Effetti della denervazione mioenterico sulle fibre della matrice extracellulare e della distribuzione dei mastociti nelle normali stomaco e lesioni gastriche

Effetti della denervazione mioenterico sulle fibre della matrice extracellulare e della distribuzione dei mastociti nelle normali lesioni allo stomaco e gastriche
Abstract
sfondo
In questo studio l'effetto di denervazione mioenterico indotta da cloruro di benzalconio (BAC) sulla distribuzione di componenti fibrillari di matrice extracellulare (ECM) e cellule infiammatorie è stata investigata in carcinogenesi gastrica indotta da N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG). I ratti sono stati divisi in quattro gruppi sperimentali: non denervato (I) e dello stomaco denervata (II) senza trattamento MNNG; stomaci non denervato (III) e denervati (IV) trattati con MNNG. Per l'analisi istopatologica, istochimica e stereologica, sezioni di frammenti gastrici sono state colorate con ematossilina-eosina, Picrosirius-ematossilina, Gomori reticolina, di Weigert Resorcin-fucsina, blu di toluidina e Alcian-Blue /safranina (AB-SAF).
Risultati
BAC denervazione provoca un aumento della frequenza di reticolare e fibre elastiche nel denervato (gruppo II) rispetto ai stomaci non denervati (gruppo i). Il trattamento degli animali con MNNG indotto lo sviluppo di adenocarcinomi in stomaci non denervati e denervati (gruppi III e IV, rispettivamente) con un notevole aumento del volume relativo del stroma, la frequenza di fibre reticolari e l'infiltrato infiammatorio che era più intensa nel gruppo IV. Un aumento della frequenza delle fibre elastiche è stata osservata in adenocarcinomi di denervato (gruppo IV) rispetto ai stomaci non denervati (gruppo III) che hanno mostrato la degradazione di queste fibre. Lo sviluppo di lesioni (gruppi III e IV) è stata anche associata ad un aumento della popolazione dei mastociti, in particolare AB e AB-SAF positivi, questi ultimi soprattutto nel gruppo denervata IV.
Conclusioni
I risultati mostrano una forte associazione nella alterazione morfologica dei componenti fibrillari ECM, l'aumento della densità dei mastociti e lo sviluppo di tumori indotti da MNNG nello stomaco di ratto non denervati o denervati da BAC. Questo suggerisce che lo studio di componenti extracellulari ed intracellulari di microambiente tumorale contribuisce alla comprensione della biologia tumorale dall'azione di denervazione mioenterico.
Sfondo
interazione tra cellule tumorali e lo stroma circostante è uno degli aspetti fondamentali nel meccanismo di proliferazione delle cellule tumorali e l'invasione [1]. Le cellule tumorali fanno rimodellare la matrice extracellulare (ECM), una miscela complessa di fibre (collagene, reticolari ed elastiche) e sostanza fondamentale che fornisce supporto di cellule [2], per facilitare la comunicazione e la fuga di controllo da parte del microambiente [3]. Il sistema di collagene fibrillare funge da un'intelaiatura di supporto di tessuti, dove le fibre reticolari collegano fibre collagene con le lamine basali delle cellule epiteliali, muscolari e adipose; il sistema microfibril-elastina svolge un ruolo nella distribuzione uniforme dello stress per mantenere la resilienza alle esigenze del tessuto locale [4].
integrità strutturale e funzionale dei sistemi di collagene fibrillari e microfibril-elastina sono importanti per lo stomaco per imballare il cibo, a secernere enzimi e acidi di rompere i nutrienti prime e di trasferire la miscela al piccolo intestino. I tre compiti dipendono del estrinseca (divisioni simpatico e parasimpatico del sistema nervoso autonomo) e l'innervazione intrinseca (enterico sistema nervoso - ENS). Le principali componenti della ENS sono due reti o plessi di neuroni e le fibre nervose, il plesso mioenterico e sottomucosa [5]. Si osserva l'importanza ENS per la regolazione delle funzioni gastrointestinali dopo l'applicazione topica del tensioattivo cationico, cloruro di benzalconio (BAC), sullo strato sierosa che provoca la distruzione parziale e selettiva di neuroni del plesso mienterico [6]. La correlazione tra la carcinogenesi e ENS è stato dimostrato in modelli sperimentali utilizzando la denervazione myenteric da BAC e l'induzione di tumori da N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) [7] e 1,2-dimetilidrazina ( DMH) [8] con una riduzione dell'incidenza e le dimensioni dei tumori gastrointestinali.
