Vertinimas rinkliavos panašaus receptoriaus 4 Asp299Gly, Thr399Ile ir interleukino-8 -251 polimorfizmų dėl distalinės skrandžio vėžio išsivystymo riziką

Vertinimas rinkliavos panašaus receptoriaus 4 Asp299Gly, Thr399Ile ir interleukino-8 -251 polimorfizmas į dėl distalinės skrandžio vėžio išsivystymo pervežimas tezės
Background Viesbutis The uždegimui sukeltos Helicobacter pylori kolonizacija yra susijęs su distalinio skrandžio vėžio (GC) plėtros. Priimančioji atsakas į H
. pylori
buvo susijęs su genetiniais polimorfizmas, kurie daro įtaką tiek įgimtas ir įgyto imuninio atsako.
Mūsų tikslas buvo ištirti, ar TLR4 Asp299Gly
, TLR4 Thr399Ile
ir IL-8-251 buvimas
a /T polimorfizmas neturėjo į distalinio GC plėtros Meksikos gyventojų įtaką
metodai
ištyrėme 337 pacientus, kurie buvo suskirstyti į dvi grupes. 78 pacientams su histologiškai patvirtinta distalinio GC ir 259 ne tik vėžio kontrolė. Iš H. pylori
buvimas kontrolinėje populiacijoje buvo apibrėžta teigiamų rezultatų iš mažiausiai dviejų iš keturių diagnostinius tyrimus: serologiniai, histologijos, greitas ureazės testo ir kultūrą. Žmogaus DNR buvo išvalytas ir genotipą už TLR4 Asp299Gly
polimorfizmo iki pyrosequencing, už TLR4 Thr399Ile
pagal PCR-RFIP ir IL8-251
pagal amplifikacijos ugniai mutacijų sistemos (ginklai) -PCR.
Rezultatai Viesbutis The ne vėžio kontrolės grupė buvo nustatyta, kad Hardy-Weinberg pusiausvyros prie polimorfinės lokusų studijavo (chi kvadrato HW = 0,58 IL8-251
, 0,42 TLR4 Asp299Gly
ir 0,17 už TLR4 Thr399Ile
). Į mutavusių alelių (homozigotinių plius heterozigotinių) dažniai buvo lyginami tarp atvejų ir kontrolės. Neradome reikšmingą skirtumą TLR4- Asp299Gly
[7,7% distalinio GC pacientų ir 7,7% ne vėžio kontrolės (p = 0,82)] ir TLR4 Thr399Ile
[1,3% GC pacientams ir 5 % iš kontrolinėje populiacijoje (p = 0,2)]. Priešingai, IL-8-251 pervežimas A /T, 80.77% GC pacientų ir 66,4% kontrolinės grupės amžių ir lytį suderinta turėjo bent vieną kopiją mutavo alelio (OR = 2,12, 95% PI = 1,1-4,2) (p = 0,023).
Išvada
Šis tyrimas parodė, kad IL8-251 d *
alelis gali būti susijęs su distalinio skrandžio vėžio vystymąsi šioje Meksikos gyventojų.
faktai
Helicobacter pylori
beveik išimtinai kolonizuoti gleivinės sluoksnį žmogaus skrandžio ir gyventi priimančiojoje metus, dešimtmečius, o gal ir visą gyvenimą. Maždaug 10% atvejų, organizmas yra susijęs su įvairių klinikinių rezultatų, įskaitant ne opa dispepsija, pepsinė opa, ir distalinės skrandžio vėžio [1].
Tiek priimančiosios ir aplinkos veiksniai buvo susiję su šio klinikinio įvairovę. Priimančiosios veiksniai yra daugiausia susijęs su bakterijų pripažinimo, kad imuninė sistema ir variacija citokinų reakcijos lygis [2, 3].
