Effets de dénervation myentérique sur les fibres de la matrice extracellulaire et la distribution des mastocytes dans l'estomac normal et Effets lesions

gastriques de dénervation myentérique sur les fibres de la matrice extracellulaire et la distribution des mastocytes dans l'estomac normal et des lésions gastriques
fond
Résumé Dans cette étude l'effet de la dénervation myentérique induite par le chlorure de benzalkonium (BAC) sur la distribution des composants fibrillaires de la matrice extracellulaire (ECM) et des cellules inflammatoires a été étudiée dans la carcinogenèse gastrique induite par la N-méthyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG). Les rats ont été divisés en quatre groupes expérimentaux: non dénervé (I) et de l'estomac dénervé (II) sans traitement MNNG; estomacs non dénervé (III) et dénervés (IV) traités par le MNNG. Résultats de Pour l'analyse histopathologique, histochimique et stéréologique, sections de fragments gastriques ont été colorées à l'hématoxyline-éosine, picrosirius-hématoxyline, Gomori réticuline, Resorcin-Fuchsine de Weigert, Toluidine bleu et Alcian-Blue /safranine (AB-SAF).
BAC dénervation provoque une augmentation de la fréquence des réticulaire et des fibres élastiques dans le dénervé (groupe II) par rapport aux ventres non dénervé (groupe I). Le traitement des animaux avec MNNG induit le développement des adénocarcinomes dans les estomacs non dénervé et dénervés (groupes III et IV, respectivement) avec une augmentation notable du volume relatif du stroma, la fréquence des fibres réticulaires et l'infiltrat inflammatoire qui était plus intense dans le groupe IV. Une augmentation de la fréquence des fibres élastiques a été observée dans les adénocarcinomes du dénervé (groupe IV) par rapport aux ventres non dénervé (groupe III) a montré que la dégradation de ces fibres. Le développement des lésions (groupes III et IV) a également été associée à une augmentation de la population des mastocytes, notamment AB et AB-SAF positifs, ces derniers principalement dans le groupe dénervé IV. De Conclusions
Les résultats montrent une forte association dans la modification morphologique des composants fibrillaires ECM, la densité accrue des mastocytes et le développement de tumeurs induites par MNNG dans l'estomac de rat ou non dénervé dénervés par BAC. Cela laisse supposer que l'étude des composants extracellulaires et intracellulaires du microenvironnement tumoral contribue à la compréhension de la biologie des tumeurs par l'action de la dénervation myentérique. Interaction
fond entre les cellules tumorales et le stroma environnant est l'un des aspects clés du mécanisme de prolifération des cellules tumorales et à l'invasion [1]. Les cellules tumorales font remodeler la matrice extracellulaire (ECM), un mélange complexe de fibres (collagène, réticulaires et élastiques) et de substance fondamentale qui fournit un soutien cellulaire [2], pour faciliter la communication et la fuite de la commande par le microenvironnement [3]. Le système collagène fibrillaire agit comme un cadre de soutien des tissus, où les fibres réticulaire relient les fibres de collagène avec les lamelles basale des cellules épithéliales, musculaires et adipeux; le système microfibrilles-élastine joue un rôle dans la distribution uniforme de stress pour maintenir la résilience aux exigences locales des tissus [4].
intégrité structurale et fonctionnelle des systèmes collagène fibrillaires et microfibrilles-élastine sont importants pour l'estomac pour emballer la nourriture, pour sécréter des enzymes et des acides pour briser les nutriments crus et pour transférer le mélange dans le petit intestin. Les trois tâches dépendent de l'extrinsèque (divisions sympathique et parasympathique du système nerveux autonome) et l'innervation intrinsèque (système nerveux entérique - ENS). Les principales composantes de l'ENS sont deux réseaux ou plexus de neurones et des fibres nerveuses, le plexus myentérique et muqueux [5]. L'importance de l'ENS pour la régulation des fonctions gastro-intestinales est observée après l'application topique de l'agent tensioactif cationique, le chlorure de benzalkonium (BAC), sur la couche séreuse qui se traduit par une destruction partielle et sélective des neurones du plexus myentérique [6]. La corrélation entre la carcinogenèse et l'ENS a été démontrée dans des modèles expérimentaux utilisant la dénervation myentérique par BAC et l'induction des tumeurs par le N-méthyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) [7] et le 1,2-diméthylhydrazine ( DMH) [8] avec une réduction de l'incidence et la taille des tumeurs gastro-intestinales.
