Arviointi tiemaksun kaltaista reseptoria 4 Asp299Gly, Thr399Ile ja interleukiini-8 -251 polymorfismien kehittymisen riski distaalisten mahalaukun cancer

arviointi tiemaksun kaltaista reseptoria 4 Asp299Gly, Thr399Ile ja interleukiini-8 -251 polymorfismien riskiä kehittäminen distaalisen mahasyövän
Abstract
tausta
intensiteetti tulehduksen aiheuttama Helicobacter pylori
kolonisaatiota liittyy kehittämiseen distaalisen mahalaukun syövän (GC). Isäntä vaste H
. pylori
on liittynyt geneettisten polymorfismien, jotka vaikuttavat sekä synnynnäisen ja adaptiivisen immuunivasteen.
Tavoitteena oli tutkia läsnäolo TLR4 Asp299Gly
, TLR4 Thr399Ile
ja IL-8-251
A /T polymorfismien ollut vaikutusta kehittämisessä distaalisen GC Meksikon väestöstä. Tool menetelmät
Tutkimme 337 potilasta, jotka jaettiin kahteen ryhmään: 78 potilasta, joilla on histologisesti vahvistettu distaalinen GC ja 259 ei-syöpä valvontaa. Läsnäolo helikobakteeri
vertailupopulaatiossa määriteltiin positiiviset tulokset vähintään kaksi neljästä diagnostisten testien: serologisia, histologisia, nopea ureaasia testi ja kulttuuriin. Ihmisen DNA puhdistettiin ja genotyyppi varten TLR4 Asp299Gly
polymorfismia pyrosekvensointi, sillä TLR4 Thr399Ile
PCR-RFLP ja IL8-251
jonka vahvistus tulenkestävä mutaatio järjestelmä (ARMS) -PCR.
Tulokset
ei-syöpä kontrolliryhmän todettiin olevan Hardy-Weinberg tasapainossa polymorfisen loci tutkittu (chi-neliö HW = 0,58 IL8-251
, 0,42 TLR4 Asp299Gly
ja 0,17 for TLR4 Thr399Ile
). Taajuudet mutatoituja alleeleja (homotsygoottinen plus heterotsygoottista) verrattiin tapausten ja kontrollien välillä. Löysimme merkittävää eroa TLR4- Asp299Gly
[7,7% distaalisen GC potilaista ja 7,7% ei-syöpä (p = 0,82)] ja TLR4 Thr399Ile
[1,3% GC potilaista ja 5 % ohjaus- väestöstä (p = 0,2)]. Sitä vastoin IL-8-251
A /T, 80,77%: n GC-potilaista ja 66,4% kontrolliryhmässä ikään ja sukupuoleen sovitettu oli vähintään yhden kopion mutatoitua alleelin (OR = 2,12, 95% CI = 1,1-4,2) (p = 0,023).
Päätelmä
Tämä tutkimus osoitti, että IL8-251 *
alleeli saattaa liittyä kehittämiseen distaalisen mahasyövän tässä Meksikon väestöstä.
Tausta
Helicobacter pylori
lähes yksinomaan asuttaa limakalvojen kerros ihmisen mahalaukussa ja oleskella vastaanottavassa vuosia, vuosikymmeniä tai ehkä elinikäinen. Noin 10%: ssa tapauksista, organismin liittyy erilaisia ​​kliinisiä tuloksia, mukaan lukien toiminnallinen dyspepsia, mahahaava tauti, ja distaalinen mahasyövän [1].
Sekä isäntä ja ympäristötekijät on liitetty tähän kliinisen monimuotoisuutta. Isäntä tekijät liittyvät lähinnä tunnustamista bakteerien immuunijärjestelmää ja vaihtelua taso Sytokiinivasteen [2, 3].
