Virkninger af myenteriske denervering på ekstracellulære matrix fibre og mastcelle fordeling i normal mave og gastriske læsioner

Virkninger af myenteriske denervering på ekstracellulære matrix fibre og mastcelle fordeling i normale mave og gastriske læsioner
Abstract
Baggrund
I denne undersøgelse virkningen af ​​myenterisk denervering induceret af benzalconiumchlorid (BAC) om distribution af fibrillære komponenter i ekstracellulære matrix (ECM) og inflammatoriske celler blev undersøgt i gastrisk carcinogenese induceret af N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG). Rotter blev inddelt i fire forsøgsgrupper: ikke-denerveres (I) og denerverede maven (II) uden MNNG behandling; ikke-denerveres (III) og denerverede maver (IV) behandles med MNNG. For histopatologisk, histokemisk og stereologiske analyse blev dele af gastrisk fragmenter farvet med Hematoxylin-Eosin, PicroSirius-Hematoxylin, Gomori retikulin, Weigert s resorcinol-Fuchsin, toluidinblåt og Alcian-Blå /Safranin (AB-SAF).
Resultater
BAC denervering forårsager en stigning i hyppigheden af ​​retikulære og elastiske fibre i denerveres (gruppe II) sammenlignet med de ikke-denerverede maver (gruppe i). Behandlingen af ​​dyrene med MNNG inducerede udvikling af adenokarcinomer i ikke-denerverede og denerverede maver (grupper III og IV, henholdsvis) med en betydelig stigning i den relative mængde af stroma, hyppigheden af ​​retikulære fibre og det inflammatoriske infiltrat, der var mere intens i gruppe IV. En stigning i frekvensen af ​​elastiske fibre blev observeret i adenocarcinomer af denerveres (gruppe IV) sammenlignet med de ikke-denerverede maver (gruppe III), som viste nedbrydning af disse fibre. Udviklingen af ​​læsioner (gruppe III og IV) blev også forbundet med en stigning i masten cellepopulation, især AB og AB-SAF positiver, sidstnævnte især i den denerverede gruppe IV.
Konklusioner Salg Resultaterne viser en stærk sammenhæng i den morfologiske ændring af ECM fibrillære komponenter, den forøgede densitet af mastceller og udviklingen af ​​tumorer induceret af MNNG i den ikke-denerveres rotte mave eller denerveres af BAC. Dette tyder på, at undersøgelsen af ​​ekstracellulære og intracellulære komponenter af tumor mikromiljø bidrager til forståelsen af ​​tumor biologi ved handling af myenteriske denervering.
Baggrund
Samspil mellem tumorceller og det omgivende stroma er et af de vigtigste aspekter i mekanismen for tumorcelleproliferation og invasion [1]. Tumorceller gøre remodel den ekstracellulære matrix (ECM), en kompleks blanding af fibre (kollagen, retikulære og elastiske) og grundsubstans, der giver celle support [2], til at lette kommunikationen og udslip af kontrol fra mikromiljøet [3]. Kollagenet fibrillært, optræder som en understøttende ramme af væv, hvor retikulære fibre forbinder collagenfibre med den basale lag af epitel, muskler og fedt-celler; den microfibril-elastin-systemet spiller en rolle i ensartet fordeling stress at opretholde den modstandskraft over for de lokale væv krav [4].
Strukturel og funktionel integritet kollagen fibrillære og microfibril-elastin-systemer er vigtige for maven at pakke maden, til at udskille enzymer og syrer til at bryde de rå næringsstoffer og overføre blandingen til tyndtarmen. De tre opgaver afhænger af ydre (sympatiske og parasympatiske divisioner af det autonome nervesystem) og den indre innervation (enterisk nervesystem - ENS). De vigtigste komponenter i ENS er to netværk eller plexus af neuroner og nervefibre, myentericus og submukøse plexus [5]. ENS betydning for regulering af de gastrointestinale funktioner er observeret efter topikal anvendelse af det kationiske overfladeaktive middel, benzalkoniumchlorid (BAC), på den serøse lag, der resulterer i delvis og selektiv destruktion af myenterisk plexus neuroner [6]. Korrelationen mellem carcinogenese og ENS er blevet demonstreret i eksperimentelle modeller under anvendelse myentericus denervering ved BAC og induktion af tumorer ved N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG) [7] og 1,2-dimethylhydrazin ( DMH) [8] med en reduktion i forekomsten og størrelsen af ​​gastrointestinale tumorer.