cellule immunitarie sono fonti potenti segnali paracrini alla ENS. Particolarmente mastociti enterici sono strategicamente insediate e potenti mediatori farmacologici che agiscono di fronte a stimoli immunologici che possono influenzare l'integrità del tratto gastrointestinale [9]. Il legame dell'anticorpo ai mastociti li rende in grado di riconoscere gli antigeni specifici e segnalare la loro presenza a ENS. ENS, a sua volta, interpreta i segnali chimici di mastociti come una minaccia e cerca di eliminarla, fornendo così una risposta protettiva [9]. La presenza dei mastociti è stata descritta in varie neoplasie, con ruoli pro o anti-tumorali giocato dai mediatori bioattivi rilasciati dalla influenza del microambiente tumorale [10-12]. L'azione di mediatori pro-tumorali come l'istamina, triptasi e chimasi può promuovere la migrazione e la proliferazione cellulare inducendo l'espressione di molecole di adesione sulle cellule endoteliali e attivando così il processo di angiogenesi tumorale, metastasi e la proliferazione [13-15]. D'altro canto, alcune citochine come l'interleuchina (IL) -2 e -21, fattore di necrosi tumorale (TNF) e eparina rilasciati dai mastociti, possono agire come agenti antitumorali inibendo la loro crescita [16, 17].
diversi studi hanno dimostrato che durante la carcinogenesi vi è un aumento del numero di mastociti, osservata in neurofibromas, lipomi, emangiomi, tumori della ghiandola surrenale e pelle [18], carcinomi a cellule squamose [19], cellule squamose della laringe [20] e carcinomi gastrici [21]. In adenocarcinomi gastrici, il piccolo rilascio dei contenuti memorizzati in granuli citoplasmatici dei mastociti è stato associato a cambiamenti nel microvascolare lamine basali, incluso lo spessore irregolare, strati multipli e una debole associazione con cellule endoteliali e periciti che contribuiscono al rimodellamento dei vasi sanguigni [22]. Dopo la rimozione chirurgica del cancro gastrico, studi di sopravvivenza hanno mostrato che i pazienti con aumento del numero di mastociti mostravano una prognosi peggiore rispetto ai pazienti con un basso numero di loro.
Lo scopo di questo studio era di determinare gli effetti di ablazione chimica di myenteric neuroni sulla distribuzione delle fibre della matrice extracellulare e mastociti nella mucosa gastrica di stomaco non denervati e denervati, e in un modello di carcinogenesi gastrica indotta dalla somministrazione MNNG nei ratti.
materiali e metodi
design sperimentale
sono stati valutati quattro gruppi sperimentali. Gruppi I (n = 5) e II (n = 5) non denervata e denervato, rispettivamente, senza la presenza di neoplasie gastriche; gruppi III (n = 10) e IV (n = 10) non denervato e denervata, rispettivamente, con la presenza di neoplasie gastriche. Frammenti della regione pilorica (antro) dello stomaco utilizzato in questo studio sono stati ottenuti da indagini condotte da Polli-LOPES et al. [7]. Le procedure sperimentali sono state eseguite in conformità con le regole del Comitato per l'assistenza e gli usi di animali da laboratorio del Consiglio Nazionale delle Ricerche del N.I.H. (USA) e Comitato Etico per la Sperimentazione Animale (CEEA) del FAMERP (protocollo n ° 6193/2008), São José do Rio Preto, SP
. Animali
maschio Wistar
ratti ponderazione 100 a 150 g, ottenuto dalla stabulario della Scuola di Medicina di Ribeirão Preto, in Brasile, sono stati alloggiati (4 animali per gabbia), a temperature comprese tra 23-25 ​​° C, e ha ricevuto cibo e acqua ad libitum
.
