Lnc RNS HOTAIR Funktiounen als Competitioun endogenous RNS HER2 Ausdrock ze regléieren vum Mir-331-3p zu gastric Kriibs sponging

Lnc RNS HOTAIR Funktiounen als Competitioun endogenous RNS HER2 Ausdrock ze regléieren vun sponging Mir-331-3p zu gastric Kriibs VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Beweiser aktueller beweist, datt de laange Net-coding RNS HOTAIR enger kritescher Roll spillt an Kriibs Werdegang an Metastasen. Allerdéngs bleift d'gesamt biologescher Roll a Krankheete Bedeitung vun HOTAIR zu gastric carcinogenesis schiddene onbekannt. VerfÜgung Method VerfÜgung HOTAIR Ausdrock gemooss gouf zu 78 kriibserreegend a noncancerous Otemschwieregkeeten Echantillon vun real-Zäit Hinnen alleguer vläit. D'Auswierkunge vun HOTAIR op gastric Kriibs Zellen sech duerch overexpression studéiert an RNS Amëschen Approche kënschtlech an VIVO. Abléck vun de Mechanismus vun kompetitiv endogenous RNAs (ceRNAs) sech aus bioinformatic Analyse verdengten, luciferase assays an RNS bindend FAQ immunoprecipitation (RIP). De positiven HOTAIR /HER2 Interaktioun war vun immunohistochemistry assay an bivariate Korrelatioun Analyse identifizéiert an ubelaangt. VerfÜgung Resultater VerfÜgung HOTAIR upregulation war mat groussen entholl Gréisst viraussetzt agebousst Etapp an extensiv Metastasen verbonnen, an och mat méi allgemeng Iwwerliewe vun gastric soll Kriibs Patienten. Ausserdeem, gefördert HOTAIR overexpression d'Prolifératioun, Migratioun an Invasioun vun gastric carcinoma Zellen, iwwerdeems HOTAIR Ausschöpfung souwuel Zell Invasioun an Zell Nuetsvolen inhibited, an entschlof Wuesstem verhaft kënschtlech an VIVO. Besonnesch, HOTAIR kann wéi e Pass Akt, effektiv e ënnerzegoen fir Mir-331-3p réckelt, domat d'derepression vun HER2 modulating an eng zousätzlech Niveau vun der Post-transcriptional Regulatioun forcéieren. Endlech, war de positive HOTAIR /HER2 Korrelatioun vill mat fortgeschratt gastric Cancers assoziéiert. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung HOTAIR overexpression engem uweist vun aarme hätt an gastric Kriibs duerstellt, a vläicht malignant phenotype ze entholl Zellen eegens. Den Pass reglementaresche Reseau HOTAIR an der positive Gespréich tëscht HOTAIR an HER2 sensibiliséieren kënnen zu engem bessere Verständnis vun gastric Kriibs pathogenesis cotiséieren an der Entwécklung vun erliichtert lncRNA-Direkter Diagnos an therapeutics géint dës Krankheet. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Wettsträit endogenous RNS HER2 HOTAIR Gastric Kriibs Zouhuelen an Invasioun Background VerfÜgung Gastric Kriibs ass den zweete Spëtzekandidat Ursaach vum Kriibs-entschlof Doud, an ass déi gemeinsam gastrointestinal malignancy am Osten Asien, an Osteuropa, an Deeler vun Central a Südamerika. Am meeschten Patienten, ass gastric Kriibs bei Diplôme Etapp festgestallte an ass duerch malignant Prolifératioun, extensiv Invasioun an lymphatic Metastasen begleet. Erfollegräicht therapeutesch Strategien sinn limitéiert an der veruerteelt ass héich [1, 2]. Laang Net-coding RNAs (lncRNAs) hunn viru groussen Opmierksamkeet krut de komplex Mechanismen Basisdaten malignant Prozesser wéi carcinogenesis, Metastasen an Drogenofhängeger Resistenz zu delineating. Dofir, wann mir gastric carcinogenesis ze voll verstoen wëllen, brauche mir dës Famill vun reglementaresche ungen Meenung, datt eng nei futti vun Komplexitéit ze entholl Biologie derbäi. VerfÜgung Obwuel nëmmen eng kleng Zuel vun funktionell lncRNAs hunn och zu Datum charakteriséiert gewiescht, si dës Distanz zu der Gentherapie Ausdrock op verschiddene Niveaue, dorënner chromatin Modifikatioun, Transkriptiouns an Post-transcriptional Veraarbechtung [3, 4] regelt gewiescht. Viru Kuerzem, huet eng nei reglementaresche Mechanismus ginn an déi identifizéiert crosstalk tëscht lncRNAs an mRNAs vun Competitioun fir gemeinsam microRNAs (miRNAs) Äntwert Elementer existeiert. An dësem Fall, Funktioun lncRNAs kann als Competitioun endogenous RNAs (ceRNAs) miRNAs ze verstinn, domat d'derepression vun miRNA Ziler modulating an eng zousätzlech Niveau vun der Post-transcriptional Regulatioun forcéieren [5]. Am fréiere Rapporten, engem Muskel-spezifesch lncRNA, linc-MD1, gemellt gouf en Pass ze gin dass MyoD Messenger RNS (mRNA) aus miRNA-mediated ofgeschnidden [6] schützt. Pluripotency-verbonne lnc-RoR als Schlëssel Pass Funktioun kann de Réseau vun miRNAs an Kär Transkriptiouns Faktore ze Link, e.g., Oct4, Sox2, an Nanog, an mënschlechen embryonal Stammzellen. Gëlt, lncRNA HULC ass héich upregulated zu Liewer Kriibs a spillt eng wichteg Roll an tumorigenesis [7]. Besonnesch Akt kann HULC als endogenous "verstinn" dass eng Rei vun miRNAs Aktivitéiten verwandelt-reguléieren, dorënner Mir-372 [8]. Mir proposéieren duerfir, datt e puer lncRNAs och Rollen als ceRNAs, verbënnt miRNAs an der Post-transcriptional Réseau zu gastric pathogenesis hun kann. VerfÜgung HOTAIR (Hox ët antisense intergenic RNS VerfÜgung) ass eng ~ 2,2-KB laang Net-coding RNS aus der nët VerfÜgung HOXC ausserdeem, déi Transkriptiouns an Ziel VerfÜgung vun HOXD VerfÜgung zu foreskin Här iwert mech selwer [9] géint kënnen. Wéi engem Roman Protein am Beräich vun entholl Biologie, gouf HOTAIR Ufank bekannt fir hir Bedeelegung am primäre Broscht erhéijen an Broscht Kriibs Investitiounen, Hellef Héicht vun HOTAIR invasiveness an Metastasen gefördert [10]. Ausserdeem, deemolegt Weltbild HOTAIR Ausdrock positiv mat malignant Prozesser a schlecht Resultat an colorectal Kriibs, hepatocellular carcinoma, pancreatic Kriibs an gastrointestinal stromal erhéijen [11-14]. Rezent Etude confirméiert datt HOTAIR war zu gastric Kriibs upregulated [15, 16]. Trotzdem bleift de globale biologescher Roll an Basisdaten molekulare Mechanismus vun HOTAIR zu gastric carcinogenesis schiddene ondefinéiert. An dëser Etude VerfÜgung, Rapport mir dass HOTAIR upregulation eng charakteristesch molekulare Verännerung gastric Kriibs ass an ermëttelen der biologescher Rollen vun HOTAIR op der phenotypes vun gastric Kriibs Zellen kënschtlech an VIVO. Desweideren, verréid mechanistic Analyse datt HOTAIR wéi enger Pass Funktioun kann den Ausdrock vun mënschlecher epithelial Wuesstem Faktor receptor 2 (HER2) duerch Konkurrenz fir Mir-331-3p ze regléieren, also eng oncogenic Roll an gastric pathogenesis gespillt. Déi heiteg Aarbecht liwwert déi éischt Beweiser fir eng positiv HOTAIR /HER2 Korrelatioun an der crosstalk tëscht Mir-331-3p, HOTAIR an HER2, op der Behandlung vun gastric Kriibs neie Liicht Environnement. VerfÜgung Resultater VerfÜgung HOTAIR Ausdrock ass upregulated zu Mënsch gastric Kriibs Stoffer VerfÜgung Den Niveau vun HOTAIR Ausdrock war zu 78 vläit gastric Kriibs Echantillonen an bascht, histologically normal Stoffer vun qRT-Hinnen alleguer, a normalized zu GAPDH alles. HOTAIR Ausdrock war wiesentlech zu kriibserreegend Stoffer upregulated (mengen Verhältnis vun 14.35-fantastesch, P &Si besteet; 0.01) am Verglach mat normal garantéieren (Dorënner 1A). Ënnersichung vun der Korrelatioun tëscht HOTAIR Ausdrock a Krankheete agebousst Fonctiounen zougedréckt datt HOTAIR upregulation mat groussen entholl Gréisst viraussetzt agebousst Etapp, soll war wäit Metastasen (Dorënner 1B an C), lymph Node Metastasen an entholl Zell dat (Table 1). Allerdéngs war HOTAIR Ausdrock net mat entholl Positioun oder Patient Geschlecht (Table 1) assoziéiert. Mat wat fir globale Iwwerliewe, Patienten mat héijer HOTAIR Ausdrock haten eng wiesentlech méi aarmen hätt wéi déi mat niddereg HOTAIR Ausdrock (P &Si besteet; 0,001, Log-Platz Test; Dorënner 1D). Dës Resultater préziséiert dass HOTAIR overexpression zu der Entwécklung vun Roman prognostic oder Werdegang lues fir gastric Kriibs nëtzlech kann. Figur 1 rel HOTAIR Ausdrock vun gastric Kriibs Stoffer a seng Krankheete Bedeitung. (A) famill Ausdrock vun HOTAIR zu gastric Kriibs Stoffer (n = 78) am Verglach mat entspriechende Net-entholl normal Stoffer (n = 78). HOTAIR Ausdrock war vun