Immune celler er kraftige kilder til parakrine signaler til ENS. Særligt enteriske mastceller er strategisk placeret og har stærke farmakologiske mediatorer, der virker i lyset af immunologiske stimuli, der kan påvirke integriteten af ​​mavetarmkanalen [9]. Antistoffet binding til mastceller gør dem i stand til at genkende specifikke antigener og signalere deres tilstedeværelse til ENS. ENS, til gengæld fortolker de kemiske signaler af mastceller som en trussel, og søger at eliminere det, hvorved der tilvejebringes en beskyttende respons [9]. Tilstedeværelsen af ​​mastceller er blevet beskrevet i adskillige neoplasier, med Pro eller anti-tumor roller ved deres bioaktive mediatorer frigivet af indflydelsen af ​​tumormikromiljøet [10-12] spillede. Virkningen af ​​pro-tumor mediatorer, såsom histamin, tryptase og chymase kan fremme migration og celleproliferation inducere ekspressionen af ​​adhæsionsmolekyler på endotelceller og således aktivere processen med tumorangiogenese, metastase og proliferation [13-15]. På den anden side kan visse cytokiner, såsom interleukin (IL) -2 og -21, tumornekrosefaktor (TNF) og heparin frigivet af mastceller, fungere som anticancermidler ved at inhibere deres vækst [16, 17].
flere undersøgelser har vist, at under carcinogenese er der en stigning i antallet af mastceller, observeret i neurofibromer, lipomas, hemangiomas, tumorer i binyrerne og hud [18], pladecellecarcinomer [19], larynx planocellulært [20] og gastriske carcinomer [21]. I gastriske adenokarcinomer blev den lille frigivelse af indholdet, der er lagret i cytoplasmatiske granula af mastceller forbundet med ændringer i det mikrovaskulære basale lag, herunder uregelmæssig tykkelse, flere lag og en svag association med endothelceller og pericytter, der bidrager til ombygningen af ​​blodkar [22]. Efter kirurgisk fjernelse af gastrisk cancer, viste overlevelse undersøgelser, at patienter med øget antal mastceller udviste en dårligere prognose sammenlignet med patienter med lave antal af dem.
Formålet med den foreliggende undersøgelse var at bestemme virkningerne af kemisk ablation af myentericus neuroner for fordelingen af ​​den ekstracellulære matrix fibre og mastceller i maveslimhinden af ​​ikke-denerverede og denerverede maver, og i en model for gastrisk carcinogenese induceret af MNNG administration i rotter.
Materiale og metoder
Eksperimentel design
Fire forsøgsgrupper blev evalueret. Gruppe I (n = 5) og II (n = 5) ikke-denerveres og denerveres henholdsvis uden tilstedeværelsen af ​​gastriske neoplasmer; gruppe III (n = 10) og IV (n = 10) ikke-denerveres og denerveres henholdsvis med tilstedeværelsen af ​​gastriske neoplasmer. Fragmenter af pyloric regionen (antrum) af maven anvendt i denne undersøgelse blev opnået fra undersøgelser foretaget af POLLI-LOPES et al. [7]. De eksperimentelle procedurer blev udført i overensstemmelse med reglerne i Udvalget om Pleje og anvendelser af forsøgsdyr af National Research Council i N.I.H. (USA) og etiske komité for dyreforsøg (CEEA) i FAMERP (protokol nr 6193/2008), São José do Rio Preto, SP.
