Uitingen van COX-2 en VEGF-C bij maagkanker: correlatie met lymfangiogenese en prognostische implicaties

Uitingen van COX-2 en VEGF-C bij maagkanker: correlatie met lymfangiogenese en prognostische implicaties
Abstract achtergrond
cyclooxygenase-2 (COX-2) is onlangs als lymfangiogenese bevorderen door opreguleren vasculaire endotheliale groeifactor C (VEGF-C) bij borstkanker en longkanker. Het effect van COX-2 op lymfangiogenese maagkanker blijft onduidelijk. Dit onderzoek heeft als doel om de expressie van COX-2 en VEGF-C te testen in menselijke maagkanker, en de correlatie met lymfatische dichtheid vat (LVD), clinicopathologic functies en overleving prognose analyseren.
Methods
Met behulp van immunohistochemie, COX -2, VEGF-C en het niveau van LVD werden geanalyseerd in 56 R0-resectie primaire maag adenocarcinomen, terwijl paracancerous normale slijmvliezen ook werden verzameld als controle van 25 gelijktijdige patiënten. De relaties tussen COX-2 en VEGF-C-expressie, LVD en clinicopathologic parameters werden geanalyseerd. De correlaties van COX-2, VEGF-C en het niveau van LVD met prognose voor de patiënt werden eveneens door univariate tests en multivariate Cox regressie.
Resultaten
de expressie tarieven van COX-2 en VEGF-C was 69,64% en 55,36%, respectievelijk, in maagcarcinoom. Peritumoraal LVD was significant hoger dan in normale en intratumorale weefsel (P
< 0,05). Het was significant gecorreleerd met lymfeklier metastase en invasie diepte (P
= 0,003, P
= 0,05). VEGF-C was significant geassocieerd met peritumorale LVD (r
= 0,308, P
= 0,021). Echter, COX-2 was niet gecorreleerd met VEGF-C (r
= 0,110, p = 0,419
) of LVD (r
= 0,042, p = 0,758
). Univariate analyse toonde aan dat de overleving tijd werd aangetast door hogere COX-2 expressie en hogere peritumorale LVD. Multivariate survival analyse toonde aan dat leeftijd, COX-2-expressie en peritumorale LVD waren onafhankelijke prognostische factoren.
Conclusies
Hoewel COX-2 expressie werd geassocieerd met overleving, was niet gecorreleerd met VEGF-C en peritumorale LVD. Onze gegevens is niet gebleken dat overexpressie van COX-2 bevordert tumor lymfevatontwikkeling via een up-regulatie van VEGF-C-expressie in maagcarcinoom. Age, COX-2 en peritumorale LVD waren onafhankelijke prognostische factoren voor de menselijke maag-carcinoom. Achtergrond
Maagcarcinoom is één van de meest voorkomende digestieve maligniteiten in de wereld, vooral in Oost- en Zuidoost-Azië, met inbegrip van China [1] . Regionale lymfeklieren zijn de meest voorkomende plaats van metastase terwijl lymfeknoop metastase is een belangrijke voorspellende factor bij maagcarcinomen. Het begrijpen van de mechanismen van lymfatische uitzaaiing een beslissende stap en kan resulteren in een nieuw therapeutisch doelwit voor de behandeling van menselijke kanker. Lymfatische metastase is eerder waarschijnlijk plaats door middel van reeds bestaande lymfevaten [2, 3]. Echter, recente studies gesuggereerd dat lymfevaten, de vorming van nieuwe lymfevaten geïnduceerd door tumoren, is direct gecorreleerd met de mate van lymfeknoop metastase van vaste tumoren [4, 5]. De mate van lymfatische bloedvatdichtheid (LVD) kan tumor lymfangiogenese kwantificeren.
LVD van kankerweefsel wordt beschouwd als een van de prognostische factoren voor overleving resultaten bij verschillende kankersoorten waaronder maagcarcinoom [6, 7]. Vasculaire endotheliale groeifactor C (VEGF-C) is de belangrijkste factor lymfangiogene door tumor en stromale cellen. Er is gevonden dat VEGF-C sterk tot expressie gebracht en is een belangrijke voorspeller van lymfangiogenese en prognose verschillende soorten kanker, waaronder maagcarcinoom [8-10]. VEGF-C kan lymfangiogenese en lymfeknoop metastase van tumoren bevorderen door het activeren van een speciale receptor vascular endothelial growth factor receptor 3 (VEGFR-3) [11, 12].
