Kifejezések a COX-2 és a VEGF-C gyomorrák: korrelációt lymphangiogenesis és prognosztikai jelentősége

Kifejezések a COX-2 és a VEGF-C, gyomorrák: korrelációt lymphangiogenezist és prognosztikai jelentősége
Abstract
alapon
ciklooxigenáz-2 (COX-2) a közelmúltban tekinteni, hogy támogassák lymphangiogenezist akár szabályozó vaszkuláris endothelialis növekedési faktor-C (VEGF-C) a mell- és tüdőrák. A hatás azonban a COX-2 lymphangiogenesis gyomorrák továbbra is tisztázatlan. A tanulmány célja, hogy teszteljék a kifejezés a COX-2 és a VEGF-C humán gyomorrák, valamint elemezze a korrelációt nyirokér denzitás (LVD), klinikopatológiai jellemzők és túlélési prognózist.
Módszerek
Immunhisztokémiai, a COX -2, VEGF-C és szintje LVD elemeztük 56 R0-kimetszett primer gyomor adenocarcinoma, míg paracancerous normális nyálkahártya szöveteket is gyűjtöttünk kontrollként 25 egyidejű betegeknél. Közötti kapcsolatok a COX-2 és a VEGF-C expresszióját, LVD és klinikopatológiai paraméterek elemezték. A korreláció a COX-2, a VEGF-C és a szintje LVD a beteg prognózisa is értékelték egyváltozós tesztek és többváltozós Cox regressziós.
Eredmények
expressziós rátát a COX-2 és a VEGF-C volt 69,64% és 55,36% -kal, a gyomorrák. Peritumorális LVD szignifikánsan magasabb volt, mint a normál és intratumorális szövet (P
< 0,05). Szignifikánsan korrelált a nyirokcsomó metasztázis és inváziós mélység (P = 0,003 katalógusa, P katalógusa = 0,05). VEGF-C szignifikánsan összefüggött a tumor körüli LVD (r = 0,308 katalógusa, P katalógusa = 0,021). Azonban a COX-2-t nem korrelált a VEGF-C (R
= 0.110, p
= 0,419) vagy az LVD (R
= 0,042, p
= 0,758). Egyváltozós elemzés azt mutatta, hogy a túlélési időt felület magasabb COX-2-expresszió és a nagyobb tumor körüli LVD. Többváltozós túlélési analízis azt mutatta, hogy az életkor, a COX-2-expresszió és peritumorális LVD függetlenek voltak prognosztikai tényezők.
Következtetések
Bár a COX-2-expresszió társult túlélési időt, nem volt korrelált a VEGF-C és a peritumorális LVD. A mi adatok nem mutatják, hogy a túlzott mértékű expressziója a COX-2 elősegíti a tumor lymphangiogenezist keresztül egy up-regulációja a VEGF-C expresszióját a gyomor karcinóma. Az életkor, a COX-2 vagy a tumor LVD volt független prognosztikai tényezők az emberi gyomorrák. Katalógusa Háttér katalógusa gyomorrák egyik leggyakoribb emésztési rosszindulatú daganatok a világon, különösen Kelet-és Délkelet-Ázsiában, többek között Kínában [1] . A regionális nyirokcsomók a leggyakoribb helyén metasztázis míg nyirokcsomó-metasztázis egyik fő prognosztikai faktor gastricus karcinómák. Megértése a mechanizmusok limfatikus metasztázis döntő lépést jelent egy és azt eredményezheti, egy új terápiás célpont a kezelés a humán rák. Lymphatic metasztázis korábban hitt keresztül történhet a már meglévő nyirokerek [2, 3]. Azonban a legújabb kutatások arra utalnak, hogy a lymphangiogenezist, az újabb nyirokerek által indukált tumorok, közvetlenül összefügg azzal, hogy mekkora nyirokcsomó áttétek szilárd tumorok [4, 5]. A mértéke nyirokér sűrűség (LVD) lehet számszerűsíteni tumor lymphangiogenezist.
