Szomatikus frameshift mutáció a Bloom szindróma BLM gén gyakoriak sporadikus gyomor carcinoma mikroszatellit mutator fenotípus

Szomatikus frameshift mutáció a Bloom szindróma BLM katalógusa gén gyakoriak sporadikus gyomor carcinoma mikroszatellit mutator fenotípus katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa genetikai instabilitást számoltak a mikroszatellit traktus néhány kódoló szekvenciákat. Kimutattuk, hogy a Bloom-szindróma BLM
gén lehet olyan célpontja microsatelliteinstability (MSI) egy rövid poli-adenin ismétlés található a kódoló régió. Ahhoz, hogy tovább jellemezzük az bevonását BLM
tumorigenezis, megvizsgáltuk mutációkat kilenc gének tartalmazó kódoló mikroszatellit mikroszatellit mutátor fenotípus (MMP) pozitív és negatív gastricus karcinómák (GC-k).
Módszerek
elemeztük 50 gyomor- karcinómák (GC-k) számára mutációk a BLM
poli (a) traktus aswell, mint a kódolás mikroszatellitek a TGFβ1-RII, IGFIIR, hMSH3, hMSH6, BAX, WRN, RECQL
és a CBL
géneket.
Eredmények
BLM katalógusa mutációt találtak a 27% MMP + GC (15/04 eset), de nem minden a MMP negatív GC (0/35 eset). A frekvencia a mutációk a többi nyolc kódoló régiók mikroszatellit a következő volt: TGFβ1-RII katalógusa (60%), BAX katalógusa (27%), hMSH6 katalógusa (20%), hMSH3 katalógusa (13 %), a CBL katalógusa (13%), IGFIIR katalógusa (7%), RECQL katalógusa (0%) és a WRN katalógusa (0%). Mutációi BLM
tűnik, hogy gyakrabban társult frameshifts a BAX katalógusa és hMSH6 katalógusa és /vagy hMSH3. Katalógusa tumorok BLM katalógusa változások jelentenek nagyobb gyakorisággal instabil mono- és trinukleotid ismétlődés található kódoló régióhoz képest mutator fenotípus tumorok nélkül BLM katalógusa frameshifts.
Következtetések katalógusa BLM katalógusa frameshifts gyakori elváltozások GC specifikusan a MMP + daganatok. Azt javasoljuk, hogy a BLM
funkciójának elvesztése által MSI növelheti a genetikai instabilitása egy korábban létező instabil genotípus a gyomor tumorok.
Alapon
rák egy progresszív genetikai betegség jellemző progresszív felhalmozódása mutációk mindkét kódoló és nem kódoló szekvenciákat [1]. Egyszerű ismétlődik vagy mikroszatellit rendkívül instabil bizonyos humán daganatok, azonosító egy osztály a daganatok mikroszatellit mutator fenotípus (MMP) + (áttekintését lásd [2]). MMP + ve állapot határozza instabilitása több mint 30% -a analised mikroszatellitek, beleértve legalább egy mononukleotid (például BAT26 vagy BAT25) [3]. Mikroszatellita instabilitás (MSI) írták le, mint egy gyakori genetikai változás a különböző humán szolid tumorok, beleértve a szórványos és örökletes gastricus karcinómák (GC-k). Majdnem minden betegnél az örökletes nonpolyposis kolorektális rák (HNPCC), a molekuláris vizsgálatok kimutatták, hogy az MSI okozta csíravonal kódoló gének mutációjával szükséges fehérjék DNS-mismatch repair (MMR) [4]. Gének, mint például hMSH2, hMLH1, PMS1, PMS2- katalógusa és hMSH6 /GTBP katalógusa [5-8] határozták meg "gondozók", mert, amikor megzavarta, hogy előnyben részesítik a megszerzése mutációk nagy gyakorisággal néhány gén, beleértve onkogének és tumorszuppresszor gének [9]. Azonban egy jelentős hányada sporadikus MMP + tumorok, mutáció elemzés nem tette lehetővé az azonosító az felelős gének MSI [2, 10], ami arra utal, hogy ilyen esetekben az MSI által esetleg előidézett epigenetikus mechanizmusokat. Tény, géncsendesítéssel promoter hipermetilációt Nemrégiben bemutattuk a hMLH1 katalógusa gén [11-13].
Jelentősége MSI a tumorok támogatta annak bizonyítása, hogy a genetikai instabilitás jellemző MMP + bélrendszeri rákot lehet megcélozni rövid ismétlődő pályák belül a kódoló régió gének fontos a sejtek túlélését és proliferációját. Inszerciós /deléciós mutációk találtak a gének a transzformáló növekedési faktor-béta II típusú receptor (TGFβ1-RII
), az inzulin-szerű növekedési faktor II típusú receptor (IGFIIR
), a DNS-t eltérés-javító gének hMSH3 katalógusa és hMSH6, katalógusa proapoptotikus gén BAX katalógusa és a transzkripciós faktor E2F-4 katalógusa [14-18]. Minden esetben, kivéve az E2F-4,
a nukleotidok inszerciós /deléciós eredményezett frameshift mutációk és fehérje csonkolást. Bár a biológiai jelentősége ezeknek a változtatások nem teljesen megalapozott, azt javasolták, hogy a hiánya TGFβ1-RII receptorok a felületről a gasztrointesztinális epiteliális sejtek képesek megszüntetni az negatív növekedési kontroll a TGF-β, ami kontrollálatlan sejtnövekedést [19]. IGFIIR szerepe van a növekedési szuppressziót által kötelező érvényű, és aktiválja a TGFβ1 receptor komplex és közvetít internalizáció, a későbbi lebomlás, a növekedési faktor IGF-II [20, 21]. BAX
elősegíti az apoptózist, és azt jelentették, hogy a BAX
inaktiváció vezet a gyors tumornövekedés [22]. Az emberi gének hMSH3
és hMSH6
homológ bakteriális MutS
gén, amelynek termékei kötődni DNS-eltérések, hogy kezdeményezzen szál-specifikus javítása a DNS-replikáció hibák [23]. A szomatikus és csíravonal mutációk hMSH6
jártak szórványos MMP + kolorektális karcinómák és HNPCC [6].
Azt találtuk korábban, hogy a BLM
gén is a cél a MSI [24]. A frameshifts, talált rövid poli-adenin ismétlés, jósoltak, hogy létrehoz egy csonkított és nem funkcionális BLM fehérje. Homozigóta vagy vegyület heterozigóta mutációt a BLM
gén mutatták, hogy hatására a Bloom szindróma (BS; OMIM 210.900), egy pre-malignus állapot jellemzi kromoszomális instabilitás és a megnövekedett mutációs arány. BS betegek hajlamosak a sokféle neoplams diagnosztizált korai korban. Figyelemre méltó, többek között 100 daganatok rögzítik a BS registry, 19 emésztőrendszeri (nyelőcső, gyomor és a vastagbél), és csak két diagnosztizáltak után 40 éves kor [25]. Ezek az adatok azt mutatják, hogy a mutációk a BLM katalógusa gén elősegítheti tumorigenezis.