Kirjaaminen taudinaiheuttajien välittyy joukko ituradan-koodattua reseptoreja, jotka kutsutaan kuvio tunnustamatta reseptorit (PRRS). Nämä reseptorit tunnista konservoituneet molekyyli kuvioita, jotka ovat yhteisiä suuret mikro-organismeja. Tärkeä PRR on Toll-kaltainen reseptori 4 (TLR4), transmembraaninen reseptori, joka tunnistaa erilaisia ​​ligandeja, mukaan lukien lipopolysakkaridi (LPS), jota esiintyy solun seinämän gram-negatiivisten bakteerien, kuten H. pylori
[3 ]. Kaksi yhden nukleotidin polymorfismit (SNP: t) on TLR4
geenin, Asp-299 → Gly ja Thr-399 → Ile siirtymiä, on osoitettu johtavan vasteeseen LPS, vähentää epiteelin TLR4 tiheyden ja vähentää inflammatoristen sytokiinien vasteena LPS: lle [ ,,,0],4]. Lisäksi geneettisiä variantteja sytokiinien ovat myös kriittisiä tulehdusreaktion, ja useita geenejä eri reittejä on liitetty mahalaukun syöpä, mukaan lukien interleukiini (IL) 1B
, TNF
, IL-10
ja IL-8
[5-7].
IL-8 sytokiinin toimii voimakas kemoattraktantti neutrofiilien ja lymfosyyttien. On raportoitu, että IL-8-tasot nousivat 10-kertainen mahasyövän näytteitä verrattuna normaalin mahan kudoksissa. Hyvin tunnettu SNP T /A, -251 lokuksessa on kuvattu ja liittyy korkeampi IL-8 tuotantoa ja useiden sairauksien [8-11].
Tavoitteena oli selvittää, onko TLR4 Asp299Gly
, TLR4 Thr399Ile
ja IL8-251 A /T
polymorfismit liittyvät distaalisen mahasyövän hyvin määritelty Meksikon väestöstä. Tool menetelmät
Potilasjoukko
Tutkimme 78 etuyhteydetöntä histologisesti vahvistettu distaalinen GC (keski-ikä = 58.6y, mediaani-ikä = 60, ikäryhmä: 22-84, F: M = 0,56). Tutkimme myös 259 potilailla, joilla ei histologiset GC (keski-ikä = 57.1y, mediaani-ikä = 54, ikä = 18-92, F: M = 1,17). Tämä kanta on kuvattu aiemmin [7]. Kaikki potilaat otettiin sairaalaan Universitario "Dr. José Eleuterio González", Universidad Autónoma de Nuevo León. Paikallinen eettinen komitea hyväksyi tutkimuksen ja kirjallinen suostumus saatiin kaikissa aineissa.
Histopatologisten tutkimusten myynnissä maassa kaikki verrokeilla, kahdeksan koepalanäytteistä saatiin histologista arviointia, kaksi vähemmän kaarevuus, kaksi suurempaa kaarta kaksi päässä incisura angularis, ja kaksi prepyloric alueella. Potilaista, joilla on distaalinen GC, vähintään 8 koepaloja saatiin kasvaimen histologista arviointia varten. Koepalat tapauksia ja kontrolleja, parafiiniin upotettu ja värjätty hematoxilin-eosiinilla. Kokenut patologi tutki kaikista histologinen dioja.
Helikobakteeri
tila
Helikobakteeri
tilan vertailupopulaatiossa määritettiin histologia, nopea ureaasin testi (RUT), serologia ja kulttuuri . Sillä RUT, joka on antral koepala analysoitiin validoidun ei-kaupallinen testi [12]. Biopsia pantiin testiastiaan, inkuboitiin 37 ° C: ssa ja 24 tunnin sisällä. Värinmuutos oranssista magenta osoitti positiivisen tuloksen. Serologisia, entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA) käytettiin osoittamaan läsnäolon IgG-vasta-aineiden, kuten aikaisemmin on kuvattu [13].
Culture suoritettiin kaksi korpus ja kaksi antrum biopsiat standardimenetelmillä. Biopsiat asetettiin 10% veren agar (Becton Dickinson, Cockeysville, MD) ja inkuboitiin 37 ° C: ssa vähintään yhden viikon mikroaerobisissa olosuhteissa. Kannat tunnistettiin gramvärjäystuloksen oksidaasi, katalaasi ja ureaasi testejä.
Kontrollipotilaat katsottiin helikobakteeri
tartunnan, kun vähintään kaksi diagnostisten testien olivat positiivisia.
Yleisyys Helikobakteeri
infektion mahasyöpäpotilaista määritettiin tuloksena histologia vain.
Genotyypin
Genominen DNA uutettiin periferaalisen veren fenoli-kloroformi-isoamilic alkoholin ja saostamalla etanolilla menetelmällä. Vahvistusjärjestelmän tulenkestävät mutaatio järjestelmän (ARMS) -PCR-menetelmää käytettiin genotyypin IL8-251
polymorfismin kuten aiemmin on kuvattu [14].
