Proteomic Verfall vun gastic adenocarcinomas aus Japanesch Patienten

Proteomic Verfall vun gastic adenocarcinomas aus Japanesch Patienten VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Gastric adenocarcinomas representéieren eent vun de gemeinsam Zorte vun Cancers an asiatesch Länner dorënner Japan. Ëmfaassend FAQ profiling vun vläit chirurgesch uplanzen vun der Primärschoul gastric adenocarcinomas an nontumor mucosae aus Japanesch Patienten ofgeleet gouf mat Hëllef vun zwee-Dimensiounen gelies electrophoresis (2D-EP) a flësseg chromatography-electrospray ionic zwee Mass spectrometry (LC-ESI-MS) duerchgefouert gastric Kriibs-spezifesch Proteinen als putative Medeziner biomarkers a molekulare Ziler fir Chimiotherapie ze etabléieren. VerfÜgung Resultater VerfÜgung relativ gemeinsam hire Restaurant zu FAQ Ausdrock sech an der entholl Stoffer verroden. Erhéijunge Mangan dismutase an nonhistone chromosomal FAQ HMG-1 (HMG-1) huet observéiert, iwwerdeems Verloschter am carbonic anhydrases ech an II, glutatione-S-transferase an foveolin Virleefer (gastrokine-1) (FOV), eng 18-kDa Mo. -specific FAQ mat putative entholl suppressor Aktivitéit, goufen erwëscht. RT-Hinnen alleguer Analyse verroden och däitlech erof-Regulatioun vun FOV mRNA Ausdrock vun entholl Stoffer. VerfÜgung Conclusioun Eng méiglech agebousst Roll fir erof-Regulatioun vun FOV VerfÜgung zu gastric carcinogenesis bewisen huet. Evaluatioun vun de spezifeschen Verloschter am Gentherapie an FAQ Ausdrock vun FOV zu Patiente kann als Medeziner biomarkers fir effikass Diagnos an Beurteelung vun gastric Kriibs geheescht ginn. VerfÜgung Background VerfÜgung Gastric adenocarcinomas representéieren eent vun de gemeinsam Zorte vun Cancers an asiatesch Länner dorënner Japan, gëtt zweeten nëmmen zu haett Kriibs als zu der Zuel vun den Doudesfäll et Ursaachen. An trotz der rezent Entwécklung vun diagnostic Techniken, sinn déi meescht gastric Kriibs Patienten op Diplôme Etapp festgestallte an hunn eng ganz niddereg fënnef-Joer Iwwerliewe Tarif (manner wéi 10%) [1]. Dat ass deelweis wéinst engem Manktem vu spezifesche a sensibel biomarkers fir d'Diagnos an Iwwerwachung vun Krankheet Fortschrëtter op eng fréi Etapp, obwuel e puer gastric entholl lues, dorënner de carcinoembryonic antigen, muss benotzt ginn a sinn deelweis effikass. Als gastric carcinogenesis ass eng multistep Prozess, detailléiert Analyse ass och fir eenzel Fäll néideg, an déi verschidden molekulare Evenementer zu all carcinogenic Prozess geschéien. VerfÜgung Viru Kuerzem, huet proteomic Analyse geheescht, FAQ Ausdrock am Beräich vu Flëssegkeeten, Stoffer an Zellen globaalt ënnersicht [ ,,,0],2-4]. Dës Approche, als Medeziner proteomics, ass ganz nëtzlech fir Erkenntnesser Krankheet-verbonne Proteinen déi zu enger Krankheet Conditioun Ännerungen am Ausdrock an Modifikatioun weisen entspriechend [5, 6]. Dës Krankheet-Zesummenhang Proteinen ginn erwaart biomarkers fir Diagnos an putative geziilte Proteinen fir behandelt ze ginn [7-9]. Wéinst dem ëmfaassend Analysë vun transcriptomes zu entholl Stoffer aus verschiddenen Kriibs Patienten mat DNA microarrays an der Gentherapie Course goufen an de leschte Joren [10] gesuergt. Allerdéngs huet e Manktem vun Korrelatioun tëscht Ännerungen am mRNAs an carcinogenesis gouf bewisen, a grouss a qualitative Ännerunge vum Post-translationally geännert Proteinen als Finale Gentherapie Produite sinn als méi praktesch wéi déi vun mRNAs zu entholl Stoffer ze ginn fir ënnersicht de molekulare Evenementer am carcinogenesis. Proteomic Studie fir d'Identifikatioun vun entholl-verbonne Proteinen am gastric Kriibs si waarden, an proteome Datenbanken fir gastric Stoffer [11] an Zell Linnen [12] gebaut goufen. Déi meescht vun hinne Suergen spezifesch Proteinen oder antigens datt d'chemo- an Thermo-resistent Eegeschafte vun Mo. Kriibs spigelen [13-15], an dat mat Helicobactor verbonne sinn pylori VerfÜgung [16, 17]. Am Moment studéieren, standing mir ëmfaassend proteome Analyse vun entholl an nontumor Stoffer an Japanesch Patienten mat gastric carcinomas, an bestëmmt e puer Proteinen vun deem d'Expressioun Besatzungszäit Medeziner Fäll Toast verännert ginn. Besonnesch, war den Ausdrock vun gastrokine-1 (GKN-1) proposéiert ënnert souwuel transcriptional an respektiv Kontroll ze ginn. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Protein Trennung an Identifikatioun VerfÜgung Dorënner 1A weist e Bild Iwwersiicht vun engem typesche Meeschtesch gelies fir eng gastric entholl Otemschwieregkeeten. Ëm 200 FAQ Flecken Kierchefënster mat Coomassie schéi blo (CBB) R-250 huet och an der gels getrennt. D'nummeréiert Flecken an Dorënner 1B an 1c sech aus enger gelies, behandelt mat trypsin excised an duerno zu flësseg chromatography-elektronesch Mass Spektrometer (LC-ESI-MS /MS) Analyse Spraydousen Eegeliichten zwee ënnerworf. Siwwenzeg-zwee vun hinnen vertrëtt 69 verschiddene FAQ Aarten sech am Kloeren. Table 1 Lëschte all vun de Proteinen duerch peptide passende identifizéiert mat der Maskottchen Sich sind. Der Richtegkeet vun FAQ profiling war wéi an de Virsprong Wäert (virun 37) bewäert. Figur 1 (A) Eng Iwwersiicht vun engem Meeschter 2D gelies Bild fir vun engem Patient ofgeleet entholl Otemschwieregkeeten mat engem gastric adenocarcinoma. (B) an (C) D'nummeréiert FAQ Flecken sech duerch LC-ESI-MS /MS an FAQ passende identifizéiert, wéi den groussen Zuelen gewisen. VerfÜgung Table 1 Protein Profil an entholl Otemschwieregkeeten fonnt ofgeleet vun enger japanescher Patient mat engem gastric adenocarcinoma. VerfÜgung icon_thumright Nr
Zougank Zuel
Protein Identifikatioun VerfÜgung
Mass
SC (%)
Pi
Punktzuel
1 VerfÜgung 24308169 VerfÜgung axonemal schwéier Kette dynein Typ 3 VerfÜgung 473776 VerfÜgung 0 VerfÜgung 6.04
37 VerfÜgung 2 VerfÜgung 15010550 VerfÜgung Hëtzt Schock FAQ gp96 Virleefer VerfÜgung 90309 VerfÜgung 7 VerfÜgung 4,73 VerfÜgung 62 VerfÜgung 3 VerfÜgung 72222 VerfÜgung Hëtzt Schock FAQ 90 -β VerfÜgung 83584 VerfÜgung 14 VerfÜgung 4,97 VerfÜgung 176 VerfÜgung 4 VerfÜgung 5729877 VerfÜgung Hëtzt Schock 70. kDa FAQ 8 isoform 1 zu 71082 VerfÜgung 19 VerfÜgung 5,37
283 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 38044288 VerfÜgung gelsolin isoform b VerfÜgung 80876 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 5,58 VerfÜgung 63 VerfÜgung 6 VerfÜgung 4826960 VerfÜgung glutaminyl-tRNA synthetase
88655 VerfÜgung 1 VerfÜgung 6,71 VerfÜgung 44 VerfÜgung 7 VerfÜgung 4501867 VerfÜgung aconitase 2
86113
10
7.36
231
8
119717
ezrin
69470
7
5.94
75
9
4557871
transferrin
79280
9
6.81
97
10
16507237
heat Schock 70. kDa FAQ 5 zur VerfÜgung 72402 VerfÜgung 15 VerfÜgung 5,07 VerfÜgung 165 VerfÜgung 11 VerfÜgung 24234686 VerfÜgung Hëtzt Schock FAQ 70 kDa FAQ 8 VerfÜgung 53598 VerfÜgung 16 VerfÜgung 5,62 VerfÜgung 160 VerfÜgung 12 VerfÜgung 4885431 VerfÜgung Hëtzt Schock 70. kDa FAQ 1B VerfÜgung 70267 VerfÜgung 11 VerfÜgung 5,48 VerfÜgung 143 VerfÜgung 13 VerfÜgung 1082886 VerfÜgung entholl necrosis Faktor Typ 1 receptor-verbonne FAQ TRAP-1 zu 75694 VerfÜgung 13 VerfÜgung 8,43 VerfÜgung 288 VerfÜgung 14 VerfÜgung 31542947 VerfÜgung chaperonin, FAQ Kënschtlech Matrixentgasung FAQ P1, P60 lymphocyte
zu 13 VerfÜgung 5,7 VerfÜgung 299 VerfÜgung 15 VerfÜgung 28592 VerfÜgung serum albumin
71316
23
6.05
292
16
340219
vimentin
53738
18
5.03
79
17
4503729
similar zu FK506-verbindlech FAQ 4
49031
5
5.6
36
18
32709
IFP53
53559
21
5.93
277
19
4502643
chaperonin-containing TCP1, subunit6A (Zeta 1) VerfÜgung 58444 VerfÜgung 6 VerfÜgung 6,23 VerfÜgung 79 zu 20 VerfÜgung 7106439 VerfÜgung tubulin, β5
50095
14
4.78
125
21
37492
α-tubulin
50810
13
5.02
94
22
125604
pyruvate kinase, M2 isozyme
58447
5
7.95
234
23
4557014
catalase
59947
6
6.9
120
24
4503483
eukaryotic Iwwersetzung elongation Faktor 2 VerfÜgung 96246 VerfÜgung 4 VerfÜgung 6,41 VerfÜgung 56 zu 25 VerfÜgung 179279 VerfÜgung ATP synthase β subunit VerfÜgung 56861 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 5,39 VerfÜgung VerfÜgung 59 26 VerfÜgung 7657041 VerfÜgung verwandelt-reglementéiert Metastasen VerfÜgung 320846 VerfÜgung 2 VerfÜgung 7,07 VerfÜgung 40 zu 27 VerfÜgung 4504169 VerfÜgung glutathione synthetase, GSH synthetase
52523
5
5.67
99
28
12017952
GE36
73327
2
5.2
37
29
34234
laminin-binding FAQ VerfÜgung 31888 VerfÜgung 12 VerfÜgung 4,84 VerfÜgung 51 zu 30 VerfÜgung 16359158 VerfÜgung actin, Beta VerfÜgung 42078 VerfÜgung 14 VerfÜgung 5,29 VerfÜgung 171 VerfÜgung 31 VerfÜgung 6635125 VerfÜgung KIAA0284 FAQ VerfÜgung 161473 VerfÜgung 2 VerfÜgung 6,36 VerfÜgung 47 zu 32 VerfÜgung 5803225 VerfÜgung 14-3-3 Epsilon VerfÜgung 29326 VerfÜgung 8 VerfÜgung 4,63 VerfÜgung 49 zu 33 VerfÜgung 4504707 VerfÜgung inositol polyphosphate-4-phosphatase, Typ II, 105 Beien zB stéiert VerfÜgung 105749 VerfÜgung 1 VerfÜgung 5,87 VerfÜgung 37
