Airway cellularità, macrofagi carichi di lipidi e microbiologia del succo gastrico e delle vie aeree nei bambini con reflusso

Airway cellularità, macrofagi carichi di lipidi e microbiologia del succo gastrico e delle vie aeree nei bambini con reflusso
Abstract
sfondo
malattia da reflusso gastroesofageo (MRGE) possono causare malattie respiratorie nei bambini da aspirazione ricorrente del contenuto gastrico. GORD può essere definito in vari modi e uno del metodo più comune è la presenza di reflusso. Nei bambini con MRGE e malattie respiratorie, delle vie aeree neutrofilia è stato descritto. Tuttavia, non ci sono studi prospettici che hanno esaminato delle vie aeree cellularità nei bambini con MRGE, ma senza malattie respiratorie. Gli obiettivi dello studio erano di confrontare (1) BAL cellularità e lipidi indice di carico dei macrofagi (LLMI) e, (2) microbiologia del BAL e succhi gastrici dei bambini con MRGE (G +) per quelli senza (G).
metodi
in 150 bambini di età compresa tra < 14 anni, aspirato gastrico e lavanda broncoscopica delle vie aeree (BAL) sono stati ottenuti durante elettiva endoscopia superiore flessibile. MRGE è stata definita come la presenza di esofagite da reflusso su biopsie esofagee distali.
Risultati
BAL neutrofili% nel gruppo G (n = 63) era leggermente ma significativamente superiore a quella nel gruppo G + (n = 77), ( mediana di 7,5 e 5, rispettivamente, p = 0,002). Lipid indice macrofagi carico (LLMI), BAL percentuali di linfociti, eosinofili e macrofagi erano simili tra i gruppi. studi virali sono risultati negativi in ​​tutte le colture batteriche, positivo nel 20,7% di Bals e nel 5,3% dei aspirato gastrico. culture BAL non riflettevano culture aspirato gastrico in tutto solo un bambino.
Conclusione
in bambini senza malattie respiratorie, MRGE definita dalla presenza di esofagite da reflusso, non è associato con BAL profilo cellulare o LLMI anomalia. microbiologia anomala delle vie aeree, quando presenti, non è legato a reflusso e non riflette quella dei succhi gastrici.
Introduzione
reflusso gastroesofageo (GOR) è molto comune e definito come il passaggio del contenuto gastrico nell'esofago . malattia GOR (MRGE) è definito come sintomi o complicazioni di GOR [1]. MRGE prevede la presenza di esofagite, istologicamente definito alla biopsia esofagea e aumento dell'indice reflusso sulla pHmetria in associazione con sintomi appropriate [2, 1]. GOR e MRGE è associato a malattia polmonare e meccanismi postulati includono aspirazione di componenti gastrici, riflesso tracheo-gastrico, e la stimolazione dei nervi sensoriali [3]. aspirazione secondario riferisce ad aspirazione di contenuto gastrico, che contengono microrganismi orali e ingeriti così come succhi gastrici. In assenza di gold standard di definizione di aspirazione ricorrenti [4], i test attuali comprendono medicina nucleare test).) [5] e, la quantificazione dei macrofagi carichi di lipidi nel lavaggio broncoalveolare (BAL) [6]. E 'controverso se un carico di indice macrofagi aumento dei lipidi (LLMI) è un indicatore utile per aspirazione polmonare ricorrente [7, 8]. Sebbene LLMI è aumentata nella malattia aspirazione polmonare, si trova anche in altre malattie polmonari [6, 9, 10]. Aumentato LLMI è stata ben documentata in gruppi altamente selezionati di bambini con malattie polmonari [11], ma ci sono pochi dati riguardo BAL dei bambini senza malattia polmonare e valutazione dei profili delle vie aeree MRGE.
Viene usata sempre più nella ricerca e nella clinica medicina per appoggio (ma non definitiva) la diagnosi delle malattie respiratorie nei bambini [12, 13]. Il profilo cellulare vie aeree dei bambini con MRGE senza malattia polmonare cronica non è nota e questa conoscenza sarà utile per scopi clinici e di ricerca comparativi.