qRT-Hinnen alleguer an normalized zu GAPDH Ausdrock iwwerpréift. Donnéeën war wéi fantastesch-Verännerung entholl Stoffer famill ze normal Stoffer presentéiert. (B) Examen d'Korrelatioun tëscht HOTAIR Ausdrock a Krankheete agebousst Fonctiounen zougedréckt datt HOTAIR upregulation mat groussen entholl Gréisst soll an fortgeschratt agebousst Etapp. (C) HOTAIR Ausdrock war wiesentlech méi héich an Patienten mat fernen Metastasen wéi an deene mat Net-wäiter Metastasen. (D) Kaplan-Meier globale Iwwerliewe Kéiren no HOTAIR Ausdrock Niveau. Déi gesamt Iwwerliewe vun der High-HOTAIR Grupp (n = 39: HOTAIR Ausdrock Verhältnis ≥ Steiren Verhältnis) war méi héich wéi déi vun Low-HOTAIR Grupp (n = 39; HOTAIR Ausdrock Verhältnis ≤ Steiren Verhältnis; P &Si besteet; 0,001, log- attributer Test). * P &Si besteet; 0,05, ** P &Si besteet; 0,01. VerfÜgung Table 1 Korrelatioun vun den Ausdrock vun HOTAIR mat clinicopathologic Fonctiounen VerfÜgung Clinicopathologic Fonctiounen
n (%)
rel Ausdrock vun HOTAIRa
P-valueb
Geschlecht VerfÜgung P = 0,62 VerfÜgung Männlech VerfÜgung 50 (64) VerfÜgung 12.21 (0.97-17.53) VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 28 (36) VerfÜgung 15.01 (7.34 -19.52) VerfÜgung Site vun entholl VerfÜgung P = 0,910 VerfÜgung Distal drëtt VerfÜgung 18 (23) VerfÜgung 9.1 (1.37-14.12) VerfÜgung Middle drëtt VerfÜgung 20 (26)
7.96 (2.55-9.72) VerfÜgung 40 VerfÜgung Proximal Mo. (51) VerfÜgung 7.76 (1.24-13.58) VerfÜgung dat VerfÜgung P = 0,045 VerfÜgung Poor VerfÜgung 56 (72)
15.6 (6.25-20.36) VerfÜgung High /moderéiert VerfÜgung 22 (28) VerfÜgung 8.1 (0.98-11.14) VerfÜgung Lymph Node Metastasen VerfÜgung P = 0,005 VerfÜgung N0 VerfÜgung 10 (13) VerfÜgung 1.14 (0.75-1.42) VerfÜgung N1 VerfÜgung 11 (14) VerfÜgung 3.44 (1.15-4.85) VerfÜgung N2 VerfÜgung 29 (37) VerfÜgung 11.99 (7.15- 14.77) VerfÜgung N3 VerfÜgung 28 (36) VerfÜgung 32.58 (7.34-36.27) VerfÜgung Metastatic Krankheet VerfÜgung P = 0,029 VerfÜgung M0 VerfÜgung 64 (82) VerfÜgung 9.35 (2.53 -33.64) VerfÜgung M1 VerfÜgung 14 Figebam VerfÜgung 28.82 (16.39-39.39) VerfÜgung aMedian vu Familljemembere Ausdrock, mat 25.-75 Géck an parentheses. BP &Si besteet; 0,05 war bedeitendst considéréiert (Mann-Whitney U VerfÜgung Test tëscht 2 Gruppen an Kruskall-Wallis Test fir 3 Gruppen). VerfÜgung Manipulatioun vun HOTAIR Niveauen am gastric Kriibs Zellen VerfÜgung Mir nächsten qRT-Hinnen alleguer Analyse standing ënnersicht Ausdrock Niveau vun HOTAIR zu Linnen verschidde Kriibs Zell, dorënner gastric, Net-kleng Zell haett Kriibs (NSCLC) an Broscht Kriibs-ofgeleet Zellen. Als zu Dorënner 2A gewisen, vun de véier gastric Zell Kriibs Linnen propagéieren (MGC-803, SGC-7901, BGC-823, an AGS), ausgedréckt BGC-823 héichen Niveau vun HOTAIR (3.18-fantastesch) wéi déi normal Zell gastric epithelium Linn (GES-1). Den Zerfall, NSCLC Zell Linn, Grapp-A1, duerch eng 3.73-fantastesch upregulation vun HOTAIR iwwer de normale Mënsch bronchial epithelial Zell Linn, 16HBE. Déi héich metastatic Broscht Kriibs Zell Linn MDA-MB-231 huet eng 4.77-fantastesch upregulation vun HOTAIR Verglach mat MCF-7 (Dorënner 2A). Eis Daten hindeit, datt HOTAIR kann oft an vill entholl Zellen upregulated ginn. Figur 2 Den Niveau vun HOTAIR Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen an hir Wierkung op Zell Prolifératioun kënschtlech. (A) Bilan aus qRT-Hinnen alleguer Musiktherapie- HOTAIR Ausdrock Niveau vun gastric Kriibs Zell Linnen (MGC-803, SGC-7901, BGC-823, an AGS) am Verglach mat normal gastric epithelium Zell Linn (GES-1), NSCLC Zell Linn ( Grapp-A1) am Verglach mat normale Mënsch bronchial epithelial Zell Linn (16HBE), an Broscht Kriibs Zell Linnen MDA-MB-231 Verglach mat MCF-7. (B) qRT-Hinnen alleguer Analysë vun HOTAIR Ausdrock Niveau folgenden Behandlung BGC-823 Zellen mat siRNAs gezielt HOTAIR a Behandlung SGC-7901 Zellen mat pCDNA /HOTAIR Vecteure. (C) MTT assay war standing d'Prolifératioun vu si-HOTAIR-transfected BGC-823 Zellen oder pCDNA /HOTAIR-transfected