denervazione gastrico im
Gli animali sono stati anestetizzati con ketamina cloridrato e thiazine cloruro (0,15 ml /0,05 ml /100 g di peso) [23]. Lo stomaco di ciascun animale è stato esteriorizzato attraverso una linea mediana laparotomia addominale superiore e isolato dalla cavità peritoneale attraverso una piccola finestratura in un foglio di plastica per argomento applicazione del 0,6% BAC (v /v) (Aldrich Chemical Co. diluito in soluzione salina (0,9% NaCl) [7, 24]. gli stomaci isolate erano avvolte con una garza imbevuta di BAC o soluzione salina e mantenuto umido per 30 min [6, 7, 24]. La superficie sierosa stomaci stato accuratamente lavato con soluzione salina, gli organi sono stati restituiti al loro posto anatomica e la parete addominale è stata suturata. Gli animali sono stati mantenuti in gabbie di plastica (4 animali /gabbia) a temperatura controllata, e hanno ricevuto cibo e acqua ad libitum
.
induzione di neoplasie nella mucosa gastrico
Sedici settimane dopo l'intervento, gli animali dei gruppi III (non denervata) e IV (denervato) ingerite una soluzione di N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) (Aldrich Chemical Co., Inc., Milwaukee, WI) disciolto in acqua distillata e deionizzata ad una concentrazione di 100 mg /L per 28 settimane. Gli animali sono stati sacrificati 2 mesi dopo l'ultima assunzione di MNNG e stomaci sono stati raccolti per l'analisi morfologica.
Morfologica e quantitativa analisi
fibre della matrice extracellulare
Frammenti della regione pilorica dello stomaco (antro) sono stati fissati in 4% formalina tamponata per 12 ore, lavato in acqua di rubinetto, disidratati in una serie di etanolo ed inclusi in paraffina. Per lo studio matrice extracellulare, sezioni 4 micron di spessore sono state colorate con ematossilina-eosina [25], Picrosirius-Hematoxylin [26] e Gomori reticolina [27] per l'analisi istopatologica, e per il collagene e fibre reticolari di valutazione rispettivamente. Le fibre del sistema elastico sono state studiate usando di Weigert Resorcin-Fucsina che macchia in modo selettivo sia fibre elastiche e elaunin (le fibre oxytalan rimangono senza macchia, perché non sono in precedenza ossidati in questo studio) [28]. I campioni sono stati analizzati con un microscopio ottico Olympus BX60 (Olympus, Amburgo, Germania) ed i campi microscopici sono stati digitalizzati utilizzando l'immagine-Pro Plus versione 4.5 per il software di Windows (Media Cybernetics, Silver Springs, MD). Cinque aree casuali della mucosa gastrica sono stati analizzati utilizzando un obiettivo × 20, e la calibrazione è stato fatto usando un Olympus classificato vetrino microscopico. L'analisi quantitativa è stata determinata secondo il procedimento di Weibel [29], un sistema di test griglia con 168 punti e 84 linee di test, per confrontare il volume relativo (percentuale) degli scomparti mucosa gastrica (epitelio, stroma ed altri scomparti, tranne la epitelio e stroma) per ematossilina-eosina colorazione e la relativa frequenza delle reticolare e distribuzione delle fibre elastiche (in percentuale) per Gomori reticolina e resorcin- colorazione fucsina di Weigert, rispettivamente. I valori sono riportati come media ± SEM di volume relativo (in percentuale) dei comparti della mucosa gastrica e media ± SEM di frequenza relativa di reticolare e distribuzione delle fibre elastiche (in percentuale).