Pripažinimo patogenų yra sąlygotas nuo gemalo koduotas receptorių rinkinys, kuris yra vadinama modelio pripažinimo receptoriai (RRKS). Šie receptoriai atpažinti užkonservuoti molekulinius modelių, kurie yra bendri visoms didelėms grupėms mikroorganizmų. Svarbus PRR yra Toll-tipo receptorių 4 (TLR4), transmembraninio receptorius, pripažįsta ligandų spektrą, įskaitant lipopolisacharido (LPS), kuri yra randama ląstelės sienelės gramneigiamų bakterijų, pavyzdžiui, H. pylori
[3 ]. Du vieno nukleotido polimorfizmas (SNP) Atsižvelgiant TLR4
geno, ASP-299 → gli ir THR-399 → Ile perėjimų, buvo įrodyta, kad sukelti susilpnėjusio atsako į LPS, sumažėjęs epitelio TLR4 tankis ir sumažėjo uždegiminių citokinų atsakymą į LPS [ ,,,0],4]. Be to, genetiniai variantai citokinų taip pat svarbus uždegiminio atsako ir keletas genų iš įvairių būdų buvo susijęs su skrandžio vėžiu, įskaitant interleukino (IL) -1b
, TNF
, IL-10 parsisiųsti ir IL-8
[5-7].
IL-8 citokino veikia kaip stiprus chemoattractant neutrofilų ir limfocitų. Buvo pranešta, kad IL-8 koncentracija padidėjo 10 kartų skrandžio vėžio egzempliorių, palyginti su normaliomis skrandžio audinius. Gerai būdingas SNP T /į -251 lokuso buvo aprašytas ir susijęs su didesne IL-8 gamybą ir kelių ligų [8-11].
Mūsų tikslas buvo nustatyti, ar TLR4 Asp299Gly
, TLR4 Thr399Ile
ir IL8-251 a /T
polimorfizmas yra susijęs su distalinės skrandžio vėžio gerai apibrėžtą Meksikos gyventojų.
metodai
pacientų populiacijos
Mes studijavo 78 nesusijusių pacientus su histologiškai patvirtinta distalinio GC (vidutinis amžius = 58.6y, vidutinis amžius = 60, amžiaus diapazonas: 22-84 F M = 0,56). Mes taip pat studijavo 259 pacientus be histologiniai GC (vidutinis amžius = 57.1y, vidutinis amžius = 54, amžiaus = 18-92 F M = 1,17). Šios populiacijos buvo aprašyta anksčiau [7]. Visi pacientai buvo įtraukti į ligoninę Universitario "Dr. José Eleutério González", Universidad Autónoma de Nuevo León. Vietos etikos komitetas patvirtino tyrimą ir raštu informuoti sutikimas buvo gautas iš visų dalykų.
Histopatologiniams egzaminus
iš visų kontrolinės grupės pacientų, aštuoni biopsijos mėginiai buvo gautas histologinis vertinimo, du iš mažesnio kreivumo, du iš didesnio kreivumo , du iš incisura angularis, ir du iš prepyloric regione. Iš pacientų, sergančių distalinio GC, ne mažiau kaip 8 biopsijos buvo paimti iš už histologinio vertinimo naviko. Biopsijos iš atvejų ir kontrolės buvo nustatytos, parafino įterptųjų ir tamsintas su hematoxilin-eozinu. Patyręs patologas išnagrinėjo visus histologinius skaidres.
H. pylori
status Viesbutis The H. pylori
statusas kontrolinėje populiacijoje nulėmė Histologija, greitas ureazės testas (RUT), serologinius tyrimus, o kultūrą , Dėl rujoti, antralinių biopsija buvo analizuojami patvirtintu nekomerciniam kriterijaus [12]. Biopsija buvo patalpinamas į bandymų buteliuko, inkubuojamos 37 ° C temperatūroje ir skaityti per 24 val. Spalvų kaita nuo oranžinės iki rausvai raudona nurodė teigiamą rezultatą. Atlikti serologinius, imunofermentinės analizės (IFA) buvo panaudota siekiant įrodyti IgG klasės antikūnų, kaip buvo aprašyta anksčiau [13] kultūros.
Buvo atliekami su dviem korpuso ir du Ertmė biopsijos standartiniais metodais. Biopsijos buvo dedamas į 10% kraujo agaro ( "Becton Dickinson, Cockeysville, MD) ir inkubuojama 37 ° C temperatūroje ne mažiau kaip vieną savaitę pagal microaerobic sąlygomis. Padermių buvo identifikuoti pagal Gramo dažymo, oksidazės, Katalazė ir ureazės testai.
Kontrolinės grupės pacientų buvo laikomas H. pylori
užsikrėtę kai bent du iš diagnostinių testų buvo teigiami.