34 VerfÜgung 35038601 VerfÜgung hypothetesch FAQ DKFZp761A078
74864
2
7.27
47
35
12017952
GE36
73327
1
5.2
38
36
4505877
plectin 1 isoform 1 VerfÜgung 520111 VerfÜgung 1 VerfÜgung 5,57 VerfÜgung 44 zu 37 VerfÜgung 38158018 VerfÜgung centrosomal FAQ 1, centriole verbonne FAQ, centriolin VerfÜgung 269874 VerfÜgung 1 VerfÜgung 5,44 VerfÜgung 39 zu 38 VerfÜgung 30157438 VerfÜgung CTD-verbindlech SR-wëll FAQ rA9 VerfÜgung 180240 VerfÜgung 1 VerfÜgung 9,15 VerfÜgung 41 zu 39 VerfÜgung 4503471
eukaryotic Iwwersetzung elongation Faktor 1 α1 VerfÜgung 50451 VerfÜgung 12 VerfÜgung 9,1 VerfÜgung 191 VerfÜgung 40 VerfÜgung 4757810 VerfÜgung ATP synthase VerfÜgung 59828 VerfÜgung 17 VerfÜgung 9,16
178 VerfÜgung 41 VerfÜgung 693933 VerfÜgung 2-phosphopyruvate-hydratase α-enolase VerfÜgung 47421 VerfÜgung 22 VerfÜgung 7,01 VerfÜgung 240 VerfÜgung 42 VerfÜgung 123576 VerfÜgung 47 kDa Hëtzt Schock FAQ Virleefer VerfÜgung 46352 VerfÜgung 14 VerfÜgung 8,27 VerfÜgung 177 VerfÜgung 43 VerfÜgung 5032069 VerfÜgung splicing Faktor 3B, subunit 4 VerfÜgung 44414 VerfÜgung 3 VerfÜgung 8,54
58 zu 44 VerfÜgung 4503471 VerfÜgung eukaryotic Faktor Iwwersetzung elongation 1 α1 VerfÜgung 50451 VerfÜgung 4 VerfÜgung 9,1 VerfÜgung 47 zu 45 VerfÜgung 5921789 VerfÜgung citrate synthase, Kënschtlech Virleefer VerfÜgung 51959 VerfÜgung 12 VerfÜgung 8,13 VerfÜgung 114 VerfÜgung 46 VerfÜgung 4505763 VerfÜgung phosphoglycerate kinase 1 zu 44985 VerfÜgung 14 VerfÜgung 8.3 VerfÜgung 87
47 VerfÜgung 4504069 VerfÜgung aspartate aminotransferase 2 Virleefer VerfÜgung 47844 VerfÜgung 6 VerfÜgung 9,14 VerfÜgung 52 zu 48 VerfÜgung 7669492 VerfÜgung glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase VerfÜgung 36201 VerfÜgung 13 VerfÜgung 8,57 VerfÜgung 49 zu 49 VerfÜgung 4757756 VerfÜgung annexin A2 VerfÜgung 38808 VerfÜgung 9 VerfÜgung 7.57 VerfÜgung 87 zu 50 VerfÜgung 6648067
malate dehydrogenase, Kënschtlech Virleefer VerfÜgung 35965 VerfÜgung 7 VerfÜgung 8,92 VerfÜgung 60 zu 51 VerfÜgung 5031857 VerfÜgung lactate dehydrogenase A VerfÜgung 36950 VerfÜgung 6 VerfÜgung 8,44
43 zu 52 VerfÜgung 238427 VerfÜgung porin 31 HM VerfÜgung 30737 VerfÜgung 29 VerfÜgung 8,63 VerfÜgung 124 VerfÜgung 53 VerfÜgung 5174447 VerfÜgung guanine Nukleotid-verbindlech FAQ
35511 VerfÜgung 8 VerfÜgung 7,6 VerfÜgung 65 zu 54 VerfÜgung 34740329 VerfÜgung heterogen nuklear ribonucleoprotein A3
39799
7
9.1
43
55
4504983
galectin-3
26229
12
8.58
42
56
4504447
heterogeneous nuklear ribonucleoprotein A2 /B1 isoform A2 VerfÜgung 36041 VerfÜgung 7 VerfÜgung 8,67 VerfÜgung 40 zu 57 VerfÜgung 86901 VerfÜgung ATP-ofhängeg DNA helicase RAP30 /74 Kette RAP30 VerfÜgung 26350
3 VerfÜgung 9,46 VerfÜgung 41 zu 58 VerfÜgung 230445 VerfÜgung carbonic anhydrase VerfÜgung ech 28903 VerfÜgung 12 VerfÜgung 6,44 VerfÜgung 67 zu 59 VerfÜgung 455739
carbonic anhydrase II VerfÜgung 29285 VerfÜgung 8 VerfÜgung 6,87 VerfÜgung 82 zu 60 VerfÜgung 26892090 VerfÜgung Beta-globin Kette Variant VerfÜgung 16101 VerfÜgung 40 VerfÜgung 7,86
121 VerfÜgung 61 VerfÜgung 34709 VerfÜgung Mangan superoxide dismutase VerfÜgung 24891 VerfÜgung 10 VerfÜgung 8,35 VerfÜgung 111 VerfÜgung 62 VerfÜgung 4507645 VerfÜgung triosephosphate isomerase 1 zu 26938 VerfÜgung 17 VerfÜgung 6,45 VerfÜgung 47 zu 63 VerfÜgung 38488935 VerfÜgung foveolin Virleefer VerfÜgung 20546 VerfÜgung 16 VerfÜgung 5,65 VerfÜgung 95 zu 64 VerfÜgung 478813
nonhistone chromosomal FAQ HMG-1 zu 25139 VerfÜgung 13 VerfÜgung 5,41 VerfÜgung 60 zu 65 VerfÜgung 2204207 VerfÜgung glutathione S-transferase
23595
34
5.43
73
66
178755
proapolipoprotein
28944
8
5.45
103
67
37267
transketolase
68435
4
7.9
59
68
189998
M2-type pyruvate kinase VerfÜgung 58447 VerfÜgung 10 VerfÜgung 7,95 VerfÜgung 157 VerfÜgung 69 VerfÜgung 825605 VerfÜgung glutathione S-transferase VerfÜgung 25650 VerfÜgung 10 VerfÜgung 8,51 VerfÜgung 65