Dyr
Wistar
rotter vægtning 100 en 150 g, opnået fra dyret facilitet i School of Medicine i Ribeirão Preto, Brasilien, blev huset (4 dyr pr bur), i temperaturer mellem 23.-25 ° C, og fik mad og vand ad libitum
.
Gastric denervering
dyrene blev bedøvet im med ketaminhydrochlorid og thiazin-chlorid (0,15 ml /0,05 ml /100 g vægt) [23]. Maven af ​​hvert dyr blev blotlagt gennem en midterlinie-abdominal øvre laparotomi og isoleret fra det peritoneale hulrum gennem et lille fenestration i et plastark til emne anvendelse af 0,6% BAC (vol /vol) (Aldrich Chemical Co. fortyndet i saltvand (0,9% NaCl) [7, 24]. de isolerede maver blev omviklet med gaze gennemvædet i BAC eller saltvand og holdes fugtig i 30 minutter [6, 7, 24]. Den serøse overflade af maverne blev grundigt vasket med saltvand, blev organerne returneret til deres anatomiske sted og bugvæggen blev syet. dyrene blev holdt i plastikbure (4 dyr /bur) under kontrolleret temperatur og modtog foder og vand ad libitum
.
Induktion af neoplasier i gastrisk antrum mucosa
Seksten uger efter operationen, dyrene i gruppe III (ikke-denerveres) og IV (denerveres) indtaget en opløsning af N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG) (Aldrich Chemical Co., Inc., Milwaukee, WI) opløst i destilleret og deioniseret vand ved en koncentration på 100 mg /l i 28 uger. Dyrene blev aflivet 2 måneder efter den sidste indtagelse af MNNG og maverne blev indsamlet til morfologisk analyse.
Morfologisk og kvantitativ analyse
ekstracellulær matrix fibre
Fragmenter af pyloric region af maven (antrum) er fastsat i 4% bufret formalin i 12 timer, vasket i postevand, dehydreres i en ethanol-serien og indlejret i paraffin. For den ekstracellulære matrix undersøgelse blev snit 4 um tykke farvet med Hematoxylin-Eosin [25], PicroSirius-Hematoxylin [26] og Gomori retikulin [27] til histopatologisk analyse, og for kollagen og retikulære fibre evaluering hhv. Fibrene i elastisk systemet blev undersøgt under anvendelse Weigert s resorcin-Fuchsin der selektivt farver både elastiske og elaunin fibre (de oxytalan fibre forbliver ufarvede fordi de ikke tidligere oxideres i denne undersøgelse) [28]. Prøverne blev analyseret med et Olympus BX60 lysmikroskop (Olympus, Hamburg, Tyskland), og de mikroskopiske felter blev digitaliseret ved hjælp af Image-Pro Plus version 4.5 til Windows-software (Media Kybernetik, Silver Springs, MD). Fem tilfældige områder af maveslimhinden blev analyseret under anvendelse af et x 20 objektiv, og kalibreringen blev udført ved anvendelse af et Olympus gradueret mikroskoppræparatet. Den kvantitative analyse blev bestemt ifølge fremgangsmåden af ​​Weibel [29], et gitter testsystem med 168 punkter og 84 testlinier at sammenligne de relative volumen (i procent) af maveslimhinden rummene (epitel, stroma og andre rum, undtagen epitel og stroma) for Hematoxylin-Eosin farvning og den relative hyppighed af retikulære og elastisk fiber fordeling (i procent) for Gomori retikulin og Weigert s resorcin- fuchsin farvning hhv. Værdier er angivet som middelværdi ± SEM af relativt volumen (i procent) af de gastriske mucosale rum og middelværdi ± SEM af relativ hyppighed af retikulære og elastisk fiber distribution (i procent). Salg mastceller
Analyse af mastceller i den gastriske antrum blev udført i snit farvet med toluidinblåt 0,5% til kvantificering af intakte og degranulerede celler og, med Alcian-blå-Safranin (AB-SAF) til kvantificering af mucosal og bindevæv mastceller [30, 31]. Til dette formål blev analyseret tres tilfældigt områder af maveslimhinden, per dyr, med et Olympus lysmikroskop (Olympus, Hamburg, Tyskland) ved anvendelse af en × 12,5 /16 millimeter okulær og en × 40 power mål (ZEISS, Tyskland) . Værdier er angivet som middelværdi ± SEM af antallet af celler pr mm 2.
