Airway cellulariteit, lipiden beladen macrofagen en microbiologie van maagsap en luchtwegen bij kinderen met reflux oesophagitis

Airway cellulariteit, lipiden beladen macrofagen en microbiologie van maagsap en luchtwegen bij kinderen met refluxoesofagitis
Abstracte achtergrond
Gastro-oesofageale refluxziekte (GOR) kan luchtwegaandoeningen bij kinderen vanaf recidiverende aspiratie van de maaginhoud veroorzaken. GORD kunnen worden gedefinieerd op verschillende manieren en een van de meest voorkomende methode aanwezigheid van reflux oesophagitis. Bij kinderen met GORD en respiratoire aandoeningen, is de luchtwegen neutrofilie beschreven. Er zijn echter geen prospectieve studies die cellulariteit luchtwegen bij kinderen met GORD zonder respiratoire ziekte onderzocht. De doelstellingen van de studie waren te vergelijken (1) BAL cellulariteit en lipiden beladen macrofagen index (LLMI) en (2) de microbiologie van BAL en maagsappen van kinderen met GORD (G +) aan mensen zonder (G).
methoden
In 150 kinderen in de leeftijd < 14-jarige, maag zuigt en bronchoscopic luchtwegen lavage (BAL) werden verkregen tijdens electieve flexibele endoscopie. GORD werd gedefinieerd als aanwezigheid van reflux oesophagitis op distale slokdarm biopten.
Resultaten
BAL neutrofielen% in G (n = 63) was marginaal maar significant hoger dan in de G + groep (n = 77), ( mediaan van 7,5 en 5 respectievelijk p = 0,002). Lipid beladen macrofagen index (LLMI), BAL percentages van lymfocyten, eosinofielen en macrofagen waren vergelijkbaar tussen de groepen. Viral studies waren negatief in alle, bacterieculturen positief in 20,7% van de bals en bij 5,3% van de maag zuigt. BAL culturen niet maagaspiraat culturen weerspiegelen in alle, maar een kind.
Conclusie
In kinderen zonder ademhalingsziekte, GORD bepaald door de aanwezigheid van reflux oesophagitis, is niet geassocieerd met BAL cellulaire profiel of LLMI afwijking. Abnormale microbiologie van de luchtwegen, indien aanwezig, niet gerelateerd aan reflux oesofagitis en geeft niet dat van maagsappen.
Inleiding
gastro-oesofagale reflux (GOR) komt zeer vaak gedefinieerd als de passage van de maaginhoud in de slokdarm . ziekte GOR (GORD) gedefinieerd als symptomen of complicaties van GOR [1]. GORD omvat de aanwezigheid van oesofagitis, oesofageale histologisch gedefinieerd op biopsie en verhoogde reflux index op pHmetry samen met geschikte symptomen [2, 1]. GOR en GORD wordt in verband gebracht met een longziekte en veronderstelde mechanismen omvatten aspiratie van de maag componenten, tracheo-maag-reflex, en sensorische zenuwstimulatie [3]. Secundaire aspiratie heeft betrekking op aspiratie van de maaginhoud, die mondelinge en ingenomen micro-organismen evenals maagsappen bevatten. Zonder gouden standaard definiëren recidiverende aspiratie [4], huidige tests omvatten nucleaire geneeskunde tests).) [5] en kwantificering van lipide beladen macrofagen uit bronchoalveolaire lavage (BAL) vloeistof [6]. Het is omstreden of een verhoogd lipide beladen macrofagen index (LLMI) is een bruikbare indicator voor recidiverende verslikking [7, 8]. Hoewel LLMI is verhoogd bij aspiratie longziekte, wordt ook gevonden in andere longaandoeningen [6, 9, 10]. Verhoogde LLMI is goed gedocumenteerd in sterk geselecteerde groepen kinderen met longziekte [11] maar weinig gegevens over BAL van kinderen zonder longziekte en GORD.
Beoordeling profiel luchtweg wordt in toenemende mate gebruikt bij onderzoek en klinische medicijnen voor ondersteunend (maar niet definitief) diagnose van ademhalingsziekten bij kinderen [12, 13]. De luchtwegen cellulaire profiel van kinderen met GORD zonder chronische longziekte is onbekend en deze kennis zal nuttig zijn voor vergelijkend klinisch onderzoek en doeleinden. Ondernemingen De doelstellingen van de studie was om te vergelijken, (1) BAL cellulariteit en lipiden beladen macrofagen index ( LLMI) en (2) de microbiologie van BAL en maagsappen van kinderen met GORD (G +) aan mensen zonder (G). Onze hypothese was dat luchtwegen van kinderen met reflux oesophagitis zouden eerder toegenomen LLMI en neutrofilie aan herhaalde aspiratie klein volume, en dat de bacteriële flora in de longen vergelijkbaar met die in de gastrische aspiraat vloeistof zou zijn.