Hogy jobban szerepének meghatározása BLM katalógusa gasztrointesztinális tumorogenezisben mi átvizsgáljuk a testület MMP + és MMP gyomor carcinoma (GC): a) frameshifts a BLM katalógusa kódoló régiót mikroszatellit és b) az esetleges együtt jár más intragenikus frameshifts. katalógusa Eredmények katalógusa MSI állapot katalógusa a jelen tanulmány a panel 50 GC tartalmaz 15 MMP + tumorok MSI at két vagy több lókusz (2. táblázat) és a 35. GC MMP a változtatás egyik mikroszatellit (4 tumorok) vagy anélkül MSI (31 daganatok). Minden MMP + eset BAT 26 pozitív, és a BAT 25 instabilitás találtak 15-ből 13 esetben (kivéve esetek 67R és 27P). A klinikopatológiai jellemzői MMP + tumorok 1. táblázatban ismertetett A MMP + fenotípus szorosan kapcsolódik egy olyan alacsony esetben pTNM szakaszban, és egy kevésbé elterjedt csomóponti áttétek (p = 0,02 és p = 0,001 a Fisher egzakt tesztet, illetve, vs.
MMP-daganatok). Belül a MMP + csoport, feleslegben tumorok korai szakaszában, és anélkül, hogy nyirokcsomó-metasztázist találták (10/15 esetben vs. 10/32 esetben MMP esetben p = 0,02 és 11/15 esetben vs. 7/32 esetek MMP esetben p = 0,001), az adatok, hogy támogassa a javasolt jobb prognosztikai glükokortikoid MMP + [33, 34]. Meg kell jegyezni, nem túlzott, a bél típusú körében MMP + daganatok találták (12/15 esetben vs. katalógusa 20/32 Az MMP esetben) (1. táblázat), az adatok szerint a közelmúltban végzett tanulmányok kimutatták, nincs jelentős különbség a gyakorisága MSI bél típusú és diffúz típusú carcinoma [26, 35] .table 1 Szövettípus és stádium társított paramétereket MMP fenotípus mi GCsa katalógusa változó
a betegek száma Matton P VALUE milliárd Matton Összesen (%) hotelben MMP + (%) hotelben MMP - (%) hotelben Szövettípus katalógusa Bél
32 (68,0) hotelben 12 (37,5) hotelben 20 (62,5) hotelben diffúz + vegyes katalógusa 15 (32,0) hotelben 3 (20,0) hotelben 12 (80,0) katalógusa NSC katalógusa T (mélység fal infiltráció) hotelben T1 + T2 katalógusa 12 (25,5) hotelben 6 (50.0) hotelben 6 (50.0) hotelben T3 + T4 katalógusa 35 (74,5 ) hotelben 9 (25.7) hotelben 26 (74,3) hotelben NS katalógusa N (nyirokcsomók) hotelben N0 katalógusa 18 (38,3) hotelben 11 (78,5) hotelben 7 (21.5) hotelben N + katalógusa 29 (61,7) hotelben 4 (12.1) hotelben 25 (87,9) hotelben = 0,001 katalógusa M (metasztázisok) hotelben M0
40 (85,1 ) hotelben 14 (35,0) hotelben 26 (65,0) hotelben M + katalógusa 7 (14.9) hotelben 1 (14.2) hotelben 6 (85,8) hotelben NS katalógusa Staging
I + II
20 (42,5) hotelben 10 (58,8) hotelben 10 (41,2) hotelben III + IV katalógusa 27 (57,5) hotelben 5 (16.6) hotelben 22 ( 83.4) hotelben = 0.02 katalógusa totala katalógusa 47 katalógusa 15 katalógusa 32 katalógusa a - adatok álltak rendelkezésre 47 ből 50 esetben b - Fisher egzakt teszt c - NS = nem szignifikáns katalógusa 2. táblázat állapota a kódoló mikroszatelliteket belül BLM, WRN, RECQL, CBL, hMSH6, hMSH3, IGFIIR, TGF-βRII katalógusa és a Bax katalógusa gének a sorozatban gyomor carcinoma mikroszatellit mutator fenotípus.
Case