LVD rákos szövetek tartották az egyik prognosztikai tényezők túlélésben különféle rákok, beleértve a gyomorrák [6, 7]. Vaszkuláris endoteliális növekedési faktor-C (VEGF-C) a legfontosabb limfangiogenikus tényező által termelt tumor és stroma sejteket. Azt találtuk, hogy a VEGF-C erősen expresszálódik, és vált fontos előrejelzője lymphangiogenezis és a prognózis számos típusú rákos megbetegedések, beleértve a gyomor karcinóma [8-10]. VEGF-C elősegítheti lymphangiogenezist és nyirokcsomó-metasztázist tumorok aktiválásával speciális receptor vaszkuláris endoteliális növekedési faktor receptor-3 (VEGFR-3) [11, 12].
Ciklooxigenáz-2 (COX-2) a rate- korlátozó enzim prosztaglandin-szintézist, és leírták, hogy túl expresszálódik különböző humán rákos megbetegedések. Progressziója során a rák, a COX-2 részt vesz számos kórélettani folyamatokban, ideértve a sejtszaporodást, az apoptózis, a moduláció az immunrendszer, és az angiogenezis [13-17]. A szerepe a COX-2 az angiogenezisben a humán rákok jól dokumentált és VEGF-A-t azonosították, mint egy nagy downstream effektor gén a COX-2 által indukált angiogenezis az emberi rákban [18, 19]. Ezzel szemben abban az értelemben, a COX-2 angiogenezis, a hatásokat lymphangiogenezist és nyirokrendszeri metasztázis marad kevéssé ismert. Újabban egyes tanulmányok azt találták, hogy a COX-2 expresszió nagymértékben összefügg az nyirokcsomómetastasis [20, 21]. Pár soros kísérleti bizonyíték azt mutatták, hogy a COX-2 lehet, hogy serkentik a VEGFR-3, hogy támogassák lymphangiogenezist up-szabályozó a VEGF-C mell- és tüdőrák-sejtek [22, 23].
Azonban a szerepe a COX-2-in lymphangiogenesis gyomorrák továbbra is tisztázatlan. Immunhisztokémiai, a mi tanulmány célja, hogy érzékeli a kifejezés a COX-2 és a VEGF-C-protein és a szintek a nyirokér sűrűség (LVD) humán gyomorrák és elemzi a korrelációk klinikopatológiai jellemzőit és a prognózis.
Módszerek
betegek és minták
Ötvenhat betegek szövettanilag igazolt gyomor adenokarcinóma és átesett radikális gastrectomián West China Kórház, Sichuan University, Kína között 2001 januárja és 2002 októbere vettek részt a vizsgálatban. Ebben a vizsgálatban, paracancerous normális nyálkahártya szöveteket a 25 beteg gyűjtöttünk kontrollként. Áteső betegek neoadjuváns kemoterápia és /vagy sugárterápia kizárták. TNM stádium alapján végeztük az American Joint Committee on Cancer (AJCC) besorolását, valamint a történelmi osztályozás szerint végeztük a WHO kritériumai. Paraffinba ágyazott, formalin-fixált műtéti mintákat készítünk és beszedett immunhisztokémiai festéssel.
Immunhisztokémiai katalógusa mintákat immunofestettük standard jelzett streptavidin-biotin protokoll. Röviden, miután deparaffinization és antigén-visszanyerés, 4 jim szöveti metszeteket COX-2 antitestek (monoklonális nyúl anti-humán, 1: 100, Goldenbridge Biotechnology Co, Ltd., Peking, Kína) és a VEGF-C antitestet (poliklonális nyúl anti humán, 1: 100, Goldenbridge Biotechnology Co., Ltd.) 37 ° C-on 1 órán át, majd 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán át. A metszeteket ezután inkubáljuk biotinilezett kecske anti-nyúl immunglobulin G (1: 200, Zymed Laboratories Inc, USA), majd ezt követően inkubáljuk torma jelzett sztreptavidinnel (1: 200, Zymed Laboratories Inc.). 3,3'-diaminobenzidin használtunk kromogén és hematoxilin mint Counterstain. A festési nyirokerek, egy nyúl anti-humán D2-40 poliklonális antitesttel (nyúl poliklonális, Dako Denmark A /S Co., Dánia) alkalmaztunk. Az eljárás immunhisztokémiai festésével D2-40 hasonló az a COX-2 festődés hígításban 1: 100.
