Downregulation vun SPARC Ausdrock Verloschter gastric Kriibs bewosst Invasioun an Iwwerliewe

Downregulation vun SPARC Ausdrock Verloschter gastric Kriibs bewosst Invasioun an Iwwerliewe VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Secreted FAQ dono a räich an cysteine ​​(SPARC) spillt eng wichteg Roll an der Entwécklung vu ville Stoffer an Uergel Typen. Aberrant SPARC Ausdrock war zu enger grousser Villfalt vu mënschlechen Cancers, dréit zu entholl Entwécklung fonnt. Well SPARC fonnt gouf zu Mënsch gastric Kriibs Otemschwieregkeeten overexpressed gin, also mir huet den Ausdrock vun SPARC zu gastric Kriibs Linnen an der carcinogenic Mechanismen. VerfÜgung Method VerfÜgung SPARC Ausdrock vun engem Rot vu mënschlechen gastric Kriibs Zell Linnen bewäert Loescht . MGC803 an HGC 27 gastric Kriibs Zell Linnen héijen Niveau vun SPARC ausdrécken sech mat SPARC-spezifesch kleng interfering RNAs transiently transfected an dono évaluéiert fir Auswierkungen op Invasioun an Prolifératioun. VerfÜgung Resultater VerfÜgung klenger RNS-mediated knockdown vun SPARC zu MGC803 interfering an HGC 27 gastric Kriibs Zellen ofgeholl dramatesch hir Invasioun. Knockdown vun SPARC war och mat Kontroll transfected Grupp observéiert zu der apoptosis vun MGC803 an HGC Verglach gastric Kriibs Zellen 27 wesentlech Augmentatioun. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung Eis Donnéeë gewisen, datt vun SPARC downregulating Invasioun an Wuestum vu mënschlechen gastric Kriibs Zellen bremst. Sou, gezielt vun SPARC kéint eng effikass therapeutesch Approche géint gastric Kriibs ginn. VerfÜgung Erschléisse VerfÜgung Gastric Kriibs ass den zweete Spëtzekandidat Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doudesfäll weltwäit an ass ee vun de stäerkste aggressiv erhéijen an ass dacks mat lymph Node assoziéiert Metastasen, peritoneal Publikatioun, an hematogenous Metastasen [1]. Op der ganzer, 65-70% vun neie Fäll an Doudesfäll vun gastric Kriibs geschéien an manner-entwéckelte Länner [2]. An 2005, d'Heefegkeet Tariffer vun gastric Kriibs (0.3 Milliounen Doudesfäll an 0,4 Milliounen nei Fäll) klasséiert drëtt ënnert déi gemeinsam Cancers an China [3]. Aktuell Therapien fir fortgeschratt Etapp oder metastatic gastric Kriibs hunn wéineg Effet, chirurgesch Entféierung mat resection vun bascht lymph Wirbelen déi eenzeg Chance fir Kur Offeren, déi manner wéi 33% vun de Patienten mat gastric Kriibs ass. De 5-Joer Iwwerliewe Taux ass nëmmen 30-40%, mat engem aarmen hätt fir fortgeschratt erhéijen. de molekulare Mechanismen de Werdegang vun gastric Kriibs Versteesdemech Basisdaten kann Abléck an nei therapeutesch Ziler déi VerfÜgung Secreted FAQ dono a räich an cysteine ​​(SPARC; och als osteonectin oder well-40 bekannt). gehéiert zu der matricellular Famill vun secreted Proteinen [4 ]. SPARC ass eng nonstructural Komponent vun extracellular matrices datt Zell-Matrixentgasung Interaktioune modulates, besonnesch während Otemschwieregkeeten Entwécklung, Remodeling an Reparatur [5]. Vill Zorte vun Cancers sinn duerch upregulated Ausdrock vun SPARC charakteriséiert [6]. Overexpression vun SPARC gouf an e puer Zorte vu staark erhéijen, wéi Broscht [7], Aarbecht [8], melanoma [9] an glioblastomas [10] dokumentéiert. Am Géigesaz, ënneschten Niveau vun SPARC Ausdrock goufen an aner Zorte vun Cancers, wéi spillt [11], colorectal [12], pancreatic [13, 14] an de Fouss myelogenous Leukämie [15] fonnt. Dës Observatioune hindeit datt tumorigenic Effet vun SPARC Zell Typ speziell