Mast cellule
Analisi dei mastociti nel gastrica antro è stata eseguita in sezioni colorate con blu di toluidina 0,5% per la quantificazione delle cellule intatte e degranulati e, con Alcian-blu-safranina (AB-SAF) per la quantificazione della mucosa e mastociti del tessuto connettivo [30, 31]. A questo scopo, sono stati analizzati sessanta casualmente aree della mucosa gastrica, per animale, con una luce microscopio Olympus (Olympus, Hamburg, Germania) utilizzando un × 12,5 /16 oculare millimetri e un obiettivo × 40 di alimentazione (Zeiss, Germany) . I valori sono riportati come media ± SEM del numero di cellule per mm 2
. Analisi statistica
I dati sono stati analizzati utilizzando il software Statistica 6.0 (StarSoft, Inc., Tulsa, OK). I dati sono presentati come media ± SEM e sono stati sottoposti a test t
di Student e l'analisi a senso unico degli scostamenti (ANOVA), e poi alla prova confronti multipli Tukey-Kramer o Bonferroni. Differenze con valori di P
< 0,05 sono stati considerati statisticamente significativi.
Risultati
analisi istopatologica e istochimiche di stomaco di ratto
Inizialmente, frammenti pilorica dello stomaco non denervati e denervati di cloruro di benzalconio (BAC) (gruppi I e II, rispettivamente) sono stati studiati . Analisi di frammenti di gruppo II ha mostrato che denervazione mioenterico non ha modificato la quantità e la distribuzione delle fibre collagene reticolo che circondano le ghiandole pilorica rispetto al gruppo I (Fig. 1A e 1B). Questo risultato è stato confermato da Picrosirius-Ematossilina macchia (Fig. 1E e 1F) e l'analisi quantitativa del volume relativo dell'epitelio e stroma della mucosa gastrica da entrambi i gruppi (Fig. 1I e 1J). Figura 1 L'analisi istologica di stomaco di ratto. A, B, E ed F)
pilorica ghiandole gastriche (g) circondate da stroma con fibre di collagene (i) osservate nello strato della mucosa dei gruppi I e II. Epitelio (ep). fossette gastriche (f). Muscolare della mucosa (m). C, D, G e H)
pilorica ghiandole gastriche (g) costituito da cellule tumorali occupato la grande area della mucosa gastrica dei gruppi III e IV. Un accumulo di PMN (frecce) è stata osservata all'interno delle ghiandole. Ematossilina-eosina (A-D); Picrosirius-Ematossilina (E-H). Bar: 20 micron. I-L
) compartimenti (epitelio, stroma, altri) i volumi della mucosa gastrica pilorica. I valori sono espressi come media ± SEM di percentuale del volume relativo. Gruppi senza lesioni (I e II) hanno presentato un elevato volume relativo dell'epitelio (p < 0,05) rispetto ai gruppi con lesioni (III e IV). La presenza di adenocarcinoma nei gruppi III e IV ha determinato un aumento significativo (p < 0,05). Di stroma rispetto ai gruppi I e II
stomaci non denervati e denervati trattati con MNNG (gruppi III e IV, rispettivamente) presentato variazioni architettura dei tessuti e la disposizione delle fibre della matrice extracellulare e un aumento del diametro delle ghiandole pilorica nonché in volume relativo del stroma (Fig. 1C, D, G e 1H). Il trattamento con MNNG indotto lo sviluppo di tumori benigni e maligni, in particolare polipi adenomatosi e adenocarcinomi (Fig. 1C e 1G) a stomaco non denervati (gruppo III). Gli animali con stomaci denervati e trattati con MNNG (gruppo IV) ha sviluppato lesioni precancerose e tumori maligni caratterizzati da displasia, gastrite atrofica e adenocarcinoma (Fig. 1D e 1H). In entrambi i gruppi, lo stroma del adenocarcinomi è stata arricchita dalla presenza di cellule infiammatorie, come mastociti, neutrofili, plasmacellule e linfociti, mostrando risposta immunologica ad neoplasie (Fig. 2). Tuttavia, le lesioni neoplastiche del gruppo IV erano di profili più piccole e meno aggressivi quando confrontato al gruppo III, e l'infiltrato infiammatorio localizzato nello stroma tumorale era più intensa, soprattutto negli animali che hanno sviluppato adenocarcinomi (Fig. 2D). Figura 2 L'analisi istologica di adenocarcinoma indotta dal trattamento MNNG. A e B)