Gli obiettivi dello studio erano di confrontare, (1) Indice BAL cellularità e lipidi macrofagi carico ( LLMI) e, (2) microbiologia del BAL e succhi gastrici dei bambini con MRGE (G +) a quelli senza (G-). Abbiamo ipotizzato che le vie aeree dei bambini con esofagite da reflusso erano più probabilità di avere una maggiore LLMI e neutrofilia dal ricorrente piccola aspirazione del volume, e che la flora batterica nei polmoni sarebbe simile a quello nel liquido aspirato gastrico.
Metodi
I bambini di età compresa tra 0.75-14 anni sottoposti elettivo superiore endoscopia flessibile sono stati invitati a partecipare allo studio (agosto 2002 al giugno 2004). Tutti i bambini sottoposti a endoscopia superiore flessibile avevano visto un consulente gastroenterologo pediatrico e la procedura eseguita in anestesia generale tra cui intubazione endotracheale. I bambini sono stati arruolati per lo studio, la mattina della loro procedura. La storia della medicina è stato ottenuto da un genitore su un pro-forma standardizzata per tutti i bambini. I criteri di esclusione erano; i bambini con anomalie dello sviluppo neurologico, noto sottostante malattie cardiorespiratorie altri poi l'asma e quelli con una storia clinica di aspirazione primaria (tosse e bobine con i feed almeno due volte a settimana). MRGE è stato considerato presente se istologia distale biopsia esofagea mostrava esofagite da reflusso determinati dai patologi in cieco alla storia delle vie respiratorie del bambino [14]. consenso scritto è stato ottenuto e lo studio approvato dal comitato etico umani della nostra istituzione.
A inizio del endoscopia superiore flessibile, succo gastrico è stato ottenuto direttamente sotto visione e aspirato in una trappola di muco. Quando < 0,5 ml è stato ottenuto, 5 o 10 ml di soluzione fisiologica è stato utilizzato e conteggio delle colonie di un organismo (se coltivate) sono stati corretti con lo stesso fattore. Per ottenere BAL, un non-broncoscopio standardizzato e ripetibile [15]. tecnica è stata utilizzata. Brevemente, con la testa del bambino girata a sinistra, un catetere 8F stato passato per quanto possibile attraverso il tubo endotracheale, assicurando che andava oltre il sito carena stimato. Soluzione fisiologica sterile (1 ml /kg al massimo di 20 ml) è stato instillato e suctioned in una trappola di muco e questo esemplare è stato utilizzato per l'esame microbiologia. è stato instillato un ulteriore 1 ml /kg (massimo 20 ml) e il nd collection 2 utilizzato per la citologia e conteggio dei macrofagi carichi di lipidi. conta delle cellule è stata eseguita sulla sospensione cellulare, scivoli citocentrifuga sono stati preparati e colorate (modificato macchia di Wright, Diff Quik, Lab Aids, Narrabeen, NSW, Australia) per il profilo differenziale cellulare (400 cellule contate quando possibile). Ulteriori vetrini sono stati preparati per LLMI con Oil Red O macchia (Sigma Chemicals), dove 100 macrofagi contati e ha ottenuto 0-4 [16, 4]. LLMI (range 0-400) è stato ottenuto con l'aggiunta di questi punteggi. Tutti gli esami cellulari e LLMI sono stati eseguiti da citologi cieco alla storia medica dei bambini
culture aerobici quantitativi di batteri sono stati assunti in BAL e succhi gastrici usando loop sterili standard. (10 & 100 ul) su piastre di sangue e agar cioccolato per il rilevamento batteri aerobi. Le piastre sono state incubate a 35 ° C per 48 ore e isola contati e identificati al livello del genere. coltura batterica positiva è stata definita come la crescita di ≥10 4 unità formanti colonie /ml [17]. studi virali sono stati eseguiti su BAL; immunofluorescenza antigene diretta (DFA) è stato utilizzato per rilevare RSV, adenovirus, virus parainfluenzali 1,2,3 e l'influenza A e B. Se virale test dell'antigene di immunofluorescenza diretto è stato negativo, amplificazione degli acidi nucleici (NAA) le prove sono state effettuate per tutti i virus di cui sopra usando multiplex PCR [18]
analisi statistica
I bambini sono stati suddivisi in categorie con MRGE (G +) e non avendo MRGE (G). chi quadrato è stato utilizzato per confrontare variabili categoriche tra i gruppi e le odds ratio descritto. I dati non sono stati distribuiti normalmente e le analisi quindi non parametrici sono stati utilizzati; Mann-Whitney per il confronto tra i 2 gruppi e Kruskal Wallis quando > sono stati confrontati 2 gruppi. Mediane e la gamma interquartile (IQR) sono stati utilizzati per tutti i dati descrittivi. Due p value code di < 0,05 è stato considerato significativo. SPSS ver 11 è stato utilizzato per tutti i calcoli statistici.