Methods
kinderen van 0,75-14 jaar die een electieve flexibele endoscopie werden uitgenodigd om deel te nemen aan het onderzoek (augustus 2002 tot juni 2004). Alle kinderen ondergaan flexibele endoscopie had een consultant pediatrische gastro-enteroloog en de procedure uitgevoerd onder algemene verdoving inclusief intubatie gezien. Kinderen werden ingeschreven voor de studie op de ochtend van hun procedure. Medische geschiedenis werd verkregen van een ouder op een gestandaardiseerde proforma voor alle kinderen. Uitsluitingscriteria waren; kinderen met neurologische ontwikkelingsstoornissen afwijkingen, (a week hoest en spoelen met diervoeders tenminste tweemaal) bekend onderliggende cardiorespiratoire ziekte anders dan astma en mensen met een klinische geschiedenis van primaire aspiratie. GORD werd heden overwogen indien histologie van distale oesofageale biopsie toonde reflux oesophagitis bepaald door pathologen blind voor respiratoire geschiedenis van het kind [14]. Schriftelijke toestemming werd verkregen en de door de mens ethische commissie van onze instelling goedgekeurd studie.
Bij aanvang van de flexibele endoscopie, werd maagsap rechtstreeks verkregen in het kader van de visie en afgezogen in een slijm te houden. Wanneer < 0,5 ml werd verkregen, werd 5 of 10 ml zoutoplossing spoeling gebruikt en kiemgetal van een organisme (indien gekweekt) werd gecorrigeerd met dezelfde factor. BAS vloeistof te verkrijgen, een niet-bronchoscopic gestandaardiseerde en herhaalbare [15]. techniek werd toegepast. Kort samengevat, met het kind hoofd naar links, een 8F katheter zoveel mogelijk doorgegeven via de endotracheale buis, zodat het ging dan geschat carina plaats. Steriele normale zoutoplossing (1 ml /kg tot maximaal 20 ml) werd gedruppeld en afgezogen in een mucus val en dit monster werd gebruikt voor microbiologie onderzoek. Een verdere 1 ml /kg (maximaal 20 ml) werd gedruppeld en de 2 nd collectie gebruikt voor cytologie en lipiden beladen macrofagen tellen. Celtelling werd uitgevoerd op de celsuspensie werden cytocentrifuge objectglaasjes geprepareerd en gekleurd (kleuring gemodificeerde Wright, Diff Quik, Lab Aids, Narrabeen, NSW, Australië) voor mobiele differentiële profiel (400 cellen geteld indien mogelijk). Aanvullende dia's werden opgesteld voor het gebruik van LLMI Oil Red O vlek (Sigma Chemicals), waar 100 macrofagen geteld en scoorde 0-4 [16, 4]. LLMI (range 0-400) werd verkregen door toevoeging van deze scores. Alle cellulaire en LLMI onderzoeken werden uitgevoerd door cytologists verblind voor de medische geschiedenis van de kinderen
Kwantitatieve aërobe culturen van bacteriën werden ondernomen op BAL en maagsappen met behulp van standaard steriele lussen. (10 & 100 ul) op bloed en chocolade agar platen voor detectie van aërobe bacteriën. Platen werden geïncubeerd bij 35 ° C gedurende 48 uur en isolaten geteld en geïdentificeerd het genus niveau. Positieve bacteriële kweek werd gedefinieerd als groei van ≥10 4 kiemgetal /ml [17]. Virale studies werden ook uitgevoerd op BAL; directe immunofluorescentie antigen (DFA) werd gebruikt om RSV, adenovirus, para-influenza virussen 1,2,3 en influenza A en B. Als viraal antigeen directe immunofluorescentie tests negatief was, nucleïnezuuramplificatie (NAA) testen werden uitgevoerd voor al deze virussen te detecteren met behulp van multiplex-PCR [18]
Statistische analyse
Kinderen werden ingedeeld met GORD (G +) en niet met GORD (G). Chi plein werd gebruikt om categorische variabelen tussen groepen en odds ratio beschreven vergelijken. De gegevens werden niet normaal verdeeld en dus niet-parametrische analyses werden gebruikt; Mann-Whitney voor vergelijkingen tussen groepen 2 en Kruskal Wallis als > 2 werden vergeleken. Medianen en inter-kwartiel range (IQR) werden gebruikt voor alle beschrijvende data. Tweezijdige p-waarde van < 0,05 werd beschouwd als significant. SPSS ver 11 werd gebruikt voor alle statistische berekening.
