Evaluación del receptor tipo Toll 4 Asp299Gly, Thr399Ile y -251 polimorfismos en el riesgo de desarrollo de cáncer gástrico distal 8 interleucina-

Evaluación del receptor tipo Toll 4 Asp299Gly, Thr399Ile y -251 polimorfismos en el riesgo de desarrollo de cáncer gástrico distal
Resumen Antecedentes

La intensidad de la inflamación inducida por Helicobacter pylori <8 interleucina-br> colonización se asocia con el desarrollo de cáncer gástrico distal (GC). La respuesta del huésped a H
. pylori
se ha relacionado con los polimorfismos genéticos que influyen en las respuestas inmunitarias innata y adaptativa.
Nuestro objetivo era investigar si la presencia del TLR4 Asp299Gly
, TLR4 Thr399Ile
e IL-8-251
polimorfismos de a /T tenían ninguna influencia en el desarrollo de GC distal en una población mexicana
Métodos
se estudiaron 337 pacientes que se dividieron en dos grupos:. 78 pacientes con diagnóstico histológico de GC distal y 259 no-cáncer controles. La presencia de H. pylori
en la población control fue definida por los resultados positivos de al menos dos de las cuatro pruebas de diagnóstico: serología, histología, test de la ureasa y cultivo. El ADN humano fue purificado y genotipo para TLR4 Asp299Gly
polimorfismo por pirosecuenciación, para TLR4 Thr399Ile fotos: por PCR-RFLP y para IL8-251 fotos: por el sistema de amplificación refractario a las mutaciones (ARMS-PCR) guía. Resultados
se encontró que el grupo de control sin cáncer para estar en equilibrio de Hardy-Weinberg en los loci polimórficos estudiados (chi-cuadrado HW = 0,58 para IL8-251
, 0,42 para TLR4 Asp299Gly
y 0,17 para TLR4 Thr399Ile
). Las frecuencias de los alelos mutados (homocigotos más heterocigotos) se compararon entre los casos y controles. No se encontraron diferencias significativas para TLR4 Asp299Gly
[el 7,7% de los pacientes con cáncer gástrico distal y controles sin cáncer 7,7% (p = 0,82)] y para TLR4 Thr399Ile
[el 1,3% de los pacientes con cáncer gástrico y el 5 % de la población de control (p = 0,2)]. Por el contrario, para la IL-8-251
A /T, el 80,77% de los pacientes con cáncer gástrico y el 66,4% en el grupo de edad y sexo de control emparejado tenían al menos una copia del alelo mutado (OR = 2,12, IC del 95% = 01.01 a 04.02) (p = 0,023). Conclusión

este estudio mostró que la IL8-251 * Un
alelo podría estar relacionada con el desarrollo de cáncer gástrico distal en esta población mexicana.
Antecedentes
Helicobacter pylori
casi exclusivamente colonizar la capa mucosa del estómago humano y residir en el huésped por años, décadas o tal vez de toda la vida. En aproximadamente el 10% de los casos, el organismo se asocia con diversos resultados clínicos, incluyendo dispepsia no ulcerosa, enfermedad de úlcera péptica y cáncer gástrico distal [1].
Tanto anfitrión y los factores ambientales se han asociado con esta diversidad clínica. Los factores del huésped están principalmente relacionadas con el reconocimiento de las bacterias por el sistema inmune y la variación en el nivel de respuesta de citoquinas [2, 3].
reconocimiento de patógenos está mediado por un conjunto de receptores de la línea germinal codificada que se conoce como Los receptores de reconocimiento de patrones (PRRS). Estos receptores reconocen patrones moleculares conservados, que son compartidos por grandes grupos de microorganismos. Un PRR importante es Toll-like receptor 4 (TLR4), un receptor transmembrana que reconoce una serie de ligandos, incluyendo lipopolisacárido (LPS), que se encuentra en la pared celular de las bacterias Gram-negativas como H. pylori
[3 ]. Dos polimorfismos de nucleótido único (SNPs) en el gen TLR4
, Asp-299 → Gly y Thr-399 → Ile transiciones, se ha demostrado que conducir a una respuesta menor a LPS, reducción de la densidad del epitelio TLR4 y la reducción de la respuesta inflamatoria de citoquinas a LPS [ ,,,0],4]. Además, variantes genéticas de citoquinas también son críticos para la respuesta inflamatoria, y varios genes de diferentes vías se han asociado con el cáncer gástrico, incluyendo la interleucina (IL) 1B
, TNF
, IL-10 y
IL-8
[5-7]. hotels, IL-8 funciones de citoquinas como un potente quimioatrayente para los neutrófilos y linfocitos. Se ha informado de que la IL-8 niveles aumentaron 10 veces en las muestras de cáncer gástrico en comparación con los tejidos gástricos normales. Un SNP T /A bien caracterizado en el locus -251 se ha descrito y asociado a una mayor producción de IL-8 y varias enfermedades [8-11].
Nuestro objetivo fue determinar si el TLR4 Asp299Gly
, TLR4 Thr399Ile
y la IL8-251 a /T
polimorfismos están asociados con el cáncer gástrico distal en una población mexicana bien definida.
Métodos población de pacientes