ass an kann vun der entholl Zell Ëmfeld Ëmwelt ofhängeg gin. VerfÜgung D'Wëssen iwwer SPARC Funktiounen am gastric Kriibs Zellen ass nach hunn. Overexpression vun der SPARC Gentherapie war zu Mënsch gastric Kriibs zu fënnef aner Rapporten [16-20] observéiert. Mä all uewendriwwer-ernimmt Studien hu keen Detail vun gastric Kriibs Zell Linnen an carcinogenic Mechanismus. SPARC gouf mat aggressiv Etappe vun gastric Kriibs verbonnen an ass mat aarmséileg hätt soll [16], wat drop hindeit, datt d'Reduktioun vun SPARC Ausdrock therapeutesch profitéiert hunn kann. Iwwerhaapt, Ausdrock vun antisense oligonucleotides géint SPARC zu melanoma Zellen blockéiert entholl Équipe [21]. Déi genee biologesch a molekulare Mechanismen duerch déi eng Reduktioun vun SPARC Ausdrock ze verbessert entholl Therapie bäidroen kéinten bleiwen propagéieren gin. Dofir, war d'Zil vun der presentéieren Etude SPARC Funktiounen am gastric Kriibs Zellen ze Markenzeeche an hir eventueller carcinogenic Mechanismus entdecken. VerfÜgung spontan a Methoden VerfÜgung Zell Kultur VerfÜgung Mënscherechter gastric Kriibs Zell Linnen NCI-N87, SGC7901, MGC803 , BGC823, HGC27 sech aus der Cancer Institut vun Chinese Academy vun Medical Science kritt. All Zellen sech am RMPI 1640 (GIBCO ™) mëttelfristeg mat 10% An et Bovine serum, penicillin G (100 Unitéiten /ml), an streptomycin (100 μg /ml) als komplett mëttelfristeg nà ugebaut. Zellen sech am monolayer Kultur bei 37 ° C an humidified Loft mat 5% CO 2. VerfÜgung Chemikalien a reagents VerfÜgung héich-2 Natrium, acridine orange, ethidium bromide (EB) an 3- [4 haten, 5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyl tetrazoliumbromide (MTT) sech aus Fläch (St Louis, MO, USA) kaaft. Mouse monoclonal antibody spezifesch ze β-actin war aus Fläch. Kanéngchen polyclonal antibodies spezifesch ze BCL-2 (sc-492), caspase-3 (sc-7148) a PARP (sc-7150) goufen aus Santa Cruz Déi (Santa Cruz, CA, USA) kaaft. Mouse monoclonal antibodies spezifesch ze SPARC (sc-74295) an Bax (sc-7480) goufen aus Santa Cruz Déi kritt. Geess anti-Kanéngchen (w3960) an Anti-Maus (w3950) Secondaire antibodies sech aus Promega kaaft (Garmin, allem, USA). VerfÜgung RNAi an transfection VerfÜgung Mënscherechter SPARC siRNA a Kontroll siRNA sech aus Dharmacon Bioscience Verletzung (Chicago , IL, USA). Equimolar Montanten vun siRNAs sech als pro Fabrikant d'Instruktioune benotzt mat Kontroll Net-gezielt siRNA (ewech). 150 000 Zellen sech pro sechs-gutt an DMEM mat 10% FBS plated a sech Iwwernuechtung zu befestegt erlaabt. Equimolar Montanten vun siRNAs sech mat Transit-TKO Transfection Reagent aus Mirus (Garmin, allem, USA) als pro d'Uweisungen d'Hiersteller incubated. Zellen sech fir 48 h virun Experimenter haten, wann et net anescht VerfÜgung Western blot Analyse beschriwwen VerfÜgung Twenty micrograms vun insgesamt Proteinen vun SDS-PAGE an transferéiert op engem PVDF Membran getrennt goufen. D'Membran war dann mat antibodies spezifesch fir SPARC incubated (Santa Cruz; 1: 500), oder anti-β-actin (Fläch; 1: 1000) Iwwernuechtung bei 4 ° C. Bound antibodies sech mat verstäerkte chemiluminescence visualized. Fir gläich Luede confirméieren, Schläimhait sech op 50 ° C fir 30 Minutten ewechgeholl an gefiermt mat 2% SDS, 62,5 mm Tris (PH 6,7), an 100 mm 2-mercaptoethanol an reprobed mat enger Anti-β-actin antibody selwecht Luede vermëttelt . D'Dicht vun der Bande war vun densitometric Analyse zum laachen d'ImageTool (Versioun 3.0) System benotzt. VerfÜgung