Értékelése immunhisztokémiai festéssel katalógusa Az immunhisztokémiai pontszáma (IHS) alapján a német immunreaktív pontszám volt használt COX-2 és a VEGF-C immunohisztokémiai vizsgálata [24]. Az IHS úgy számítjuk ki, amely egyesíti a mennyiség pont (százalék festett pozitív sejtek) a festés intenzitása pontszámot. A mennyiség pontszám mozog 0-4, azaz 0, nincs immunfestés; 1, 1-10% sejteket megfestjük; 2, 11-50% pozitív; 3, 51-80% pozitív; és 4, ≥81% sejtek pozitívak. A festés intenzitását pontozni: 0 (negatív), 1 (gyenge), 2 (közepes) és 3 (erős). A nyers adatok alakítunk IHS szorozni a mennyiséget pontszámot (0-4) a festés intenzitása pontszám (0-3). Elméletileg, a pontszámok is 0-tól 12. Az IHS 9-12 tartották erős immunreakciót; 5-8, mérsékelt; 1-4, gyenge; és 0 negatív. A statisztikai elemzés, a COX-2 és a VEGF-C pontszámok helyeztünk egy nagy expressziós csoport (erős és mérsékelt immunreaktivitás), és egy alacsony expressziós csoport (gyenge és negatív immunreaktivitás). Immunreaktivitás szerzett két független kutatók.
LVD detektáltuk immunfestéssel D2-40 szerint a kritériumai Masakau et al.
[25]. Először is, a nagymértékben D2-40-pozitív hajók (hot spot) peritumoralis intratumorális és normális szövet azonosítottak, Szkenneralapú szakaszok kis nagyítás (x 100); akkor száma D2-40 pozitív hajók megszámoltuk öt nagy nagyítású mező (× 400) minden esetben. A középérték az öt mezők számítottuk, mint az LVD egyes daganat. Hatásának értékelésére az LVD a prognózist, osztottuk a 56 esetben a két csoport szerint az átlagos LVD szinten.
Statisztikai analízis katalógusa A statisztikai elemzéseket az SPSS 11.5 szoftver (SPSS Inc., Chicago, USA). Az összefüggések között a kifejezés a COX-2, a VEGF-C, szintje LVD és klinikopatológiai jellemzőket számítottuk ki Student T
-teszt, Chi-négyzet korrelációs tesztet és Spearman-féle korrelációs együttható megfelelő. A Kaplan-Meier-módszerrel becsülni a túlélést az idő függvényében, és a túlélés különbségeket elemeztük a log-rank teszt. Többváltozós tesztet végeztünk, hogy meghatározzák a tényező korrelált túlélés hossza Cox regressziós analízissel. A statisztikai szignifikancia szintnek a P katalógusa < 0.05.
Eredmények katalógusa Betegtájékoztató
56 beteg (35 férfi és 21 nő) átlagéletkora 56,2 (range 27-74) év volt. Huszonhat esetben jelenik meg a fogyás, és 17 bemutatott anémia hemoglobin (HGB) < 90 g /l. A szövettani vizsgálat kimutatta, hogy a 4. megjelenített jól differenciált adenocarcinoma, 18 közepes és 34 szegény. Szerint a hatodik AJCC TNM osztályozás, 16 beteg volt az I. szakaszban, a 18. szakaszban II 19 III-as stádiumú és 3 szakaszban IV. A 56 beteg, 39 (69,6%) volt nyirokcsomó-metasztázis. Akár 2008-ban volt 32 beteg összesen kimúlt.