les cellules immunitaires sont de puissantes sources de signaux paracrines à l'ENS. En particulier, les mastocytes entériques sont stratégiquement situés et ont de puissants médiateurs pharmacologiques qui agissent dans le visage de stimuli immunologiques qui peuvent affecter l'intégrité du tractus gastro-intestinal [9]. L'anticorps se liant aux mastocytes les rend capables de reconnaître des antigènes spécifiques et signaler leur présence à l'ENS. ENS, à son tour, interprète les signaux chimiques de mastocytes comme une menace et cherche à l'éliminer, fournissant ainsi une réponse protectrice [9]. La présence de mastocytes a été décrite dans plusieurs néoplasies, avec des rôles pro ou anti-tumoraux joués par les médiateurs bioactifs libérés par l'influence du microenvironnement tumoral [10 à 12]. L'action de médiateurs pro-tumorales telles que l'histamine, la tryptase et la chymase peut favoriser la migration et la prolifération des cellules induisant l'expression des molécules d'adhésion sur des cellules endothéliales et activant ainsi le processus d'angiogenèse tumorale, des métastases et de la prolifération [13-15]. D'autre part, certaines cytokines telles que l'interleukine (IL) -2 et -21, le facteur de nécrose tumorale (TNF) et de l'héparine libérés par les mastocytes, peuvent agir comme agents anti-cancéreux en inhibant leur croissance [16, 17].
plusieurs études ont montré que, lors de la carcinogenèse on observe une augmentation du nombre de mastocytes, observée dans neurofibromes, les lipomes, les hémangiomes, des tumeurs de la glande surrénale et la peau [18], les carcinomes épidermoïdes [19], à cellules squameuses du larynx [20] et carcinomes gastriques [21]. Dans les adénocarcinomes gastriques, la petite libération des contenus stockés dans les granules cytoplasmiques des mastocytes a été associée à des changements dans la microvasculaire lames basales, y compris l'épaisseur irrégulière, des couches multiples et une faible association avec les cellules endothéliales et péricytes qui contribuent au remodelage des vaisseaux sanguins [22]. Après l'ablation chirurgicale du cancer gastrique, les études de survie ont montré que les patients avec une augmentation du nombre de mastocytes ont montré un plus mauvais pronostic par rapport aux patients ayant un faible nombre d'entre eux.
Le but de la présente étude était de déterminer les effets de l'ablation chimique de myentérique neurones sur la répartition des fibres de la matrice extracellulaire et des mastocytes dans la muqueuse gastrique de l'estomac non dénervé et dénervés, et dans un modèle de carcinogenèse gastrique induite par l'administration MNNG chez les rats.
Matériel et méthodes
conception expérimentale
Quatre groupes expérimentaux ont été évalués. Groupes I (n = 5) et II (n = 5) non dénervé et dénervé respectivement, sans la présence de néoplasmes gastriques; des groupes III (n = 10) et IV (n = 10) et non dénervé dénervé, respectivement, avec la présence de néoplasmes gastriques. Des fragments de la région du pylore (antrale) de l'estomac utilisés dans cette étude ont été obtenues à partir des enquêtes menées par POLLI-LOPES et al. [7]. Les procédures expérimentales ont été réalisées conformément aux règles du Comité sur les soins et les utilisations des animaux de laboratoire du Conseil national de recherches du N.I.H. (USA) et le Comité d'éthique de l'expérimentation animale (CFEC) de FAMERP (Protocole de n ° 6193/2008), São José do Rio Preto, Wistar Animals
rats de SP. Pondérant 100 a 150 g, obtenu à partir de l'animalerie de l'Ecole de Médecine de Ribeirão Preto, Brésil, ont été logés (4 animaux par cage), à ​​des températures entre 23 à 25 ° C, et reçu de la nourriture et de l'eau ad libitum.

