Somatinių rėmelio mutacijų Bloom sindromas BLM geno yra dažnos atsitiktinis skrandžio karcinoma su Mikrosatelitinis Mutator phenotype

somatinių rėmelio mutacijų žydi sindromas blm
geno yra dažnos atsitiktinis skrandžio karcinoma su Mikrosatelitinis Mutator fenotipo
tezės
Background
Genomo nestabilumo buvo pranešė, kad ne mikrosatelitinius takų per kelias kodavimo sekų. Mes parodė, kad žydi sindromas blm
genas gali būti microsatelliteinstability tikslas (MSI) per trumpą poli-adenino pakartoti esantiems jos kodavimo regione. Toliau apibūdinti BLM
Tumorigenesis dalyvavimą, mes ištyrėme mutacijas devyniose genų, kurių sudėtyje yra kodavimo mikrosatelitai į Mikrosatelitinis Mutator fenotipo (MMP) teigiami ir neigiami skrandžio karcinomos (GKS).
Metodai
Tyrėme 50 skrandžio karcinomos (GKS) dėl mutacijos blm
poli (A), takų, kaip gerai, kaip ir kodavimo mikrosatelitai iš TGFβ1-RPG, IGFIIR, hMSH3, hMSH6, BAX, WRN, RECQL
ir CBL
genuose.
rezultatai
blm
mutacijų buvo rasta 27% MMP + gCS (4/15 atvejų), bet ne bet koks iš MMP neigiamų gCS (0/35 atvejai). Mutacijų dažnis Kita aštuoni koduojančių regionų MIKROSATELITŲ buvo taip: TGFβ1-RPG
(60%), Bax
(27%), hMSH6
(20%), hMSH3
(13 %), CBL
(13%), IGFIIR
(7%), RECQL
(0%) ir WRN
(0%). Mutacijos BLM
atrodo, dažniau siejama su rėmelio BAX
ir hMSH6 parsisiųsti ir /arba hMSH3.
Navikai su blm
pakitimų kelia didesnę dažnis Nestabilios mono- ir trinukleotido kartojasi, esančių kodavimo regionus, palyginti su Mutator fenotipo navikų be blm
rėmelio.
išvadas
blm
rėmelio dažni pakitimai gCS konkrečiai su MMP + navikų. Mes rekomenduojame, kad blm
praradimas funkcija MSI gali padidinti genetinio nestabilumo anksto neegzistuojančios nestabilios genotipo skrandžio navikų.
Faktai
vėžiu yra progresyvi genetinė liga, kuriai būdingas progresuojantis kaupimo mutacijų tiek kodavimo ir ne-koduojančios sekos [1]. Paprasta seka kartojasi arba mikrosatelitai yra labai nestabili kai žmogaus navikų, identifikavimo auglių klasę su Mikrosatelitinis Mutator fenotipo (MMA +) (peržiūrėti pamatyti [2]). MMP + ve statusas yra apibrėžtas nestabilumo daugiau nei 30% analised mikrosatelitai, įskaitant bent vieną mononukleotido (pavyzdžiui, BAT26 arba BAT25) [3]. Mikrosatelitų nestabilumas (MSI) buvo apibūdinta kaip dažnai genetiniais pakitimais įvairiose žmogaus solidinių navikų, įskaitant pavienius ir šeimyninių skrandžio karcinoma (GKS). Beveik visiems pacientams, paveldimos nonpolyposis storosios žarnos vėžio (HNPCC), molekuliniai tyrimai parodė, kad MSI sukelia gemalo mutacijų genuose koduojančių baltymus, reikalingus DNR neatitikimas Remontas (MMR) [4]. Genai, pvz hMSH2, hMLH1, PMS1, PMS2 parsisiųsti ir hMSH6 /GTBP
[5-8], buvo apibrėžiamas kaip "prižiūrėtojams", nes, kai sutrinka, jie pirmenybę mutacijų įsigijimo dideliu dažniu kelių genų, įskaitant Onkogeny ir naviko slopintuvas genų [9]. Tačiau didelė dalis atsitiktinio MMP + navikų, mutacija analizė nebuvo leido genų, atsakingų už MSI [2, 10] nustatyti, o tai rodo, kad tokiais atvejais, MSI, gali būti sukeltas epigenetinių mechanizmus. Tiesą sakant, genų slopinimo iki promotoriaus hypermethylation neseniai buvo parodyta už hMLH1
geno [11-13].
MSI reikšmę Tumorigenesis rėmė įrodymą, kad genetinio nestabilumo apibūdinantys MMP + virškinimo trakto vėžiui, gali būti taikomi trumpi pasikartojantys takų, kaip kodavimo regione svarbiausių ląstelių išlikimo ir platinimu genuose. Įterpimo /išbraukta mutacijos buvo rasta už transformuojantis augimo faktorius-beta II tipo receptorius (TGFβ1-RII pervežimas), II insuliną panašus augimo faktorius tipo receptorius (IGFIIR pervežimas), DNR neatitikimas-remonto genų genų hMSH3 parsisiųsti ir hMSH6, Viesbutis The proapoptotic genas BAX