Histotypea

Stagingb


BLM

WRN

REQL

CBL

hMSH6

hMSH3

IGFIIR

TGF-βRII

BAX

No.



MSIc

(A)9

(A)8

(A)9

(ATG)6

(C)8

(A)8

(G)8

(A)10

(G)8

31R
I
I(T2N0M0)
2/5
-
-
-
-
-
-
-
-
-
57R
I
IV(T3N1M1)
5/5
-
-
-
-
-
-
-
+
-
63R
I
I(T2N0M0)
5/5
-
-
-
-
+
-
-
+
+
67R
I
I(T2N0M0)
4/5
-
-
-
-
-
-
-
+
-
69R
D
II(T3N0M0)
4/5
+
-
-
+
+
+
-
+
+
79R
I
I(T2N0M0)
5/5
-
-
-
-
-
-
-
-
-
3P
I
II(T3N0M0)
4/7
+
-
-
-
-
-
-
-
+
11P
I
III(T3N1M0)
3/7
+
-
-
-
-
+
+
+
-
14P
M
II(T3N0M0)
6/7
+
-
-
+
+
-
-
+
+
17P
I
II(T3N0M0)
3/7
-
-
-
-
-
-
-
-
-
19P
D
III(T3N1M0)
3/7
-
-
-
-
-
-
-
-
-
27P
I
IV(T4N0M0)
2/5
-
-
-
-
-
-
-
+
-
30P
I
I(T2N0M0)
3/6
-
-
-
-
-
-
-
-
-
37P
I
I(T2N0M0)
3/7
-
-
-
-
-
-
-
+
-
38P
I
III(T3N2M0)
3/7
-
-
-
-
-
-
-
+
-
%
present vizsgálatban (esetszám) hotelben 27% katalógusa 0% 0% katalógusa katalógusa 13% katalógusa 20% katalógusa 13% katalógusa 7% katalógusa 60% katalógusa 27 % katalógusa mutációk katalógusa (15/04) hotelben (0/15) hotelben (0/15) hotelben (15/02) hotelben (15/03) hotelben (2 /15) hotelben (15/01) hotelben (15/09) hotelben (15/04) hotelben a szakirodalomban (a GC-k) d katalógusa -
- - -
22-52% katalógusa 19-64% katalógusa 19-24% katalógusa 42-83% katalógusa 15-64% katalógusa a - I = intesztinális típusú; D = diffúz típusú M = vegyes típusú b szerint - a TNM osztályozás (Sobin és Wittekind, 1997) c - számos labilis /összes vizsgált mikroszatellit nap - összeállított adatok a referenciák: [17,27,42,50,51,52]
BLM frameshifts
PCR-amplifikáció a BLM katalógusa mikroszatellit feltárta abnormális sávok, hiányzik a szokásos illesztett DNS-ek, 4-ben a 15-MMP + tumorok (27%) (ábra. 1). Mi már szekvenálással igazoljuk, hogy a rendellenes sávok által okozott deléció egy adenin maradékot a poli-adenin traktus (csökkentés kilencről nyolcra adeninek), amint korábban kimutatták [24]. A mutáció gyakorisága BLM
lehet egy alacsony becslés, mivel már kizárt eseteket, amelyekben rendellenes sávok tumor DNS-eket nevezetesen gyengébb, mint a normál is, esetleg annak következtében, egy nagy szennyeződését tumor nem rosszindulatú sejtek vagy az alacsony része rosszindulatú sejtek megjelenítő rendellenesség (ábra. 1). Mivel nem BLM
mutáció volt látható MMP daganatok, frameshift mutációk a BLM
gén tűnik, hogy specifikusan a gyomor MMP + daganatok (p valószínűséggel < 0,01 a Fisher exact teszt), hasonlóan az előző jól dokumentált elváltozások TGFβ1-RII, IGFIIR, hMSH3, hMSH6
és a BAX
gének [14, 16, 17, 32]. Ezért adataink bővíteni a repertoárját módosított gének járó MMP + gyomor carcinoma. 1. ábra reprezentatív példái mutációk kimutatott mikroszatellitek a gén-kódoló régió. Case számok fent látható mindegyik illő normál (N) és a tumor (T) DNS pár. A nyilak jelzik a kóros sávokat. Vegyük észre, hogy még nem tekinthető mutáns mintában, ahol abnormális sávok nagyon halvány (mint a BLM katalógusa és a Bax katalógusa génjei tumor minta 30P). Mivel a tendencia, a Taq-polimeráz hozzá egy extra nukleotid végén a szintetizált DNS-fragmentumok PCR-termékek jelennek meg néha kettős sávok. Kivéve a BAX katalógusa frameshift tumor 69R, nincs más mutáció tűnik, hogy homozigóta. Azonban ismeretében aránya malignus sejtek tumor mintában, már korábban jelezték, hogy a BLM
mutáció tumor 69R is homozigóta [24].
Frameshifts más CDR mikroszatellitek és kapcsolatok az BLM frameshifts
ugyanazt a panelt MMP + tumorok is elemeztük jelenlétére frameshifts a mikroszatellit található kódoló régiók nyolc más gének (2. táblázat). Találtunk variáció sorozat hosszát a TGFβ1-RII, IGFIIR, hMSH3, hMSH6 katalógusa és BAX katalógusa gének, minden korábban közölték, hogy megváltozott a MMP + GC. Adatok a TGFβ1-RII katalógusa állapota nyolc (P sorozat 2. táblázat) a tizenöt tumorok korábban jeleztük [27]. A megfigyelt mutációs gyakoriság hasonlók voltak a korábban közölt összes ezek a gének, kivéve a IGFIIR,