Risultati
L'età media dei 150 bambini (91 maschi e 56 femmine) reclutati era 8,2 anni (IQR 7). Le indicazioni principali per esofago-gastroscopia sono stati dolore addominale (n = 77), vomito ricorrente (n = 35), scarso aumento di peso (n = 20), revisione di lesione precedente (n = 19) e soffocamento (n = 17); alcuni bambini avevano più di una indicazione primaria per esofago-gastroscopia. La maggior parte (n = 136, 90,7%), i bambini sono stati clinicamente sospettati di avere MRGE e esofagite era presente in 77 (51,3%) bambini. C'erano 77 bambini in G + categoria, 73 in G. Solo 17 bambini hanno avuto l'esposizione al fumo di tabacco e come numeri erano piccoli, i confronti non sono state fatte.
Gruppo G (mediana 7, IQR 13) ha avuto un significativo ma piccolo aumento dei neutrofili BAL% rispetto al + G gruppo (5, 7.5), p = 0,002. Non vi era alcuna differenza significativa nella percentuale di macrofagi, linfociti, eosinofili e LLMI in BAL tra G + e gruppi G- (tabella 1, campo p 0,23-0,78). Quando sono stati esclusi i bambini i cui BAL ha mostrato coltura batterica positiva (n = 31), BAL neutrofili% era ancora significativamente più alta nel G (n = 52) di G + (n = 67) dei bambini, p = 0,009; mediana di 7 vs 4%, rispettivamente. Percentuali di macrofagi, linfociti, eosinofili e LLMI in BAL tra G + e gruppi G- non è rimasto significativamente diversa quando quelli con BAL cultura positivi sono stati excluded.Table 1 profilo cellulare dei bambini raggruppati per presenza e assenza di MRGE

G + N = 77
G N = 73
linfociti%
mediana, IQR
4,0, 3
4.4 , 4
neutrofili%
mediana, IQR
5, 7.5
7.5, 14
macrofagi%
mediana, IQR
89, 16
88,3, 14
eosinofili%
mediana, IQR
0, 0
0, 0
cella totale conteggio
mediana, IQR
96, 175
116, 83,5 l'indice
LLM
mediana, IQR
42, 47
38, 30
G + = gruppo con esofagite da reflusso
G = gruppo senza esofagite da reflusso
studi virali (DFA e NAA) sono risultati negativi in tutti i campioni BAL. colture batteriche positive è stato trovato nel Bals di 31 bambini (20,7%) e le aspirato gastrico da 8 (5,3%) dei bambini, Tabella 2. Diciotto bambini hanno avuto una crescita significativa di S. pneumoniae
nella loro BAL ma solo uno di questi bambini hanno avuto una crescita significativa di S pneumoniae
nella loro aspirato gastrico (10 5). S. aureus
si trovava nel BAL di 2 bambini e uno di questi ha avuto anche un basso numero (10 2) di S. aureus nella loro aspirazione gastrica. Il profilo cellulare di questi 31 bambini (mediana neutrofili% è stata del 20, IQR 34;% linfociti 6, 8,5;% macrofagi 65.5, 34) era significativamente differente a quelli senza cultura BAL positivo (% neutrofili 5, 4;% linfociti 3, 4;% macrofagi 90, 9); p di 0,00001 per tutti i tipi di cellule. I bambini che erano G + non erano più probabilità di avere la cultura BAL positivo rispetto al gruppo G (tabella 3). Trenta sette bambini avevano uso recente (entro una settimana) di inibitori della pompa protonica (PPI). L'uso di PPI non ha influenzato G + /G- stato (p = 0,452) e ha avuto alcun effetto significativo sulla BAL stato cultura positiva (p = 0,762) o cultura aspirato gastrico (p = 0,092) .table 2 batteri positivi cultura in BAL e aspirato gastrico
crescita di organismo di unità che formano colonie ≥104
BAL n
aspirato gastrico n
S. pneumoniae
19 Pagina 6
H. influenzae
10
0
M. catarrhalis
7
0 zona S. aureus