SGC-7901 Zellen ze bestëmmen. Donnéeën vertrieden mengen ± s.d. aus dräi onofhängeg Experimenter. (D) Kolonie-administrativ Wuesstem assay Leeschtung war d'Prolifératioun vu si-HOTAIR transfected BGC-823 Zellen ze bestëmmen. Kolonie goufe gezielt an ageholl. * P &Si besteet; 0,05 an ** P &Si besteet; 0,01. VerfÜgung Fir HOTAIR Niveauen am gastric Kriibs Zellen, engem pCDNA /HOTAIR Vecteure war transfected an SGC-7901 Zellen a si-HOTAIR war transfected an BGC-823 Zellen, bzw. manipuléieren. qRT-Hinnen alleguer Analyse vun HOTAIR Niveauen war um 48 h Post-transfection standing an Teamchef HOTAIR Ausdrock 98-fantastesch an SGC-7901 Zellen fräi war, am Verglach mat Kontroll Zellen. Allerdéngs, an BGC-823 Zellen, war HOTAIR Ausdrock effektiv 75% Uewerschenkel duerch si-HOTAIR2, déi effektiv siRNA dono an de folgende Experimenter benotzt (Dorënner 2B). VerfÜgung Effekt vun HOTAIR op Zell Prolifératioun an apoptosis kënschtlech
déi bedeitendst Erhéijung vun HOTAIR Ausdrock vun gastric Kriibs Echantillon Suite eis d'méiglech biologesch Bedeitung vun HOTAIR zu tumorigenesis ze entdecken. MTT assay Teamchef Zell Wuesstem war zu BGC-823 Zellen mat si-HOTAIR transfected vill leider, iwwerdeems Prolifératioun vu SGC-7901 Zellen zu pCDNA /HOTAIR transfected Zellen am Verglach mat respektiven Kontrollen (Dorënner 2C) fräi war. Den Zerfall, réischt d'Resultat vun Amphipolis-Opstellung assay datt clonogenic Iwwerliewe folgenden inhibition vun HOTAIR zu BGC-823 Zellen (Dorënner 2D) ofgeholl huet. VerfÜgung Fir erauszefannen, ob apoptosis eng Contributioun Faktor war Wuesstem inhibition zu Zell, standing mir Hoechst staining an Flux-cytometric Analyse vun si-HOTAIR-behandelt BGC-823 Zellen. D'Daten huet, datt d'Zuel vun Zellen mat ënnersichen an fragmentaresch Käre der Ëmwandlung vun fréi apoptotic Zellen besot huet bedeitend méi héich si-HOTAIR-behandelt BGC-823 Zellen am Verglach mam si-NC-behandelt Zellen (Dorënner 3A a B). Ausserdeem hunn mir dass inhibition vun HOTAIR caspase-3-ofhängeg apoptosis coopération, déi westlech blot Analyse vun ageschalt caspase-3 bewisen no si-HOTAIR transfection (Zousätzleche Fichier 1: Dorënner S1). Geholl zesummen, weg dës Resultater datt knockdown vun HOTAIR Prolifératioun gastric Kriibs Zell Hien an induces apoptosis kënschtlech. Figur 3 Den Effet vun HOTAIR op gastric Kriibs Zell apoptosis, Migratioun an Invasioun kënschtlech. BGC-823 Zellen sech mat si-HOTAIR oder si-NC transfected, an SGC-7901 Zellen sech mat pCDNA /HOTAIR Vecteure oder eidel Vecteure Kontroll transfected. (A) Hoechst staining assay vun Zell apoptosis; de Prozentsaz vun Hoechst-positiv Käre pro opteschen Terrain (op d'mannst 50 Felder) war alles. (B) Déi apoptotic Tariffer vun Zellen vun Flux cytometry fonnt goufen. UL, necrotic Zellen; Ur, Uschloss apoptotic Zellen; LR, fréi apoptotic Zellen. (C an D) Transwell assays sech standing Ännerungen am Zell Wanderung an invasiveness ze ermëttelen. * P &Si besteet; 0,05 an ** P &Si besteet; 0,01. VerfÜgung HOTAIR ënnerstëtzt Wanderung an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen kënschtlech VerfÜgung Zell Invasioun ass e wichtegen Aspekt vun Kriibs Werdegang, datt d'Migratioun vun entholl Zellen an Misère Stoffer an d'Opléise vun extracellular Matrixentgasung Proteinen bënnt. Hei bewäert mir Kriibs Zell Invasioun duerch transwell assays. Als zu Dorënner 3C gewisen, impeded der transfection vun HOTAIR siRNA den Opbau ëmmer BGC-823 Zellen vun ongeféier 66%. Eng entspriechend Effekt op invasiveness war och zu engem parallel Invasioun assay observéiert. Ëmgedréit, transfection vun SGC-7901 Zellen mat pCDNA /HOTAIR Vecteure gefördert Zell Wanderung an invasiveness ~ 1,9-fantastesch (Dorënner 3D). Dës Donnéeë weisen, datt HOTAIR oncogenic Eegeschaften huet, datt en Opbau an invasiv phenotype zu gastric Kriibs Zellen Promotioun kann. VerfÜgung HOTAIR tumorigenesis vun gastric Kriibs Zellen zu VIVO VerfÜgung ënnerstëtzt ze wëssen, ob de Niveau vun HOTAIR Ausdrock