se estudiaron 78 pacientes no relacionados con diagnóstico histológico GC distal (edad media = 58.6y, edad media = 60, rango de edad: 22-84, F: M = 0,56). También se estudiaron 259 pacientes sin evidencia histológica de GC (edad media = 57.1y, edad mediana = 54, rango de edad = 18-92, F: M = 1.17). Esta población se ha descrito anteriormente [7]. Todos los pacientes fueron reclutados en el Hospital Universitario "Dr. José Eleuterio González", Universidad Autónoma de Nuevo León. El comité de ética local aprobó el estudio y el consentimiento informado por escrito se obtuvo de todos los sujetos.
Los exámenes histopatológicos
De todos los pacientes del grupo control, se obtuvieron ocho muestras de biopsia para la evaluación histológica, dos de la curvatura menor, dos de la curvatura mayor , dos de los incisura angularis, y dos de la región prepilóricas. De los pacientes con GC distal, al menos 8 biopsias se obtuvieron del tumor para la evaluación histológica. Las biopsias de casos y controles se fijaron, embebidos en parafina y teñidas con hematoxilina-eosina. Un patólogo experimentado examinó todos los cortes histológicos.
H. pylori
estado de Francia El H. pylori
estado de la población de control se determinó por la histología, la prueba rápida de ureasa (RUT), la serología y la cultura . Para el RUT, una biopsia del antro se analizó mediante una prueba no comercial validado [12]. La biopsia se colocó en un vial de ensayo, se incubaron a 37 ° C y leer dentro de 24 h. Un cambio de color de naranja a magenta indica un resultado positivo. Para la serología, se utilizó un inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para demostrar la presencia de anticuerpos IgG tal como se describe anteriormente [13].
Cultura se realizó en dos corpus y dos biopsias del antro por métodos estándar. Las biopsias se colocaron en 10% de agar sangre (Becton Dickinson, Cockeysville, MD) y se incubaron a 37 ° C durante al menos una semana en condiciones microaeróbicas. Las cepas fueron identificadas por tinción de Gram, se consideraron las pruebas de oxidasa, catalasa y ureasa.
Control de los pacientes infectados por H. pylori
ha cuando al menos dos de las pruebas de diagnóstico fueron positivos. México La prevalencia de H. pylori
infección en pacientes con cáncer gástrico fue determinada por el resultado de la histología solamente.
Genotipado
ADN genómico fue extraído a partir de sangre periférica por el alcohol de fenol-cloroformo-isoamílico y precipitación con etanol método. Un sistema de amplificación refractario a las mutaciones (ARMS)-PCR se utilizó el método para determinar el genotipo del polimorfismo IL8-251
como se ha descrito anteriormente [14].
Se determinó el polimorfismo de TLR4 Thr399Ile
por PCR-RFLP [15] y el TLR4 Asp299Gly
polimorfismo se determinó mediante un método de pirosecuenciación diseñado para este estudio. Inicialmente, se realizó una PCR con los cebadores F-GAT TAG CAT ACT TAG ACT ACT ACC TCC ATG y R-CCC TTT CAA TAG TCA CAC TCA CCA GG con el cebador inverso biotinilado. Las condiciones de PCR fueron: 94 ° C durante 5 min y 40 ciclos de 94 ° C, 59 ° C y 72 ° C durante 30 s cada uno, y una extensión final a 72 ° C durante 5 min. Para pirosecuenciación, plantillas de PCR biotinilados fueron inmovilizados en perlas de Sepharose paramagnéticas recubiertas con estreptavidina en tampón de unión. Los complejos de cordón plantilla se lavaron por inmersión en alcohol al 70% y NaOH 0,5 M y luego se añaden a 45 l de tampón de hibridación que contenía 15 pmol de cebador de secuenciación 5'-CAT ACT ACT ACT TAG ACC TC 3 '. El recocido se llevó a cabo a 80 ° C durante 2 min. pirosecuenciación en tiempo real se realizó en un 96 pocillos pyrosequencer PSQ 96 SNP (pirosecuenciación AB, Uppsala, Suecia) utilizando las enzimas y los sustratos recomendados por el fabricante.
El análisis estadístico automatizado
Hardy-Weinberg de alelos en loci individuales fue evaluada por la estadística de chi-cuadrado. Diferencias estadísticamente significativas se determinaron mediante t de Student
, chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher, dos colas. Una probabilidad (p) de valor < 0,05 fue considerado estadísticamente significativo. La odds ratio (OR) con intervalos de confianza del 95% (IC) se calcularon utilizando el software Epi-Info 2000 (Centro para el Control y Prevención de Enfermedades, Atlanta, Ga.). Se realizaron tres análisis, uno en el que se incluyeron todos los casos y controles, un segundo en el que se compararon los casos solamente con H. pylori controles
+ y un tercer análisis en el que los controles basados ​​en la población fueron emparejados por edad de 5 años de grupo y de género con los casos de cáncer.
resultados
grupos de estudio y características H. pylori
estado
se muestra la distribución de los genotipos de acuerdo con los hallazgos histológicos en la Tabla 1 1.Table Genotipo y frecuencias de los alelos de la IL-8 251
a /T y TLR-299 grupos de cáncer y
-399
loci en el cáncer y no según los hallazgos histológicos

IL8-251 A /T

TLR4 Asp299Gly
TLR4Thr399Ile
Grupo (n)
genotipo alelo

genotipo alelo

genotipo
alelo
AA por
TT
* A * T

1,1 1,2

* * 1

• asociados de infección gástrica por Helicobacter pylori con un mayor riesgo de pólipos colorrectales en los afroamericanos
• Fosforilados Smad2 en estadio avanzado gástrico Carcinoma