn
I denne studien virkningen av myenterisk denervering indusert av benzalkoniumklorid (BAC) på fordeling av fibrillære komponenter av ekstracellulær matriks (ECM) og inflammatoriske celler ble undersøkt i gastrisk karsinogenese indusert av N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG). Rotter ble delt i fire forsøksgrupper: ikke-denervert (I) og denerveres mage (II) uten MNNG behandling; ikke-denervert (III) og denervert magene (IV) behandlet med MNNG. For histopatologiske, histokjemisk og stereological analyse, ble deler av mage fragmenter farget med Hematoxylin-Eosin, Picrosirius-Hematoxylin, Gomori retikulin, Weigert er resorcin-Fuchsin, toluidinblått og Alcian-Blue /safranin (AB-SAF).
Resultater
BAC denervering fører til en økning i hyppigheten av retikulære og elastiske fibre i denervert (gruppe II) sammenlignet med de ikke-denervert magene (gruppe i). Behandlingen av dyrene med MNNG indusert utviklingen av adenokarsinomer i ikke-denervert og denervert magene (gruppene III og IV, henholdsvis) med en markert økning i det relative volum av stroma, hyppigheten av retikulære fibre og det inflammatoriske infiltrat som var mer intens i gruppe IV. En økning i hyppigheten av elastiske fibre ble observert i adenokarsinomer av denervert (gruppe IV) sammenlignet med de ikke-denervert magene (gruppe III) som viste degradering av disse fibrene. Utviklingen av lesjoner (gruppene III og IV) ble også assosiert med en økning i mastcellepopulasjonen, spesielt AB og AB-SAF positive, det sistnevnte i hovedsak i denerveres gruppe IV.
Konklusjoner
Resultatene viser sterk forening i den morfologiske endring av ECM fibrillære komponenter, økt tetthet av mastceller og utvikling av tumorer indusert av MNNG i den ikke-denerveres rotte mage eller denerveres av BAC. Dette tyder på at studiet av ekstracellulære og intracellulære komponenter av svulsten mikromiljøet bidrar til forståelsen av tumorbiologi ved handlingen av myentericus denervering.
Bakgrunn
Interaksjon mellom kreftceller og omkringliggende stroma er en av de viktigste aspektene i mekanismen tumorcelle-proliferasjon og invasjon [1]. Tumorceller gjør fornye den ekstracellulære matriks (ECM), en kompleks blanding av fibre (kollagen, retikulære og elastiske) og grunnsubstans som gir cellehjelp [2], for å lette kommunikasjon og rømning av kontroll ved mikromiljøet [3]. Kollagen fibrillær system virker som et bærende rammeverk av vev, hvor retikulære fibre forbinder kollagenfibre med den basale lamina av epiteliale, muskel og adipose celler; den microfibril-elastin system spiller en rolle i jevn fordeling av belastning å opprettholde elastisitet til lokale vev krav [4].
Strukturell og funksjonell integritet av kollagen fibrillar og microfibril-elastin systemer er viktige for magen å pakke maten, å utskille enzymer og syrer for å bryte de rå næringsstoffer og til å overføre blandingen til tynntarmen. De tre oppgaver som avhenger av det ytre (sympatiske og parasympatiske avdelinger av det autonome nervesystemet) og den indre innervasjon (enterisk nervesystem - ENS). Hovedkomponentene i den ENS er to nett eller plexus av nerveceller og nervefibre, det myenterisk plexus og submucosal [5]. ENS betydning for reguleringen av de gastrointestinale funksjoner observeres etter den topiske påføringen av kationisk overflateaktivt middel, benzalkoniumklorid (BAC), på serøs lag som resulterer i delvis og selektiv ødeleggelse av plexus myentericus neuroner [6]. Korrelasjonen mellom karsinogenese og ENS er vist i eksperimentelle modeller ved bruk av myenterisk denervering av BAC og induksjon av tumorer ved N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG) [7] og 1,2-dimetylhydrazin ( DMH) [8] med en reduksjon i forekomsten og størrelsen av gastrointestinale tumorer.