tumorigenesis schellt, BGC-823 transduced Zellen mat der head-HOTAIR /pENTR Vecteure (ev) sech zu engem Sauna Mais xenograft Modell benotzt. Bis zu 16 Deeg no knockdown vun HOTAIR, war et eng dramatesch Ofsenkung entholl Volumen a Gewiicht am head-HOTAIR Grupp Verglach mat Kontrollen (Dorënner 4A, B an C). Next, war immunostaining Analyse vun der Prolifératioun Bewaacher PCNA zu resected entholl Stoffer gesuergt. Am Verglach mat, datt zu erhéijen aus Kontroll Zellen gemaach, awer Ok-HOTAIR-ofgeleet erhéijen vill PCNA komm (Dorënner 4D) reduzéiert. Dës Resultater hindeit, datt de Niveau vun HOTAIR Ausdrock vill mat der vun VIVO Prolifératioun Kapazitéit vun gastric Kriibs Zellen verbonnen ass. Figur 4 Effekt vun HOTAIR knockdown op entholl Wuesstem zu VIVO. (A) entholl Wuesstem Kéieren waren der Sprëtz vun BGC-823 Zellen mat head-HOTAIR oder pENTR Vecteure transfected gemooss. Entholl Volumen ass all 3 Deeg ausgerechent. Daten ginn als mengen ± s.d. (N = 5). (B) entholl Gewiicht. Wäerter sinn heescht vun entholl Gewiicht ± s.d. (C) qRT-Hinnen alleguer Analyse vun HOTAIR Ausdrock vun Stoffer vun resected erhéijen. (D) Saachen entwéckelt aus BGC-823 /head-HOTAIR Zellen zougedréckt engem nidderegen Niveau vun PCNA FAQ wéi aus BGC-823 /pENTR Vecteure Zellen entwéckelt erhéijen. Ieweschte: H & E staining; Niddreg: immunostaining. * P &Si besteet; 0,05 an ** P &Si besteet; 0,01. VerfÜgung HOTAIR eng Zilscheif vum Mir-331-3P an Mir-124 VerfÜgung Bioinformatik Analyse vun miRNA Unerkennung Message op HOTAIR ass réischt d'Präsenz vun 11 entholl-suppressive miRNAs bindend Siten. D'HOTAIR cDNA war matgeholl vun der luciferase Gentherapie gekloonten an RLuc-HOTAIR (Dorënner 5A), dann transfected zesumme mat verschiddenen miRNA-coding plasmids genannt. rno-Mir-344 protokolléiert als negativ Kontroll. D'Resultater weisen, datt luciferase Aktivitéit vun 48% an 31% reduzéiert war am Verglach mat der eidel Vecteure Kontroll wann Mir-331-3p an Mir-124 huet ausgedréckt, respektiv. Dës Donnéeë weisen datt souwuel Mir-331-3p an Mir-124 direkt ze HOTAIR duerch respektiven miRNA Unerkennung Siten (Dorënner 5B lénks Rot) festleeën kann. Figur 5 HOTAIR ass eng Zilscheif vum Mir-331-3P oder Mir-124 an Kontrollen Mir-331-3p viséieren. (A) Den 11. putative miRNA bindend Siten an der HOTAIR Haaptrei. D'HOTAIR cDNA der putative miRNAs Unerkennung Siten wou war matgeholl vun der luciferase Gentherapie gekloonten an RLuc-HOTAIR genannt. (B) Lénk: D'luciferase reporter plasmid (RLuc-HOTAIR) war Co-transfected an HEK-293 T Zellen mat der 11 verschidde miRNA-coding plasmids. Recht: den luciferase reporter plasmid Wildwest-Typ oder Mann- HOTAIR wouvun war Co-transfected an HEK-293 T Zellen mat Mir-331-3p an parallel mat eidelen plasmid Vecteure. Luciferase Aktivitéit war mat der duebel luciferase assay sech an den relativ luciferase Aktivitéit normalized zu renilla Aktivitéit gewisen. Ugëtt beweist d'Wäerter vun luciferase 48 h der transfection gemooss. (C) D'3'-UTR vun HER2 war fir d'luciferase coding Regioun Method (RLuc-HER2 3'-UTR) an transfected zu HEK293T Zellen mat Mir-331-3p ze confirméieren HER2 d'Zil vum Mir-331-3p ass. RLuc-HER2 3'-UTR an Mir-331-3p gesond waren Co-transfected an HEK293T Zellen mat plasmids ausdrécken HOTAIR (pCDNA /HOTAIR) oder mat engem Kontroll Vecteure d'Pass Aktivitéit vun HOTAIR fir z'iwwerpréiwen. rno-miRNA-344 gouf als negativ Kontroll benotzt. Ugëtt beweist d'Wäerter vun luciferase 48 h der transfection gemooss. (D) RIP mat Maus monoclonal anti-Ago2, preimmune IgG oder 10% Input vu BGC 823-Zell dovu publizéiert. RNS Niveauen am immunoprecipitates sech duerch qRT-Hinnen alleguer alles. Top: Niveau vun HOTAIR, miRNA331-3P an Erhëtzung RNS sech als fantastesch Beräicherung an Ago2 famill ze IgG immunoprecipitates presentéiert. Ënnen: famill RNS Niveau vun U1 snRNA zu SNRNP70 famill ze IgG immunoprecipitates. Zuelen sinn mengen ± s.d. (N = 3). (E) Western blot Analyse vun HER2 FAQ folgenden Behandlung vun BGC-823 