Resultaten
mediane leeftijd van de 150 kinderen (91 jongens en 56 meisjes) aangeworven was 8,2 jaar (IQR 7). De belangrijkste indicaties voor oesophago-gastroscopie waren buikpijn (n = 77), herhaaldelijk braken (n = 35), slechte gewichtstoename (n = 20), herziening van eerdere letsel (n = 19) en verstikking (n = 17); sommige kinderen had meer dan één primaire indicatie voor oesophago-gastroscopie. De meeste (n = 136, 90,7%) kinderen werden klinisch verdacht van GORD en oesofagitis aanwezig in 77 (51,3%) kinderen was. Er waren 77 kinderen in G + categorie, 73 in G. Slechts 17 kinderen hadden blootstelling tabaksrook en als getallen klein waren, werden vergelijkingen niet gemaakt.
G- groep (mediaan 7, IQR 13) een significante maar kleine toename in BAL neutrofielen% in vergelijking met het G + groep (5, 7,5), p = 0,002. Er was geen significant verschil in de percentages van macrofagen, lymfocyten, eosinofielen en LLMI in BAL tussen G + en G groepen (tabel 1, blz traject 0,23-0,78). Bij kinderen van wie de BAL toonde positieve bacteriecultuur werden uitgesloten (n = 31), BAL neutrofielen% was nog steeds significant hoger in G- (n = 52) dan G + (n = 67) kinderen, p = 0,009; mediaan van 7 vs 4% respectievelijk. Percentages van macrofagen, lymfocyten, eosinofielen en LLMI in BAL tussen G + en G- groepen bleven niet significant verschillend bij patiënten met BAL positieve kweek waren excluded.Table 1 Cellular profiel van de kinderen gegroepeerd door de aanwezigheid en afwezigheid van GORZ

G + N = 77
G- N = 73
lymfocyt%
mediaan, IQR
4,0, 3
4.4 , 4
neutrofielen%
mediaan, IQR
5, 7.5
7,5, 14
macrofaag%
mediaan, IQR
89, 16
88,3, 14
Eosinofiel%
mediaan, IQR
0, 0
0, 0
Totaal aantal cellen
mediaan, IQR
96, 175
116, 83,5
LLM index
Median, IQR
42, 47
38, 30
G + = groep met refluxoesofagitis
G- = groep zonder refluxoesofagitis
Viral studies (DFA en NAA) waren negatief in alle BAL monsters. Positieve bacteriële kweken werd gevonden in de Balş van 31 kinderen (20,7%) en de maag aspiraten van 8 (5,3%) kinderen, tabel 2. Achttien kinderen een aanzienlijke groei van S. pneumoniae
in hun BAL maar slechts één deze kinderen hadden een aanzienlijke groei van S pneumoniae
in hun maag aspireren (10 5). S. aureus
werd gevonden in de BAL van 2 kinderen en een daarvan hadden eveneens een laag aantal (10 2) van S. aureus in hun maagaspiraat. De cellulaire profiel van deze 31 kinderen (mediaan% neutrofielen was 20, IQR 34;% lymfocyten 6, 8,5,% macrofagen 65,5, 34) was significant anders dan mensen zonder positieve BAL kweek (% neutrofielen 5, 4,% lymfocyten 3, 4; 90% macrofagen, 9); p van 0,00001 voor alle celtypen. Kinderen die G + waren, waren niet meer kans om positieve BAL cultuur dan de G-groep (tabel 3) hebben. Dertig zeven kinderen had recent gebruik (binnen een week) van protonpompremmers (PPI). Het gebruik van PPI heeft G + /G--status (p = 0,452) geen invloed op en had ook geen significant effect op BAL positieve cultuur staat (p = 0,762), of maag aspireren cultuur (p = 0,092) .table 2 Positieve bacteriecultuur in BAL en maagaspiraat
De groei van het organisme van ≥104 kiemgetal
BAL n
maagaspiraat n
S. pneumoniae

19
6
H. influenzae
10 | 0
M. catarrhalis
7
0
S. aureus
3
0
Candida
0 2
Tabel 3 Vergelijkingen van groepen met positieve bacteriecultuur in BAL

BAL cultuur


Group categorie
Negative (< 104 kve /ml)

Positief (≥104 kve /ml)
p-waarde
OR, 95% CI
G-
52
17
G +
67
14
0,27
0,64, 0,29-1,42
G + = groep met refluxoesofagitis
G- = groep zonder discussie refluxoesofagitis
In 150 kinderen hebben we aangetoond dat kinderen met GORD en zonder onderliggend probleem longen geen afwijkingen in de luchtwegen cellulaire profiel of LLMI. Inderdaad het percentage neutrofielen was in de G- groep significant hoger dan in de groep G + (het verschil tussen de groepen was echter klein en niet klinisch significant). We hebben ook aangetoond dat positieve bacteriecultuur erkende respiratoire pathogenen relatief hoog 20,6% en werd niet beïnvloed door G + staat. Tot slot hebben we aangetoond dat de microbiologie van de luchtwegen weerspiegelt niet dat van de maag zuigt bij kinderen met en zonder GORD.