amelyre találtunk egy kis százaléka frameshifts (2. táblázat). Érdekes, összehasonlítva BLM
mutációk csak TGFβ1-RII
frameshifts gyakoribb volt (60% vs. 27%, sorrendben) és a bax
frameshifts voltak, valamint a gyakori (27%). Ezek az adatok arra utalnak, hogy a frameshifts BLM katalógusa gyakori elváltozások MMP + GC. A tendencia közötti társulás mutációk BLM katalógusa, és mutációk BAX katalógusa és hMSH3 katalógusa és /vagy hMSH6 katalógusa megfigyelhető volt (2. táblázat) (P = 0,05 Fisher exact teszt).
Azt is elemezte a RecQL, WRN katalógusa és CBL katalógusa gének, amelyek rövid ismétlődések a kódoló régiók. Az első két gén tagjai ugyanazon helikáz gén család BLM katalógusa [36, 37]. Míg RecQL katalógusa nem jár semmilyen emberi betegségek mutáció a WRN katalógusa gén okozza a Werner-szindróma (WS; OMIM 277700), egy ritka autoszomális recesszív klinikailag jellemzi a korai öregedés és a megnövekedett kockázata a különböző daganatot, és a genetikailag jellemezhető genetikai instabilitást. CBL
egy tirozin-kináz-receptor [38], akiknek a dereguláció társult onkogenezisben [39]. Azt találtuk mutációkat csak a CBL
gén (ábra. 1). Két minta (69R és 14P) azt találtuk, hogy hordoz egy 3 bp behelyezés trinukleotid (ATG) 6 ismétlés a CBL katalógusa gén (az adatokat nem mutatjuk be). Mint azt már korábban jeleztük [24], mivel nem frameshift keletkezik, nem funkcionális következménye lehet következtetni. Mindkét mutációkat találtunk rákok megjelenítésére is BLM
frameshifts (2. táblázat). Érdemes megjegyezni, hogy ez a részhalmaza tumorok mutatnak statisztikailag szignifikáns feleslegét MSI kódoló régiók, ha összehasonlítjuk a MMP + részhalmaz nélkül BLM
elváltozások (P < 0,001, a Χ 2 teszt) (2. táblázat).
Vita katalógusa Számos tanulmány bizonyította, hogy az alternatív utak lehetnek a gasztrointesztinális MMP + és MMP jellemezhető rákok különböző féle módosított gének [40]. Egy fokozatos modellje mutátor mutációk (a "mutátor hogy mutálódik a másik mutátor") javasoltak, hogy meghatározza a mutátor versus a szuppresszor utak gastrointestinalis tumorok [41]. Elemezve az időzítése mutációs események genetikailag instabil GC, azt javasolták, hogy az első célpontjai mismatch repair hiány a mononukleotid kiterjedésű TGFβ1-RII katalógusa és a Bax.
A frameshift mutációk hMSH3 katalógusa és hMSH6
tűnnek másodlagos mismatch repair elváltozások, amely generál mutációk IGFIIR katalógusa [42]. Az a megállapítás, hogy a frameshift mutációk TGFβ1-RII katalógusa a leggyakoribb és a IGFIIR katalógusa a kevésbé gyakori a gyomorrák MMP + daganatok támogatja a modell, amelyben a korai események jelen kell lennie a legtöbb tumor és késői mutációk csak egy minor frakció [43]. Ezt a megállapítást megerősíti az általunk vizsgált (2. táblázat). BLM
frameshift mutációk társulnak gyakrabban első és a második lépést javasolt módosítások ebben a modellben, ami arra utal, hogy ezek másodlagos mismatch repair hibák (a hMSH3 katalógusa és /vagy hMSH6
) jelen van a sejtekben, amelyek nem apoptózist (esetleg következtében BAX katalógusa inaktiválása). Figyelemre méltó, abban az esetben, 3P, továbbá a BLM,
az egyetlen frameshifts találtak BAX (lásd
1. ábra) és a p53 katalógusa (az adatokat nem mutatjuk be) géneket, ami arra utal, hogy bizonyos esetekben, BLM
változtatás nélkül történhetnek hMSH3 katalógusa és /vagy hMSH6 katalógusa mutációk, a sejtek rendellenes p53-közvetített úton apoptotikus válasz a DNS mismatch.