Dës Proteinen kann an e puer Kategorien séiert ginn baséiert op hir Funktiounen, dorënner cytoskeleton Proteinen, Stress-wëssenschaftlech an chaperoning Proteinen, Fouss-Phase Proteinen, glycolytic Enzymen, Équipe Enzymen zu ukuerbelt an Zell Prolifératioun, entholl suppressor Proteinen an Mo-spezifesch Proteinen . VerfÜgung Gemeinsam hire Restaurant vun FAQ Ausdrock tëscht entholl an nontumor Stoffer zu gastric Kriibs Patienten VerfÜgung erschoss hire Restaurant zu proteomes sech tëscht entholl erwëscht an nontumor Stoffer aus der selwechter Patienten. Als zu Dorënner 2 gewisen, huet d'puer gemeinsam hire Restaurant ënnert zu fënnef Japanesch gastric Kriibs Patienten (Cases A bis E) observéiert. Mangan superoxide dismutase (MnSOD), nonhistone chromosomal FAQ HMG-1 (HMG-1), phosphoglycerate kinase 1 (PGK-1), carbonic anhydrase ech an II (CA ech an II), foveolin Virleefer FOV (gastrokine-1), aspartate aminotransferase 2 Virleefer (AST), an glutathione S-transferase (GST) Schatzkummer gemeinsam Ännerungen am Ausdrock tëscht entholl an nontumor Stoffer, dorënner ënnert der identifizéiert Proteinen. D'FAQ Ausdrock vun MnSOD an HMG-1 war hien zu entholl Stoffer Verglach zu nontumor Stoffer up-reglementéiert gin. Wéinst dem, den CA ech an II, FOV, AST an GST Proteinen sech réischt an entholl Stoffer verwandelt-reglementéiert gin. Déi fantastesch Ännerungen am Ausdrock vun dësen Proteinen Verglach zu deem vun GAPDH sinn an Table 2. De stäerkste bemierkenswäert erofgoen zesummegefaasst huet an den Niveau vun FOV an all Fäll gewisen. D'Ausmooss vun de Verloscht vun GST FAQ Ausdrock war bal d'selwecht wéi déi an FOV (Cases B, D, an E), och wann een net an déi aner zwee Fäll observéiert gouf. Op der aner Hand, war d'Vergréisserung vun der HMG-1 an dräi Fäll markéiert (A, C an D), obwuel esou enger Differenz vun Ausdrock net an déi aner zwee Fäll observéiert gouf. MnSOD Schatzkummer eng Tendenz an der entholl Stoffer vun dräi Patienten (Cases A, C an D) ze klammen, mee eng relativ ofgeholl huet och zu Case B. Als fir PGK-1, e wesentleche Relatioun tëscht fantastesch Ännerungen am FAQ Ausdrock observéiert a der agebousst senger Analyse vun erhéijen war kaum observéiert. Figur 2 Detailéiert Verfall Musteren vu Proteinen. (A) Nontumor a (B) entholl Proteinen dorënner CAI (No.58), CAII (No.59), MnSOD (No.61), FOV (No.63), HMG-1 (No.64), an GST (No.65). (C) Nontumor a (D) entholl Proteinen dorënner PGK-1 (No.46), AST (No.47), an GST (No.69). GAPDH, Geschwat gouf als Referenz FAQ. VerfÜgung Table 2 falen Ännerungen am FAQ Ausdrock tëscht nontumor an entholl Stoffer aus fënnef Patienten mat gastric adenocarcinomas ofgeleet ginn. VerfÜgung Protein VerfÜgung Case A
Case B
Case C
Case D
Case E VerfÜgung
CA ech VerfÜgung -6,5 VerfÜgung -1,6 VerfÜgung -3,3 VerfÜgung -4,3 VerfÜgung -2,6 VerfÜgung CA II
-2.6
-1.3
-26
-4.3
-13
FOV
-13
-13
-26
*
-26
MnSOD
+1.7
-2.6
+6.5
+1.4
+1.1
HMG-1
+13
*
+3.7
+13
*
PGK1
+1.6
+1.1
-1.2
+2.6
-1.4
AST
-13
-1.6
-6.5
-3.7
-2.6
GST
*
-26
*
-13
-13
CA ech, I. carbonic anhydrase VerfÜgung CA II, carbonic anhydrase II. VerfÜgung FOV, foveolin Virleefer. VerfÜgung MnSOD, Mangan superoxide dismutase. VerfÜgung HMG-1, nonhistone chromosomal FAQ. VerfÜgung PGK1, phosphoglycerate kinase 1. VerfÜgung AST, aspartate aminotransferase 2 Virleefer. VerfÜgung GST, glutathione S-transferase. VerfÜgung *, net alles. VerfÜgung RT-Hinnen alleguer Analyse VerfÜgung vun RT-Hinnen alleguer, Ännerungen am mRNA Ausdrock vun entholl an nontumor aus gastric Kriibs Patienten ofgeleet Stoffer sech fir Proteinen ze analyséieren dass hire Restaurant zu FAQ Ausdrock, dorënner FOV, MnSOD an HMG-1 Schatzkummer. Als zu Dorënner 3, war FOV dës mRNA bedeitend an entholl Stoffer ofgeholl zu véier bei all Patienten (Cases A, B, C, an E), iwwerdeems et entweder an net nogewise gouf nontumor oder entholl Stoffer aus der aner Patient (Case D) . Wéinst dem MnSOD mRNA zu véier Patienten (Cases B, C, D, an E) Ofstand fräi, obwuel kleng Differenz an der mRNA Niveau tëscht nontumor an entholl Stoffer zu Case A festgestallt gouf. Allerdéngs gouf eng Relatioun tëscht HMG-1 mRNA Ausdrock an der agebousst phenotypes vun erhéijen kaum observéiert. Figur 3 Se mRNA Ausdrock vu Proteinen eventuell mat carcinogenesis tëscht nontumor an entholl Stoffer aus fënnef Patienten mat gastric adenocarcinomas (Fäll A bis E) vun RT-Hinnen alleguer ofgeleet assoziéiert. N an T weg nontumor an entholl Stoffer, bzw.. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung An dëser Etude mir aus Japanesch gastric adenocarcinoma Patienten ofgeleet proteomic Analyse vun entholl an nontumor Stoffer gesuergt. Siechzeg-néng verschiddene Proteinen am entholl Otemschwieregkeeten aus engem Fall gastric Kriibs sech duerch 2D-EP an LC-ESI-MS /MS identifizéiert, déi Stress Proteinen abegraff, Hsp70, Hsp90 an chaperonine-haltege TCP1 (CCT), fir Self-Schutz; glycolytic Enzymen, triose phosphate isomerase 1, α-enolase an PGK-1, fir der wuessender Energie Noutwendegkeete; cytoskeletal Proteinen, ezrin, gelsolin isoform b an vimentin; Proteinen zu Zell dat an Prolifératioun Équipe, galectin-3 an transferrin; an Proteinen suer- putative entholl suppressor Aktivitéit, FOV. Vill vun dëse Proteinen muss gemellt ginn mat der tumorigenesis vun gastric adenocarcinomas sensibiliséieren Multiple Schrëtt an Faktoren [18, 19] verbonne ginn. VerfÜgung Mir hien och, datt de Wëllen Niveau vun e puer Proteinen am entholl Stoffer Toast zu fënnef Japanesch Patienten verännert sech mat gastric adenocarcinomas, an nontumor Stoffer zu deenen Verglach. Eng gemeinsam Erhéijung vun FAQ Ausdrock vun entholl Stoffer Priedegt fir MnSOD, HMG-1 an PGK-1, hierkommen eng gemeinsam Ofsenkung entholl Stoffer fir FOV, GST an AST Priedegt VerfÜgung Superoxide (O 2 . - e Fräistouss radikal), ass, wichteg fir d'Anti-microbial Aktioun vun granulocytes an monocytes. Superoxide dismutase (SOD) verschwënnt séier d'iwwerschësseg Montant vun superoxide am Stress a biologescher Reaktioune vun VIVO produzéiert VerfÜgung duerch catalysis vun der Konversioun vun superoxide mat H + bis H 2O 2 an O 2. MnSOD, eent vun de SODs, ass zu Mitochondrie matzen an dréit zu der Protektioun vun Kënschtlech DNA aus Schued. Et gouf gemellt, dass verstäerkte Ausdrock vun MnSOD zu II gastric Kriibs soll bis de 5-Joer Iwwerliewe Taux an der Chirurgie [20] an Empfindlechkeet op Chimiotherapie [21] Zesummenhang ginn. An dëser Etude, FAQ Ausdrock vun MnSOD war bis-reglementéiert 4 vu 5 gastric Kriibs Patienten, a proposéiert en Self-Protektioun Äntwert. Op der aner Hand, huet de weider-Regulatioun vun MnSOD zu entholl Stoffer gouf mat effikass Chimiotherapie zu Bréissel als Basis radikal Produktioun, déi e Verloscht vun Empfindlechkeet zu Anti-Kriibs Drogen verursaache kann an d'Gravitéit vun de Kriibs bestëmmen. VerfÜgung HMG-1 reguléieren der Reunioun vu verschiddene Genen an der struktureller Stabiliséierung vun chromosomes wéi engem DNA-verbindlech FAQ. HMG-1 huet confirméiert gouf mat carcinogenesis an Metastasen zu colorectal an Broscht Kriibs [22]. VerfÜgung Transcriptional up-Regulatioun vun HMG-1 zu gastric Kriibs verbonne ginn huet och bewisen ginn [23]. Ausdrock vun HMG-1 zu entholl Stoffer gouf ugeholl ze Resistenz zu cisplatin [24] Zesummenhang ze sinn. Mir bewisen hei eng Erhéijung vun dëser FAQ vun dräi Fäll. VerfÜgung GST ass eng EPO-metabolizing Aktivitéit datt de of reduzéiert glutathione zu Drogen an metabolites catalyzes, an dréit och zu der detoxification vun carcinogens. Dofir, kann eng Ofsenkung vun der Aktivitéit en Risk Faktor fir carcinogenesis ginn. Wonn vun Helicobacter pylori gouf confirméiert enger Ofsenkung GST Ausdrock ze féieren [25], suggeréiert, dass eng Diminutioun vun GST Aktivitéit kéint ee Grond vun gastric carcinogenesis ginn. An dëser Etude, war eng Ofsenkung GST FAQ Ausdrock an dräi Fäll observéiert. A Ofsenkung GST FAQ Ausdrock kann als uweist fir d'Diagnos vun gastric erhéijen geheescht ginn. VerfÜgung AST eng aminotransferase ass dass op Héicht Saieren a α-keto Seier Akten, ass, datt iwwerall an mënschlechen Organer verdeelt. AST ass an d'Blutt leeft dann duerch verstäerkte permeability an Zerstéierung vun Stoffer. A nik Konzentratioun vun AST FAQ gouf am Blutt vu Patienten mat hepatitis, malignant erhéijen dorënner hepatomas, an leuchemia gemellt. Gene Ausdrock vun GST huet och zu colorectal entholl Stoffer up-regulariséiert ginn [26] Gewise ginn. Allerdéngs huet e Verloscht vun AST FAQ Ausdrock Toast an all entholl Stoffer aus der heiteg fënnef Patienten mat gastric adenocarcinomas ofgeleet observéiert. Weider Etude soll, fir standing gin ob enger Ofsenkung vun der AST FAQ speziell zu gastric entholl Stoffer observéiert ass oder net. VerfÜgung nik Ausdrock vun PGK-1, wat ee vun der Enzymen an der glycolytic Passerelle ass a wat catalyzes der dephosphorylation vun 1,3-bisphosphoglycerate ATP ze