dénervation gastrique im
Les animaux ont été anesthésiés avec du chlorhydrate de kétamine et du chlorure thiazine (0,15 ml /0,05 ml /100 g de poids) [23]. L'estomac de chaque animal a été extériorisé par une laparotomie abdominale supérieure médiane et isolée de la cavité péritonéale à travers une petite fenêtrage dans une feuille en matière plastique pour application topique de 0,6% BAC (v /v) (Aldrich Chemical Co., diluée dans une solution saline (0,9% NaCl) [7, 24]. les estomacs isolés ont été enveloppés avec de la gaze imbibée d'alcoolémie ou de sérum physiologique et maintenu humide pendant 30 min [6, 7, 24]. La surface séreuse de l'estomac a été lavé soigneusement avec du sérum physiologique, les organes ont été retournés à leur place anatomique et la paroi abdominale a été suturée. les animaux ont été maintenus dans des cages en plastique (4 animaux /cage) à température contrôlée, et reçu de la nourriture et de l'eau ad libitum.

induction de néoplasies dans la muqueuse gastrique antrale
Seize semaines après l'intervention chirurgicale, les animaux des groupes III (non dénervé) et IV (dénervé) ingérés une solution de N-méthyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) (Aldrich Chemical Co., Inc., Milwaukee, WI) dissous dans de l'eau distillée et déionisée à une concentration de 100 mg /L pendant 28 semaines. Les animaux ont été sacrifiés 2 mois après la dernière prise de MNNG et les estomacs ont été prélevés pour l'analyse morphologique. L'analyse morphologique et quantitative
fibres de la matrice extracellulaire
fragments de la région pylorique de l'estomac (antre) ont été fixés dans 4% de formol tamponné pendant 12 heures, on l'a lavé dans de l'eau du robinet, déshydraté dans une série d'éthanol et inclus dans de la paraffine. Pour l'étude de la matrice extracellulaire, sections 4 um d'épaisseur ont été colorées à l'hématoxyline-éosine [25], picrosirius-hématoxyline [26] et Gomori réticuline [27] pour l'analyse histopathologique, et respectivement pour le collagène et les fibres réticulaires évaluation. Les fibres du système élastique ont été étudiés en utilisant Resorcin-Fuchsine de Weigert qui colore sélectivement les deux fibres élastiques et elaunin (les fibres de oxytalanes restent non colorées parce qu'ils ne sont pas oxydés précédemment dans cette étude) [28]. Les échantillons ont été analysés avec un microscope optique Olympus BX60 (Olympus, Hambourg, Allemagne) et les champs microscopiques ont été numérisés à l'aide de l'image-Pro Plus version 4.5 pour le logiciel Windows (Media Cybernetics, Silver Springs, MD). Cinq zones aléatoires de la muqueuse gastrique ont été analysées à l'aide d'un objectif × 20, et l'étalonnage a été effectué à l'aide d'un Olympus classé lame de microscope. L'analyse quantitative a été déterminée selon le mode opératoire de Weibel [29], un système de test de réseau avec 168 points et 84 lignes d'essai, à comparer le volume relatif (pourcentage) des compartiments de la muqueuse gastrique (épithélium, le stroma et d'autres compartiments, à l'exception du épithélium et le stroma) pour l'hématoxyline-éosine et de la fréquence relative des réticulaire et la distribution des fibres élastiques (pourcentage) pour Gomori et réticuline resorcin- coloration à la fuchsine de Weigert, respectivement. Les valeurs sont rapportées comme moyenne ± SEM de volume relatif (pourcentage) des compartiments de la muqueuse gastrique et la moyenne ± ETM de la fréquence relative des réticulaire et la distribution des fibres élastiques (pourcentage). Cellules
Mât
Analyse des mastocytes dans l'estomac antrale a été réalisée dans les coupes colorées avec du bleu de toluidine à 0,5% pour la quantification des cellules intactes et dégranulés et, avec Alcian-Blue-la safranine (AB-SAF) pour la quantification de la muqueuse et les mastocytes du tissu conjonctif [30, 31]. A cet effet, soixante au hasard des zones de la muqueuse gastrique ont été analysés, par animal, avec un microscope optique Olympus (Olympus, Hambourg, Allemagne) en utilisant un millimètre oculaire et un objectif × 40 puissance × 12,5 /16 (ZEISS, Allemagne) . Les valeurs sont exprimées en moyenne ± SEM du nombre de cellules par mm Analyse statistique de 2.