RT-Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS (1-2 μg) war ëmgedréint ausserdeem mat engem SuperScript Pre-amplification Kit (Invitrogen, Karlsbad , CA). Primers baséieren op gemellt Message op Genebank (NM 003118). SPARC Sënn Haaptrei war 5'-GTGGGCAAAGGGAAGTAACA-3 'an SPARC anti-Sënn Haaptrei 5'-GGGAGGGTGAAGAAAAGGAG-3 ". D'erwaart Produit Gréisst vun SPARC cDNA war 512bp. SS-actin Sënn Haaptrei war 5'-GGCATCCTCACCCTGAAGTA-3 'an SS-actin anti-Sënn Haaptrei 5'-GTCAGG CAGCTCGTAGCTCT-3 ". D'erwaart Produit Gréisst vun SS-actin cDNA war 514bp. Hinnen alleguer amplification war zu 25 μl Reaktioun Bänn mat 0,2 μM dNTPs, 20 pmol vun all oligonucleotide primer, an 0.2U Tag polymerase vun Hinnen alleguer gefiermt gesuergt. cDNA war fir 5 min bei 95 ° C op engem Hinnen alleguer thermesch ziemlech mat enger éischter denaturation Implikatioune verstärkt, gefollegt vun Zykle vun 95 ° C fir 1 min, 65 ° C fir 1 min, an 72 ° C fir 1 min, 27 Monaco, an eng final Extensioun Schrëtt vun 72 ° C fir 10 min. De Montant vun cDNA ugefaange gouf benotzt β-actin Intensitéit ugepasst. VerfÜgung Zell Migratioun assay VerfÜgung der Fähegkeet vun Zellen duerch Filter- an opgeholl war e BioCoat Matrigel Invasioun Chambre gemooss benotzt (BD Biosciences, San Jose, CA). Zell Kultur Text mat enger 8 μm pore Gréisst PET Membran no de Protokoll vun der Produktioun gebraucht goufen. Ënnen Chambre abegraff mëttelfristeg (0,75 ml) 10% FCS wouvun hierkommen SPARC siRNA transfected oder Kontroll transfected Zellen (1.0 × 10 5 an 0.5 ml vun mëttelfristeg suspendéiert mat 1% FCS) waren an der ieweschter Chambre rakommen an Iwwernuechtung incubated bei 37 ° C an enger humidified Atmosphär mat 5% CO 2. Remaning Zellen op der ieweschter Uewerfläch sech mechanesch geläscht. Schläimhait sech dann gewäsch, fix, an Kierchefënster vum Diff-Quik (Medion kinnt). D'Zuel vun Zellen, déi un der ënneschter Uewerfläch vun der Filter- migrated war an dräi onofhängeg Felder (0,25 mm 2 /gutt) vun Zielen Kierchefënster Zellen ënnert engem Liicht microscope alles. VerfÜgung Zell Wuesstem an Nuetsvolen assay VerfÜgung der Effet vun SPARC SiRNA op d'Nuetsvolen vun Zellen war vun der MTT assay alles. Kuerz, goufen MGC803 an HGC 27 Zellen op 1 × 10 4 Zellen pro gutt an Wüüst-sechs-gutt microtitre Placke plated. No incubation fir 72 h, war Zell Nuetsvolen alles. Dunn 20 μl MTT (10 mg /ml vun PBS rembourséiere verdënntem ze schaffen Konzentratioun vun 1 mg /ml mat Medien) war gutt zu all ugebaut a fir 4 h incubated. No virsiichteg Entfernung vun der mëttelgrouss, huet 200 μl Police sulfoxide fir all gutt an Hënt extra derbäi. D'absorbance war op der microplate Lieser opgeholl (ELX 800; Bio-Tek Instrumenter, Inc. Winooski, hu, USA) op engem 570 nm Wellelängt. Den Effet vun SPARC siRNA op Zell Wuesstem inhibition als Prozentsaz Zell Nuetsvolen évaluéieren war wou Gefier behandelt Zellen als 100% halen. VerfÜgung Zell Zyklus Analyse an annexin V staining VerfÜgung geholl goufen Fir Zell Zyklus Analyse Flux cytometric, behandelt d'Zellen mat siRNA sech gesammelt, mat PBS gewäsch, an kal 70% Ethanol fix, an bei -20 ° C bis staining gespäichert. No zéien, goufen d'Zellen mat PBS gewäsch a mat 50 μg /mL RNaseA (Fläch) fir 30 min bei 37 ° C incubated, ier mat 50 μg /mL propidium Kaliumiodid (Fläch) staining. Apoptotic Zellen zu fréi a spéit Etappen sech mat enger annexin V-FITC Apoptosis Detektioun Kit vun BioVision (Mountain View, CA, USA) fonnt. An dowéinst, goufen d'Zellen mat siRNA transfected. Um 96 h Post-transfection, Kultur