immun~~POS=TRUNC celler~~POS=HEADCOMP er potente kilder paracrine signaler til ENS. Spesielt enteriske mastceller er strategisk plassert og har kraftige farmakologiske meklere som fungerer i møte med immunologiske stimuli som kan påvirke integriteten av mage-tarmkanalen [9]. Antistoffet bindes til mastceller som gjør dem i stand til å gjenkjenne spesifikke antigener og signalisere sitt nærvær til ENS. ENS, i sin tur, tolker de kjemiske signalene fra mastceller som en trussel og søker å eliminere den, og dermed gi en beskyttende respons [9]. Tilstedeværelsen av mastceller er blitt beskrevet i flere neoplasier, med pro eller anti-tumor rollen til deres biologisk aktive mediatorer som frigis under påvirkning av svulsten mikromiljøet [10-12]. Virkningen av pro-tumor mediatorer slik som histamin, tryptase og kymase kan fremme migrering og celleproliferasjon indusering av ekspresjon av adhesjonsmolekyler på endotelceller og således aktivering av prosessen med tumor angiogenese, metastase og proliferasjon [13-15]. På den annen side kan enkelte cytokiner, slik som interleukin (IL) -2 og -21, tumor nekrose faktor (TNF) og heparin utgitt av mastceller, opptre som anticancermidler ved å hemme deres vekst [16, 17].
flere studier har vist at under kreftutvikling er det en økning i antall mastceller, observert i nevrofibromer, lipomas, hemangiomer, svulster i binyrene og huden [18] plateepitelkarsinom [19], laryngeal plateepitelkarsinom [20] og gastrisk karsinom [21]. I gastrisk adenokarsinomer, ble den lille frigivelse av innholdet som er lagret i cytoplasmiske granuler av mastceller forbundet med endringer i mikrovaskulær basal lamina, blant uregelmessig tykkelse, flere lag og en svak sammenheng med endotelceller og pericytes som bidrar til ombygging av blodkar [22]. Etter kirurgisk fjerning av magekreft, overlevelse studier viste at pasienter med økt antall mastceller viste en dårligere prognose enn pasienter med lavt antall dem.
Hensikten med denne studien var å fastslå effekten av kjemiske ablasjon av myenterisk nevroner på fordelingen av de ekstracellulære matriks-fibrene og mastceller i gastrisk mucosa av ikke-denervert og denervert mager, og i en modell av mage karsinogenese indusert ved MNNG administrering i rotter.
Materiale og metoder
Eksperimentell utforming
Fire forsøksgruppene ble evaluert. Gruppene I (n = 5) og II (n = 5) ikke-denerveres og denervert henholdsvis, uten tilstedeværelse av gastriske neoplasmer; gruppene III (n = 10) og IV (n = 10) ikke-denerveres og denerveres, henholdsvis, med tilstedeværelse av gastriske neoplasmer. Fragmenter av sekken (antrum) av mage brukt i denne studien ble oppnådd fra undersøkelser utført ved Polli-LOPES et al. [7]. De eksperimentelle prosedyrer ble utført i samsvar med reglene i komité for omsorg og bruk av forsøksdyr i National Research Council i N.I.H. (USA) og etiske komité for forsøk med dyr (CEEA) av FAMERP (protokoll n ° 6193/2008), São José do Rio Preto, SP.
Dyr
Mann Wistar
rotter vekting 100 150 g, hentet fra dyre~~POS=TRUNC ved School of Medicine i Ribeirão Preto, Brasil, ble huset (4 dyr per bur), i temperaturer mellom 23-25 ​​° C, og fikk mat og vann ad libitum
.