Les données ont été analysées à l'aide du logiciel Statistica 6.0 (StarSoft, Inc., Tulsa, OK). Les données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM et ont été soumis à t
test de Student et l'analyse à sens unique des variances (ANOVA), puis à l'Tukey-Kramer test de comparaisons multiples ou Bonferroni. Les différences avec les valeurs de P <
0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives.
Analyse histopathologique et histochimique des résultats des estomacs de rats
Initialement, des fragments pyloriques des estomacs non dénervé et dénervés par le chlorure de benzalkonium (BAC) (groupes I et II, respectivement) ont été étudiés . L'analyse des fragments de groupe II a montré que la dénervation myentérique n'a pas modifié la quantité et la distribution des fibres de collagène de grillages qui entourent les glandes pyloriques par rapport au groupe I (Fig. 1A et 1B). Ce résultat a été confirmé par coloration hématoxyline-picrosirius (Fig. 1E et 1F), et l'analyse quantitative du volume relatif de l'épithélium et du stroma de la muqueuse gastrique par les deux groupes (Fig. 1I et 1J). Figure 1 L'analyse histologique des estomacs de rats. A, B, E et F)
pyloriques glandes gastriques (g) entourées par un stroma avec des fibres de collagène (s) observée dans la couche muqueuse des groupes I et II. Epithelium (ep). fosses gastriques (f). Muscularis mucosa (m). glandes gastriques C, D, G et H)
pyloriques (g) constituées par les cellules tumorales ont occupé la plus grande surface de la muqueuse gastrique des groupes III et IV. Une accumulation de PMN (flèches) a été observée dans les glandes. Hématoxyline-éosine (A-D); Picrosirius-hématoxyline (E-H). Bars: 20 pm. I-L
) des compartiments de tissus (épithélium, stroma, autres) volumes de la muqueuse du pylore gastrique. Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart-type de pourcentage du volume relatif. Groupes sans lésions (I et II) présentent un volume relativement élevé de l'épithélium (p < 0,05) par rapport aux groupes présentant des lésions (III et IV). La présence d'adénocarcinome dans les groupes III et IV ont abouti à une augmentation significative (p < 0,05). Du stroma par rapport aux groupes I et II
estomacs non dénervé et dénervés traités avec MNNG (groupes III et IV, respectivement) a présenté des changements dans l'architecture tissulaire et l'agencement des fibres de la matrice extracellulaire et à une augmentation du diamètre des glandes pyloriques, ainsi que dans le volume relatif du stroma (Fig. 1C, D, G et 1H). Le traitement par MNNG induit le développement de tumeurs bénignes et malignes, en particulier les polypes adénomateux et adénocarcinomes (Fig. 1C et 1G) dans les estomacs non dénervé (groupe III). Les animaux ayant l'estomac dénervés et des lésions précancéreuses traitées par MNNG (groupe IV) développé et les tumeurs malignes caractérisées par la dysplasie, la gastrite atrophique et adénocarcinome (Fig. 1D et 1H). Dans les deux groupes, le stroma de la adénocarcinomes a été enrichi par la présence de cellules inflammatoires, comme les mastocytes, les neutrophiles, les cellules plasmatiques et les lymphocytes, montrant une réponse immunologique à néoplasies (fig. 2). Cependant, les lésions néoplasiques du groupe IV ont des profils plus petits et moins agressifs par rapport au groupe III et de l'infiltrat inflammatoire localisée dans le stroma de la tumeur était plus intense, en particulier chez les animaux qui ont développé des adénocarcinomes (Fig. 2D). Figure 2 L'analyse histologique d'adénocarcinome induite par le traitement MNNG. A et B)
vue morphologique de l'adénocarcinome (AD) en non-dénervé (groupe III) et de l'estomac dénervé (groupe IV). couche musculaire (M). infiltrat inflammatoire intense (In). C et D)