Cyclooxygenase-2 (COX-2) is de rate enzym in prostaglandinesynthese en is naar verluidt overexpressie in verschillende humane kankers. Tijdens de progressie van kanker, COX-2 neemt aan vele pathofysiologische processen, waaronder celproliferatie, apoptose, modulatie van het immuunsysteem, en angiogenese [13-17]. De rol van COX-2 in angiogenese van menselijke kankers is goed gedocumenteerd en VEGF-A werd geïdentificeerd als een belangrijke stroomafwaartse effector gen van COX-2-geïnduceerde angiogenese in humane kanker [18, 19]. In tegenstelling tot het effect van COX-2 angiogenese, blijven de effecten op lymfangiogenese en lymfatische uitzaaiing slecht begrepen. Onlangs hebben sommige studies bleek dat COX-2-expressie in hoge mate gecorreleerd is met lymfekliermetastasen [20, 21]. Verschillende lijnen van experimenteel bewijs heeft aangetoond dat COX-2 kan stimuleren VEGFR-3 te bevorderen door lymfangiogenese opreguleren VEGF-C in borst- en longkankercellen [22, 23].
De rol van COX-2 in lymfangiogenese van maagcarcinoom blijft onduidelijk. Middels immunohistochemie ons onderzoek gericht op de expressie van COX-2 en VEGF-C-eiwit en het niveau van lymfatische bloedvatdichtheid (LVD) in menselijke maagkanker detecteren en hun correlatie met klinisch-pathologische kenmerken analyseren en de prognose.
Methods
patiënten en monsters
Zesenvijftig patiënten met histologisch bewezen adenocarcinoom van de maag en die radicale gastrectomie ondergingen in West-China Hospital, Sichuan University, China tussen januari 2001 en oktober 2002 werden opgenomen in het onderhavige onderzoek. In dit onderzoek paracancerous normale mucosale weefsel van 25 patiënten werden verzameld als controle. Patiënten neoadjuvante chemotherapie en /of radiotherapie ondergingen werden uitgesloten. TNM enscenering werd volgens de American Joint Committee on Cancer (AJCC) classificatie uitgevoerd, en historische indeling werd uitgevoerd volgens de WHO criteria. In paraffine ingebedde, met formaline gefixeerde chirurgische monsters werden bereid en verzameld voor immunohistochemische kleuring.
Immunohistochemische kleuring
Monsters werden immunogekleurd met de standaard gelabelde streptavidine-biotine protocol. In het kort, na deparaffinisatie en antigen herstel, werden 4-um weefselcoupes geïncubeerd met COX-2-antilichamen (monoklonale konijnen anti-humaan, 1: 100, Goldenbridge Biotechnology Co, Ltd, Beijing, China) en VEGF-C-antilichamen (polyklonaal konijn anti humaan, 1: 100, Goldenbridge Biotechnology Co., Ltd.) bij 37 ° C gedurende 1 h, vervolgens bij 4 ° C overnacht. De coupes werden vervolgens geïncubeerd met gebiotinyleerd geiten anti-konijn immunoglobuline G (1: 200, Zymed Laboratories Inc., USA) en vervolgens geïncubeerd met mierikswortel gemerkt streptavidine (1: 200, Zymed Laboratories Inc.). 3,3'-Diaminobenzidine werd gebruikt als chromogeen en hematoxyline als tegenkleuring. Voor de kleuring van lymfevaten, een konijn anti-humaan D2-40 polyklonaal antilichaam (polyklonaal konijn, Dako Denmark A /S Co., Denemarken) werd gebruikt. De procedure voor immunohistochemische kleuring van D2-40 is vergelijkbaar met die van de COX-2 kleuring bij een verdunning van 1:. 100
Evaluatie van immunohistochemische kleuring
immunohistochemische score (IHS) gebaseerd op de Duitse immunoreactieve tegenzin voor COX-2 en VEGF-C immunohistochemische evaluatie [24]. De IHS wordt berekend door het combineren van de hoeveelheid score (percentage van positief gekleurde cellen) met de kleuring intensiteit score. De hoeveelheid score varieert van 0 tot 4, d.w.z. 0, geen immunokleuring; 1, 1-10% van de cellen worden gekleurd; 2, 11-50% zijn positief; 3, 51-80% zijn positief; en 4, ≥81% van de cellen positief. De kleuring intensiteit werd gescoord als: 0 (negatief), 1 (zwak), 2 (matig) en 3 (sterk). Ruwe data werden omgezet in IHS door vermenigvuldiging van de hoeveelheid score (0-4) door de kleurintensiteit score (0-3). Theoretisch kan de score varieert van 0 tot 12. IHS van 9-12 werd als een sterke immunoreactiviteit; 5-8, matig; 1-4, zwak; en 0, negatief. Statistische analyse werden COX-2 en VEGF-C scores in een hoge expressie groep (sterke en gematigde immunoreactiviteit) en een lage expressie groep (zwak en negatieve immunoreactiviteit). Immunoreactiviteit werd gescoord door twee onafhankelijke onderzoekers.