H. pylori paplitimą
infekcijos skrandžio vėžiu sergantiems pacientams buvo nustatytas pagal histologiją tik.
genotipo
Genomo DNR buvo išskirta iš periferinio kraujo iš fenolio-chloroformo-isoamilic alkoholio ir kritulių etanolio metodo rezultatas. Amplifikacijos ugniai mutacijų tyrimo sistemą (ginklai) -PCR metodas buvo naudojamas genotipo į IL8-251
polimorfizmas, kaip aprašyta anksčiau [14].
TLR4 Thr399Ile
polimorfizmas nulėmė PCR-RFIP [15] ir į TLR4 Asp299Gly
polimorfizmas nulėmė pyrosequencing metodas skirtas šiame tyrime. Iš pradžių PGR buvo atliekama su gruntais, F-GAT TAG CAT AKTAS TAG Akto ACC TCC ATG ir R-BMK TTT CAA TAG TBS ŠMC TBS CCA GG su atvirkštine gruntas Biotinilinta. PGR sąlygos buvo: 94 ° C temperatūroje 5 min ir 40 ciklai 94 ° C, 59 ° C ir 72 ° C temperatūroje 30 s kiekvienas, ir galutinis išplėtimas 72 ° C temperatūroje 5 min. Dėl pyrosequencing, Biotinilinta PGR šablonai buvo imobilizuoti avidino dengtos paramagnetinėmis Sepahrose karoliukai privalomas buferį. Tuo, kad rumbė-šablono kompleksai buvo plaunamos, panardinant į 70% alkoholio ir 0,5 M NaOH ir po to pridedama 45 pL atkaitinimo buferio, kurio sudėtyje yra 15 pmol sekos grunto 5'-CAT ACT TAG ACT ACT ACC TC 3 ". Atkaitinimo vyko 80 ° C temperatūroje 2 min. Realaus laiko pyrosequencing buvo atliktas automatiniu 96-gerai pyrosequencer PSQ SNP 96 (Pyrosequencing AB, Uppsala, Švedija), kurį rekomenduoja gamintojas, naudojantis fermentais ir substratų.
Statistinės analizės pervežimas Hardy-Weinberg pusiausvyros alelių ne individualios lokusų buvo įvertintas chi kvadrato statistika. Statistiškai reikšmingi skirtumai buvo nustatyti Stjudento t pervežimas testas, chi kvadrato ar Fisher miesto bandymo, du tailed. Tikimybę (p) vertė < 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas. Kursai santykis (OR) su 95% patikimumo intervaluose (CIS) buvo skaičiuojamas naudojant EKI-Informacija 2000 programinę įrangą (centre ligų kontrolės ir prevencijos, Atlanta, GA.). Buvo atlikti trys tyrimai, per kuriuos buvo įtraukti visi atvejai ir kontrolę, antra, kuriais atvejais buvo palyginti tik su H. pylori
+ Valdymas ir trečiosios analizę, kurioje gyventojų pagrindu kontrolė buvo suderinta su 5 metų amžiaus grupes ir lytį su vėžio atvejų.
rezultatai
tyrimo grupių charakteristikos ir H. pylori
būsena Viesbutis The genotipų pagal histologinių duomenų paskirstymo rodomas Stalo 1.Table 1 genotipas ir alelių dažniai IL-8 251
A /T ir TLR-299 parsisiųsti ir -399
lokusų į ne vėžio ir vėžio grupės pagal histologinių išvadas

IL8-251 A /T

TLR4 Asp299Gly
TLR4Thr399Ile
grupė (N)
genotipas pervežimas alelio
genotipas
alelis
genotipas
alelis
A.