Détail de infiltrat inflammatoire du stroma tumoral constitué par les mastocytes (flèches noires), les neutrophiles (pointes de flèches), les lymphocytes (flèches vertes) et des cellules plasmatiques (flèches rouges). Bleu de toluidine. Bars:. 100 um (Fig. A et B), 10 um
(Fig. C et D)
analyse histochimique des sections pyloriques a été réalisée avec Gomori réticuline et Resorcin-Fuchsine coloration de Weigert pour étudier la distribution ( fréquence) de la réticulaire et des fibres élastiques dans le stroma, respectivement. Les articles soumis aux deux méthodes ont révélé la même répartition des fibres de grillages qui entourent les glandes pylorique de l'estomac des groupes I et II (fig. 3A, B, E et 3F). estomacs non dénervé ou dénervés traités par MNNG (groupes III et IV, respectivement), apparemment présentées plus grande quantité de fibres réticulaires (Fig. 3C et 3D) et des fibres élastiques courts et épais très désorganisé (Fig. 3G et 3H), dans les adénocarcinomes par rapport à leurs groupes témoins respectifs (groupes I et II, respectivement). Figure 3 Analyse histochimique des réticulaire (A-D) et des fibres élastiques (E-H) dans les estomacs de rats. A et B)
groupes I et II ont présenté des fibres réticulaires rectilignes et alignées (flèches) entourant l'épithélium (EP) et le stroma (s). C et D)
fibres réticulaires (flèche) sinueuses et apparemment les plus denses à la base (flèches) des glandes (g). Les fibres de collagène accumulation entre les glandes (*) ont été observées. E et F)
Les glandes sont accompagnés d'une délicate toile de fibres élastiques (flèche) et plus intensément marqués dans E. G et H)
Une augmentation de l'épaisseur de ces fibres, la perturbation et la fragmentation des variables fibrillaires masses groupées de l'élastine (flèches) peuvent être observées autour des glandes (g) par rapport à leurs groupes témoins respectifs (I et II). argent (A-D) de Gomori; Resorcin-Fuchsine de Weigert (E-H). Bars:. 10 um
Analyse quantitative des fibres réticulaires ont confirmé l'augmentation de cette composante extracellulaire dans les adénocarcinomes observées dans les groupes III et IV et ont également montré une augmentation significative inattendue dans la muqueuse de l'estomac dénervé (groupe II ) par rapport au groupe I (tableau 1). En dépit de l'augmentation apparente des fibres élastiques dans le stroma des animaux non dénervé et dénervés traités par MNNG (groupes III et IV, respectivement), aucune différence statistique n'a été observée dans leur distribution par rapport aux groupes de contrôle (I et II) (tableau 1) . D'autre part, la dénervation induit myentérique augmentation significative des fibres élastiques du stroma gastrique des groupes II et IV par rapport aux estomacs non dénervé des groupes I et III (voir le tableau 1). Aucune différence significative n'a été notée dans le collagène et la distribution de la fibre élastique entre les lésions non malignes et malignes de stromas des groupes III et IV.Table 1 évaluation stéréologique des effets de la dénervation myentérique dans l'antre gastrique.

distribution de fréquence relative des fibres (%) 1
Groupes
système collagène
système élastique
I
16,87 ± 0,5
13,27 ± 0,5
II
24.06 ± 1,5 *
19,4 ± 0,6 *
III - NT
21,8 ± 0,9
11,2 ± 0,6
III - MT
25,71 ± 0,5 *
11.1 ± 0.4
IV - NT
21,2 ± 1,6
20,2 ± 1,7 &
IV - MT
26,87 ± 1,5 *
19 ± 0,7 &
préparation histologique a été réalisée comme décrit dans Matériels et Méthodes
. Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart-type de pourcentage de la fréquence relative des fibres. tumeur non maligne (NT); tumeur maligne (MT). 1 Une analyse statistique basée sur ANOVA suivi par la correction de Tukey-Kramer. * P < 0,05 par rapport au groupe I; &Amp; P < 0,05 par rapport au groupe III.