Gastric denervering
dyrene ble bedøvet im med ketamin hydroklorid og tiazin-klorid (0,15 ml /0,05 ml /100 g vekt) [23]. Magen av hvert dyr ble exteriorized gjennom et midtlinje øvre abdominal laparotomi og isolert fra bukhulen gjennom en liten fenestration i et plastark for emne anvendelse av 0,6% BAC (v /v) (Aldrich Chemical Co. fortynnet i saltvann (0,9% NaCl) [7, 24]. de isolerte magene ble pakket med gasbind dyppet i BAC eller saltvann og holdt fuktig i 30 min [6, 7, 24]. Den serosale overflate av magene ble grundig vasket med saltvann, ble organene returnert til sin anatomiske plass og bukveggen ble sydd. dyrene ble holdt i plastbur (4 dyr /bur) under kontrollert temperatur, og fikk mat og vann ad libitum
.
Induksjon av neoplasier i gastrisk antrum mucosa
Seksten uker etter operasjonen ble dyrene i gruppene III (non-denerveres) og IV (denerveres) inntatt en oppløsning av N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG) (Aldrich Chemical Co., Inc., Milwaukee, WI) ble oppløst i destillert og deionisert vann ved en konsentrasjon på 100 mg /l i 28 uker. Dyrene ble avlivet 2 måneder etter siste inntak av MNNG og magene ble samlet for morfologisk analyse.
Morfologiske og kvantitativ analyse
ekstracellulære matriks fibre
Fragmenter av sekken i magen (antrum) ble løst i 4% bufret formalin i 12 timer, vasket i ledningsvann, tørket i en etanol serie og innstøpt i parafin. For den ekstracellulære matrise studien ble §§ 4 mikrometer tykke farget med Hematoxylin-Eosin [25], Picrosirius-Hematoxylin [26] og Gomori retikulin [27] for histopatologiske analyse, og for kollagen og retikulære fibre evaluering hhv. Fibrene i elastisk system ble studert ved hjelp Weigert er resorcin-Fuchsin som selektivt flekker både elastiske og elaunin fibre (de oxytalan fibrene forblir unstained fordi de ikke er tidligere oksidert i denne studien) [28]. Prøvene ble analysert med en Olympus BX60 lysmikroskop (Olympus, Hamburg, Tyskland) og den mikroskopiske feltene ble digitalisert ved hjelp av Image-Pro Plus versjon 4.5 for Windows-programvare (Media Cybernetics, Silver Springs, MD). Fem tilfeldige områder av mageslimhinnen ble analysert ved hjelp av en × 20 objektiv, og kalibreringen ble gjort ved hjelp av et Olympus gradert mikroskopisk lysbilde. Den kvantitative analysen ble bestemt i henhold til fremgangsmåten i Weibel [29], et gitter testsystem med 168 punkter og 84 testlinjene, for å sammenligne den relative volum (prosentandel) av mageslimhinnen kamrene (epitel, stroma og andre kamre, unntatt epitel og stroma) for Hematoxylin-eosin-farging og den relative hyppigheten av retikulære og elastisk fiberfordeling (i prosent) for Gomori reticulin og Weigert s resorcin- fuksin flekker, respektivt. Verdiene er angitt som middelverdi ± SEM av relative volum (prosentandel) av de mucosale mage-kammere og middelverdi ± SEM av den relative hyppighet av retikulære og elastisk fiberfordeling (i prosent).
Mastceller
Analyse av mastceller i den gastriske antrum ble utført i seksjoner farget med toluidinblått 0,5% for kvantifisering av intakte og degranulated celler og, med Alcian-Blue-safranin (AB-SAF) for kvantifisering av mukosal bindevev og mastceller [30, 31]. For dette formål, ble seksti tilfeldig områder av gastrisk mucosa analysert per dyr, med en Olympus lys mikroskop (Olympus, Hamburg, Tyskland) ved hjelp av en x 12,5 /16 mm okular og et objektiv x 40 kraft (Zeiss, Tyskland) . Verdiene er angitt som middelverdi ± SEM av antall celler pr mm Statistical Analysis 2.