Dit is de eerste studie die de luchtwegen cellulariteit en microbiologie van de luchtwegen van kinderen heeft onderzocht zonder een onderliggende ziekte van de luchtwegen in verband met GORD . Hoewel het aantal neutrofielen in BAL van G- kinderen hoger dan in G + kinderen was het verschil tussen de groepen was klein (mediaan verschil van 2%) en in de klinische context is dit niet significant. Deze BAL waarden zeer dicht bij de normale kinderen [12] beschreven bereik. Er is een gebrek aan gegevens over bevindingen luchtwegen bij patiënten met GORD zonder een onderliggende longaandoening. Onze bevindingen zijn vergelijkbaar met een kleine (n = 11) onderzoek bij volwassenen met GORD (zonder longziekte), die ook beschreven dat GORD geen koppeling met luchtweg neutrofilie. Onze bevindingen van het ontbreken van de luchtwegen neutrofilie bij kinderen met GORD zijn, in tegenstelling tot studies die BAL bij kinderen met een chronische ziekte van de luchtwegen [11] hebben onderzocht. Het is waarschijnlijk dat de luchtwegen neutrofilie in aanwezigheid van respiratoire ziekte van de luchtwegen ziekte zelf in plaats van stimulatie van de tracheo-gastrische reflex. Indeed in onze studie, het percentage neutrofielen in BAL kinderen met GORD lager was dan bij kinderen zonder GORD. Echter, de afwezigheid van de luchtwegen neutrofilie niet zeggen afwezigheid van neutrofiele ontsteking omdat we niet onderzocht voor neutrofiele markers zoals IL-8.
Er zijn geen verschillen in LLMI bij kinderen met of zonder GORD vinden. In onze studie, LLMI is niet een bruikbare marker van de aanwezigheid van reflux oesophagitis bij kinderen zonder een onderliggende ziekte van de luchtwegen. De plausibele verklaringen zijn onder andere; geen van deze kinderen hadden secundaire aspiratie en /of LLMI is geen gevoelige test voor secundaire aspiratie. Inderdaad het nut van LLMI als een gevoelige en specifieke marker van aspiratie bij kinderen is in twijfel [6, 9, 10]. En Colombo meldde dat LLMI was het hoogst bij patiënten underdoing chemotherapie en graft versus host ziekte [4]. Krishnan en collega's recent beschreven armen specificiteit en gevoeligheid van LLMI aspiratie [19]. Maar ze gebruikt tracheale aspiraten [4], die niet representatief BAL [20, 21]. BAL vloeistof gemeenschappelijke gestandaardiseerde methode voor de behandeling van luchtweg cellulariteit in de luchtwegen gebied [12].