TLR4 Thr399Ile
polymorfismi määritettiin PCR: llä-RFLP [15] ja TLR4 Asp299Gly
polymorfismi määritettiin pyrosekvensointi menetelmällä suunniteltu tätä tutkimusta varten. Aluksi PCR suoritettiin alukkeilla F-GAT TAG CAT ACT TAG ACT ACT ACC TCC ATG ja R-CCC TTT CAA TAG TCA CAC TCA CCA GG kanssa käänteisaluketta biotinyloitu. PCR-olosuhteet olivat: 94 ° C 5 min ja 40 sykliä 94 ° C, 59 ° C ja 72 ° C: ssa 30 s kukin, ja lopullinen pidennys 72 ° C: ssa 5 min. Sillä pyrosekvensointi, biotinyloitua PCR-malleja immobilisoitiin streptavidiinilla päällystettyjä paramagneettisia Sepahrose helmiä sitoutumispuskuriin. Helmi-template kompleksit pestiin upottamalla 70% alkoholia ja 0,5 M NaOH: a ja sitten lisättiin 45 ui annealing-puskuria, joka sisälsi 15 pmol sekvensointi aluke 5'-CAT ACT TAG ACT ACT ACC TC 3 '. Hehkutus tapahtui 80 ° C: ssa 2 min. Reaaliaikainen pyrosekvensointi suoritettiin automatisoidussa 96-pyrosequencer PSQ SNP 96 (pyrosekvensointi AB, Uppsala, Ruotsi) käyttäen entsyymejä ja substraatteja valmistajan suosittelemia.
Tilastollinen
Hardy-Weinberg tasapaino alleelien yksittäisten loci arvioitiin chi-neliö tilastoja. Tilastollisesti merkitseviä eroja määritettiin Studentin t
testiä, Khin neliö tai Fisherin tarkkaa testiä, kaksisuuntaisia. Todennäköisyys (p) arvo < 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävänä. Kertoimet suhde (OR), jossa 95%: n luottamusväli (CI) laskettiin käyttäen Epi-Info 2000 -ohjelmistoa (Center for Disease Control and Prevention, Atlanta, Ga.). Kolme analyysit tehtiin, sellainen, jossa kaikissa tapauksissa ja kontrollia sisällytettiin toinen missä tapauksissa verrattiin vain helikobakteeri
+ valvontaa ja kolmas analyysi, jossa väestöpohjainen verrokit sovitettava 5 vuoden ikä ja sukupuolen kanssa syöpätapauksia.
tulokset
Opintoryhmät ominaisuudet ja helikobakteeri
tila
jakautuminen genotyyppien mukaan histologiseen havaintojen näkyy taulukossa 1.Table 1 genotyypin ja alleelifrekvenssien IL-8 251
A /T ja TLR-299
ja -399
lokusten ei-syöpä ja syövän ryhmiin histologisten havaintojen

IL8-251 A /T

TLR4 Asp299Gly
TLR4Thr399Ile
Group (n) B genotyyppi
alleeli
genotyyppi
alleeli
genotyyppi
alleeli
AA
Ladbrokes.comissa TT
*
* T
1,1
1,2
* 1
* 2
1 , 1
1,2
* 1
* 2
gastriitti (207)
42
97
68
0.44
0.56
190
17
0.96
0.04
196
11
0.97
0.03
PUD (29) B-4
14
11
0,38
0,62
29
0
1
0
27
2
0.97
0.03
AG + IM (23) B 5
10
8
0,43
0,57
20
3
0,93
0,07
23
0
1
0
Mahasyöpää (78)
16
47
15
0.51
0.49
72
6
0.96
0.04
77
1
0.99
0.01
diffuse type
8
26
8
0.5
0.5
38
4
0.95
0.05
41
1
0.99
0.01
intestinal tyypin
8
21
7
0,51
0,49
34
2
0,97
0,03
36
0
1
0
H. pylori
+ (191)
37
90
64
0.43
0.57
175
16
0.96
0.04
181
10
0.97
0.03
Age ja sukupuoleen sovitettu (n = 189)
33
87
69
0,4 ​​
0,6
175
14
0,96
0,04
179
10
0,97
0,03
PUD: ulkustauti; AG, atrofinen gastriitti; IM: suoliston metaplasiaa
genotyyppi taajuudet yksittäisten loci tutkittu olivat Hardy-Weinberg tasapainossa, ei-merkitsevä chi-neliö-arvot (0,58 IL8-251
, 0,42 TLR4 Asp299Gly
ja 0,17 TLR4 Thr399Ile
). Niistä kontrolliryhmään, 80%: lla oli krooninen gastriitti (taulukko 1), 11,2%: lla potilaista oli puuro ja 8,8%: lla potilaista oli atrofinen gastriitti ja /tai suoliston metaplasiaa. Osuus hajanainen ja suoliston mahasyövän oli 1,2: 1.