ir transkripcijos faktorius E2F-4 pervežimas [14-18]. Visais atvejais su E2F-4 išimtis, Viesbutis The nukleotidai įterpimo /išbraukta lėmė rėmelio mutacijų ir baltymų trumpinimą. Nors biologinė reikšmė iš šių pakeitimų yra galutinai nenustatyta, buvo pasiūlyta, kad TGFβ1-RII receptorių nebuvimas iš skrandžio ir žarnų epitelio ląstelių paviršiuje gali pašalinti neigiamą augimo kontrolę TGF-beta, todėl nekontroliuojamo ląstelių augimą [19]. IGFIIR turi vaidmenį augimo slopinimas privalomas ir ijungtu TGFβ1 receptorių kompleksas ir tarpininkauti internalizavimo, su vėlesniais degradacija, šio augimo faktoriaus IGF-II [20, 21]. BAX
skatina apoptozę ir buvo pranešta, kad BAX
inaktyvacijai veda prie greito naviko augimą [22]. Žmogaus genai hMSH3 parsisiųsti ir hMSH6
yra homologiczne bakterijų Muts
geno, kurių produktai įpareigoti DNR neatitikimus inicijuoti kryptis konkrečių remontas DNR replikacijos klaidų [23]. Somatinių ir germinacinės mutacijos hMSH6
buvo susijusios su pavieniais MMP + storosios žarnos karcinomos ir HNPCC [6].
Mes nustatėme anksčiau, kad blm
genas taip pat gali būti MSI tikslas [24]. Kad skaitymo rėmelio, rasta per trumpą poli-adenino pakartoti, buvo prognozuojama, kad generuoti sutrumpintą ir ne-funkcinį blm baltymų. Homozigotinė arba sudėtiniams Heterozigotinių mutacijos ne blm
geno buvo įrodyta, kad sukelti Bloom sindromas (BS; OMIM 210.900), iš anksto piktybinis būklė, kuriai būdingas chromosomų nestabilumo ir padidėjo mutacijos norma. BS pacientai linkę į įvairių neoplams diagnozuojama anksti. Pažymėtina, tarp įrašytų BS registre 100 navikais, 19 buvo virškinimo trakto (stemplės, skrandžio ir storosios žarnos) ir tik du buvo diagnozuotas po 40 [25] amžiaus. Šie duomenys rodo, kad mutacijų blm
geno gali skatinti tumorigenezei
Siekiant geriau apibrėžti BLM
virškinimo Tumorigenesis vaidmenį mes tikrinami iš MMP + ir MMP- skrandžio karcinoma (GKS) for panel: a.) rėmelio blm
kodavimo regionas MIKROSATELITŲ ir rezultatai
MSI būsenos
Šiai studijai b) galimų asociacijų su kitomis intrageninės rėmelio.
, mūsų panelė 50 gCS yra 15 MMP + navikai su MSI ne du ar daugiau lokusų (2 lentelė) ir 35 GCS MMP- su pakeitimo vienu MIKROSATELITŲ (4 navikų) arba be MSI (31 augliai). Visi MMP + atvejai buvo GPGB 26 teigiamas, ir GPGB 25 nestabilumas buvo rasta 13-oje iš 15 atvejų (išskyrus atvejus, 67R ir 27P). Į Klinikos-patologinių funkcijų MMP + navikų yra aprašyti 1 lentelėje MMP + fenotipas buvo glaudžiai susijusi su mažu pTNM etape ir su mažiau paplitusių mazgų metastazės (p = 0,02 ir p = 0,001 bent Fisher miesto bandymas, atitinkamai, lyginant su
MMP-navikai). Per MMP + grupės, buvo nustatyta, jog auglių ankstyvosiose stadijose ir be limfmazgių metastazių perteklius (10/15 atvejus vs 10/32 atvejus MMP- atvejais, p = 0,02 ir 11/15 atvejus vs 7/32 atvejai MMP- atvejai, p = 0,001, atitinkamai), duomenų, kuriais remiantis siūloma geriau prognostinė GKS MMP + [33, 34]. Pažymėtina, nerasta žarnyno tipo tarp MMP + navikų perteklius (12/15 atvejus vs
20/32 dėl MMP- atvejai) (1 lentelė), duomenys pagal naujausius tyrimų rezultatus, rodančius reikšmingai nesiskyrė nuo dažnio MSI žarnyne tipo ir difuzinis tipo karcinoma [26, 35] .table 1 Histotype ir sustojimo parametrai susiję su MMP fenotipo mūsų GCsa
kintamo