vista morfologico di adenocarcinoma (AD) in non-denervato (gruppo III) e lo stomaco denervata (gruppo IV). strato muscolare (M). infiltrato infiammatorio intenso (In). C e D)
Particolare di infiltrato infiammatorio di stroma tumorale costituito da mastociti (frecce nere), neutrofili (frecce), linfociti (frecce verdi) e plasmacellule (frecce rosse). Toluidina blu. Bar: 100 micron. (Fig. A e B), 10 micron (Fig. C e D)
analisi istochimica delle sezioni pilorica è stata eseguita con Gomori reticolina e Resorcin-Fucsina colorazione di Weigert per studiare la distribuzione ( frequenza) della reticolare e fibre elastiche stroma rispettivamente. Sezioni presentate alla entrambi i metodi rivelato simile distribuzione delle fibre trabecolato che circondano le ghiandole pilorica dello stomaco dei gruppi I e II (Fig. 3A, B, E e 3F). Non-denervati o denervati stomaci con MNNG (gruppi III e IV, rispettivamente), apparentemente presentati maggiore quantità di fibre reticolari (Fig. 3C e 3D) e fibre elastiche spessi e corti altamente disorganizzato (Fig. 3G e 3H) nei adenocarcinomi rispetto ai rispettivi gruppi di controllo (gruppi rispettivamente I e II,). Figura 3 Analisi istochimica di reticolare (A-D) e fibre elastiche (E-H) nello stomaco di ratto. A e B)
gruppi I e II presentati fibre reticolari rettilinei e allineate (frecce) che circondano l'epitelio (ep) e lo stroma (s). C e D)
fibre reticolari (freccia) tortuose e apparentemente più densi alla base (punte di freccia) delle ghiandole (g). sono stati osservati fibre di collagene accumulo tra le ghiandole (*). E ed F)
Le ghiandole sono accompagnati da un delicato velo di fibre elastiche (freccia) e più intensamente segnati in E. G e H)
Un aumento nello spessore di queste fibre, rottura e frammentazione delle variabili fibrillari masse raggruppate di elastina (frecce) osservabili intorno alle ghiandole (g) rispetto ai rispettivi gruppi di controllo (i e II). di Gomori argento (A-D); di Weigert Resorcin-Fucsina (E-H). Bar: 10 micron.
Analisi quantitativa delle fibre reticolari hanno confermato l'aumento di questa componente extracellulare nei adenocarcinomi osservati nei gruppi III e IV e anche mostrato un significativo aumento inaspettato nella mucosa dello stomaco denervato (gruppo II ) rispetto al gruppo I (Tabella 1). Malgrado l'apparente aumento delle fibre elastiche nello stroma di animali non denervati e denervati trattati con MNNG (gruppi III e IV, rispettivamente), nessuna differenza statistica è stata osservata nella loro distribuzione rispetto ai gruppi di controllo (I e II) (Tabella 1) . D'altra parte, la denervazione myenteric indotto significativo aumento delle fibre elastiche di stroma gastrica dei gruppi II e IV rispetto al stomaci non denervati dei gruppi I e III (Tabella 1). Nessuna differenza significativa è stata osservata nel collagene e distribuzione delle fibre elastiche tra non-maligne e maligne lesioni stromas da gruppi III e IV.Table 1 Valutazione stereologica degli effetti della denervazione mioenterico in gastrico.

distribuzione di frequenza relativa delle fibre (%) 1
Gruppi
collagene sistema
sistema elastico
i
16.87 ± 0.5
13.27 ± 0.5
II
24.06 ± 1.5 *
19,4 ± 0,6 *
III - NT
21,8 ± 0,9
11.2 ± 0.6
III - MT
25,71 ± 0,5 *
11.1 ± 0.4
IV - NT
21.2 ± 1.6
20.2 ± 1.7 &
IV - MT
26.87 ± 1.5 *
19 ± 0.7 &
preparazione istologica è stata eseguita come descritto in Materiali e Metodi
. I valori sono espressi come media ± SEM di percentuale di frequenza relativa di fibre. tumore non maligno (NT); tumore maligno (MT). 1 L'analisi statistica basata su ANOVA seguita dalla correzione di Tukey-Kramer. * P < 0,05 vs gruppo I; &Amp; P < 0,05 vs gruppo III.