Statistiske analyser
Data blev analyseret under anvendelse af Statistica 6.0 software (StarSoft, Inc., Tulsa, OK). Data er præsenteret som gennemsnit ± SEM og blev forelagt for Students t
test og envejs-analyse af varianser (ANOVA), og derefter til Tukey-Kramer multiple sammenligninger test eller Bonferroni. Forskelle med værdier af P
< 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.
Resultater Salg Histopatologisk og histokemisk analyse af rottemaver
Oprindeligt pylorus fragmenter af ikke-denerverede og denerverede maver efter benzalkoniumchlorid (BAC) (gruppe I og II, henholdsvis) blev undersøgt . Analyse af fragmenter af gruppe II viste, at myenteriske denervering ikke ændre mængden og fordelingen af ​​meshwork kollagen fibre, der omgiver pylorus kirtler i forhold til gruppe I (fig. 1A og 1B). Dette resultat blev bekræftet af PicroSirius-Hematoxylin farvning (fig. 1E og 1F) og kvantitativ analyse af den relative volumen af ​​epitel og stroma af maveslimhinden fra begge grupper (fig. 1i og 1J). Figur 1 Histologisk analyse af rottemaver. A, B, E og F)
pyloric gastriske kirtler (g) omgivet af stroma med kollagenfibre (er) observeret i slimhinden lag af grupperne I og II. Epitel (ep). Gastric gruber (f). Muscularis mucosa (m). C, D, G og H)
pyloric gastriske kirtler (g) udgøres af tumorceller besatte det største område af maveslimhinden af ​​grupperne III og IV. En ophobning af PMN (pile) blev observeret inden for de kirtler. Hematoxylin-Eosin (A-D); PicroSirius-Hematoxylin (E-H). Stænger: 20 pm. I-L
) Tissue rum (epitel, stroma, andre) mængder af den gastriske pylorus slimhinde. Værdier er udtrykt som middelværdi ± SEM af procentdelen af ​​relativt volumen. Grupper uden læsioner (I og II) præsenteret en høj relativ mængde epitel (p < 0,05) i forhold til grupper med læsioner (III og IV). Tilstedeværelsen af ​​adenocarcinom i grupperne III og IV resulterede i en betydelig stigning (p < 0,05). Af stroma i forhold til gruppe I og II
Ikke-denerverede og denerverede maver behandlet med MNNG (grupper III og IV, henholdsvis) præsenteret ændringer i væv arkitektur og arrangementet af fibrene i den ekstracellulære matrix og en stigning af diameteren af ​​pylorus kirtler samt i relative volumen af ​​stroma (fig. 1C, D, G og 1 H). Behandling med MNNG inducerede udvikling af godartede og ondartede tumorer, især adenomatøse polypper og adenocarcinomer (fig. 1C og 1G) i ikke-denerverede maver (gruppe III). Dyr med denerverede maver og behandlet med MNNG (gruppe IV) udviklede forstadier til kræft og ondartede tumorer er kendetegnet ved dysplasi, atrofisk gastritis og adenocarcinom (fig. 1D og 1H). I begge grupper blev stroma af adenocarcinomer beriget ved tilstedeværelsen af ​​inflammatoriske celler, som mastceller, neutrofiler, plasmaceller og lymfocytter, der viser immunologisk respons på neoplasier (fig. 2). Men de neoplastiske læsioner i gruppe IV var af mindre og mindre aggressive profiler sammenlignet med gruppe III, og det inflammatoriske infiltrat lokaliseret i tumoren stroma var mere intens, især i dyr, der udviklede adenocarcinomer (fig. 2D). Figur 2 Histologisk analyse af adenocarcinom induceret af MNNG behandling. A og B)
Morfologisk visning af adenocarcinom (AD) i ikke-denerveres (gruppe III) og denerverede mave (gruppe IV). Muskulære lag (M). Intens inflammatorisk infiltrat (In). C og D)