ne
TT
d *
* t
1,1
1,2
* 1
* 2
1 1
1,2
* 1
* 2
Gastritas (207)
42
97
68
0.44
0.56
190
17
0.96
0.04
196
11
0.97
0.03
PUD (29)
4
14
11
0,38
0,62
29
0
1
0
27
2
0,97
0,03
AG + MP (23)
5 10 8
0.43
0,57
20
3
0.93
0,07
23
0
1
0
Skrandžio vėžys (78)
16
47
15
0.51
0.49
72
6
0.96
0.04
77
1
0.99
0.01
diffuse type
8
26
8
0.5
0.5
38
4
0.95
0.05
41
1
0.99
0.01
intestinal įrašykite
8
21
7
0,51
0,49
34
2
0,97
0,03
36
0
1
0
H. pylori
+ (191)
37
90
64
0.43
0.57
175
16
0.96
0.04
181
10
0.97
0.03
Age ir lyčių atitiko (n = 189)
33
87 69
0,4 ​​
0,6
175
14
0.96
0,04
179

10
0,97
0,03
kojytė: pepsinė opa; AG atrofinė gastritas; MP: žarnyno metaplazija
genotipas dažnių individualiu lokusų studijavo buvo Hardy-Weinberg pusiausvyros, su ne dideliais chi kvadrato vertės (0,58 IL8-251
, 0,42 TLR4 Asp299Gly
ir 0,17 už TLR4 Thr399Ile
). Tarp kontrolinės grupės, 80% buvo lėtinis gastritas (1 lentelė), 11,2% pacientų kojytė ir 8,8% pacientų atrofijos gastritas ir /arba žarnyno Metaplasia. Pasklidosios ir žarnyno skrandžio vėžio dalis buvo 1,2. 1
H. pylori pervežimas paplitimą kontrolinėje grupėje buvo 73,7%. Tai yra panašus į vertės anksčiau nustatytą šio tyrimo populiacijos [16]. H. pylori pervežimas paplitimas tarp skrandžio vėžiu sergantiems pacientams buvo 53,8%.
Vertinimas rizika IL8-251 pervežimas A /T TLR4 Asp299Gly parsisiųsti ir TLR4 Thr399Ile
genotipai
mes palyginome visas konkrečias genotipus už IL8-251
(A., AT ir TT), nes TLR4 Asp299Gly
(1,1, 1,2 ir 2,2) ir TLR4 Thr399Ile
(1,1, 1,2 ir 2,2) (1 lentelė). Iš IL8-251
čia genotipo dažnis buvo didesnis skrandžio vėžio atvejų nei visų kontrolės, tik Helicobacter pylori
teigiamos kontrolės ir amžius ir lytis suderintų kontrolę (2 lentelė) .table 2 LAŽYBOS santykį ir 95 % pasikliautinieji intervalai analizės dėl distalinės skrandžio vėžio atvejų genotipai vs
visi ne vėžio kontrolę.

IL8-251 d *
IL8-251 AT
TLR-299
* 2 TLR-399 * 2

visais atvejais vs
OR (95% PI)
p
arba (95% PI)
p
arba 95% PI
psl
arba 95% PI
psl
Visi valdikliai (n = 259)
2,12 (1,1-4,2)
0,023
1.73 (1-3) 0,049
1 (0,3-2,8)
0,82
0,25 (0,01-1,8)
0,2
H. pylori
+ valdikliai (n = 191)
2,12 (1,1-4,2)
0,029
1.7 (0.96-3)
0.068
0.91 (0.3-2.6)
0,95
0,24 (0-1,8)
0,19
Amžius ir lytis atitiko kontrolę (n = 189)
2,42 (1,2-4,8)
0,009
1,78 (1-3,2
0.035
1,04 (0,3-3,1)
0,86
0,23 (0-1,8)
0,1
vertinimas rizika IL8-251
* A TLR4 Asp299Gly * 2 pervežimas ir TLR4 Thr399Ile * 2
aleliai
Mes šalia lyginami IL8-251 vežimas d *
alelio (homozigotine plius heterozigotinės) GC atvejais ir visų gastritas plius įprastos kontrolės. Mes nustatėme, kad, IL8 asociaciją -251 d *
alelis ir GC (OR = 2,12, 95% PI = 1.1-4.2, p = 0,023) (2 lentelė). Kai mes palyginti visus gastritas plius normalus kontrolę vs
histologinių vėžio tipų plėtra , už difuzinės ir žarnyno skrandžio vėžio tipų rizika buvo panaši, tačiau nėra reikšminga (arba = 2.15, p = 0,08 ir OR = 2.1, p = 0,13 atitinkamai).
Kai mes palyginti skrandžio vėžio atvejų su H. pylori
+ valdikliai radome panašų vertę (arba = 2.12, 95% PI = 1,1-4,2, p = 0,029).
Pirmyn, mes palyginti skrandžio vėžio grupės withage dažnį ir lyčių atitiko kontrolę ir mes radome stipresnis asociacija (ARBA: 2,42, 95% PI = 1,2-4,8, p = 0.0.009).
neradome jokios asociaciją TLR4 Asp299Gly * 2
ir TLR4 Thr399Ile * 2
hyporeactive alelių.