COX-2, a VEGF-C és a D2-40 expresszió gyomor karcinóma
pozitív kifejeződése a COX-2-protein és a VEGF-C kimutatta kapunk sárga vagy barnás sárga folt citoplazmájában karcinóma sejtek (1. és 2. ábra). Az expressziós rátát a COX-2 és a VEGF-C voltak 69,64% (39/56), és 55,36% (31/56), illetve a gyomor karcinóma. Azonban a normál szövetek nem mutatott immunreaktivitás a COX-2 és a VEGF-C. 1. ábra Immunhisztokémiai festéssel a COX-2 a gyomorkarcinóma: a pozitív expresszióját a COX-2 protein festettük sárga vagy barnás sárga citoplazmájában karcinóma sejtek (LSAB, × 400).
2. ábra immunhisztokémiai festése VEGF -C a gyomorkarcinóma: a pozitív expresszióját a VEGF-C-protein festettük sárga vagy barnás sárga citoplazmájában karcinóma sejtek (LSAB, × 400).
immunreaktivitása D2-40 fehérjék találtak a citoplazmában és celluláris membrán limfatikus endoteliális sejtekben. A terjesztési D2-40-pozitív sejtek gyakran található tumor körüli szövetek (hot spot) (3A). Az eszköz LVD peritumoralis intratumorális és normális szövet a 56 gyomor carcinoma volt 9,24 ± 4,51, 2,88 ± 2,04 2,69 ± 1,78 volt. Az LVD peritumoralis intratumorális (3B) és normál szövet (3C, ábra) szignifikánsan különbözött varianciaanalízissel randomizált elrendezésben. Ha összehasonlítjuk egymással legkisebb szignifikáns különbség (LSD) teszt volt szignifikáns különbség a peritumorális LVD és mind a intratumoural LVD és a LVD normális szövetek. Nem volt szignifikáns különbség a intratumorális LVD és a LVD normális szövetek. Amikor az átlagos tumor körüli LVD a 9,24-t választották a cut-off pont diszkrimináció a 56 beteg, 32 beteget kategóriába az alacsony LVD-csoport és 24 a nagy LVD csoport. 3. ábra immunhisztokémiai festése D2-40: immunreaktivitása D2-40 fehérjék találtak a citoplazmában és celluláris membrán limfatikus endoteliális sejtekben. A. kimutatása nyirokerek a tumor körüli szövetben a gyomorrák is kiemelte immunfesté ellen D2-40 (LSAB, × 200). B. immunhisztokémiai festésével D2-40 az intratumorális szöveti gyomorrák (LSAB, × 200). C. immunhisztokémiai festése D2-40 a normál gyomornyálkahártya szövet (LSAB, × 200).