Quantification des mastocytes dans les fragments de la région pylorique de l'estomac
mastocytes ont été analysés et quantifiés dans la muqueuse, la sous-muqueuse et les couches musculaires dans tous les groupes expérimentaux. L'analyse du nombre total de cellules par le fragment gastrique n'a montré aucune différence significative entre le non dénervé (I) et (II) les groupes dénervé (Fig. 4A). Cependant, dans les groupes non dénervé ou dénervés traités par MNNG (III et IV, respectivement), le développement des lésions bénignes ou malignes a été associée à une augmentation significative du nombre de mastocytes dans l'antre gastrique par rapport au groupe non dénervé (JE). Dans les couches de la muqueuse et la sous-muqueuse, l'augmentation significative des mastocytes dans les groupes non traités dénervés ou dénervés avec MNNG, (III et IV) a été associée à une augmentation des cellules intactes et dégranulés (Fig. 4B). Dans la couche musculaire, cette augmentation était principalement associée avec le grand nombre de mastocytes intactes (Fig. 4C). La Figure 4 Analyse quantitative des mastocytes dans l'estomac. Les données représentent la moyenne ± S.E.M. de soixante champs analysés par animal comme décrit dans Matériel et méthodes. Non-dénervé (I) et de l'estomac dénervé (II) sans lésions. estomac non dénervé (III) et dénervé (IV) avec des lésions. tumeur non maligne (NT). Tumeur maligne (MT). A)
Nombre total de mastocytes dans le fragment gastrique. * P < 0,05 vs. groupe I. # P < 0,01 vs. autres groupes expérimentaux. B et C)
mastocytes Intact et dégranulés dans la muqueuse, la sous-muqueuse et les couches musculaires. * P < 0,05 par rapport au groupe I; #P ≪ 0,05 par rapport aux autres groupes expérimentaux; δ P < 0,05 groupe vs III - NT (mastocytes intact); &Amp; P < 0,05 par rapport au groupe III - NT (mastocytes dégranulés). C)
mastocytes Intact et dégranulés dans la couche musculaire. * P < 0,05 par rapport au groupe I; # P < 0,05 par rapport au groupe II.
L'analyse phénotypique des cellules du mât
Pour la caractérisation phénotypique des mastocytes il a été utilisé la méthode de la safranine-bleu alcian (AB-SAF). Chez les animaux de non-dénervé (I) et (II) les groupes dénervé, il y avait une prédominance des mastocytes AB positif (AB +) dans les couches de la muqueuse et la sous-muqueuse de l'antre gastrique, la caractérisation de ces cellules en tant mastocytes de la muqueuse (MMC) (fig. 5A et 5B). Dans les groupes expérimentaux traités avec MNNG (III et IV), une forte proportion de AB + et AB-SAF + mastocytes sous-types ont été observés, ce dernier principalement dans le groupe dénervé (IV) (Fig. 5C et 5D). Des fragments de l'antre contenant mésentère gastrique ont été utilisés pour confirmer la présence du SAF + cellules, caractérisant la mastocytes du tissu conjonctif (CCFPT) par cette méthode de coloration (Fig. 5E et 5F). La Figure 5 Analyse phénotypique des mastocytes de fragment gastrique. A et B)
couche de sous-muqueuse de non-dénervé (groupe I) et dénervé (groupe II) estomac montrant des mastocytes avec des granules cytoplasmiques positifs à alcian-bleu (flèches), caractérisant le phénotype des cellules muqueuses de mât - en détail du panneau A . C et D)
Deux population de cellules de mât sont notées dans les lésions gastriques de non-dénervé (groupe III) et dénervés groupe IV) estomacs (: cellules alcian-bleu positifs mastocytes (flèches noires) et alcian-bleu /safranine mastocytes positives (flèches rouges). E et F)
Mast cellules avec des granules positifs safranine (flèches) sont observées dans le mésentère, la caractérisation des mastocytes du tissu conjonctif. Alcian-bleu /méthode safranine. Bars: 10 pm (Fig A-F.); 5 um (détail Fig. A)
.