LVD werd gedetecteerd door immunokleuring voor D2-40, volgens de criteria van Masakau et al.
[25]. Ten eerste, gebieden met zeer D2-40-positieve vaten (hot spots) in peritumorale, intratumorale en normaal weefsel werden geïdentificeerd, door het scannen van de secties bij een lage vergroting (× 100); dan is het aantal D2-40 positieve schepen werd geteld op de vijf high-vergroting velden (× 400) voor elk geval. De gemiddelde waarde van de vijf velden werd berekend als de LVD wordt per orgaan. Om het effect van LVD op de prognose evalueren we de 56 gevallen verdeeld in twee groepen op basis van het gemiddelde niveau LVD.
Statistische analyse
Statistische analysen werden uitgevoerd met SPSS 11.5 software (SPSS Inc., Chicago, USA). De correlaties tussen de expressie van COX-2, VEGF-C, niveau van LVD en clinicopathologic eigenschappen werden berekend door Student's t-test
, chi-kwadraat correlatietoets en Spearman correlatiecoëfficiënt waar nodig. De Kaplan-Meier-methode werd gebruikt om overleving te schatten als functie van de tijd, en overleving verschillen werden geanalyseerd met de log-rank test. Een multivariate test werd uitgevoerd om de factor gecorreleerd met overleving lengte van Cox-regressieanalyse bepaald. De statistische significantie niveau werd gedefinieerd als P Restaurant < 0.05.
Resultaten
Patiënteninformatie Ondernemingen De 56 patiënten (35 mannen en 21 vrouwen) hadden een gemiddelde leeftijd van 56,2 (range 27-74) jaar. Zesentwintig van de gevallen getoond gewichtsverlies, en 17 gepresenteerd anemie met hemoglobine (HGB) < 90 g /l. Histologisch onderzoek is gebleken dat 4 weergegeven goed gedifferentieerd adenocarcinoom 18 matig en 34 slecht. Volgens de zesde AJCC TNM classificatie, 16 patiënten waren in stadium I, 18 in fase II, 19 in fase III, en 3 in fase IV. Van de 56 patiënten, 39 (69,6%) hadden lymfklier metastase. Tot 2008 waren er 32 patiënten in totaal dat gestorven.
COX-2, VEGF-C en D2-40 expressie in maagcarcinoom
Positieve expressie van COX-2 eiwit en VEGF-C vertoonden een gele of bruinachtig gele vlek in het cytoplasma van carcinoomcellen (figuren 1 en 2). De expressie tarieven van COX-2 en VEGF-C was 69,64% (39/56) en 55,36% (31/56) respectievelijk in maagcarcinoom. Echter normaal weefsel vertoonden geen immunoreactiviteit voor COX-2 en VEGF-C. Figuur 1 Immunohistochemische kleuring van Cox-2 in de maagcarcinoom: positieve expressie van COX-2 eiwit werd gekleurd zoals geel of bruinachtig geel in het cytoplasma van carcinoomcellen (LSAB, × 400)
Figuur 2 Immunohistochemische kleuring van VEGF. C in de maagcarcinoom: positieve expressie van VEGF-C-eiwit werd gekleurd zoals geel of bruinachtig geel in het cytoplasma van carcinoomcellen (LSAB, × 400).