pacientų skaičius
P VALUE mlrd
iš viso (%)
MMP + (%) pervežimas MMP - (%) pervežimas Histotype pervežimas žarnyno
32 (68,0)
12 (37,5) 20 (62,5)
Difuzinė + Mišrūnė
15 (32,0)
3 (20,0)
12 (80,0)
NSC
T (gylis sienos infiltracija)
T1 + T2
12 (25,5)
6 (50,0)
6 (50,0)
T3 + T4
35 (74,5 )
9 (25,7)
26 (74,3)
NS
N (limfmazgių būklė)
N0
18 (38,3)
(78,5)
7 11 (21,5)
n +
29 (61,7)
4 (12,1)
25 (87,9)
= 0,001
m (metastazių)
M0
40 (85,1 )
14 (35,0)
26 (65,0)
M +
7 (14,9)
(14,2)
1 6 (85,8)
NS
Sustojimo
I + II
20 (42,5)
10 (58,8)
10 (41,2) III + IV
27 (57,5)
5 (16,6)
22 ( 83.4)
= 0,02
totala
47
15
32
a - duomenys buvo prieinami 47 iš 50 atvejų B - bent Fisher miesto bandymo C - N = nėra statistiškai reikšmingas
2 lentelė statusas kodavimo mikrosatelitai per BLM, WRN, RECQL, CBL, hMSH6, hMSH3, IGFIIR, TGF-βRII parsisiųsti ir BAX
genų skrandžio karcinoma su mikrosatelitinis Mutator fenotipo serijos.
Case

Histotypea

Stagingb


BLM

WRN

REQL

CBL

hMSH6

hMSH3

IGFIIR

TGF-βRII

BAX

No.