Yleisyys helikobakteeri
kontrolliryhmässä oli 73,7%. Tämä on samanlainen kuin arvo aiemmin raportoitu tämän tutkimuksen väestöstä [16]. Esiintyvyys Helikobakteeri
joukossa mahasyöpäpotilaista oli 53,8%.
Arvio riskin IL8-251
A /T, TLR4 Asp299Gly
ja TLR4 Thr399Ile
genotyypit
Vertasimme kaikki erityisten genotyyppien varten IL8-251
(AA, AT ja TT), sillä TLR4 Asp299Gly
(1,1, 1,2 ja 2,2) ja TLR4 Thr399Ile
(1,1, 1,2 ja 2,2) (taulukko 1). Taajuus IL8-251
AT genotyyppi oli suurempi mahasyövän tapaukset kuin kaikki säätimet, ainoastaan ​​H. pylori
positiiviset kontrollit ja iän ja sukupuolen verrokeilla (taulukko 2) .table 2 Kertoimet suhteet ja 95 %: n luottamusväli analyysin genotyyppejä distaalisen mahasyövän tapaukset vs
kaikki ei-syöpä valvontaa.

IL8-251 *
IL8-251 AT
TLR-299 * 2
TLR-399 * 2
Kaikki tapaukset vs
OR (95% CI) B p
OR (95% CI) B p
OR 95% CI
p
OR 95% CI
p
Kaikki säätimet (n = 259) B 2,12 (1,1-4,2) B 0,023
1,73 (1-3) B 0,049
1 (+0,3-+2,8) B 0,82
0,25 (0,01-1,8) B 0,2
H. pylori
+ ohjaimet (n = 191) B 2,12 (1,1-4,2)
0,029
1,7 (0,96-3) B 0,068
0,91 (0,3-2,6) B 0,95
0,24 (0-1,8) B 0,19
Ikä ja sukupuoli verrokkia (n = 189) B 2,42 (1,2-4,8) B 0,009
1,78 (1-3,2
0,035
1,04 (0,3-3,1) B 0,86
0,23 (0-1,8) B 0,1
arvio riskin IL8-251
* A TLR4 Asp299Gly * 2
ja TLR4 Thr399Ile * 2
alleelien
Olemme vieressä verrattuna kuljetukseen IL8-251 *
alleelin (homotsygoottinen plus heterotsygoottinen) GC tapauksissa ja kaikissa gastriitti sekä terveillä. Löysimme yhdistys on IL8 -251 *
alleeli kehittämiseen GC (OR = 2,12, 95% CI = 1,1-4,2, p = 0,023) (taulukko 2). Kun vertasimme kaikki gastriitti plus terveillä vs
histologisia syöpätyyppeihin riskit ja hajanainen ja suoliston mahasyövän tyyppejä olivat samankaltaisia, mutta eivät merkittävästi (OR = 2,15, p = 0,08 ja OR = 2,1, p = 0,13 vastaavasti).
Kun vertasimme mahasyövän tapaukset kanssa H. pylori
+ ohjaimet löysimme samanlainen arvo (OR = 2,12, 95% CI = 1,1-4,2, p = 0.029).
Seuraavaksi vertasimme taajuus mahasyövän ryhmä withage ja sukupuolen verrokeilla ja löysimme vahvempi yhdistys (OR: 2,42, 95% CI = 1,2-4,8, p = 0.0.009).
Emme löytäneet yhdistys TLR4 Asp299Gly * 2
ja TLR4 Thr399Ile * 2
hyporeactive alleeleja.
keskustelut ja johtopäätös
monimuotoisuus vastauksena tartunnan helikobakteeri
katsotaan johtuvan useista tekijöistä. Geneettisesti säännelty immuunivastetta näyttää olevan ratkaiseva rooli päätettäessä intensiteetin vahinkoa isäntä [1-3].