Data ble analysert ved anvendelse av Statistica 6.0 programvare (StarSoft, Inc., Tulsa, OK). Dataene er presentert som gjennomsnitt ± SEM, og ble sendt til Student t
test og enveis analyse av avvik (ANOVA), og deretter til Tukey-Kramer multiple sammenligninger test eller Bonferroni. Forskjeller med verdier av P
< 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
Histopatologisk og histokjemisk analyse av rotte magene
Utgangspunktet, pyloric fragmenter av ikke-denervert og denervert magene av benzalkoniumklorid (BAC) (gruppene I og II, henholdsvis) ble undersøkt . Analyse av fragmenter av gruppe II viste at myentericus denervering ikke endre mengden og fordelingen av meshwork kollagenfibre som omgir sekken kjertler i forhold til gruppe I (Fig. 1A og 1B). Dette resultatet ble bekreftet ved Picrosirius-Hematoxylin flekk (fig. 1E og 1F) og kvantitativ analyse av det relative volum av epitel og stroma av gastrisk mucosa fra begge grupper (Fig. 1i og 1 J). Figur 1 Histologisk analyse av rotte mager. A, B, E og F)
pyloric gastriske kjertler (g) omgitt av stroma med kollagenfibre (s) observert i slimhinnene lag av gruppene I og II. Epitel (ep). Gastric groper (f). Muskularis slimhinnen (m). C, D, G og H)
pyloric gastriske kjertler (g) konstituert av tumorceller okkuperte det største området av gastrisk mucosa fra gruppene III og IV. En opphopning av PMN (piler) ble observert i løpet av de kjertler. Hematoxylin-eosin (A-D); Picrosirius-Hematoxylin (E-H). Barer: 20 mikrometer. I-L
) vevsområder (epitel, stroma, andre) volumer av den pyloriske gastrisk mucosa. Verdier er uttrykt som gjennomsnitt ± SEM av prosentandelen av relativt volum. Grupper uten lesjoner (I og II) viste en høy relativ volum av epitel (p 0,05) sammenlignet med grupper med lesjoner (III og IV). Tilstedeværelsen av adenokarsinom i gruppene III og IV resulterte i en signifikant økning (p 0,05). Av stroma i forhold til gruppene I og II
ikke-denervert og denervert magene ble behandlet med MNNG (gruppene III og IV, henholdsvis) presenterte endringer i vevsarkitektur og anordning av fibrene i den ekstracellulære matriks og en økning av diameteren av pyloric kjertler, så vel som i relative volum av stroma (fig. 1C, D, G og 1 H). Behandling med MNNG indusert utvikling av godartede og maligne svulster, særlig adenomatøse polypper og adenokarsinomer (Fig. 1C og 1G) i ikke-denerveres mager (gruppe III). Dyr med denerveres magene og behandlet med MNNG (gruppe IV) utviklet forstadier til kreft og sverte svulster preget av dysplasi, atrofisk gastritt og adenokarsinom (Fig. 1D og 1 H). I begge gruppene ble stroma av adenokarsinomer anriket ved tilstedeværelse av inflammatoriske celler, som mastceller, nøytrofile, plasmaceller og lymfocytter, som viser immunologisk respons til neoplasier (fig. 2). Men de neoplastiske lesjoner i gruppe IV var av mindre og mindre aggressive profiler sammenlignet med gruppe III, og det inflammatoriske infiltrat lokalisert i tumoren stroma var mer intens, særlig i dyr som utviklet adenokarsinomer (fig. 2D). Figur 2 Histologisk analyse av adenokarsinom indusert av MNNG behandling. A og B)
Morfologisk visning av adenokarsinom (AD) i ikke-denervert (gruppe III) og denerveres magen (gruppe IV). Muskulære laget (M). Intens inflammatorisk infiltrat (I). C og D)