MSIc

(A)9

(A)8

(A)9

(ATG)6

(C)8

(A)8

(G)8

(A)10

(G)8

31R
I
I(T2N0M0)
2/5
-
-
-
-
-
-
-
-
-
57R
I
IV(T3N1M1)
5/5
-
-
-
-
-
-
-
+
-
63R
I
I(T2N0M0)
5/5
-
-
-
-
+
-
-
+
+
67R
I
I(T2N0M0)
4/5
-
-
-
-
-
-
-
+
-
69R
D
II(T3N0M0)
4/5
+
-
-
+
+
+
-
+
+
79R
I
I(T2N0M0)
5/5
-
-
-
-
-
-
-
-
-
3P
I
II(T3N0M0)
4/7
+
-
-
-
-
-
-
-
+
11P
I
III(T3N1M0)
3/7
+
-
-
-
-
+
+
+
-
14P
M
II(T3N0M0)
6/7
+
-
-
+
+
-
-
+
+
17P
I
II(T3N0M0)
3/7
-
-
-
-
-
-
-
-
-
19P
D
III(T3N1M0)
3/7
-
-
-
-
-
-
-
-
-
27P
I
IV(T4N0M0)
2/5
-
-
-
-
-
-
-
+
-
30P
I
I(T2N0M0)
3/6
-
-
-
-
-
-
-
-
-
37P
I
I(T2N0M0)
3/7
-
-
-
-
-
-
-
+
-
38P
I
III(T3N2M0)
3/7
-
-
-
-
-
-
-
+
-
%
present Tyrimas (atvejų skaičius)
27%
0%
0% 13% 20%
pervežimas 13% pervežimas 7%
60% pervežimas 27 %
mutacijos
(4/15)
(0/15)
(0/15)
(2/15)
(3/15)
(2 /15)
(1/15)
(9/15)
(4/15)
pranešė literatūroje (per gCS) d -
- CR.LT - -
22-52%
19-64%
19-24%
42-83%
15-64%
a - i = žarnyno rūšį; D = difuzinis tipas; M = mišraus tipo b - pagal TNM klasifikaciją (Sobin ir WITTEKIND, 1997) C - skaičius nestabilių /visas išbandytas mikrosatelitai D - surinkta iš nuorodų duomenis: [17,27,42,50,51,52]
BLM rėmelio
PGR amplifikacija iš blm
MIKROSATELITŲ atskleidė nenormalus juostas, nesant esant normalioms suderintų DNR, 4 iš 15 MMP + navikų (27%) (1 pav.). Mes patvirtina sekos, kad nenormalus juostos sukelia vieną adenino liekaną trintinos poli-adenino trakto (sumažinimas nuo devynių iki aštuonių adenines), kaip anksčiau parodyta [24]. Mutacija dažnis BLM
gali būti žemas įvertinimas, nes mes atmesti atvejus, nenormalūs juostų naviko DNR buvo ypač silpnesni nei įprastų tie, galbūt todėl didelio užterštumo naviko su nonmalignant ląstelių arba mažai dalis piktybinių ląstelių kuriose rodomas anomaliją (1 pav.). Kadangi nė BLM
mutacija buvo pastebėtas MMP- navikų, rėmelio mutacijas blm
geno, atrodo, specialiai susijęs su skrandžio MMP + navikų (tikimybė P < 0,01 esant Fisher miesto sąlygomis), panašus į ankstesnįjį gerai dokumentais pakitimai TGFβ1-RPG, IGFIIR, hMSH3, hMSH6
ir BAX
genų [14, 16, 17, 32]. Todėl mūsų duomenų išplėsti pakeista genų, susijusių su MMP + skrandžio karcinoma repertuarą. 1 pav tipinius pavyzdžius aptiktų mikrosatelitai ne genų kodavimo regionuose mutacijų. Case numeriai rodomi, išdėstytus vienas virš atitikimo normalaus (N) ir naviko (T) DNR poromis. Rodyklės rodo pakitusias juostas. Atkreipkite dėmesį, kad mes ne manoma mutavo pavyzdžius, jeigu nenormalūs juostos buvo labai neryški (kaip ir BLM
ir BAX
genų naviko mėginio 30P). Dėl to, kad Taq polimerazės polinkio pridėti papildomą nukleotidą, tuo Susintetintų DNR fragmentų pabaigoje, PGR produktai rodomi kartais ir dvigubi juostų. Su BAX