Useat kirjoittajat ovat kuvanneet lisääntynyt IL-8 aikana helikobakteeri
infektio. A /T polymorfismi asemassa -251 geenissä on liittynyt korkeampaan aktiivisuuteen tämän interleukiini ja äskettäin, tämä alleeli on liittynyt kahdessa tutkimuksessa kehittämiseen mahasyövän Japani väestöstä [10, 11]. Yhdessä näistä tutkimusten IL8-251 AA
genotyyppi pidetään suurempi riski gastriitin (OR = 2,35; 95% CI = 1,12-4,94) ja mahasyövän (OR = 2,22; 95% CI = 1.08- 4,56) verrattuna TT genotyyppi. He tutkivat 252 tervettä verrokkia, 215 yksilöiden atrofinen gastriitti, ja 396 potilasta, joilla mahalaukun syövän. AA ja AT genotyypit merkitsevästi yhteydessä korkeampi IL8 proteiinia, ankarampaa neutrofiilikeräytymän verrattuna TT genotyyppi. Toisessa tutkimuksessa, IL-8 -251
* alleelin liittyi suurempaan mahalaukun syövän riski (OR = 2,1, 95% CI = 1,38-2,92). Tuloksemme eivät osoittaneet yhdistyksen välillä korkeampia GC ja AA genotyyppi, mutta positiivinen yhteys havaittiin AT genotyypin ja kuljetukseen vähintään yhden kopion * alleelin (homotsygoottinen plus heterotsygoottinen). On huomionarvoista, että syrjäisimpien alueiden arvo havaittu tutkimuksessamme (2,12) oli melko samanlainen kuin vuonna Japanin väestöstä (2.1).
IL-1B-31 C /T
polymorfismi on liittynyt kehittämiseen mahalaukun syövän ja maantieteellinen-etninen ero on kuvattu tässä lokuksessa, vahvemmalla yhdistys polymorfismin occidental kuin itämainen väestöstä. Tulokset IL-8-251
A /T-polymorfismi korreloi aiempien tietojen esitetään Japanin väestöstä näkyvissä mitään suuntausta maantieteellisten tai etnisten vaihtelua.
On tällä hetkellä ratkaisematon onko hyporesponsiivinen LPS signalointireitin on hyödyllistä tai haitallinen isännälle. Yksilöiden hyporeactive TLR4
polymorfismien ovat osoittaneet vähentänyt Veren tulehduksellisten sytokiinien, lisääntynyt riski akuutin bakteeri-infektioiden ja suuntaus kohti lisääntynyt kuolleisuus. Muut viimeaikaiset tutkimukset tukevat olettamusta, että matalan toimiva TLR4
polymorfismit voivat johtaa alennettuun tulehdusreaktio liittyy alhainen vahingoittamatta infektio, joka edistää pysyvä infektio [17-20]. Tässä tutkimuksessa emme löytäneet yhdistyksen välillä GC ja TLR4 polymorfismien, ikään kuin he eivät edistä kehitystä distaalisen mahasyövän. Molemmat TLR4 Asp299Gly
ja Thr399Ile
polymorfismien on raportoitu kytkentäepätasapainossa (LD) [21, 22], mutta päätimme genotyypin sillä me tiennyt, he olivat LD meidän väestöstä.
Lopuksi todettakoon, että alustavat tulokset viittaavat siihen, että IL8-251
on biologisesti uskottava sairauden kulkuun polymorfismi. Jos vahvistettu monia populaatioita, koska se on ollut Japanin, ja nyt Meksikon ryhmiä, tämä polymorfisen yhdessä muiden kanssa, voitaisiin käyttää tunnistamaan potilaita, joilla on suurempi riski GC, jotka saattavat tarvita tiiviimpää seurantaa.
Julistukset
kilpailevat edut
tekijä (t) ilmoittaa, että heillä ei ole kilpailevia intressejä.

• Mahalaukun Helicobacter pylori-infektion kumppaniaan lisääntynyt riski peräsuolen polyyppien Afrikkalainen amerikkalaiset
• Fosforyloituu Smad2 in Advanced Stage mahakarsinoo-