Diskusijos ir išvada Viesbutis The įvairovės reaguojant į H. pylori infekcijos
buvo priskirtas keletas veiksnių. Genetiškai reguliuoja imuninį atsaką, atrodo, vaidina lemiamą vaidmenį nustatant žalos priimančiosios [1-3] intensyvumą.
Keli autoriai apibūdino padidintą gamybą IL-8 metu H. pylori pervežimas infekcijos. A /T polimorfizmas pozicijos -251 geno buvo susijęs į aukštesnį veiklos šio interleukino ir neseniai, tai alelis buvo susijęs į du tyrimus, kad skrandžio vėžio išsivystymo japonų populiacijos [10, 11]. Viename iš šių tyrimų duomenimis, IL8-251 AA
genotipas vyko didesnę riziką atrofinį gastritas (OR = 2,35, 95%, PI = 1,12-4,94) ir skrandžio vėžio (OR = 2,22, 95% PI = 1.08- 4,56), lyginant su TT genotipą. Jie studijavo 252 sveikų, 215 asmenis su atrofinį gastritas, ir 396 pacientai, sergantys skrandžio vėžio. AA ir AT genotipų buvo reikšmingai susijęs su aukštesnio lygio IL8 baltymų, sunkesne neutrofilų infiltracija palyginti su TT genotipą. Kitame tyrime, IL-8 -251
d * alelis buvo susijęs su didesne rizika skrandžio vėžio (OR = 2,1, 95% PI = 1.38-2.92). Mūsų rezultatai parodė, jokių asociaciją tarp koeficientai yra didesni GC ir AA genotipo, bet teigiamas asociacija AT genotipo ir ne mažiau kaip vieną kopiją į * A alelio vežimėlio (homozigotinį plius heterozigotinės) buvo rasta. Tai puikus, kad AR vertė pastebėjo mūsų tyrime (2.12) buvo gana panašus į stebėtą Japonijos gyventojų (2.1).
IL-1B-31, C /T polimorfizmo
buvo susijęs su plėtrai skrandžio vėžio ir geografinė-etninių skirtumų buvo aprašyta šio lokuso, labiau asociacijos į Occidental polimorfizmo nei rytietiško gyventojų. Il-8-251
A /T polimorfizmo rezultatai koreliuoja su ankstesniais pateiktų Japonijos gyventojų duomenimis, nepateikdamas jokių geografiniame ar etninės variacijos tendencija.
Šiuo metu yra neišspręstas, ar susilpnėjusio atsako LPS signalizacijos būdas yra naudingas arba žalingas į priimančiąją. Asmenys turintys hyporeactive TLR4
polimorfizmas parodė mažesnio cirkuliuojančių uždegiminių citokinų, padidėjusia rizika ūmių bakterinių infekcijų ir tendencija padidėjusio mirtingumo. Kiti naujausi tyrimai patvirtina hipotezę, kad žemos veikianti TLR4
polimorfizmas gali susilpnėti uždegimine reakcija, susijusi su mažu kenkia infekcija, kuri skatins nuolatinį infekcijos [17-20]. Šiame tyrime neradome jokio ryšio tarp GC ir TLR4 polimorfizmas, tai rodo, jie neturi prisidėti prie distalinės skrandžio vėžio vystymąsi. Tiek TLR4 Asp299Gly parsisiųsti ir Thr399Ile
polimorfizmas buvo pranešta šarnyro pusiausvyros pažeidimo (LD) [21, 22], tačiau mes nusprendėme genotipo tiek, nes mes ne žinoti, jei jie buvo LD mūsų gyventojų.
Taigi, mūsų preliminarūs rezultatai rodo, kad IL8-251
yra biologiškai tikėtina ligos eigą modifikuojančiais polimorfizmas. Jei patvirtinta keliais gyventojų, nes jis buvo japonų, ir dabar Meksikos grupių, tai polimorfinės svetainė kartu su kitais, gali būti naudojami siekiant nustatyti pacientus, kuriems yra didesnė rizika GC, kuris gali prireikti atidžiau stebėti.
Deklaracijos
konkuruojančių interesų
autorius (-iai) deklaruoja, kad jie neturi jokių konkuruojančių interesų.

• Skrandžio Helicobacter pylori infekcija asocijuojasi su padidėjusia rizika susirgti storosios žarnos polipai Afrikos Americans
• Fosforilinamos Smad2 įpusėjęs Skrandžio Carcinoma