rėmelio auglio 69R išskyrus, jokia kita mutacija atrodo homozigotiškas. Tačiau, žinant piktybinių ląstelių naviko imties santykis, mes jau anksčiau nurodė, kad blm
mutacija naviko 69R taip pat homozigotiškas [24].
Rėmelio kitų CDR mikrosatelitai ir santykių su blm rėmelio
Tas pats skydelis MMP + navikų taip pat buvo analizuojami už rėmelio buvimo mikrosatelitai esančių kodavimo regionuose kitų aštuonių genų (2 lentelė). Mes nustatėme, kad variacijos sekos ilgio TGFβ1-RPG, IGFIIR, hMSH3, hMSH6
ir BAX
genų, visi anksčiau pranešė būti pakeista, MMP + GCS. Duomenys apie TGFβ1-RPG
statuso aštuoni (P serijos 2 lentelę) iš penkiolikos navikų anksčiau buvo pranešta [27]. Pastebėti mutacijų dažniai buvo panašūs su pranešta anksčiau už visus šiuos genus, su IGFIIR, išskyrus
, dėl kurių mes radome mažą procentą rėmelio (2 lentelė). Įdomu tai, kad palyginus su blm
mutacijų, tik TGFβ1-RPG
rėmelio buvo dažnesni (60% vs 27%, atitinkamai) ir BAX
rėmelio buvo taip pat dažnai (27%). Šie duomenys rodo, kad rėmelio blm
yra bendri pakitimai MMP + GCS. buvo pastebėta tendencija, tarp mutacijų BLM parsisiųsti ir mutacijos BAX parsisiųsti ir hMSH3 parsisiųsti ir /arba hMSH6
asociacijos (2 lentelė) (p = 0,05 esant Fisher miesto testą).
Mes taip pat analizavo RecQL, wrn parsisiųsti ir CBL
genus, kuriuose yra trumpas kartojasi jų kodavimo regionuose. Pirmieji du genai yra tos pačios helikazės genų šeimos, kaip BLM
[36, 37]. Nors RecQL
nėra susijęs su bet kuriuo žmonių ligų, mutacijų WRN pervežimas geno yra priežastis Werner sindromas (WS; OMIM 277.700), retas autosominiu recesyvinis sutrikimas kliniškai apibūdinamas priešlaikinio senėjimo ir padidino riziką veislės navikai, genetiškai būdingas genomo nestabilumą. CBL
yra tirozino kinazės receptorius [38], kurio reguliavimo panaikinimas buvo susijęs su onkogenezėje [39]. Mes nustatėme, mutacijas tik į CBL
geno (1 pav.). buvo rasta Du mėginiai (69R ir 14p) vežti 3 bp įterpimo į trinukleotido (ATG) 6 pasikartojimas CBL
geno (duomenys neparodyti). Kaip mes anksčiau pranešė [24], nes nėra rėmelio pagamintas, ne funkcinis pasekmė gali būti numanomas. Abu mutacijos buvo rasta vėžį, kuriems atsirado taip pat blm
rėmelio (2 lentelė). Pažymėtina, kad šis navikų poaibis rodo statistiškai reikšmingą perteklių MSI kodavimo regionuose lyginant su MMA + pogrupyje be blm
pakitimų. (P < 0,001, ne Χ 2 bandymas) (2 lentelė)
Diskusijos
Keletas tyrimų dokumentais, kad gali egzistuoti virškinimo MMP + alternatyvūs keliai ir MMP- vėžio būdingas skirtingų rinkinių pakeista genų [40]. Laipsniškas modelis Mutator mutacijų (toliau Mutator kad mutuoja kitą Mutator ") buvo siūloma apibrėžti Mutator palyginti slopinamąjį kelius virškinimo trakto navikų [41]. Analizuojant mutacijų įvykių genetiškai nestabilios GCS laiką, buvo pasiūlyta, kad pirmieji taikiniai neatitikimas remonto trūkumas yra mononukleotido nedirbamos TGFβ1-RPG