Detalje af inflammatorisk infiltrat af tumor stroma udgøres af mastceller (sorte pile), neutrofiler (pilespidser), lymfocytter (grønne pile) og plasmaceller (røde pile). Toluidinblåt. Barer:. 100 um (. Figur A og B), 10 um (. Figur C og D)
Histokemisk analyse af pylorus sektioner blev udført med Gomori retikulin og Weigert s resorcinol-Fuchsin farvning at studere distribution ( frekvens) af det retikulære og elastiske fibre i stroma hhv. Sektioner forelagt begge metoder afslørede lignende fordeling af meshwork fibre, der omgiver pylorus kirtler i maver fra gruppe I og II (fig. 3A, B, E og 3F). Ikke-denerverede eller denerverede maver behandlet med MNNG (gruppe III og IV, henholdsvis), præsenterede tilsyneladende øget mængde af retikulære fibre (fig. 3C og 3D) og tykke og korte elastiske fibre meget uorganiseret (fig. 3G og 3H) i adenocarcinomer sammenlignet med deres respektive kontrolgrupper (gruppe i og II, henholdsvis). Figur 3 Histokemisk analyse af retikulære (A-D) og elastiske fibre (E-H) i rotte maver. A og B)
gruppe I og II præsenterede retikulære fibre retlinede og aligned (pile) omgiver epitel (ep) og stroma (s). C og D)
retikulære fibre (pil) snoede og tilsyneladende tætteste på basen (pilespidser) af kirtler (g). Kollagen fibre ophobning mellem kirtler (*) blev observeret. E og F)
Den kirtler er ledsaget af en delikat væv af elastiske fibre (pil) og mere intenst markeret i E. G og H)
En stigning i tykkelsen af ​​disse fibre, forstyrrelse og opsplitning af fibrillære variabler grupperede masser af elastin (pile) kan iagttages omkring kirtler (g) i forhold til deres respektive kontrolgrupper (i og II). Gomori sølv (A-D); Weigert s resorcin-Fuchsin (E-H). Barer:. 10 um
Kvantitativ analyse af retikulære fibre bekræftede stigningen i denne ekstracellulære komponent i de observerede i grupperne III og IV adenokarcinomer og viste også en uventet signifikant stigning i slimhinden i denerveres mave (gruppe II ) sammenlignet med gruppe i (tabel 1). Trods den tilsyneladende stigning af elastiske fibre i stroma af ikke-denerverede og denerverede dyr behandlet med MNNG (grupper III og IV, respektivt), var ingen statistisk forskel observeret i deres fordeling sammenlignet med kontrolgrupper (I og II) (tabel 1) . På den anden side, den myenteriske denervering inducerede signifikant stigning af de elastiske fibre af gastrisk stroma fra gruppe II og IV sammenlignet med ikke-denerverede maver fra grupperne I og III (tabel 1). Ingen væsentlig forskel blev bemærket i kollagen og elastiske fibre fordeling mellem ikke-ondartede og ondartede læsioner af stromas fra grupperne III og IV.Table 1 Stereologisk evaluering af virkningerne af myenteriske denervering i den gastriske antrum.

Relativ frekvens fordeling af fibrene (%) 1
grupper
Collagen System
Elastisk System
jeg
16,87 ± 0,5
13,27 ± 0,5
II
24,06 ± 1,5 *
19,4 ± 0,6 *
III - NT
21,8 ± 0,9
11,2 ± 0,6
III - MT
25,71 ± 0,5 *
11,1 ± 0,4
IV - NT
21,2 ± 1,6
20,2 ± 1,7 &
IV - MT
26,87 ± 1,5 *
19 ± 0,7 &
Histologisk præparat blev udført som beskrevet i Materialer og Metoder
. Værdier er udtrykt som middelværdi ± SEM af procentdelen af ​​relative hyppighed af fibre. Ikke-malign tumor (NT); malign tumor (MT). 1 Statistisk analyse baseret på ANOVA efterfulgt af korrektionen af ​​Tukey-Kramer. * P < 0,05 over gruppe I; &Amp; P < 0,05 over gruppe III.