produzéieren, gouf vun villen malignant entholl Stoffer observéiert datt op ATP als eng grouss Energiequell ofhängeg sinn. Staark erhéijen si gemengt d'overproduction vum ATP zu brauchen déi verstäerkte Prolifératioun ze erhalen. Déi weider-Regulatioun vun glycolytic Enzymen, dorënner PGK-1 zu haett Kriibs [27] an M2-Typ pyruvate kinase zu colorectal Kriibs [28], huet gemellt ginn a proposéiert fir Kriibs Duerchmusterung nëtzlech ze sinn. Allerdéngs, an de Grëff ze studéieren, eng wichteg Relatioun tëscht PGK-1 FAQ Ausdrock an der phenotypes vun gastric adenocarcinomas war kaum fonnt. Dofir, PGK-1 geduecht war fir d'Diagnos vun gastric Kriibs net gëeegent gin. VerfÜgung Carbonic anhydrases (Cas) sinn Zénk-haltege Enzymen dass iwwerall an verschiddenen Organer verdeelt ginn an dass eng grouss Famill dorënner CA-ech bis CA representéieren -IX. Si Meat der hydration vun CO 2 fir Tëscherapport ukuerbelt, an erhalen de pH an ioun Gläichgewiicht an de Kierper. Mettlerweil enger direkter Relatioun gouf tëscht malignant Transformatioun an FAQ Ausdrock fir Cas ech duerch VII [29] bewisen. Zwee virdrun Studien verroden, datt de Begrëff vun béiden CA-ech an CA-II bedeitend an colorectal erhéijen reduzéiert war Verglach zu normal colorectal epithelia oder mucosae [30]. Aner Rapport virgestallt Resultater weist dass Ausdrock vun CA-ech reduzéiert a CA-II mat der biologescher aggressiveness vun colorectal Kriibs an Synchron- wäit Metastasen [31] soll war. Wéi virdrun ugeholl, [32], gastric an colorectal carcinomas kann engem ähnleche Mechanismus vun Zell Prolifératioun an mucosal malignancy deelen, a vläicht e uweist fir dësen carcinomas ginn, well gemeinsam erof an d'FAQ Ausdrock vun CA-ech an CA-II och observéiert goufen an dëser Etude. VerfÜgung FOV, wat fir eng Mo-spezifesch 18-kDa antrum mucosa FAQ identesch ass! (Amp-18) [33, 34], GKN1 [35], an trefoil Faktor Interaktioune (Y) (TFIZ) [36], war hien Trainer gin verwandelt-reglementéiert oder feelen an der gastric adenocarcinoma Patienten an dëser Etude. De Mënsch amp-18 a mënschlech carcinoantigenic CA11 Gentherapie Produit, deen eng Aminosaier Haaptrei encodes datt an nëmmen enger eenzeger Ermächtegung aus, datt vun amp-18 Ënnerscheed [37, 38], Funktioun als secreted Wuesstem Faktoren deelweis responsabel fir eng normal funktionell gastric Erhalen epithelium [33]. Béid amp-18 an d'CA11 Gentherapie Produit muss gemellt ginn intensiv am normal Mo. Otemschwieregkeeten ausgedréckt gin, mee net an déi gastric Cancers [33, 37, 38]. Immunohistochemical Etuden bewisen, dass amp-18 zu mucosal epithelial Zellen vun den normale Mënsch gastric antrum an Ausléiser [33] präsent ze sinn schéngt. Viru Kuerzem, huet TFIZ wéi engem Wuesstem regulator vun gastric epithelial Zellen duerch d'Opstellung vun engem heterodimer mat trefoil Faktor 1 (TFF1) [36] zu Akt bewisen. Eis presentéieren Donnéeë confirméiert weider déi héich Ausdrock vun FOV zu nontumor gastric Stoffer an de wesentleche Ennerdréckung vun de FAQ zu gastric adnocarcinomas, wat beweist, datt FOV Rollen an der Ënnerhalt vun normal dat vun epithelial Zellen an entholl Ennerdréckung Leeschtung war awer net zu entholl Stoffer. Doriwwer eraus, hien huet mir dat Transkriptiouns vun FOV mRNA och zu gastric Kriibs Patienten Toast verwandelt-reglementéiert ass, beweist, datt eng schéi Ofsenkung FOV FAQ vun Ennerdréckung vun FOV Gentherapie Ausdrock ëmmer war. Doriwwer eraus, war an ee Patient d'FAQ net zu nontumor Stoffer fonnt, suggeréiert, dass d'Ausdrock Niveau vun FOV FAQ vun Individuen der gastric adenocarcinoma phenotype bestëmmen kann. An anere Wierder, kann de Begrëff Niveau vun FOV als uweist fir de Bilan vun gastric Kriibs Informatiounen ginn. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Protein profiling vun entholl an nontumor aus Japanesch Patienten ofgeleet Stoffer mat gastric adenocarcinomas Leeschtung war mat 2D-EP an LC- ESI-MS /MS. D'identifizéiert Proteinen abegraff molekulare chaperones, Energie-produzéiert Enzymen, cytoskeletal Proteinen, an sou op. Gemeinsam FAQ hire Restaurant goufen an der gastric Kriibs Patienten fonnt. Protein Ausdrock vun MnSOD an HMG-1 war bis-reegelen iwwerdeems déi vun GST, AST an FOV war verwandelt-reglementéiert gastric entholl Stoffer. A Korrelatioun tëscht de Verfall vun dësen Proteinen an hir transcriptional Ausdrock vun gastric Kriibs gouf kaum an dëser Etude observéiert, ausser am Fall vun FOV. Souwuel d'FAQ a Gentherapie Ausdrock vun FOV, eng Mo-spezifesch secretory Wuesstem Faktor fir normal gastric epithelial Zellen, Ofstand verwandelt-reglementéiert entholl aus Japanesch Patienten mat gastric adenocarcinomas ofgeleet Stoffer. Iwwerwachung vun den Ausdrock Niveau vun dëser Mo-spezifesch FAQ zu Medeziner Echantillon kann nëtzlech Informatiounen fir d'Diagnos vun gastric Kriibs wéi engem spezifeschen uweist bidden a fir bessere Verständnis vun gastric carcinogenesis. VerfÜgung Method VerfÜgung spontan VerfÜgung DNase ech, RNase A, 2-mercaptoethanol (2-ME), Glaspärelen (212-300 μm), Nonidet P-40, acrylamide, N, N, N ', N' VerfÜgung -tetramethylenediamine (TEMED), Natrium dodecylsulfate (SDS ), iodoacetamide an dithiothreitol (DTT) sech aus Fläch (St. Louis, MO) kaaft. Agarose fir isoelectronic Fredi (IEF), an Pharmalyte Pi 3-10, 4-6.5 an 8-10.5 sech aus Amersham Bioscience (Piscataway, NJ). Trypsin (sequencing Schouljoer) war vun Roche (Manheim, Däitschland). Phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), thiourea, sorbitol, Natrium pyrophosphate, ammonium persulfate, D, L-aspartic Seier, trichloroacetic Seier, sulfosalicylic Seier dihydrate, acetic Seier, acetonitrile, formic Seier an trifluoroacetic Seier (TFA) sech aus Wako Pure Chemesch (Rekorder , Japan). Urea war vun Katayama Chemesch (Rekorder, Japan). Pepstatin A an leupeptin sech aus der Peptide Institut (Rekorder, Japan). NH 4HCO 3 an N, N'-methylenebisacrylamide sech aus Nacalai Tesque (Kyoto, Japan). CBB R-250 gouf aus ICN Biomedicals Galaxy (Aurora, leider). Molekulare Mass Standarden sech aus APRO Science Galaxy (Tokushima, Japan). TRIZOL reagent war aus Life Technologies (Friedrich, MD). Oligo (DT) 12-18 primer, deoxynucleotides (dNTPs), an RNaseOUT sech aus Invitrogen (Karlsbad CA). M-MLV ëmgedréint transcriptase an Taq DNA polymerase sech aus Promega (Garmin, allem). VerfÜgung Stoffer an Echantillonen Virbereedung VerfÜgung primär gastric adenocarcinomas an bascht nontumor mucosae sech op gastrectomy gesammelt an vun der Dept. vun befënnt gëtt, CSL School vun der Medezin, der Universitéit vu Tokushima, Tokushima, Japan. Déi Forschung huet am Aklang mat der Deklaratioun vun Helsinki vun der World Medical Association duerchgefouert, a gouf vun der ethesch Comité vun der Universitéit vun Tokushima guttgeheescht. Awëllegung war och vun all de Patiente kritt déi de Medeziner Echantillon gëtt. Stoffer sech an engem dréchnen Äis-methanol Bad sou séier wéi méiglech nom dissection an gespäichert an engem déiwen Frigo (-80 ° C) ier benotzen gefruer. Fir mRNA Analyse, goufen Stoffer éischt virun dagsiwwer am RNAlater (Takara, Tokyo, Japan) Beweegung. Detailléiert clinicopathological Donnéeën dorënner de entholl Etapp (laut der AJCC System), Site an dat, an histological Donnéeën op der Otemschwieregkeeten Echantillon sinn an Table 3. Keen vun dësen Fäll opgezielt am scirrhous Typ Kategorie séiert huet, an entholl Otemschwieregkeeten war haut eenzegaarteg distinguishted aus Net-entholl een an all Fall. Fir zwee-Dimensiounen gelies electrophoresis (2D-EP), FAQ erauszéien aus Stoffer war duerch de folgenden Prozedur duerchgefouert. Gefruer Bleck (20-30 mg naass Gewiicht) huet am 10 vol /naass Gewiicht vun dialysis gefiermt mat 5 M urea, 1 M thiourea, 10 mm NAPPI mat enger Plastikstut pestle (Toyobo, Tokyo, Japan) an der Präsenz vun Glaspärelen homogenized , 1,67 μL /mL 2-ME, 0,005% DNase ech, 0,05 mg /ml RNase a, 20 μM leupeptin, 1 mm héich, 2 mm PMSF an 20 μM pepstatinA, an duerno bei 50.000 Ziichter fir 30 min bei 4 ° C centrifuged (Beckman -Coulter, Fullerton, CA). D'entstoent supernatant war den Otemschwieregkeeten Extrait benotzt. Protein Konzentratioune sech mat engem Bradford FAQ assay Kit (Bio-Rad, Hercules, CA) benotzt Bovine ESO-globulin als Séminairen Charakteristike vun de Patienten mat gastric adenocarcinomas standard.Table 3 geschoss. VerfÜgung Case

Age

Sex

Locationa

Gradeb

Stage


A
63
Male
UM
G3
IIIA
T2N2M0H0
B
68
Female
L
G2
II
T2N2M0
C
76
Male
ML
G2
IV
T4N3M0
D
78
Female
L
G2
III
T2N0M0H0
E
77
Male
ML
G2
II
T2N1M0