La quantification total de trois sous-types de mastocytes (AB +, AB-SAF + et SAF +) a confirmé les observations morphologiques, montrant une prédominance de AB + cellules dans le fragment pylore dans tous les groupes expérimentaux (Tableau 2). Dans les groupes non dénervé et dénervés traités par MNNG (III et IV, respectivement), ce sous-type de cellules a augmenté de façon significative par rapport au groupe non dénervé (I). Dans les estomacs dénervés traités par MNNG (groupe IV), la sous-cellulaire AB-SAF + a également été significativement augmentée dans les lésions malignes par rapport à des lésions dans le groupe non dénervé traité avec MNNG (III) .Tableau 2 Densité de mastocytes avec différents phénotypes dans l'antre gastrique.

pyloriques Fragment
Groupes
AB +

SAF +
AB + SAF +
I
8 ± 2
1 ± 1
4 ± 1
II
14 ± 4
3 ± 1
13 ± 10
III - NT
49 ± 16 *
5 ± 2
11 ± 4
III - 23 ± 4 ***
MT 4 ± 2
13 ± 5
IV - NT
28 ± 5 ***
2 ± 1
23 ± 8
IV - MT
36 ± 8 ** #
13 ± 10
47 ± 12 &
préparation histologique a été réalisée comme décrit dans Matériels et Méthodes
. Valeurs (nombre de cellules par mm2) sont exprimés en moyenne ± SEM de 60 champs analysés par animal avec un objectif de puissance élevée (40 ×). Alcian bleu
(AB +), safranine (SAF +) et Alcin bleu
/safranine cellules positives (AB + SAF +). * P < 0,05 par rapport au groupe I; # P < 0,01 vs. III - NT et - MT; &Amp; P < 0,05 par rapport à II.
L'analyse des différents sous-types de mastocytes dans les couches de la muqueuse et la sous-muqueuse de fragments pylore a montré une augmentation significative des mastocytes AB + uniquement chez les animaux atteints d'une tumeur bénigne (tableau 3). Dans les estomacs dénervés traités avec MNNG (groupe IV), la population de mastocytes AB-SAF + a augmenté en comparaison avec d'autres groupes expérimentaux, étant significatif pour les tumeurs malignes. La couche musculaire a montré un profil différent du fragment dans son ensemble, et les estomacs dénervés avec et sans néoplasie (groupes II et IV) a montré une prédominance des mastocytes AB-SAF +. Dans aucun groupe étudié, le nombre de cellules SAF +, qui caractérisent le CCFPT, a dépassé l'autre subtypes.Table cellulaire 3 Répartition des mastocytes avec des phénotypes différents dans les couches de l'antre gastrique.

couches histologiques

Muqueuse et Submucosa
Musclé

Groupes
AB +
SAF +
AB + SAF +
AB +
SAF +
AB + SAF +

I (Control)
7 ± 2
0 ± 0
3 ± 0
1 ± 0
1 ± 1
2 ± 1
II
12 ± 4
0 ± 0
2 ± 1
2 ± 1
2 ± 1
11 ± 9
III - NT
40 ± 14 *
1 ± 1
4 ± 1
8 ± 3 *
3 ± 2
7 ± 3
III - MT
12 ± 2
0 ± 0
3 ± 1
11 ± 3 *
4 ± 1
10 ± 4
IV - NT
19 ± 3 **
1 ± 0,6
12 ± 8
9 ± 3 *
1 ± 0
18 ± 7
IV - 27 ± 10
9 ± 8
25 ± 8 # &MT;
9 ± 2 ** π
3 ± 2
22 ± 9
préparation histologique a été réalisée comme décrit dans Matériels et Méthodes
. Valeurs (nombre de cellules par mm2) sont exprimés en moyenne ± SEM de 60 champs analysés par animal avec un objectif de puissance élevée (40 ×). Alcian bleu
(AB +), safranine (SAF +) et Alcin bleu
/safranine cellules positives (AB + SAF +). * P < 0,05 par rapport au groupe I; # ≪ 0,05 vs. I et III-MT; &Amp; P < 0,01 vs II; π P < Discussion de
0,05 vs. II. Dans cette étude, on a étudié l'évolution histopathologiques et la distribution de la matrice extracellulaire (ECM) des composants fibrillaires, et les mastocytes dans la région pylorique de l'estomac de rats non dénervé ou dénervé par le chlorure de benzalkonium (BAC) et non traitées ou traitées avec l'agent cancérigène N-méthyl-N '-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG).