Zellen mat si-HOTAIR oder pCDNA /HOTAIR, an SGC-7901 Zellen mat pCDNA /HOTAIR. GAPDH war als Kontroll benotzt. * P &Si besteet; 0,05, ** P &Si besteet; 0,01 an N.S. net relevant. VerfÜgung ëmzestoussen, kucke mer Mir-331-3p als Modell miRNA fir weider Studien. Fir weider bestätegen, datt d'Reduktioun vun luciferase Aktivitéit aus der RLuc-HOTAIR-virstellen Vecteure wéinst war Interaktioun tëscht der miRNA a seng putative bindend Site fir direkt, mir mutated der Mir-331-3p bindend Site vum Site-Direkter mutagenesis geplatzt RLuc -HOTAIR-Mut. Wéi erwaart, huet Ennerdréckung vun luciferase Aktivitéit misst an dëser Mann- bauen Verglach mat Wëld-Typ Vecteure (Dorënner 5B Recht Rot) ofgeschaaft. VerfÜgung HOTAIR an Mir-331-3p souwuel kruet mat AGO2 vun Zellen gastric Kriibs VerfÜgung miRNAs sinn an der Form vun miRNA ribonucleoprotein investéiert (miRNPs) dass och Ago2, de Kär Komponent vun der RNS-entschlof silencing komplex (RISC) [17, 18] bekannt präsent an der Zytoplasma enthale gin. Ze testen ob HOTAIR Mataarbechter mat miRNPs, goufen RNS bindend FAQ immunoprecipitation (RIP) Experimenter standing op BGC-823 Zell dovu antibodies géint Ago2 benotzt. RNS Niveauen am immunoprecipitates sech duerch qRT-Hinnen alleguer alles. HOTAIR war zéien beräichert (354-fantastesch) zu Ago2-haltege miRNPs relativ immunoglobulin G (IgG) immunoprecipitates ze kontrolléieren. Den Zerfall, war op engem Niveau fonnt miRNA-331-3p 840-fantastesch grouss wéi déi vun Kontroll anti-IgG. Erfollegräicht immunoprecipitation vun Ago2-verbonne RNS war vun qRT-Hinnen alleguer ubelaangt, RIP primers Hëllef géint Mënscherechter Erhëtzung vun der RIPAb + Ago2 Kit (Dorënner 5D, erop Rot) abegraff. Ausserdeem, war anti-SNRNP70 als eng positiv Kontroll fir de RIP Prozedur benotzt, an U1 snRNA och op engem Niveau 206-fantastesch grouss wéi déi vun Anti-IgG (Dorënner 5D, ënnen Rot) fonnt gouf. Soumat ass HOTAIR präsent an Ago2-haltege miRNPs, wahrscheinlech duerch Associatioun mat miRNA-331-3p, konsequent mat eis bioinformatic Analyse an luciferase assays. VerfÜgung HOTAIR Kontrollen der Mir-331-3p Zil, HER2 VerfÜgung Ënnert de ville Ziler vum mir-331-3p, mir op HER2 Konzentratioun zanter et e transmembrane FAQ mat engem relevant Funktioun vun carcinogenesis a Resistenz zu Stad-baséiert Therapie [19] encodes. D'3'-UTR vun HER2 war de luciferase coding Regioun Method (RLuc-HER2 3'-UTR) an transfected mat plasmids Zeechesaatz Mir-331-3p an eidelen plasmid Vecteure. rno-miRNA-344 protokolléiert als negativ Kontroll. D'luciferase assay gewisen, datt Mir-331-3p vill luciferase Aktivitéit inhibited (~ 41% inhibition) vun der RLuc-HER2 3'-UTR Rapporteur, confirméiert, datt HER2 eng Zilscheif vum Mir-331-3p ass. D'RLuc-HER2 3'-UTR bauen gouf transfected zesumme mat plasmids Zeechesaatz Mir-331-3p an HOTAIR (pCDNA /HOTAIR). Luciferase assays uginn, datt, an der Präsenz vun HOTAIR, RLuc-HER2 3'-UTR Repressioun restauréiert war am Verglach mat der Kontroll Grupp (Dorënner 5C). Dëst bedeit datt HOTAIR Akten als endogenous "Dat verstinn d'Leit 'vum Mir-331-3p bindend, sou de miRNA-entschlof repressing Aktivitéit op der HER2 3'-UTR mar. VerfÜgung Ausserdeem, d'Wierkung vun HOTAIR Ausdrock op endogenous HER2 FAQ zu Kombinatioun mat modulation vun miRNA oder lncRNA Niveau vun de verschiddene Approche dës Distanz an Dorënner 5E iwwerwaacht gouf: (1) Mir-331-3p overexpression géint HER2 zu BGC-823 Zellen; (2) HOTAIR knockdown géint HER2 zu BGC-823 Zellen; (3) HOTAIR overexpression fir HER2 zu SGC-7901 Zellen. Western blot Analyse gewisen, datt gezwongen Ausdrock vu Mir-331-3p oder knockdown vun HOTAIR zu BGC-823 Zellen e wesentleche silencing Effekt op endogenous HER2 FAQ Ausdrock ausgeléist. Doriwwer eraus, war HER2 FAQ Ausdrock Ofstand no transfection mat HOTAIR zu SGC-7901 Zellen upregulated, wat eng relativ niddereg endogenous HOTAIR Ausdrock Niveau weist. VerfÜgung Zesumme dës Donnéeë weg datt Mir-331-3p vun bindend, HOTAIR Akten wéi enger Pass fir der Zil- HER2 