bevonása BLM katalógusa a tumorok kívül BS betegek tűnik elképzelhető, hiszen ez a gén úgy tűnik, hogy egyfajta gondnok. BLM katalógusa mutációk okoznak fokozott genetikai instabilitást jellemzi emelt számú kromoszóma törések, hiányosságok és átrendeződések és túl nagy számú mutációt egyaránt kódoló és nem kódoló régiókban, valószínűleg származik egyenlőtlen testvér-cromatidcsere, jellemző a Bloom-szindróma [44, 45]. Ennek megfelelően, a BS kombinációt mutat genetikai instabilitást és emelkedett a rák kockázata, társulás is megtalálható más betegségek által okozott hibák ügyvivő gének (mint például a HNPCC, WS, ataxia-teleangiectasia és xeroderma pigmentosum). Hasonló a mutációkat találtak a BS, a frameshifts leírt GC eltörli a helikáz funkciója a BLM fehérje [24]. BLM fehérje már igazolt DNS letekercselés tevékenység [46], és lehet bevont folyamatok, amelyek zavarják a malignus sejtekben, mint például a DNS-replikációt, a rekombináció, kromoszóma szegregáció, a DNS-javítás és a transzkripció. Valóban, a hasadó élesztő BLM gén katalógusa homológ (radl2 katalógusa + /rqhl katalógusa +) kimutatták, hogy szabályozza az S-fázis ellenőrzési pontot, és azt javasolták, hogy pár kromoszóma integritás sejtciklus progresszióját [47, 48]. Azonban a megállapítás BLM katalógusa mutációk MMP + tumorok generál egy paradoxon: BLM katalógusa mutációk az előrejelzések generálására kromoszómális instabilitás, míg a legtöbb MMP + daganatok diploid. Mindazonáltal néhány MMP + tumorok aneuploid és BLM katalógusa loss-of-funkció mutációk lehetnek pleiotropiás következményei, esetleg is érintő mikroszatellit instabilitás útvonal, ahogy azt a leírást fokozott belüli génmutációt Bloom szindróma [44, 45 ]. Annak suppoprt mi javaslat az a megállapítás, hogy azt találtuk, hogy a BLM katalógusa van mutációnak LoVo sejtvonal, a vastagbélrák sejtvonal mind mikroszatellit és kromoszóma inatability [43]. Sokkal több volt a közelmúltban számolt be, hogy SGS1 katalógusa gén, a Saccharomyces cerevisiae katalógusa homológ BLM katalógusa és WRN, katalógusa elnyomja genom instabilitás és homeologous rekombináció és redundáns DNS mismatch repair (MMR) elnyomására bruttó kromoszomális átrendeződések és elnyomására közötti rekombináció eltérő DNS-szekvenciák [49].
Következtetések
Eredményeink azt jelzik, hogy a BLM
frameshifts gyakori elváltozások GC és kifejezetten társítva MMP + mutató daganatok legalább 2 instabil mikroszatellitek. Mutációi BLM
tűnik, hogy gyakran jár együtt frameshifts a BAX katalógusa és hMSH6 katalógusa és /vagy hMSH3, katalógusa és tumorok BLM katalógusa változtatások számos szempontból instabil mono- és trinukleotid ismétlődés található kódoló régiók lényegesen magasabb, mint a megfigyelt MMP + tumorok nélkül BLM
frameshifts. Javasoljuk, hogy a BLM katalógusa funkciójának elvesztése által MSI a gyomor tumorok egy közbülső mutációs esemény, ami növelheti a bizonytalanság egy korábban létező instabil genotípus. Katalógusa módszerek katalógusa tumormintákban
ötven primer gyomor tumorok és a rendes párosított szövetekben (vér vagy normál gyomornyálkahártya) választottunk alapján rendelkezésre álló DNS-t egy panel 80 gyomor tumorok (27, Calin G és Negrini M nem publikált adatok). Amikor lehetséges, területeit tumorszövet minimális gyulladásos sejtek vagy minimális stroma, vagy mindkettő, arra kiválasztva, hogy egy neoplasztikus sejt terhelés nagyobb, mint 50%. Minden esetet azonosítottak szövettanilag mint adenocarcinoma. Szövettípus (a Lauren osztályozás) [28] és átmeneti (a TNM osztályozás) [29] volt ismert 47 ből 50 esetben (94%) (1. táblázat). Harminckét eset bél Szövettípus