immunoreactiviteit van D2-40 eiwitten werd gevonden in het cytoplasma celmembraan van lymfatische endotheelcellen. De verdeling van D2-40-positieve cellen werd vaak gevestigd in peritumorale weefsel (hotspot) (figuur 3A). De middelen van LVD in peritumorale, intratumorale en normaal weefsel van de 56 maagcarcinomen waren 9,24 ± 4,51, 2,88 ± 2,04, 2,69 ± 1,78, respectievelijk. De LVD in peritumorale, intratumorale (Figuur 3B) en normaal weefsel (figuur 3C) was significant verschillend van variantie analyse van gerandomiseerde blok design. Vergeleken met elkaar minst significante verschil (LSD) test, was er een significant verschil tussen de peritumorale LVD en zowel de intratumorale LVD en LVD van normaal weefsel. Er was geen significant verschil tussen de intratumorale LVD en LVD van normaal weefsel. Wanneer de gemiddelde peritumorale LVD van 9,24 werd gekozen als de cut-off point voor discriminatie van de 56 patiënten werden 32 patiënten ingedeeld in de lage LVD-groep en 24 in de hoge LVD-groep. Figuur 3 Immunohistochemische kleuring van D2-40: immunoreactiviteit van D2-40 eiwitten werd gevonden in het cytoplasma celmembraan van lymfatische endotheelcellen. A. Detectie van lymfevaten in de peritumorale weefsel van maagcarcinoom werd benadrukt door immunokleuring tegen D2-40 (LSAB, × 200). B. Immunohistochemische kleuring van D2-40 in de intratumorale weefsel van maagcarcinoom (LSAB, × 200). C. Immunohistochemische kleuring van D2-40 de normale gastrische mucosale weefsel (LSAB, × 200).
Correlatie tussen COX-2, VEGF-C en LVD en clinicopathologic kenmerken
De correlatie van COX-2, VEGF-C en peritumoraal LVD met Clinicopathologische factoren maagcarcinoom is weergegeven in Tabel 1. Er was geen significante correlatie tussen de COX-2-expressie en alle clinicopathologic kenmerken, zoals geslacht, leeftijd, lymfeknoop metastase, histologische differentiatie, invasie diepte en TNM (P
> 0,05, chi-kwadraat test). Op dezelfde manier werd VEGF-C-expressie niet gecorreleerd met enige clinicopathologic kenmerken (P Restaurant > 0,05, chi-kwadraat test). De peritumoraal LVD was significant gecorreleerd met lymfeklier metastase en invasie diepte. Was hoger in de lymfekliermetastase groep (10,37 ± 4,61) dan in de niet lymfekliermetastase groep (6,64 ± 3,01) (P
= 0,003, t-test
) en hoger in de T3, T4 groep (10.80 ± 5.24) dan in de T1, T2-groep (8,37 ± 3,85) (P
= 0,05, t
-test). Geen significante correlatie werd waargenomen met de rest van de clinicopathologic parameters (P
> 0,05, t-test
) .table 1 Correlatie tussen COX-2, VEGF-C, peritumorale LVD en Clinicopathologische factoren maagcarcinoom
parameters
N
COX-2-expressie
VEGF-C expressie
LVD


Lage
hoge
P waarde
Laag
hoge
P-waarde
Gemiddelde ± SD
P-waarde
histologische indeling
Lage
34
11
23
0,916
16
18
0,703
9.03 ± 4.37
0,721
Matige
18
5
13
8
10

• Uitputting van OLFM4 gen remt celgroei en verhoogt de gevoeligheid voor waterstofperoxide en tumornecrosefactor-alfa geïnduceerde apoptose bij maagkanker cells
• Metallothioneine 2A remt NF-KB-route activering en voorspelt klinische uitkomst gescheiden met TNM stadium bij maagkanker patiënten na radicale resection