Detalj av inflammatorisk infiltrat av tumor stroma konstituert av mastceller (svarte piler), nøytrofiler (pilspisser), lymfocytter (grønne piler) og plasmaceller (røde piler). Toluidinblått. Barer:. 100 mikrometer (Fig. A og B), 10 mm (Fig. C og D) Book histochemical analyse av pyloric seksjonene ble utført med Gomori retikulin og Weigert er resorcin-Fuchsin flekker å studere fordelingen ( frekvens) av den retikulære og elastiske fibre i stroma, respektivt. Seksjoner som sendes inn til begge metoder avslørte lik fordeling av nettvaren fibrene som omgir pyloric glands av magesekkene fra gruppene I og II (fig. 3A, B, E og 3F). Ikke-denervert eller denervert magene ble behandlet med MNNG (gruppene III og IV, henholdsvis), tilsynelatende presentert økt mengde av retikulære fibre (fig. 3c og 3d) og tykke og korte elastiske fibre svært uorganisert (Fig. 3G og 3H) i de adenokarsinomer sammenlignet med deres respektive kontrollgrupper (gruppe i og II, henholdsvis). Figur 3 histokjemisk analyse av retikulære (A-D) og elastiske fibrer (E-H) i rotte mager. A og B)
gruppene I og II presenteres retikulære fibre rettlinjede og innrettede (piler) som omgir epitel (ep) og stroma (e). C og D)
retikulære fibre (pil) for svinging og tilsynelatende tetteste ved basen (pilspisser) fra kjertler (g). Det ble ikke observert kollagenfibre opphopning mellom kjertler (*). E og F) Bedrifter Den kjertlene er ledsaget av en delikat web av elastiske fibre (pil) og mer intenst merket E. G og H)
En økning i tykkelsen av disse fibrene, avbrudd og fragmentering av fibrillar variabler grupperte masser av elastin (piler) kan observeres rundt kjertler (g) i forhold til deres respektive kontrollgruppene (i og II). Gomori sølv (A-D); Weigert er resorcin-Fuchsin (E-H). Barer:. 10 mikrometer Book Kvantitativ analyse av retikulære fibre bekreftet økningen av denne ekstracellulære komponenten i adenokarsinomer observert i gruppene III og IV og viste også en uventet stor økning i slimhinnene i denerveres magen (gruppe II ) sammenlignet med gruppe i (tabell 1). Til tross for den åpenbare økning av elastiske fibre i stroma av ikke-denervert og denervert dyr behandlet med MNNG (gruppene III og IV, respektivt), ble ingen statistisk forskjell ble observert i deres fordeling i forhold til kontrollgruppene (I og II) (Tabell 1) . På den annen side, myenterisk denervering induserte betydelig økning av de elastiske fibrene i mave stroma fra gruppe II og IV sammenlignet med ikke-denerveres magene fra gruppene I og III (tabell 1). Ingen signifikant forskjell ble notert i kollagen og elastiske fiberfordeling mellom ikke-maligne og maligne lesjoner av stromas fra gruppene III og IV.Table en Stereological evaluering av virkningene av myenterisk denervering i gastrisk antrum.

Relativ frekvens fordeling av fibrene (%) 1
grupper
Collagen System
Elastisk System
jeg
16,87 ± 0,5
13,27 ± 0,5
II
24,06 ± 1,5 *
19,4 ± 0,6 *
III - NT
21,8 ± 0,9
11,2 ± 0,6
III - MT
25,71 ± 0,5 *
11,1 ± 0,4
IV - NT
21,2 ± 1,6
20,2 ± 1,7 &
IV - MT
26,87 ± 1,5 *
19 ± 0,7 &
Histologisk preparat ble utført som beskrevet i materialer og metoder
. Verdier er uttrykt som gjennomsnitt ± SEM av prosentandelen av relative hyppigheten av fibre. Non-malign tumor (NT); malign tumor (MT). 1 Statistisk analyse basert på ANOVA etterfulgt av korrigering av Tukey-Kramer. * P < 0,05 vs. gruppe I; &Amp; P < 0,05 vs. gruppe III.