ir BAX.
Rėmelio mutacijos hMSH3
ir hMSH6
atrodo vidurinės neatitikimas remontas pažeidimai, gaminančios mutacijų IGFIIR
[42]. Išvada, kad rėmelio mutacijos TGFβ1-RPG
yra dažniausias ir IGFIIR
yra retesni skrandžio MMP + navikų palaiko pateiktą pavyzdį, kuris anksti renginiai turėtų būti pateikti auglių ir pabaigoje mutacijų dauguma tik nežymius frakcija [43]. Ši išvada taip pat patvirtina mūsų tyrimo (2 lentelė). Blm
rėmelio mutacijos yra susiję dažniau pirmosios ir antrosios pakopos siūlomų šio modelio pokyčių, o tai rodo, kad jie yra antrinė neatitikimo remonto defektus (į hMSH3 parsisiųsti ir /arba hMSH6
) dalyvauja ląstelių, kurios nėra atlikti apoptozę (galbūt pasekmė BAX
nukenksminti). Pažymėtina, tuo atveju, 3P, be BLM
tik rėmelio buvo rasta BAX (žr
1 paveikslą) ir p53
(duomenys nerodomas) genai, rodančių, kad kai kuriais atvejais, BLM
pasikeitimas gali įvykti be hMSH3 parsisiųsti ir /ar hMSH6
mutacijų, ląstelėse su nenormaliu p53 tarpininkaujant būdams apoptozės atsakas į DNR nesutapimus.
apie BLM
dalyvavimą tumorigenesis už BS pacientų atrodo įmanoma, nes atrodo, kad šis genas veikti kaip prižiūrėtoju. Blm
mutacijos yra žinoma, kad sukelti padidėjusį genomo nestabilumą būdinga padidėjusi skaičių chromosomų pertraukas, spragų ir pertvarkymų ir itin daug mutacijų tiek kodavimo ir nekoduojamame regionuose, tikėtina, atsiradusios dėl nevienodo sesuo chromatidžių mainų, būdinga iš Bloom sindromas [44, 45]. Todėl BS eksponatų genomo nestabilumo ir padidėjusiu vėžio rizikos derinys, asociacija taip pat nustatė, kitų ligų, kurias sukelia defektai rūpintojo genų (pvz HNPCC, WS, ataksija-telangiectasia ir xeroderma pigmentinės). Panašus į mutacijų rasti BS, apibūdintos gcs skaitymo rėmelio panaikinti helikazės funkciją BLM baltymų [24]. BLM baltymas turi įrodyta DNR nepanaikina veikla [46], ir galėtų dalyvauti procesuose, kad yra sutrikę ir piktybinių ląstelių, tokių kaip DNR replikacija, rekombinacija, chromosomų atskyrimo, DNR remonto ir transkripcijos. Iš tiesų, dalijimasis mielių BLM genas
homologas (radl2
+ /rqhl
+), buvo parodyta reguliuoti S-fazių kontrolės punkto ir buvo pasiūlyta pora chromosomų vientisumą su ląstelių ciklo progresavimo [47, 48]. Tačiau blm
mutacijų MMP + navikų išvada sukuria paradoksą: blm
mutacijos prognozuojama, kad generuoti chromosomų nestabilumas, o dauguma MMP + navikų yra diploidas. Vis dėlto kai kurie MMP + navikai yra aneuploidija ir blm
netekus funkcijos mutacijos gali turėti pleiotropic pasekmes, kurios gali turėti įtakos taip pat ir Mikrosatelitinis nestabilumo kelią, kaip siūlė dėl padidėjusios vidaus genų mutacijų aprašymas žydėti sindromas [44, 45 ]. Be suppoprt mūsų pasiūlymas yra konstatavimas, kad mes nustatėme, kad BLM