Medien an Zellen sech gesammelt an centrifuged. No wäschen, sech Zellen zu 490 μL annexin V bindend Prellbock, gefollegt vun der Zousätzlech vun 5 μL annexin V-FITC a 5 μL propidium Kaliumiodid resuspended. D'Echantillon waren am däischteren fir 5 min bei Raumtemperatur incubated an cytometry Flux analyséiert benotzt. VerfÜgung Statistics VerfÜgung Resultater goufen ausgedréckt als Ausdrock Niveauen mengen (± Fils). Student d't VerfÜgung Azeton oder Platz Zomm Test huet fir statistesch Analyse benotzt. A p-Wäert &Si besteet; 0,05 war den Niveau vu Bedeitung (two-eesäitegen). VerfÜgung Resultater VerfÜgung Expression vun SPARC zu cultured gastric Kriibs Zellen geholl VerfÜgung Mir éischt de endogenous Ausdrock vun SPARC zu puer Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen bewäert. Mir hu fonnt, datt SPARC FAQ a mRNA zu MGC803 an HGC27 Zellen verwandelt huet, um ënneschten Niveau vun SGC7901 Zell Linn huet an NCI-N87 an BGC823 Zell Linnen (Dorënner 1) undectable produzéiert goufen. Figur 1 Expression vun SPARC zu gastric Kriibs Zell Linnen. A, Immunoblot Analyse mat enger Kanéngchen polyclonal SPARC antibody (1: 500). B, Spezifësch ëmgedréint transcriptase polymerase Kette Reaktioun (RT-Hinnen alleguer) Analyse fir SPARC. β-actin war den Luede Kontroll benotzt. C, rel SPARC mRNA Ausdrock Niveauen. Autoradiographs sech duerch densitometry vun quantitation famill ze β-actin duerno gescannt an analyséiert. Resultater sinn als Ausdrock (an%) relativ zu β-actin a si bedeit (± Fils) vun 3 Experimenter gewisen. VerfÜgung Inhibition vun endogenous SPARC Ausdrock VerfÜgung initial Duerchmusterung Nexten, MGC803 Zellen an HGC27 Zellen ausdrécken relativ héich endogenous SPARC sech knockdown etabléierten SPARC ausdrécken an enger flüchteg Manéier d'Wichtegkeet vun endogenous SPARC Ausdrock ze bestëmmen. Als zu Dorënner 2A gewisen, war SPARC Ausdrock mat SPARC siRNA transfectants zu FAQ Niveauen inhibited. Dës Resultater hindeit, datt dës SPARC siRNAs erfollegräich engem silencing Effekt fir SPARC Ausdrock noutwänneg. Figur 2 Effekt vun SPARC knockdown op Zell Migratioun zu gastric Kriibs Zell Linnen MGC 803 an HGC 27 Zellen. A. SPARC Ausdrock vun MGC 803 an 27 HGC, Kontroll an SPARC siRNA transfected Zellen war vun immunoblot Analyse fonnt enger Kanéngchen polyclonal SPARC antibody benotzt (1: 500). β-actin war den Luede Kontroll benotzt. B. Effects vun SPARC knockdown op Zell Migratioun zu gastric Kriibs Zell Linnen. SPARC Ausdrock war zu MGC 803 an HGC 27 Zellen mat SPARC siRNA an deen zu enger Wanderung assay mat enger zwee-chambered Invasioun Staatsapparat ëmschriwwen an spontan a Methoden, ugëtt weist Prozent inhibition vun MGC 803 an HGC 27 Zell Invasioun Uewerschenkel. D'Experiment war zu triplicate an de Wäert vun Jacquerie siRNA transfected Zellen war wéi 100% Formatioun kritt gemaach. VerfÜgung Downregulation vun SPARC Ausdrock gastric Kriibs Zellen Invasioun inhibited kënschtlech VerfÜgung Fir erauszefannen, ob SPARC siRNA protumorigenic bewosst Verhaalen reduzéiert konnt verbonne mat SPARC Ausdrock, alles mir éischter den Effet vun ofgeholl SPARC Ausdrock op entholl Zell Invasioun. Zell Invasioun assay sech dann Transwell CHAMBERS standing benotzt. Mir gemooss d'Kapazitéit vun gastric Kriibs Zellen duerch Matrigel, eng kënschtlech extracellular Matrixentgasung, no transfection mat engem Net-gezielt Kontroll siRNA oder SPARC siRNA ze violéieren. Ofgeholl SPARC Ausdrock fir d'inhibition vun Invasioun vun 69% an 79% vun