Kvantifisering av mastceller i fragmenter av magesekken i magen
Mastceller ble analysert og kvantifisert i slimhinne, submucosal og muskellagene i alle forsøksgrupper. Analysen av det totale antall celler pr gastrisk fragment viste ingen signifikant forskjell mellom den ikke-denervert (I) og (II) denervert grupper (Fig. 4A). Imidlertid, i ikke-denervert eller denervert grupper behandlet med MNNG (III og IV, henholdsvis), utvikling av benigne eller maligne lesjoner ble assosiert med en signifikant økning av antallet av mastceller i gastrisk antrum, sammenlignet med det ikke-denerveres gruppe (JEG). I de mucosale og submucosale lag, den betydelige økningen av mastceller i den ikke-denervert eller denervert grupper behandlet med MNNG, (III og IV) var assosiert med en økning av intakte og degranulated celler (Fig. 4B). I muskelen laget ble denne økning hovedsaklig i forbindelse med det store antallet av intakte mastceller (Fig. 4C). Figur 4 Kvantitativ analyse av mastceller i magen. Data representerer gjennomsnittsverdier ± S.E.M. av seksti felt analysert per dyr som beskrevet i Materiale og metode. Ikke-denerveres (I) og denerveres mage (II) uten lesjoner. Ikke-denervert (III) og denerveres mage (IV) med lesjoner. Non-ondartet svulst (NT). Ondartet svulst (MT). A)
Totalt antall mastceller i mage-fragmentet. * P < 0,05 vs. gruppe I. # P < 0,01 vs. en annen forsøksgrupper. B og C)
Intakte og degranulated mastceller i mucosal, submucosal og muskellagene. * P < 0,05 vs. gruppe I; #P ≪ 0,05 vs. annen eksperimentelle grupper; δ P < 0,05 vs. gruppe III - NT (intakt mastceller); &Amp; P < 0,05 vs. gruppe III - NT (degranulated mastceller). C)
intakt og degranulated mastceller i muskellaget. * P < 0,05 vs. gruppe I; # P < 0,05 vs. gruppe II.
Fenotypisk analyse av mastceller
For den fenotypiske karakteriseringen av mastceller ble det benyttet fremgangsmåten i Alcian Blue-safranin (AB-SAF). Hos dyr med ikke-denervert (I) og denervert (II) grupper, var det en overvekt av mastceller AB positiv (AB +) i slimhinne og submucosale lag av gastrisk antrum, karakterisere disse cellene som mukosale mastceller (MMC) (fig. 5A og 5B). I de eksperimentelle gruppene som ble behandlet med MNNG (III og IV), en høy andel av AB + og AB-SAF + mastceller subtyper ble observert, idet sistnevnte hovedsakelig i denerveres gruppen (IV) (fig. 5C og 5D). Fragmenter av gastrisk antrum som inneholder mesenteriet ble benyttet for å bekrefte tilstedeværelsen av SAF + -celler, som karakteriserer bindevev mastcelle (CTMC) ved denne fremgangsmåte for farging (fig. 5E og 5F). Figur 5 fenotypisk analyse av mastceller i mage-fragment. A og B)
submucosal lag av ikke-denervert (gruppe I) og denerveres (gruppe II) mage viser mastceller med cytoplasmiske granuler positive til Alcian-blått (piler), karakteristiske mucosal mastcelle fenotype - i detalj i panel A . C og D)
To mastcellepopulasjonen er nevnt i mage lesjoner av ikke-denervert (gruppe III) og denerveres (gruppe IV) magene: Alcian-blått positive mastceller (svarte piler) og Alcian-blå /safranin positive mastceller (røde piler). E og F)
Mastceller med safranin positive granulater (piler) er observert i mesenteriet, karakteriserer bindevev mastceller. Alcian-blå /safranin metoden. Barer: 10 mikrometer (Fig A-F.); 5 mikrometer (detalj Fig. A)
.