mRNA, domat d'derepression vun HER2 modulating an eng zousätzlech Niveau vun der Post-transcriptional Regulatioun forcéieren. VerfÜgung Mir-331-3p an Mir-124 gastric Kriibs Zellen Prolifératioun oofgesinn VerfÜgung als endogenous ënnerzegoen fir Zil ze déngen miRNAs, soll d'Heefegkeet vun HOTAIR ginn ähnlech oder méi héich wéi Mir-331-3p /Mir-124. An eiser Etude, zougedréckt qRT-Hinnen alleguer Analyse datt Mir-331-3p /Mir-124 Ausdrock inversely mat HOTAIR Ausdrock vun 20 Puer fortgeschratt gastric Cancers (Dorënner 6A) soll war. Ze validéieren, ob Mir-331-3p an Mir-124 och gastric Kriibs Zell Prolifératioun inhibit konnt, gezwongen mir hir Ausdrock vun BGC-823 Zellen miRNA-Zeechesaatz plasmids benotzt. Den Ausdrock Niveau vun miRNA-331-3p an Mir-124 transfected an BGC-823 Zellen sech däitlech vun 36-fantastesch fräi a 29-fantastesch, respektiv, am Verglach mat Kontroll Zellen (Dorënner 6B). Next, MTT a Kolonie-Opstellung assays sech standing Zell Nuetsvolen ze bestëmmen. D'Resultater vun der MTT assay a Wuesstem Kéiren Teamchef mat Mir-331-3p transfected Zellen oder Mir-124 bedeitendst Wuesstem retardation zougedréckt a wann mat Zellen transfected mat eidelen Vecteure (Dorënner 6C) am Verglach. Dës Donnéeë weisen, datt overexpression vum Mir-331-3p oder Mir-124 Ausdrock gastric Kriibs Zell Prolifératioun verhaft kann, wat mat de Resultater vun HOTAIR Ausdrock knockdown zu BGC-823 Zellen konsequent ass. Figur 6 Positiv Korrelatioun tëscht HOTAIR an HER2 Ausdrock an d'Relevanz fir Mir-331-3p /Mir-124 Ausdrock Niveauen. (A) Bivariate Korrelatioun Analyse vun der Relatioun tëscht HOTAIR Ausdrock an Mir-331-3p, oder Mir-124 Niveau. (B) BGC-823 Zellen sech mat plasmids transfected Zeechesaatz Mir-331-3p oder Mir-124, an qRT-Hinnen alleguer benotzt gouf de miRNA Niveauen mat Kontrollen (Mir-NC) am Verglach zu z'entdecken. (C) MTT assay a Kolonie-administrativ Wuesstem assay sech standing d'Prolifératioun vu Mir-331-3p oder Mir-124 transfected BGC-823 Zellen ze bestëmmen. (D) Lénk: immunostaining vun HER2 FAQ zu fortgeschratt gastric Kriibs Otemschwieregkeeten Echantillon. Ieweschte: immunostaining vun HER2 war negativ an gastric Kriibs Stoffer mat relativ niddreg HOTAIR Ausdrock. Niddreg: immunostaining vun HER2 war positiv an gastric Kriibs Stoffer mat relativ héich HOTAIR Ausdrock. Recht: bivariate Korrelatioun Analyse vun der Relatioun tëscht HOTAIR an HER2 Ausdrock Niveau. * P &Si besteet; 0,05, ** P &Si besteet; HER2 0,01. VerfÜgung ass coexpressed mat HOTAIR zu gastric Kriibs Stoffer VerfÜgung D'HER2 overexpression Taux gemellt war 7-34% vun gastric Kriibs ze ginn, a gouf mat méi aggressiv Krankheet an aarmen Iwwerliewe vun gastric Kriibs verbonne [19]. Mir fonnt Ausdrock vun HER2 zu 50 fortgeschratt gastric Kriibs Stoffer (Etapp III /IV) vun der viregter 78 gastric Kriibs Stoffer vun immunohistochemistry ausgewielt (IHC) an qRT-Hinnen alleguer Analyse. D'Resultater vun IHC staining zougedréckt HER2 FAQ komm, an 56% vun der gewielter 50 gastric Kriibs Stoffer. Achtzegjärege-sechs Prozent vun dësen HER2 positive Echantillon waren aus fortgeschratt Etapp III /IV erhéijen, an 71% ugewisen héich HOTAIR Ausdrock (Dorënner 6D an Weider Fichier 2: Table S2). Bivariate Korrelatioun Analyse gewisen, datt Ausdrock vun HER2 vill mat HOTAIR ët Niveau vun gastric Kriibs Stoffer Verglach mat normal garantéieren (Dorënner 6D) soll war. Dës Donnéeë weisen, datt den Ausdrock vun HER2 ass positiv, verbonne mat upregulated HOTAIR zu gastric Kriibs Otemschwieregkeeten Echantillonen, suggeréiert datt characterization vun der HER2 /HOTAIR Interaktioun kéint biologically bedeitendst ginn an mënschlechen gastric tumorigenesis. VerfÜgung kann, well vun enger Dräierkoalitioun Phase III /IV Prozess, den HER2 overexpression Tarif am Moment Etude nogewise ass méi héich wéi déi virdrun am Rapport Steiren Gamme. Dëst fräi Taux vun HER2 overexpression ass gastric Cancers aarmséileg Resultater fir Patiente mat metastatic an héich-mannerwäerteg en der, doduerch ervirhiewt d'Wichtegkeet vun HER2 zu gastric Kriibs Entwécklung an Metastasen. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung LncRNAs, déi staark verbonne si méi wéi 200 nucleotides zu Längt mat limitéiert FAQ-coding Muecht, sinn oft an engem disease-, tissue- oder Entwécklungsphase Etapp-spezifesch Manéier ausgedréckt, spezifesch Funktiounen fir lncRNAs an Entwécklung a Krankheeten déi besot an dës Molekülle attraktiv therapeutesch Ziler nees [20-22]. Eng Zuel vun de rezenten Aarbechten hunn bekannt ginn dass dysregulation vun dësen lncRNAs och d'Regulatioun vun der eukaryotic Nepgen Afloss kann an engem bewosst Wuesstem Virdeel déi geplatzt progressiv a ongebremste entholl Wuesstem [23-25]. Dofir, kann lncRNAs engem vermësst Stéck vun der anescht bekannt oncogenic an entholl suppressor Reseau Puzzel bidden. VerfÜgung An dëser Etude, getest mir den Ausdrock vun HOTAIR zu gastric carcinoma Echantillonen an hirem Ëmfeld Net-tumorous Stoffer. Mir och d'Funktioun vun HOTAIR zu gastric carcinoma Zellen identifizéiert vun Kandidatur gain- a Verloscht-vun-Funktioun Approche. D'Resultater bewisen, dass HOTAIR zu gastric carcinoma Stoffer am Verglach mat bascht normal gastric Stoffer upregulated war, an datt HOTAIR upregulation mat groussen entholl Gréisst viraussetzt agebousst Etapp an extensiv Metastasen soll. Ausserdem war de globale Iwwerliewe Zäit vun Patienten mat manner HOTAIR Ausdrock Niveau bedeitend méi wéi dat vu Patienten mat moderéiert oder staark HOTAIR Ausdrock Niveauen. Ausserdeem, gefördert HOTAIR overexpression d'Prolifératioun, Migratioun an Invasioun vun gastric carcinoma Zellen, iwwerdeems HOTAIR Ausschöpfung Zell Invasioun an Zell Nuetsvolen inhibited, an entschlof Wuesstem verhaft souwuel eng kënschtlech an VIVO. Zousätzlech dozou gefouert HOTAIR Ennerdréckung fir d'Promotioun vun gastric Zell apoptosis. Dës Conclusiounen hindeit datt HOTAIR engem direkten Roll an der modulation vu multiple oncogenic Eegeschafte spillt an gastric Kriibs Werdegang, nei Fuerschung Richtungen Spannend an therapeutesch Optiounen HOTAIR als Roman prognostic Bewaacher geflitzt an therapeutesch Zilscheif vun gastric Kriibs que. VerfÜgung D'Wichtegkeet vun lncRNAs zu Mënsch Krankheet kann mat hire Géigner ze Impakt bewosst Funktiounen duerch verschidde Mechanismen verbonne ginn. An dëser Etude, ass esou wäit wéi de Mechanismus vun HOTAIR ubelaangt, ass et derwäert ass ze ernimmen, datt subcellular Lokalisatioun Analyse vun HOTAIR vun RNS fluorescence zu situ hybridization assay d'Lokalisatioun vun HOTAIR souwuel den helle Sarkasmus an der Zytoplasma [24]. Et ass evident, datt nuklear HOTAIR polycomb repressive komplex 2 Zil- kënnen, Wou muss ech H3K27 methylation an der Gentherapie Ausdrock Musteren ganze Nepgen [10, 11]. Rezent Wierk gemellt engem scaffold Funktioun fir HOTAIR an der Zytoplasma als inducer vun ubiquitin-mediated proteolysis [26]. Trotzdem, de tumorigenic Eegeschaften a mechanistic heterogeneity vun HOTAIR, a besonnesch déi vun der cytoplasmic Form, si wäit aus vollstänneg opgekläert ginn. Vun der "kompetitiv endogenous RNAs 'reglementaresche Réseau an de Schwellelänner Beweiser Inspiréiert VerfÜgung datt lncRNAs an dëser deelhuelen kann reglementaresche circuitry, Hypothes mir dass HOTAIR och als e Pass déngen kann an esou gesichte mir fir potentiell Interaktioune mat miRNAs. An Ënnerstëtzung vun dëser Virstellung, Employé mir Bioinformatik Analyse an luciferase assays der direkt bindend Fähegkeet vun der virausgesot miRNA Äntwert Elementer op der voller-Längt HOTAIR ët ze validéieren. GAPDH war wéi enger Kontroll benotzt. * P &Si besteet; All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Liewensqualitéit, immunomodulation a Sécherheet vun adjuvant Mëspel Behandlung an Patienten mat gastric carcinoma - eng zoufälleg kontrolléiert Pilot study
• Down Regulatioun vun Thrombospondin2 aarmséileg hätt renomméierter däitscher Zeitung an Patienten mat gastric cancer