Kvantificering af mastceller i fragmenter af pyloric region af maven
Mastceller blev analyseret og kvantificeret i den mukosale, submukøse og muskulære lag i alle forsøgsgrupper. Analysen af ​​det totale antal celler pr gastrisk fragment viste ingen signifikant forskel mellem den ikke-denerveres (I) og denerverede (II) grupper (fig. 4A). Men i ikke-denerverede eller denerverede grupper behandlet med MNNG (III og IV, respektivt), udvikling af godartede eller ondartede læsioner var forbundet med en betydelig stigning i antallet af mastceller i det gastriske antrum sammenlignet med den ikke-denerveres gruppe (JEG). I slimhinder og submukøse lag, den betydelige stigning af mastceller i de ikke-denerverede eller denerverede grupper behandlet med MNNG, (III og IV) blev forbundet med en stigning af intakte og degranulerede celler (fig. 4B). I musklen lag blev denne stigning hovedsagelig forbundet med det store antal af intakte mastceller (fig. 4C). Figur 4 Kvantitativ analyse af mastceller i maven. Dataene repræsenterer gennemsnittet ± standardfejl på tres felter analyserede per dyr som beskrevet i Materiale og fremgangsmåder. Ikke-denerveres (I) og denerverede mave (II) uden læsioner. Ikke-denerveres (III) og denerverede mave (IV) med læsioner. Ikke-malign tumor (NT). Malign tumor (MT). A)
Samlet antal mastceller i det gastriske fragment. * P < 0,05 vs. gruppe I. # P < 0,01 over en anden forsøgsgrupper. B og C)
intakte og degranulerede mastceller i den mucosale, submukøse og muskulære lag. * P < 0,05 over gruppe I; #P ≪ 0,05 i forhold til en anden eksperimentelle grupper; δ P < 0,05 vs. gruppe III - NT (intakt mastceller); &Amp; P < 0,05 vs. gruppe III - NT (degranulerede mastceller). C)
intakte og degranulerede mastceller i den muskulære lag. * P < 0,05 over gruppe I; # P < 0,05 over gruppe II.
Fænotypisk analyse af masten celler Hus Til den fænotypiske karakterisering af mastceller det blev brugt metoden ifølge Alcian Blue-Safranin (AB-SAF). I dyr af ikke-denerveres (I) og denerverede (II) grupper, der var en overvægt af mastceller AB positive (AB +) i mucosale og submukøse lag af den gastriske antrum, karakterisere disse celler som mucosal mastceller (MMC) (fig. 5A og 5B). I de eksperimentelle grupper behandlet med MNNG (III og IV), en stor andel af AB + og AB-SAF + mastceller undertyper blev observeret, sidstnævnte hovedsageligt i denerveres gruppe (IV) (fig. 5C og 5D). Fragmenter af den gastriske antrum indeholdende mesenterium blev anvendt til at bekræfte tilstedeværelsen af ​​SAF + -celler, der kendetegner det bindevæv mastcelle (CTMC) ved denne metode til farvning (fig. 5E og 5F). Figur 5 fænotypisk analyse af mastceller af gastrisk fragment. A og B)
Submukøs lag af ikke-denerveres (gruppe I) og denerverede (gruppe II) mave viser mastceller med cytoplasmatiske granula positive til alcian-blå (pile), der karakteriserer mucosal mast-fænotype - i detaljer af panel A . C og D)
To mast cellepopulation, er angivet i de gastriske læsioner af ikke-denerveres (gruppe III) og denerverede (gruppe IV) maver: Alcian-blå positive mastceller (sorte pile) og Alcian-blå /safranin positive mastceller (røde pile). E og F)
Mastceller med safranin positive granulat (pile) er observeret i mesenterium, karakteriserer bindevæv mastceller. Alcian-blå /Safranin metode. Bars: 10 um (fig A-F.); 5 um (detaljer Fig. A)
.