Quantificazione dei mastociti nei frammenti della regione pilorica dello stomaco
I mastociti sono stati analizzati e quantificati nella mucosa, sottomucosa e strati muscolari in tutti i gruppi sperimentali. L'analisi del numero totale di cellule per frammento gastrica non ha mostrato alcuna differenza significativa tra la mancata denervato (I) e (II) gruppi denervati (Fig. 4A). Tuttavia, in gruppi non denervati o denervati trattati con MNNG (III e IV, rispettivamente), lo sviluppo di lesioni benigne o maligne è stata associata con un aumento significativo del numero di mastociti in gastrico rispetto al gruppo non-denervato (IO). Negli strati della mucosa e sottomucosa, il significativo aumento dei mastociti nei gruppi non-denervati o denervati trattati con MNNG, (III e IV) è stato associato ad un aumento di cellule intatte e degranulati (Fig. 4B). Nello strato muscolare, tale incremento è principalmente associato con il grande numero di mastociti intatte (Fig. 4C). Figura 4 Analisi quantitativa dei mastociti nello stomaco. I dati rappresentano la media ± S.E.M di sessanta campi analizzate per animale, come descritto in Materiali e Metodi. Non-denervata (I) e denervata stomaco (II) senza lesioni. stomaco non denervato (III) e denervata (IV) con lesioni. tumori non maligni (NT). tumore maligno (MT). A)
Numero totale dei mastociti nel frammento gastrica. * P < 0,05 vs gruppo I. # P < 0.01 vs. altri gruppi sperimentali. B e C)
mastociti intatto e degranulati nella mucosa, sottomucosa e strati muscolari. * P < 0,05 vs gruppo I; #P ≪ 0.05 contro altri gruppi sperimentali; δ P < 0.05 vs gruppo III - NT (mastociti intatto); &Amp; P < 0,05 vs gruppo III - NT (mastociti degranulati). C)
mastociti intatto e degranulati nello strato muscolare. * P < 0,05 vs gruppo I; # P < 0,05 vs gruppo II.
Analisi fenotipica dei mastociti
Per la caratterizzazione fenotipica dei mastociti è stato utilizzato il metodo di Alcian Blu-safranina (AB-SAF). Negli animali di non denervato (i) e (ii) gruppi denervati, c'era una predominanza di mastociti AB positivo (AB +) negli strati della mucosa e sottomucosa del gastrico, che caratterizzano queste cellule come le cellule della mucosa albero (MMC) (Fig. 5A e 5B). Nei gruppi sperimentali trattati con MNNG (III e IV), una proporzione elevata di AB + e AB-SAF + mastociti sottotipi sono stati osservati, quest'ultimo principalmente nel gruppo denervato (IV) (Fig. 5C e 5D). Frammenti di gastrica dell'antro contenente mesentere stati usati per confermare la presenza di SAF + cellule, che caratterizza i mastociti tessuto connettivo (CTMC) da questo metodo di colorazione (Fig. 5E e 5F). Figura 5 analisi fenotipica dei mastociti di frammento gastrica. A e B)
strato sottomucosa di (gruppo I non denervato) e denervata (gruppo II) stomaco mostrando mastociti con granuli citoplasmatici positive per Alcian-blu (frecce), che caratterizzano il fenotipo delle cellule della mucosa mast - in particolare di pannello A . C e D)
Due popolazione di mastociti sono indicati nelle lesioni gastriche di non denervato (gruppo III) e stomaci denervati (gruppo IV): le cellule Alcian-blu positivi montante (frecce nere) e Alcian-blu /safranina mastociti positive (frecce rosse). cellule E e F)
Mast con granuli positivi safranina (frecce) sono stati osservati nel mesentere, che caratterizza i mastociti del tessuto connettivo. Alcian-blu /metodo safranina. Bar: 10 micron (Fig A-F.); 5 micron (particolare Fig. A)
.