és 15 esetben diffúz vagy vegyes típusú. Húsz tumorokat megrendezett I. vagy II, míg a 27 stádiumba III-IV. Ami a nyirokcsomó státusz, tizennyolc esetben voltak és 29 volt az N-pozitív. Egyik beteg már kifejlesztett egy rák korai életkorban, és egyik sem volt a családi anamnézisben utaló genetikai hajlam a rák. Nagy molekulatömegű DNS-t izoláltunk a szokásos eljárások [30]. Katalógusa értékelése MSI katalógusa MSI feltérképezését két névtelen markerek loci: (i) D11S1778, D11S1328, D11S922 katalógusa és D11S1318 katalógusa [24] vagy (ii) D2S177, D3S1076, D5S433, D11S904, D17S796
és a D18S59
[27]. A primereket ezek dinukleotid mikroszatellit lókusz nyert információk érhetők el a genom adatbázisból. PCR amplifikáció végeztük a korábban leírtak [24, 27]. Az összes mintát a BAT25
és BAT26
mikroszatellitek elemeztük PCR-amplifikáció leírt [31]. MSI értékeltük, ha a mobilitási eltolódása a PCR-termékek származó tumor DNS összehasonlítva a normális megfelelője azonosítottuk. Csak tumorok legalább 2 MSI (> 30% vizsgált mikroszatellitek) úgy tekintettünk, MMP +.
Amplifikálása mikroszatellit BLM és más kódoló régiók (CDR-ek)
A (A) 9 mikroszatellit található pozícióban 1610- 1618 BLM katalógusa cDNS-szekvencia elemeztük az összes párosított minták. Röviden, a mikroszatellit amplifikáltuk PCR-rel 50 ng templát DNS-t, 1 uM mindegyik primerből, 1,5 mM MgC12, 50 um dATP, dGTP és dTTP, valamint 5,0 uM dCTP-t, 0,1 egység Taq DNS-polimeráz, és 1 uCi [α33P] dCTP 10 ul reakció-térfogatban. PCR-reakciót végeztünk, egy ciklus 94 ° C-on 5 percig, majd 35 ciklusban 94 ° C 30 s, 60 ° C-on 30 s és 72 ° C-on 30 másodpercig. PCR termékek tumor és a megfelelő kontroll DNS rakták párhuzamosan 6% -os akrilamid szekvenáló gélek és ki vannak téve a megjelenítés Autoradiográfiával Kodak X-AR filmeket. Mutációk kimutatására a mikroszatellit található, a CDR-ek nyolc más gének (a (A) 10 TGFβ1-RII,
a (G) 8 IGFIIR,
a (G) 8 BAX,
a (a) 8 hMSH3,
a (C) 8 hMSH6,
az (a) 9 RecQL,
az (a) 8 WRN,
és a (ATG) 6 CBL
) végeztük a korábban leírtak [14, 16, 17, 24, 32]. Az ellenőrzés, minden egyes PCR-t legalább kétszer megismételjük. Egy mutáns allél képviselte egy sáv eltolódása 1-3 bp-re a normál sáv intenzitása hasonló, vagy nagyobb, mint a vad-típusú sáv (ábra. 1).
Szekvenálása rendellenes termékek katalógusa genomiális DNS-fragmensek mutató sáv eltolódásokat amplifikáltuk azonos feltételek mellett, kivéve a mulasztás jelzett dCTP. Mielőtt szekvenálás, a PCR-termékeket tisztítjuk vagy közvetlenül, vagy elválasztás után 2% -os agaróz gélen, Qiagen tisztítás készletek. Mindkét DNS-szál szekvenciáját PCR-láncindítók alkalmazásával, és egy automata Applied Biosystem 377 szekvenálás állomáson. A szekvenciákat analizáljuk Wisconsin (GCG) programcsomag változata Unix-8.1. Katalógusa Statisztikai analízis katalógusa A statisztikai elemzésre alkalmas eredmények végeztünk a Χ 2 teszt vagy Fisher-féle egzakt tesztet. AP katalógusa értéke < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa nyilatkozatok katalógusa visszaigazolása katalógusa Ezt a munkát támogatták az Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC), részben az EK BIOMED szerződés BMH4-CT95-0914. GC támogatott IARC Research Training Fellowship. Katalógusa Szerzők eredeti beküldötteknek képeket
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12863_2001_18_MOESM1_ESM.png A szerzők eredeti fájlt az 1. ábrán

• Hasi migrén gyermekeknél: összefüggés a gyomor motilitás paraméterek és a klinikai characteristics
• Anti-fekélyt aktivitását kiváltó kéreg kivonat az afrikai aranyeső "Cassia sieberiana" és annak hatása az antioxidáns védelmi rendszer rats