Samlede kvantificering af tre undertyper af mastceller (AB +, AB-SAF + og SAF +) bekræftede de morfologiske observationer, viser en overvægt af AB + -celler i pylorus fragmentet i alle forsøgsgrupper (tabel 2). I ikke-denerverede og denerverede grupper behandlet med MNNG (III og IV, respektivt), forøget denne celle subtype væsentligt i forhold til den ikke-denerveres gruppe (I). I denerverede maver behandlet med MNNG (gruppe IV), sub-cellulære AB-SAF + også blev øget betydeligt i maligne læsioner sammenlignet med læsioner i den ikke-denerveres gruppe behandlet med MNNG (III) .table 2 Density af mastceller med forskellige fænotyper i den gastriske antrum.

pylorus Fragment
grupper
AB +

SAF +
AB + SAF +
jeg
8 ± 2
1 ± 1
4 ± 1
II
14 ± 4
3 ± 1
13 ± 10
III - NT
49 ± 16 *
5 ± 2
11 ± 4
III - MT
23 ± 4 ***
4 ± 2
13 ± 5
IV - NT
28 ± 5 ***
2 ± 1
23 ± 8
IV - MT
36 ± 8 ** #
13 ± 10
47 ± 12 &
Histologisk præparat blev udført som beskrevet i Materialer og Metoder
. Værdier (antal celler pr mm2) er udtrykt som middelværdi ± SEM af 60 felter analyserede per dyr med en stærk objektiv (40 ×). Alcian-blå og (AB +), safranin (SAF +) og alcin-blå og /safranin positive celler (AB + SAF +). * P < 0,05 over gruppe I; # P < 0,01 vs. III - NT og - MT; &Amp; P < 0,05 over II.
Analyse af de forskellige undertyper af mastceller i mucosale og submukøse lag af pylorus fragmenter viste en betydelig stigning af mastceller AB + kun hos dyr med en godartet tumor (tabel 3). I denerverede maver behandlet med MNNG (gruppe IV), populationen af ​​mastceller AB-SAF + øget i sammenligning med andre forsøgsgrupper, værende væsentlig for malignt neoplasme. Musklen lag viste en anden profil af fragmentet som helhed, og denerverede maver uden og med neoplasi (II og IV) viste en overvægt af mastceller AB-SAF +. I ingen gruppe studeret, antallet af celler SAF +, der kendetegner CTMC, overhalede den anden celle subtypes.Table 3 Fordeling af mastceller med forskellige fænotyper i lagene af gastrisk antrum.

Histologiske Lag

slimhinde og Submucosa
Muskuløs

grupper
AB +
SAF +
AB + SAF +
AB +
SAF +
AB + SAF +

I (kontrol)
7 ± 2
0 ± 0
3 ± 0
1 ± 0
1 ± 1
2 ± 1
II
12 ± 4
0 ± 0
2 ± 1
2 ± 1
2 ± 1
11 ± 9
III - NT
40 ± 14 *
1 ± 1
4 ± 1
8 ± 3 *
3 ± 2
7 ± 3
III - MT
12 ± 2
0 ± 0
3 ± 1
11 ± 3 *
4 ± 1
10 ± 4
IV - NT
19 ± 3 **
1 ± 0,6
12 ± 8
9 ± 3 *
1 ± 0
18 ± 7
IV - MT
27 ± 10
9 ± 8
25 ± 8 # &
9 ± 2 ** π
3 ± 2
22 ± 9
Histologisk præparat blev udført som beskrevet i Materialer og metoder
. Værdier (antal celler pr mm2) er udtrykt som middelværdi ± SEM af 60 felter analyserede per dyr med en stærk objektiv (40 ×). Alcian-blå og (AB +), safranin (SAF +) og alcin-blå og /safranin positive celler (AB + SAF +). * P < 0,05 over gruppe I; # ≪ 0,05 vs. I og III-MT; &Amp; P < 0.01 vs. II; π P < 0,05 over II.