La quantificazione totale di tre sottotipi di mastociti (AB +, AB-SAF + e SAF +) ha confermato le osservazioni morfologiche, mostra una predominanza di cellule AB + nel frammento pilorica in tutti i gruppi sperimentali (Tabella 2). Nei gruppi non denervati e denervati trattati con MNNG (III e IV, rispettivamente), questo sottotipo di cellule aumentato in modo significativo rispetto al gruppo non-denervato (I). In stomaci denervati trattati con MNNG (gruppo IV), sub-cellulare AB-SAF + è stato anche significativamente aumentata nelle lesioni maligne rispetto a lesioni nel gruppo non-trattato con denervata MNNG (III) .table 2 densità dei mastociti con diversi fenotipi in gastrico.

pilorica Frammento
Gruppi
AB +

SAF +
AB + SAF +
I
8 ± 2
1 ± 1 Pagina 4 ± 1
II
14 ± 4
3 ± 1
13 ± 10
III - NT
49 ± 16 *
5 ± 2
11 ± 4
III - MT
23 ± 4 ***
4 ± 2
13 ± 5
IV - NT
28 ± 5 *** Pagina 2 ± 1
23 ± 8
IV - MT
36 ± 8 ** #
13 ± 10
47 ± 12 &
preparazione istologica è stata eseguita come descritto in Materiali e Metodi
. Valori (numero di cellule per mm2) sono espressi come media ± SEM di 60 campi analizzate per animale, con un obiettivo ad alta potenza (40 ×). Alcian-blu
(AB +), safranina (SAF +) e
Alcin-blu /safranina cellule positive (AB + SAF +). * P < 0,05 vs gruppo I; # P < 0.01 vs III - NT e - MT; &Amp; P < 0,05 vs. II.
L'analisi dei diversi sottotipi di mastociti negli strati della mucosa e della sottomucosa di frammenti pilorica ha mostrato un significativo aumento dei mastociti AB + solo animali con un tumore benigno (Tabella 3). In stomaci denervati trattati con MNNG (gruppo IV), la popolazione dei mastociti AB-SAF + è aumentata in confronto con altri gruppi sperimentali, essendo significativo per neoplasia maligna. Lo strato muscolare mostrava un profilo differente del frammento nel suo complesso, e stomaci denervati senza e con neoplasia (gruppi II e IV) ha mostrato una predominanza di mastociti AB-SAF +. In nessuno dei due gruppi studiati, il numero di cellule SAF +, che caratterizzano la CTMC, ha superato l'altro subtypes.Table cellulare 3 Distribuzione dei mastociti con diversi fenotipi negli strati di gastrico.

Livelli istologici

mucosa e sottomucosa
Muscoloso

Gruppi
AB +
SAF +
AB + SAF +
AB +
SAF +
AB + SAF +

I (controllo)
7 ± 2
0 ± 0
3 ± 0
1 ± 0
1 ± 1 Pagina 2 ± 1
II
12 ± 4
0 ± 0 Pagina 2 ± 1 Pagina 2 ± 1 Pagina 2 ± 1
11 ± 9
III -
NT 40 ± 14 *
1 ± 1 Pagina 4 ± 1 Pagina 8 ± 3 * Pagina 3 ± 2
7 ± 3
III - MT
12 ± 2
0 ± 0
3 ± 1
11 ± 3 * Pagina 4 ± 1
10 ± 4
IV - NT
19 ± 3 **
1 ± 0,6
12 ± 8
9 ± 3 *
1 ± 0
18 ± 7
IV - MT
27 ± 10
9 ± 8
25 ± 8 # &
9 ± 2 ** π
3 ± 2
22 ± 9
preparazione istologica è stata eseguita come descritto in Materiali e Metodi
. Valori (numero di cellule per mm2) sono espressi come media ± SEM di 60 campi analizzate per animale, con un obiettivo ad alta potenza (40 ×). Alcian-blu
(AB +), safranina (SAF +) e
Alcin-blu /safranina cellule positive (AB + SAF +). * P < 0,05 vs gruppo I; # ≪ 0,05 vs. I e III-MT; &Amp; P < 0,01 vs. II; π P < 0.05 vs II.