yra mutavo į Lovo ląstelių linija, gaubtinės žarnos vėžio ląstelių atitiko tiek MIKROSATELITŲ ir chromosomų inatability [43]. Daug daugiau, tai neseniai buvo pranešta, kad SGS1
genas, Saccharomyces cerevisiae
homologą BLM
ir WRN
slopina genomo nestabilumą ir homeologous rekombinacija ir yra nereikalinga su DNR neatitikimas remontas (MMR) už slopinti Groß chromosomų pertvarkymai ir slopinti rekombinacija tarp skirtingų DNR sekų [49].
Išvados
Mūsų rezultatai rodo, kad blm
rėmelio dažni pakitimai gCS ir yra specialiai susijęs su MMP + navikų, kuriems atsirado bent 2 nestabilių mikrosatelitai. Mutacijos BLM
atrodo, dažnai susijęs su rėmelio BAX
ir hMSH6 parsisiųsti ir /ar hMSH3,
ir auglių su blm
pokyčių pateikti nestabilių mono- ir trinukleotido kartojasi skaičių įsikūręs kodavimo regionus gerokai didesnes nei stebėtas MMP + navikų be blm
rėmelio. Mes rekomenduojame, kad blm
praradimas funkcija MSI skrandžio navikų yra tarpinis mutacijų įvykis, kuris gali padidinti anksto neegzistuojančios nestabilios genotipo nestabilumą.
Metodai
navikų mėginiuose
Penkiasdešimt pirminis skrandžio navikai ir jų normalūs suporuoti audiniai (kraujo ar normalus skrandžio gleivinę) buvo atrinkti remiantis turimais DNR pagrindu iš 80 skrandžio auglių (27, Calinas G ir Negrini M neskelbtų duomenų) skydelyje. Jei įmanoma, sritys naviko audinio su minimaliais uždegiminių ląstelių arba tik minimaliai stromos, arba abu, buvo atrinkti gauti neoplastinį ląstelių apkrova, didesnį kaip 50%. Visi atvejai buvo identifikuoti histopathologically kaip adenokarcinomos. Histotype (pagal Lauren klasifikaciją) [28] ir sustojimo (pagal TNM klasifikaciją) [29] buvo žinomas dėl 47 iš 50 atvejais (94%) (1 lentelė). Trisdešimt du atvejai buvo žarnyno histotype ir 15 atvejų pasklidosios arba mišraus tipo. Dvidešimt navikai buvo pastatyta I arba II, o 27 buvo III arba IV stadijos. Dėl limfmazgių būklę, aštuoniolika atvejų nebuvo ir 29 buvo N-teigiamas. Nė vienas iš pacientų buvo sukurtas vėžio mažens, ir nė vienas buvo šeimos istoriją spėjamą genetinis polinkis į vėžį. Didelės molekulinės masės DNR buvo išskirta naudojant nustatytas procedūras [30]
vertinimas MSI
MSI buvo atskleista su dviem komplektais anoniminių žymenų loci. (I) D11S1778, D11S1328, D11S922 parsisiųsti ir D11S1318
[24] arba (ii) D2S177, D3S1076, D5S433, D11S904, D17S796 parsisiųsti ir D18S59
[27]. Šių dinukleotidas mikrosatelitiniai lokusų pradmenys buvo gauti iš turimos informacijos per genomo duomenų bazę. PGR amplifikacijos buvo atlikti kaip buvo aprašyta anksčiau [24, 27]. Dėl visų mėginių, kuriuose BAT25 parsisiųsti ir BAT26