Diskussion
I denne undersøgelse blev undersøgt de histopatologiske ændringer og fordeling af den ekstracellulære matrix (ECM) fibrillære komponenter, og mastceller i pyloric region rottemaver ikke-denerverede eller denerveres af benzalkoniumchlorid (BAC), og ikke-behandlet eller behandlet med kræftfremkaldende N-methyl-N 'nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG).
Oprindeligt viste histopatologiske og stereologiske analyse ingen ændringer i den relative mængde af epitel og stromale rum i pylorus fragmenter fra ikke-denerveres (gruppe i) og denerverede maver (gruppe II). Men undersøgelsen af ​​fibrillære komponenter af ECM i disse prøver viste, at BAC denervering forårsager en forøgelse i hyppigheden af ​​retikulære og elastisk systemet fibre i denerveres gastrisk mucosa (gruppe II) sammenlignet med ikke-denerveres (gruppe I), hvilket fremgår af histokemisk og stereologiske analyse under anvendelse Gomori retikulin og Weigert s resorcin-Fuchsin farvning hhv. Sandsynligvis, fraværet af kontraktile stimulering forårsaget af myenteriske denervering i disse fragmenter (gruppe II) bidrager til en stigning i syntesen af ​​retikulære og elastiske fibre ved glatte muskelceller og /eller en ny forening af fibre i stroma som en mekanisme til passende den peristaltiske bølge koordination, og for at forhindre stasis i denerverede organer [32-34].
Behandling af ikke-denerveres (gruppe III) og denerverede (gruppe IV) dyr med MNNG inducerede udvikling af maligne tumorer (adenocarcinomer), godartet tumorer (adenomatøs polypose) og forstadier til kræft (dysplasi og atrofisk gastritis). Udviklingen af ​​adenokarcinomer i både ikke-denerverede og denerverede maver var i stand til at fremme en betydelig stigning i den relative mængde af det stromale rum. Under tumorudvikling i prostata eller maveslimhinden er interaktionen stroma /epitel forstyrret og indførte en ny tilstand forbundet til de morfologiske forandringer af ekstracellulær matrix komponenter og tumorvækst [35]. Den epitelcelleproliferation i både maligne og benigne læsioner forårsager ændringer placeret i kirtlen, efterfulgt af en fokal remodeling af de fibrillære komponenter i den ekstracellulære matrix [27].
I dette aspekt viste histokemisk analyse en betydelig stigning på retikulære fibre ifølge adenocarcinom (gruppe III) sammenlignet med de ikke-denerverede maver uden læsioner (gruppe i). Stigningen i stromale kollagen fibre udgør en mekanisme, hvorved tumorceller kunne undslippe "angreb" af T-lymfocytter (CD8 +) og at inducere apoptose, der vil virke som en barriere for infiltration af CD8 + [ ,,,0],36]. Trods en ikke signifikant ændring på den elastiske system, er en forstyrrelse af disse fibre observeret i adenocarcinomer af den ikke-denerveres mave (gruppe III), med tilstedeværelsen af ​​ligene af elastiske elementer fraktionerede, hvilket antyder en nedbrydning eller ombygning af stroma i afhængighed til skade under indflydelse af neoplastiske celler. Disse ændringer i elastiske systemets fibre var samtidig med ombygningen af ​​kollagen fibre, også observeret i prostata læsioner [37] og i prostata stroma i løbet af denne kirtel regression efter kastration [38, 39]. Ifølge disse resultater, kunne den aggressive tumor vurderes af de fibrøse komponenter i matrixen.

• Hvordan skal sporstoffer injiceres at opdage for sentinel knudepunkter i mavekræft - submukøst indefra eller subserosally fra ydersiden af ​​maven
• Clinicopathologic karakteristika og behandlingsresultater af hepatoid adenokarcinom i maven, en sjælden, men unik undertype af gastrisk cancer