Discussione
In questo studio è stato indagato i cambiamenti istopatologici e la distribuzione della matrice extracellulare (ECM) componenti fibrillari, e mastociti nella regione pilorica di stomaco di ratto non denervati o denervato da cloruro di benzalconio (BAC) e, non trattata o trattata con l'agente cancerogeno N-metil-N 'nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG).
Inizialmente, l'analisi istopatologica e stereologica non ha mostrato variazioni nel volume relativo del epiteliale e compartimenti stromali nei frammenti pilorica da (gruppo i) non denervato e stomachi denervati (gruppo II). Tuttavia, lo studio di componenti fibrillari di ECM in questi campioni ha rivelato che BAC denervazione provoca un aumento della frequenza delle fibre reticolari e sistema elastico nella mucosa gastrica denervata (gruppo II) rispetto a (gruppo I) non denervato, come dimostrano analisi istochimica e stereologica utilizzando rispettivamente Gomori reticolina e Resorcin-Fucsina colorazione di Weigert,. Probabilmente, assenza di stimolazione contrattile causata da denervazione mioenterico in questi frammenti (gruppo II) contribuire ad un aumento della sintesi di fibre reticolari ed elastiche dalle cellule muscolari lisce e /o una nuova associazione di fibre nello stroma come meccanismo per un'adeguata il coordinamento onda peristaltica, e per evitare la stasi negli organi denervati [32-34]
. Trattamento di non denervato (gruppo III) e denervata (gruppo IV) gli animali con MNNG indotto lo sviluppo di tumori maligni (adenocarcinomi), benigna tumori (polipi adenomatosi) e lesioni precancerose (displasia e gastrite atrofica). Lo sviluppo di adenocarcinomi in entrambe stomaci non denervati e denervati era in grado di promuovere un notevole aumento del volume relativo del compartimento stromale. Durante lo sviluppo del tumore della prostata o mucosa gastrica, l'interazione stroma /epitelio è interrotto e ha imposto una nuova condizione associata ai cambiamenti morfologici dei componenti della matrice extracellulare e la crescita tumorale [35]. La proliferazione delle cellule epiteliali in entrambe le lesioni maligne e benigne provoca cambiamenti situate nella ghiandola, seguiti da un rimodellamento focale dei componenti fibrillari della matrice extracellulare [27].
In questo aspetto, l'analisi istochimica mostrato un incremento significativo sulla fibre reticolari del adenocarcinoma (gruppo III) rispetto ai stomaci non denervati senza lesioni (gruppo i). L'aumento delle fibre collagene stromale rappresenta un meccanismo con cui le cellule tumorali possono sfuggire "attacco" di linfociti T (CD8 +) e di indurre apoptosi, che fungere da barriera per l'infiltrazione di CD8 + [ ,,,0],36]. Nonostante una modifica non significativa sul sistema elastico, una rottura di queste fibre è stata osservata in adenocarcinomi dello stomaco non denervato (gruppo III), con la presenza di corpi di elementi elastici frazionati, suggerendo una degradazione o rimodellamento dello stroma in risposta lesioni sotto l'influenza di cellule neoplastiche. Questi cambiamenti nelle fibre elastiche del sistema erano simultanea con il rimodellamento delle fibre di collagene, osservati anche nelle lesioni della prostata [37] e nello stroma prostatico durante questa regressione della ghiandola dopo la castrazione [38, 39]. In base a questi risultati, il tumore aggressivo potrebbe essere valutata dai componenti fibrosi della matrice.

• Come dovrebbero traccianti essere iniettato per rilevare per i nodi sentinella nel carcinoma gastrico - sottomucosa dall'interno o subserosally al di fuori dello stomaco
• caratteristiche clinico-patologiche e risultati del trattamento di adenocarcinoma hepatoid dello stomaco, un raro ma unico sottotipo di cancer