We hebben een hoge incidentie van positieve bacteriecultuur (zachte respiratoire bacteriën in de BAL maar niet maagaspiraat) in ons cohort kinderen , gedefinieerd op een gekozen drempel van ≥10 4 kve /ml gebaseerd op eerdere studies [17]. De diagnostische drempel voor kwantitatieve cultuur op de BAL van bronchitis bij kinderen (in tegenstelling tot pneumonie) is onbekend en voorzichtigheid is geboden bij de interpretatie van BAL microbiology [12]. Aangezien luchtwegen neutrofilie was ook aanwezig bij kinderen met positieve bacteriekweek is het waarschijnlijk dat kweekresultaten waren significant. We hadden geen relatie tussen de luchtwegen en het maag aspireren microbiologie vinden, wat erop wijst dat de aspiratie van de maag pathogenen was niet significant in deze kinderen. Onze bevindingen zijn ter ondersteuning van een studie die aantoont dat de maag geen bron voor kolonisatie van de bovenste luchtwegen en longontsteking [22]. Slikken van sputum van gemeenschappelijk respiratoire bacteriën zal waarschijnlijk niet resulteren in een positieve maagaspiraat cultuur als maagsap heeft een bacteriedodend effect; S. aureus
wordt gedood binnen 30-45 minuten na inenting terwijl P. aeruginosa
wordt gedood in 60-90 min [23].
Onze gegevens mogen niet worden geëxtrapoleerd naar andere definities van GORD. We onderzochten GORD gedefinieerd door oesofageale biopsie, een gemeenschappelijke methode voor het diagnosticeren van GORD bij kinderen in Australië. In onze instelling, oesophago-gastroscopie wordt vaker uitgevoerd dan pHmetry (ongeveer 800 en 300 respectievelijk per jaar). Verschillende technieken worden gebruikt om te bevestigen of ondersteuning van de diagnose GORD. Er is echter geen enkele perfecte methode voor objectieve definitie van alle GORD. Iedere modaliteit heeft zijn voordelen en nadelen /beperkingen. Niettemin aantoonbaar oesofagitis is de gouden standaard definitie, maar zal waarschijnlijk ook de minst gevoelige diagnostische methode vooral wanneer GORD is mild en /of occasioneel of intermitterend. De American Gastroenterology Association (AGA) richtsnoeren voor pHmetry verklaarde: "Bij afwezigheid van oesofagitis, is er geen gouden standaard voor de definitie van GERD ..." [2]. pHmetry gerapporteerd gevoeliger te zijn maar er is aanzienlijke onenigheid wat een abnormale pHmetry [1] vormt. Ook sommige gastroenterologen pHmetry stellen dat alleen kan worden gebruikt voor diagnose GORD, gezien de bekende problemen geschetst in de richtsnoeren AGA. Aldus soortgelijke bevindingen behulp GORD basis van pHmetry en misschien multikanaals intraluminale elektrische impedantiemeting, (waarschijnlijk een meer gevoelige methode voor het evalueren GORD varianten dwz zure en niet-zure reflux [24]) zou moeten worden geconcludeerd dat alle soorten GORD zijn geassocieerd met normale luchtwegen cellulaire profiel anders goed kinderen. Aangezien er geen significante afwijking in beide groepen kinderen onderzocht in deze studie, is het onwaarschijnlijk dat type zuur gerelateerde GORD wordt geassocieerd met abnormale cellulariteit luchtwegen bij kinderen zonder longziekte.
Conclusie We
concluderen dat bij kinderen zonder ademhalingsziekte, aanwezig GORD gedefinieerd reflux oesophagitis, is niet geassocieerd met BAL cellulaire profiel of LLMI abnormaliteit. Abnormale microbiologie van de luchtwegen, indien aanwezig, niet overeen met die van de maagsappen en wordt niet geassocieerd met reflux oesophagitis.
Verklaringen
Dankwoord
Wij zijn dankbaar voor J Gaffney, Mary DaSilva en de verpleegkundigen van de afdeling Maag-, Royal Children's Hospital, evenals de anesthesisten in het bijzonder Drs Chris Beem, A Newton, ik Webb, D Hill, en M Pabari, zonder wie dit project zou niet mogelijk zijn. Deze studie werd gedeeltelijk gefinancierd door de Stichting van het Ziekenhuis van de Royal Children's en door Sylvia en Charles Viertel Charitable Foundation. ABC wordt ondersteund door Stichting van het Ziekenhuis van de Royal Children's en door een Practitioner Fellowship van de Australian National Health en Medical Research Council.

• Expressie profiel van mucinen (MUC2, MUC5AC en MUC6) in Helicobacter pylori geïnfecteerde pre-neoplastische en neoplastische menselijke maag epitheel
• Overexpressie van Snail is geassocieerd met lymfeknoop metastase en slechte prognose bij patiënten met maagkanker