Közötti korreláció a COX-2, a VEGF-C és a LVD és klinikopatológiai jellemzők
A korreláció a COX-2, VEGF-C és peritumorális LVD a klinikopatológiai faktorok gyomor karcinóma mutatja az 1. táblázat nem volt szignifikáns korreláció a COX-2-expresszió és bármely klinikopatológiai jellemzők, beleértve nem, életkor, nyirokcsomó-metasztázis, szövettani differenciálás, invázió mélysége és TNM-beosztása (P
> 0,05, chi-négyzet próba). Hasonlóképpen, a VEGF-C expresszió nem korrelál olyan klinikopatológiai jellemzők (P katalógusa > 0,05, chi-négyzet próba). A tumor körüli LVD szignifikáns korrelációt nyirokcsomó metasztázis és invázió mélysége. Ez nagyobb volt a nyirokcsomó-metasztázis csoport (10,37 ± 4,61), mint a nem nyirokcsomó áttét csoport (6,64 ± 3,01) (P = 0,003 katalógusa, t katalógusa próba), és nagyobb volt a T3, T4 csoportban (10,80 ± 5,24), mint a T1, T2 csoport (8,37 ± 3,85) (p
= 0,05, T
próba). Nem szignifikáns összefüggést a többi klinikopatológiai paraméterek (P katalógusa > 0,05, t katalógusa próba) .table 1 Korreláció a COX-2, VEGF-C, peritumoralis LVD és klinikopatológiai faktorok gyomorrák
paraméterek Matton N Matton COX-2 expresszió Matton VEGF-C expresszió Matton LVD Matton katalógusa katalógusa Alacsony Matton Nagy Matton P érték
Alacsony Matton Nagy Matton P érték Matton átlag ± SD Matton P érték Matton szövettani osztályozás
Alacsony katalógusa 34 katalógusa 11 katalógusa 23 katalógusa 0.916 katalógusa 16 katalógusa 18 katalógusa 0.703 katalógusa 9,03 ± 4,37 katalógusa 0,721 katalógusa Mérsékelt katalógusa 18
5 katalógusa 13 katalógusa 8 katalógusa 10 katalógusa 9,88 ± 5,15 katalógusa Nos katalógusa 4 katalógusa 1 katalógusa 3 katalógusa 1 katalógusa 3 katalógusa 8,14 ± 2,69
mélysége invázió katalógusa T1 + T2 katalógusa 36 katalógusa 12 katalógusa 24 katalógusa 0,516 katalógusa 17 katalógusa 19 katalógusa 0,602 katalógusa 8,37 ± 3,85 katalógusa 0,052
T3 + T4 katalógusa 20 katalógusa 5 katalógusa 15 katalógusa 8 katalógusa 12 katalógusa 10,80 ± 5,24 katalógusa nyirokcsomó áttétek katalógusa No katalógusa 17 katalógusa 5 katalógusa 12
0.919 katalógusa 10 katalógusa 7 katalógusa 0,159 katalógusa 6,64 ± 3,01 katalógusa 0,003 katalógusa Igen
39 katalógusa 12 katalógusa 27 katalógusa 15 katalógusa 24
10,37 ± 4,61 katalógusa TNM katalógusa I + II
34 katalógusa 11 katalógusa 23 katalógusa 0.686 katalógusa 18 katalógusa 16
0,12
8,40 ± 3,95 katalógusa 0,084 katalógusa III + IV katalógusa 22 katalógusa 6 katalógusa 16
7 katalógusa 15 katalógusa 10,53 ± 5,08 katalógusa korrelációja COX-2, VEGF -C és LVD
expresszióját a COX-2-t jelentős mértékben nem korrelált a VEGF-C expresszióját (R
= 0.110, p
> 0,419), és peritumorális LVD (R
= 0,042, p
> 0,05). Peritumorális LVD a VEGF-C pozitív expresszió gyomor karcinóma volt 10,45 ± 5,11 volt, ami jelentősen magasabb, mint a VEGF-C negatív expresszió gyomor karcinóma (7,73 ± 3,09, p
= 0,023). Peritumorális LVD szignifikáns összefüggést mutatott a VEGF-C (R
= 0,308, p
= 0,021) (2. táblázat) .table 2 közötti korreláció a COX-2 és a VEGF-C, a peritumorális LVD
katalógusa katalógusa COX-2 Matton peritumoralis LVD Matton VEGF-C katalógusa együttható
0.110
0,308 katalógusa P érték katalógusa 0.419 katalógusa 0.021 katalógusa COX-2

• Kiürülése OLFM4 gén gátolja a sejtnövekedést és növeli a szenzitizáció hidrogén-peroxid és a tumor nekrózis faktor-alfa által indukált-apoptózist gyomorrák cells
• Metallotionein 2A gátolja az NF-kB útvonal aktiválása és megjósolja a klinikai eredmény szegregált a TNM a gyomorrákos betegek következő radikális resection