Au: ieweschte, M: Mëtt, L: manner VerfÜgung bG2: mëttelméisseg ënnerscheet, G3:. schlecht ënnerscheet VerfÜgung Zwee-dimesional gelies electrophoresis VerfÜgung 2D-EP war virdrun ëmschriwwen duerchgefouert [39]. Den éischte-Dimensiounen isoelectric Schwéierpunkt war an engem 1% (w /v) agarose gelies (φ 2,6 × 180 mm) mat engem pH 3-10 packt um 700 V fir 18 HR bei 4 ° C, an der zweeter-Dimensiounen SDS gesuergt gelies electrophoresis war mat engem 5-15% (w /v) acrylamide packt (M VerfÜgung r Rei, 6-200 kDa) op e Liewesniveau Dësch gelies (20 × 13 cm) um 15 ma fir 3 h gesuergt, an dann um 70 ma fir 2 h bei Raumtemperatur. Gels sech mat CBB R-250 Kierchefënster. VerfÜgung Protein Echantillon (500 μg) aus der entholl Zentrum ofgebaut an histologically normal mucosa ronderem sech ze 2D-EP ënnerworf an zu Puer Säit zur Säit lafen. Verschiddener vun der Kierchefënster Flecken VerfÜgung vun der 2D-gelies, an-gelies mat trypsin verdaut an duerno zu LC-ESI-MS /MS Analyse virdrun ëmschriwwen excised sech [40]. D'peptide Mëschung war mat engem réckgängeg Phase nanoLC System (bekannte, Swichos II, Ultimate, LC Këschte, Sunnyvale, CA) getrennt. D'eluted peptides sech direkt un eng ESI Mass Spektrometer (Esquire3000 Plus, Bruker-Daltonics, Frémont, CA) gehait. War mat DataAnalysis 3,1 Software (Bruker-Daltonics) Qualifikatiounen E grousse Volume vun MS /MS Donnéeën VerfÜgung, ëmgerechent zu Text Fichieren der Mass Wäerter vun den Elterevertrieder Protonen, an intensities an Radius vun ofgesprengt Protonen stéisst, an dann mat der Maskottchen sind (MATRIX Science Ltd, London, UK) Filteren ze peptides an der NCBI net-iwwerflësseg Haaptrei Datebank e taxonomic Restriktioun benotzt, "Mënsch". D'Datebank Sich gouf mat de Parameteren beschriwwen Yoshimura et al gesuergt. [40]. VerfÜgung Image Analyse an MS peptide sequencing VerfÜgung Image Acquisitioun an Analyse waren mat cuisine pauschal fënnt FXProPlus (Bio-Rad) an ImageMaster Software (Bio-Rad) gesuergt. Vergläicher sech tëscht gelies Biller vun entholl iwwereneestëmmen nontumor Echantillon hien huet misse vum Pair feieren. Normalized Volumen Differenzen sech statistesch fir all fënnef Fäll berechent. Den Inhalt vun glyceraldehyde 3-phosphodehydrogenase (GAPDH) FAQ war als Referenz fir d'fantastesch Verfall vun FAQ Ausdrock tëscht entholl diskutéieren a reagéiert nontumor Stoffer den Niveau vun GAPDH mRNA an FAQ sech net tëscht Stoffer ofgeleet vu Patienten geännert. Konsequent a vill verschiddene Plazen huet fir Analys vum LC-ESI-MS /MS ausgewielt. Protein Flecken! Goufen aus gels zu klenge Stécker geschnidde eraus, an deen un an-gelies tryptic unzereegen Iwwernuechtung [40]. Peptide Mass Spektren sech opgeholl, an Parameteren fir Spektren Acquisitioun benotzt goufen wéi virdrun gesot [40]. Richtegkeet vun Datebank FAQ passende Maskottchen Search benotzt [41] war wéi e Ball iwwer 37 dorun, déi am meeschte vun der gebueden kritt huet. VerfÜgung RNS Isolatioun an RT-Hinnen alleguer Analyse VerfÜgung entholl iwwereneestëmmen nontumor Echantillon (ca.. 50 naass Gewiicht mg) waren Schwéngs-, an dann manuell an 1 ml vun TRIZOL reagent (Invitrogen) op Äis homogenized. RNS war ouni DNase ech Behandlung isoléiert no de Protokoll d'Hiersteller. Kuerz, war fir 15 min bei 20.600 × g vun centrifugation zu der homogenate, duerno 0,2 ml vun CHCl 3 notéiert. Eng gläichberechtegt Volume vun 2-propanol war fir d'entstoent supernatant dobäi RNS zu Manéier. No centrifugation, war d'PELLET mat 75% Ethanol /diethylpyridylchloride (DEPC) -treated Waasser, gefollegt vun drëschenen rinsed. D'PELLET war an eng adequat Volume vun DEPC-behandelt Waasser als total RNS Ëmwandlung opgeléist. Fir ëmgedréint Transkriptiouns (RT), 2 μg vun RNS aus all Prouf bei 37 ° C fir 1 h an der Präsenz vun 200U vun Molony ëmgedréint Leukämie Virus transcriptase (Promega) ausserdeem war, oligo (DT) 12-18 primer, 0,5 mm dNTPs an 50U vun RNaseOUT. D'PCRs fir carbonic anhydrase-ech an II, glutatione-S-transferase, FOV, an GAPDH sech bannent engem linear Gamme vun amplification standing der gewielter primer Formatioun a Konditiounen benotzt, an erwaart Gréisst vun de Produiten, wéi zu Table 4. der Hinnen alleguer zesummegefaasst

• Down Regulatioun vun Thrombospondin2 aarmséileg hätt renomméierter däitscher Zeitung an Patienten mat gastric cancer
• Catecholamine up-reguléieren MMP-7 Ausdrock vun activating AP-1 an STAT3 zu gastric cancer