mikrosatelitai buvo analizuojami PGR, kaip aprašyta [31]. MSI buvo įvertintas jei mobilumas pamaina PGR produktų iš naviko DNR palyginti su Nustatyta normali kolega. Tik navikai bent 2 MSI (> 30% tirtų mikrosatelitai). Buvo laikomi MMP +
stiprinimas iš mikrosatelitai į BLM ir kitų kodavimo regionuose (CDR)
(A) 9 Mikrosatelitinis yra padėtyje 1610- 1618 iš blm
kDNR seka buvo analizuojami visiems suporuotas pavyzdžius. Trumpai, mikrosatelitinis buvo amplifikuotas naudojant ir 50 ng DNR šablono, 1 pM kiekvieno gruntas, 1,5 mM MgC12, 50 mkm kiekvienas iš dATF, dGTF, ir dTTF ir 5,0 mikrometrai iš dCTF, 0.1 vienetas Taq DNR polimerazės, ir 1 μCi [α33P] dCTP 10 įxL reakcijos tūrio. PGR reakcijos buvo atlikti vieną ciklą 94 ° C temperatūroje 5 min, po to 35 ciklų 94 ° C temperatūroje 30 S, 60 ° C temperatūroje 30 s ir 72 ° C temperatūroje 30 s. PGR produktai iš naviko ir atitinkamos kontrolės DNR buvo pakrautas ant lygiagrečiai 6% akrilamido sekos geliai ir veikiami vizualizacija autoradiografiją apie "Kodak" X-AR filmų. Aptikta mutacijų mikrosatelitai esančių CDR iš kitų aštuonių genų ((A) 10 metu TGFβ1-RPG,
(G) 8 in IGFIIR,
(G) 8 BAX, Viesbutis The (A), 8 hMSH3,
(C) 8 hMSH6,
(A) 9 RecQL,
(A) 8 WRN,
ir (ATG) 6 ir CBL
) buvo padaryta kaip buvo aprašyta anksčiau [14, 16, 17, 24, 32]. Patikrinti, kiekvieną PGR buvo pakartoti bent du kartus. Mutuotu alelis buvo atstovaujama juostoje poslinkio nuo 1 iki 3 bp nuo normalaus juostoje su intensyvumo panašios ar didesnio negu laukinio tipo juostos (1 pav.).
Sekos nenormalus produktų
genomo DNR fragmentai eksponuoti band pamainomis buvo reamplified tomis pačiomis sąlygomis, išskyrus už pažymėtą dCTF aplaidumą. Prieš sekos, PGR produktai buvo išgryninti arba tiesiogiai, arba po to, kai atskyrimo 2% agarozės gelyje, naudojant Qiagen valymo rinkiniai. Abu DNR gijos buvo sekos naudojant PCR pradmenys ir automatizuotą Taikomoji Biosistem 377 sekvenavimo stotį. Nukleotidų sekos buvo analizuojami naudojant Viskonsinas (GCG) programos paketo versija Unix-8.1.
Statistinė analizė
statistinės analizės rezultatus buvo atlikta naudojant Χ 2 testus arba tiksli Fišerio testą. AP
vertė. ≪ buvo laikoma statistiškai reikšmingas 0,05
deklaracijų
Padėka
šis darbas buvo remiamas dotacijas iš Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC) ir iš dalies iš EB BIOMED sutarties BMH4-CT95-0914. GC, buvo atliktas IARC tyrimų mokymo stipendija.
Autorių originalios pateikti failai vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių originalus pateiktų failų vaizdų. 12863_2001_18_MOESM1_ESM.png autorių originalų failą 1 paveiksle

• Pilvo migrena vaikams: ryšys tarp skrandžio judrumą parametrų ir klinikines charakteristikas
• Anti-opas veikla šaknų žievės ekstraktas Afrikos Laburnum "cinamonas sieberiana" ir jos poveikio antioksidantas gynybos sistemos žiurkių