Total kvantifisering av tre undertyper av mastceller (AB +, AB-SAF + og SAF +) bekreftet morfologiske observasjoner, viser en overvekt av AB + -celler i pylorus-fragmentet i alle forsøksgrupper (tabell 2). I ikke-denervert og denervert grupper behandlet med MNNG (III og IV, henholdsvis), økte denne celleundertype betydelig sammenlignet med den ikke-denerveres gruppe (I). I denerveres mager behandlet med MNNG (gruppe IV), sub-cellulære AB-SAF + også ble betydelig økt i maligne lesjoner sammenlignet med lesjoner i den ikke-denerveres gruppen behandlet med MNNG (III) .table to Tetthet av mastceller med ulike fenotyper i mage antrum.

pyloriske fragment
grupper Book AB +

SAF +
AB + SAF +
jeg
8 ± 2
en ± 1
4 ± 1
II
14 ± 4
3 ± 1
13 ± 10
III - NT
49 ± 16 *
5 ± 2
11 ± 4
III - MT
23 ± 4 ***
4 ± 2
13 ± 5
IV - NT
28 ± 5 ***
2 ± 1
23 ± 8
IV - MT
36 ± 8 ** #
13 ± 10
47 ± 12 &
Histologisk preparat ble utført som beskrevet i materialer og metoder
. Verdier (antall celler per mm2) er uttrykt som gjennomsnitt ± SEM av 60 felt analysert pr dyr med en høy effekt objektiv (40 x). Alcian-blått plakater (AB +), safranin (SAF +) og alcin-blå Twitter /safranin positive celler (AB + SAF +). * P < 0,05 vs. gruppe I; # P < 0,01 vs. III - NT og - MT; &Amp; P < 0,05 vs. II.
Analyse av de forskjellige subtyper av mastcellene i de mucosale og submucosale lag av pyloriske fragmenter viste en signifikant økning av mastceller AB + bare i dyr med en benign tumor (Tabell 3). I denerveres mager behandlet med MNNG (gruppe IV), befolkningen i mastceller AB-SAF + økt sammenlignet med andre eksperimentelle grupper, som er betydelig for ondartet svulst. Muskelen laget viste en annen profil av fragmentet som en helhet, og denervert mager uten og med neoplasi (grupper II og IV) viste en overvekt av mastceller AB-SAF +. Ikke i noen gruppe studert, antall celler SAF +, som karakteriserer CTMC, nådde den andre cellen subtypes.Table 3 Fordeling av mastceller med forskjellige fenotyper i lag av gastrisk antrum.

Histologiske Layers

slimhinnen og submucosa
Muskel

grupper Book AB +
SAF +
AB + SAF +
AB +
SAF +
AB + SAF +

I (Control)
7 ± 2
0 ± 0
3 ± 0
1 ± 0
1 ± 1
2 ± 1
II
12 ± 4
0 ± 0
2 ± 1
2 ± 1
2 ± 1
11 ± 9
III - NT
40 ± 14 *
1 ± 1
4 ± 1
8 ± 3 *
3 ± 2
7 ± 3
III - MT
12 ± 2
0 ± 0
3 ± 1
11 ± 3 *
4 ± 1
10 ± 4
IV - NT
19 ± 3 **
1 ± 0,6
12 ± 8
9 ± 3 *
1 ± 0
18 ± 7
IV - MT
27 ± 10
9 ± 8
25 ± 8 # &
9 ± 2 ** π
3 ± 2
22 ± 9
Histologisk preparat ble utført som beskrevet i materialer og metoder
. Verdier (antall celler per mm2) er uttrykt som gjennomsnitt ± SEM av 60 felt analysert pr dyr med en høy effekt objektiv (40 x). Alcian-blått plakater (AB +), safranin (SAF +) og alcin-blå Twitter /safranin positive celler (AB + SAF +). * P < 0,05 vs. gruppe I; # ≪ 0,05 vs. I og III-MT; &Amp; P < 0,01 vs. II; π P < 0,05 vs. II.