3
0
Candida
0 2
Tabella 3 confronti di gruppi con coltura batterica positiva nel BAL

cultura BAL


categoria Gruppo
negativo (< 104 ufc /ml)

positivo (≥104 ufc /ml)
valore p
O, 95% CI
G-
52
17
G +
67
14
0,27
0,64, 0,29-1,42
G + = gruppo con esofagite da reflusso
G = gruppo senza esofagite da reflusso
Discussione
in 150 bambini , abbiamo dimostrato che i bambini con MRGE e senza un problema polmonare sottostante non hanno alcuna anomalia nella loro vie respiratorie profilo cellulare o LLMI. Infatti la percentuale di neutrofili era significativamente superiore nel gruppo G che nel gruppo G + (la differenza tra i gruppi era quanto piccolo e clinicamente non significativo). Abbiamo anche dimostrato che coltura batterica positiva con patogeni respiratori riconosciuti era relativamente alta al 20,6% e non è stato influenzato da G + stato. Infine abbiamo dimostrato che la microbiologia delle vie aeree non riflette quella di aspirato gastrico nei bambini con e senza MRGE.
Questo è il primo studio che ha esaminato cellularità delle vie aeree e microbiologia delle vie aeree di bambini senza una malattia respiratoria di base in relazione con MRGE . Sebbene la percentuale di neutrofili nel BAL di bambini G- era superiore a quella nei bambini G +, la differenza tra i gruppi era piccola (differenza mediana del 2%) e nel contesto clinico non è significativo. Questi valori BAL sono molto vicini alla gamma descritta in bambini normali [12]. C'è una scarsità di dati sui risultati delle vie aeree nei pazienti con MRGE senza una malattia polmonare di base. I nostri risultati sono simili a un piccolo studio (n = 11) negli adulti con MRGE (senza malattia polmonare), che descrive anche che MRGE non è stato associato con neutrofilia vie aeree. I nostri risultati di assenza di neutrofilia delle vie aeree nei bambini con MRGE sono in contrasto con gli studi che hanno esaminato BAL in bambini con malattie respiratorie croniche [11]. E 'probabile che vie neutrofilìa in presenza di malattie respiratorie è dalla malattia respiratoria stesso piuttosto che dalla stimolazione del riflesso tracheo-gastrica. Infatti nel nostro studio, la percentuale di neutrofili nel BAL dei bambini con MRGE è stata inferiore a quella nei bambini senza MRGE. Tuttavia, l'assenza di neutrofilia vie aeree non significa assenza di infiammazione neutrofila come noi non esaminiamo per i marcatori neutrofili come IL-8.
Non abbiamo trovato alcuna differenza di LLMI nei bambini con o senza MRGE. Nel nostro studio, LLMI non è un indicatore utile di presenza di esofagite da reflusso nei bambini senza una sottostante malattia respiratoria. Le spiegazioni plausibili includono; nessuno di questi bambini aveva aspirazione secondario e /o LLMI non è un test sensibile per aspirazione secondario. Infatti l'utilità di LLMI come marcatore sensibile e specifico dell'aspirazione nei bambini è stata messa in discussione [6, 9, 10]., E Colombo riferito che LLMI è stata più alta nei pazienti underdoing chemioterapia e trapianto vs host disease [4]. Krishnan e colleghi hanno recentemente descritto la scarsa specificità e la sensibilità dei LLMI per aspirazione [19]. Tuttavia hanno usato aspirati tracheali [4], che non è rappresentativo di BAL [20, 21]. BAL è il metodo standard comuni per l'esame delle vie aeree cellularità nel campo respiratorio [12].