dans un premier temps, l'analyse histopathologique et stéréologique n'a montré aucun changement dans le volume relatif de l'épithélium et compartiments stromales dans les fragments pyloriques de non-dénervé (groupe I) et les estomacs dénervés (groupe II). Cependant, l'étude des composants fibrillaires d'ECM dans ces échantillons a révélé que les taux d'alcoolémie dénervation provoque une augmentation de la fréquence des fibres réticulaires et du système élastique dans la muqueuse gastrique dénervé (groupe II) par rapport aux non-dénervé (groupe I), comme le montre analyse histochimique et stéréologique utilisant Gomori réticuline et Resorcin-fuchsine coloration de Weigert, respectivement. Probablement, l'absence de stimulation de la contraction provoquée par une dénervation myentérique dans ces fragments (groupe II) contribuent à une augmentation de la synthèse des fibres de réticuline et élastique par les cellules musculaires lisses et /ou une nouvelle association de fibres dans le stroma en tant que mécanisme pour adéquat la coordination de l'onde péristaltique, et pour empêcher la stase dans les organes dénervés [32-34]
. Traitement des non-dénervé (groupe III) et dénervé (groupe IV) animaux avec MNNG induit le développement de tumeurs malignes (adénocarcinomes), bénigne tumeurs (polypes adénomateux) et des lésions précancéreuses (dysplasie et gastrite atrophique). Le développement des adénocarcinomes dans les estomacs non dénervé et dénervés est capable de promouvoir une augmentation significative du volume relatif du compartiment stromal. Au cours du développement de la tumeur de la prostate ou de la muqueuse gastrique, l'interaction stroma /épithélium est perturbé et impose une nouvelle condition associée aux changements morphologiques des composants de la matrice extracellulaire et la croissance des tumeurs [35]. La prolifération des cellules epitheliales dans les deux lésions malignes et bénignes provoque des changements situés dans la glande, suivie d'un remodelage focal des composants fibrillaires dans la matrice extracellulaire [27].
Dans cet aspect, l'analyse histochimique a démontré une augmentation significative de la les fibres réticulaires des adénocarcinomes (groupe III) par rapport aux ventres non dénervé sans lésions (groupe I). L'augmentation des fibres stromales de collagène représente un mécanisme par lequel les cellules tumorales pourraient échapper à la «attaque» des lymphocytes T (CD8 +) et à induire l'apoptose, qui agirait comme un obstacle à l'infiltration de CD8 + [ ,,,0],36]. En dépit d'une modification non significative sur le système élastique, une rupture de ces fibres a été observée dans les adénocarcinomes de l'estomac non dénervé (groupe III), avec la présence de corps d'éléments élastiques fractionnés, ce qui suggère une dégradation ou un remodelage du stroma en réponse à la blessure sous l'influence des cellules néoplasiques. Ces changements dans les fibres élastiques du système ont été simultanément avec le remodelage des fibres de collagène, également observées dans les lésions de la prostate [37] et dans le stroma de la prostate au cours de cette glande régression suivant la castration [38, 39]. D'après ces résultats, la tumeur agressive peut être évaluée par les composants fibreux de la matrice.

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