Diskusjon
I denne studien ble undersøkt histopatologiske forandringer og distribusjon av den ekstracellulære matriks (ECM) fibrillar komponenter og mastceller i magesekken av rotte magene ikke-denerveres eller denervert av benzalkoniumklorid (BAC) og ikke-behandlet eller behandlet med carcinogen-N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG).
Innledningsvis histopatologisk og stereological analyse viste ingen endring i det relative volum av epithelial og stromal avdelinger i pylorus fragmenter fra ikke-denervert (gruppe i) og denerveres mager (gruppe II). Imidlertid studiet av fibrillære komponenter av ECM i disse prøvene viste at BAC denervering fører til en økning i hyppigheten av retikulære og elastisk system fibre i denerveres gastriske slimhinne (gruppe II) sammenlignet med ikke-denervert (gruppe I), som demonstrert av histokjemisk og stereological analyse ved hjelp Gomori retikulin og Weigert er resorcin-Fuchsin flekker, henholdsvis. Sannsynligvis, fravær av kontraktile stimulering forårsaket av myenterisk denervering i disse fragmentene (gruppe II) bidrar til en økning i syntesen av retikulære og elastiske fibre av glatte muskelceller, og /eller en ny assosiasjon av fibre i stroma som en mekanisme for å tilstrekkelig den peristaltiske bølge koordinering, og for å forhindre stasis i denervert organer [32-34].
Behandling av ikke-denervert (gruppe III) og denerveres (gruppe IV) dyr med MNNG indusert utvikling av maligne tumorer (adenokarsinomer), godartet tumorer (adenomatøse polypper) og forstadier til kreft (dysplasi og atrofisk gastritt). Utviklingen av adenokarsinomer i både ikke-denervert og denervert magene var i stand til å fremme en betydelig økning i det relative volum av stromal rommet. Under tumorutviklingen i prostata eller mageslimhinnen, er samspillet stroma /epitel forstyrret og ilagt en ny tilstand som er forbundet til morfologiske endringer av ekstracellulære matrise komponenter og tumorvekst [35]. Den epitelcelleproliferasjon i begge maligne og benigne lesjoner fører til endringer som befinner seg i pakkboksen, etterfulgt av en fokal ombygging av de fibrillære komponentene i den ekstracellulære matriks [27].
I dette aspekt, viste histokjemisk analyse en betydelig økning i retikulære fibre av adenokarsinom (gruppe III) sammenlignet med ikke-denerveres magene uten lesjoner (gruppe i). Økningen av stromal kollagenfibre utgjør en mekanisme som tumorceller kunne unnslippe "angrep" fra T-lymfocytter (CD8 +), og for å indusere apoptose, som ville virke som en barriere mot inntrengning av CD8 + [ ,,,0],36]. Til tross for en ikke signifikant endring på det elastiske system, ble en forstyrrelse av disse fibrene observert i adenokarsinomer av den ikke-denervert mage (gruppe III), med tilstedeværelse av legemer av elastiske elementer fraksjonerte, tyder på en degradering eller ombygging av stroma i respons til skade under påvirkning av neoplastiske celler. Disse endringer i elastiske system fibre var samtidig med ombygging av kollagenfibre, også observert i prostata lesjoner [37] og i den prostatic stroma i løpet av denne kjertel regresjon etter kastrering [38, 39]. I henhold til disse resultater kan det aggressive tumor vurderes av de fibrøse komponentene i matrisen.

• Hvordan bør tracere injiseres for å oppdage for sentinel noder i magekreft - submucosally fra innsiden eller subserosally fra utsiden av magen?
• Clinicopathologic egenskaper og behandlingsresultater av hepatoid adenokarsinom i magen, en sjelden, men unik subtype av magekreft