Abbiamo trovato una elevata incidenza di coltura batterica positiva (di batteri respiratorie comuni nel BAL ma non in aspirato gastrico) nella nostra coorte di bambini , definito su una soglia scelta di ≥10 4 cfu /ml basato su studi precedenti [17]. Tuttavia, la soglia diagnostica per la cultura quantitativa BAL per la bronchite nei bambini (al contrario di polmonite) è sconosciuta e la cautela è necessaria l'interpretazione dei BAL microbiologia [12]. Come vie aeree neutrofilia era presente anche in bambini con coltura batterica positiva, è probabile che i risultati delle colture sono stati significativi. Non abbiamo trovato alcuna relazione tra vie aeree e gastrica microbiologia aspirato, suggerendo che l'aspirazione di agenti patogeni gastrici non è stato significativo in questi bambini. I nostri risultati sono a sostegno di uno studio che mostra che lo stomaco non è una fonte per la colonizzazione del tratto respiratorio superiore e polmonite [22]. L'ingestione di secrezioni respiratorie di batteri respiratori comuni è improbabile che tradursi in cultura positiva aspirare gastrica come succo gastrico ha un effetto battericida; S. aureus
viene ucciso entro 30-45 minuti di inoculazione, mentre P. aeruginosa
viene ucciso in 60-90 minuti [23].
Nostri dati non possono essere estrapolati ad altre definizioni di MRGE. Abbiamo esaminato MRGE definito dalla biopsia esofagea, un metodo comune di diagnosticare MRGE nei bambini in Australia. Nel nostro istituto, esofago-gastroscopia è più comunemente eseguita di pHmetria (circa 800 e 300, rispettivamente per anno). Una varietà di tecniche sono utilizzate per confermare o sostenere la diagnosi di MRGE. Tuttavia non esiste un unico metodo perfetto per la definizione oggettiva di tutti i tipi di MRGE. Ogni modalità ha i suoi vantaggi e svantaggi /limitazioni. Tuttavia, probabilmente esofagite è la definizione gold standard, ma è anche probabile che il metodo diagnostico sensibile almeno soprattutto quando MRGE è lieve e /o occasionale o intermittente. Le linee guida americana Gastroenterology Association (AGA) su pHmetria ha dichiarato: "In assenza di esofagite, non esiste uno standard d'oro per la definizione di GERD ..." [2]. pHmetria è stato segnalato per essere più sensibili, ma non vi è un notevole disaccordo ciò che costituisce un [1] pHmetria anormale. Inoltre, alcuni gastroenterologi sostengono che solo pHmetria non può essere utilizzato per diagnosticare la MRGE, dati i problemi noti descritti nelle linee guida AGA. Così, risultati simili utilizzando MRGE sulla base di pHmetria e monitoraggio impedenza elettrica endoluminale forse multi-canale, (probabilmente un metodo più sensibile per valutare MRGE varianti cioè l'acido e non reflusso acido [24]) sarebbe necessario concludere che tutti i tipi di MRGE sono associati con il normale vie aeree profilo cellulare in altrimenti ben bambini. Tuttavia, dato che non vi era alcuna anomalia significativa in entrambi i gruppi di bambini esaminati in questo studio, è improbabile che qualsiasi tipo di acido correlate MRGE sarà associato anormale cellularità delle vie aeree nei bambini senza malattia polmonare.
Conclusione
Noi concludere che, nei bambini senza malattie respiratorie, presenza di MRGE definito da esofagite da reflusso, non è associato con il profilo cellulare BAL o LLMI anomalia. microbiologia anomala delle vie aeree, quando presenti, non riflette quello dei succhi gastrici e, non è associato con esofagite da reflusso.
dichiarazioni
Ringraziamenti
Siamo grati a J Gaffney, Maria DaSilva e le infermiere del Dipartimento di Gastroenterologia, Royal Hospital per bambini, così come gli anestesisti, in particolare, Drs Chris Beem, a Newton, io Webb, D Hill, e M Pabari, senza i quali questo progetto non sarebbe possibile. Questo studio è stato parzialmente finanziato dalla Fondazione Ospedale dei Bambini di Reale e da Sylvia e Charles Viertel Charitable Foundation. ABC è supportato dalla Fondazione Ospedale dei Bambini di Reale e da un medico Fellowship dalla Australian National Health e Medical Research Council.

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