MGC803 an HGC27, bzw. (Dorënner 2B, C) gefouert. Geholl zesummen, weg dës Resultater kloer dass Ennerdréckung vun SPARC der Migratioun an Invasioun Fähegkeet vun MGC803 Zellen an HGC27 Zellen bremst. VerfÜgung Downregulation vun SPARC Ausdrock bremst Wuesstem vun gastric Kriibs Zellen kënschtlech VerfÜgung Mir propagéieren ob SPARC siRNA der erofgoen kéint Iwwerliewe vun gastric Kriibs Zellen. MGC 803 an HGC 27 gastric Kriibs Zellen mat SPARC siRNA transfected erëmfonnt bei Tariffer famill ze reagéiert Zellen ofgeholl transfected mat engem Net-gezielt Kontroll siRNA (Dorënner 3A). Downregulation vun SPARC Ausdrock net Zell Zyklus verhaft an gastric Kriibs Zellen induce. Mir iwwerpréift d'Auswierkunge vun SPARC siRNA op Zell Zyklus Werdegang. Silencing vun SPARC zu MGC803 an HGC27 Zellen rauszesichen G1 oder S Phase änneren Populatiounsschichte um 72 h posttransfection mat SPARC siRNA am Verglach mat den negativen Kontroll Grupp (Dorënner 3B). Figur 3 Effects vun SPARC knockdown op Zell Wuesstem zu gastric Kriibs Zell Linnen. déi lénks Halschent Donnéeën vertrieden Daten aus MGC 803 Zellen kritt an de Recht hues vertrieden Daten aus HGC 27 Zellen kritt. A. Basal Wuesstem war no 48 h am komplett mëttel- vun der MTT assay alles. Resultater sinn als mengen Wuesstem (an%) vun de respektiven MGC 803 an HGC 27 Zell Linn a sinn bedeit (± SE) vun quadruplicate alles aus sechs separat Experimenter gewisen. Zellen aus der siRNA a Kontroll Gruppen sech fir cytometry Zell Zyklus Analyse gesammelt. B. Silencing vun SPARC vun siRNA transfection rauszesichen Zell Zyklus Verdeelung vun MGC 803 an HGC 27 Zellen gastric Kriibs änneren. MGC 803 an HGC 27 Zellen sech mat SPARC siRNA oder negativ Kontroll siRNA transfected. Um 72 h Post-transfection, war DNA Inhalt cytometry benotzt propidium Kaliumiodid (PI) staining op Flux gemooss. VerfÜgung Inhibition vun SPARC Ausdrock apoptosis zu gastric Kriibs Zellen verbessert VerfÜgung Mir propagéieren ob SPARC siRNA Zell Doud gastric Kriibs induce kéint Zell Linnen. D'Behandlung vun MGC803 an HGC27 Zellen mat SPARC siRNA fräi fréi apoptotic Zellen souwéi spéiden apoptotic Zellen, am Verglach mat negativen Kontroll siRNA Behandlung (Dorënner 4A) als déi Annexin V assay gemooss. Wéi erwaart, huet d'Verréngerung Iwwerliewe vun de mat SPARC siRNA transfected Zellen mat fräi Tariffer vun apoptosis vun 91% vun MGC803 an 92% vun HGC27 Zellen (Dorënner 4B) assoziéiert. Dës Conclusiounen hindeit datt SPARC zu apoptosis Équipe ass bewosst Iwwerliewe vun e puer gastric Kriibs Zellen ze erhalen. Figur 4 SPARC knockdown Resultater an Aféierungs- vun apoptosis zu gastric Kriibs Zell Linnen. Fir Flux cytometric Analyse, goufen Zellen 96 h der transfection mat SPARC siRNA oder negativ Kontroll siRNA recoltéiert, dann mat annexin V-FITC an propidium Kaliumiodid (PI) geschriwwen. déi lénks Halschent Donnéeën vertrieden Daten aus MGC 803 Zellen kritt an de Recht hues vertrieden Daten aus HGC 27 Zellen kritt. D'Prozentzuelen vun annexin V /PI (fréi apoptotic) an annexin V /PI (spéiden apoptotic) Zellen ass an all Rot gewisen. Wäerter an fett SPARC Ausdrock weg falender fräi apoptosis vun 65% vun MGC803 an 92% vun HGC27 Verglach mat negativen Kontroll siRNA. VerfÜgung Apoptotic Effet vun SPARC siRNA transfected Behandlung vun MGC 803 an HGC27 Zellen VerfÜgung An en Effort der, fir Mechanismus vun SPARC siRNA entschlof apoptosis zu MGC 803 Zellen an HGC27 Zellen, Ausdrock Niveau vun apoptotic-Regulatioun Proteinen wéi BCL-2, Bax an caspase-3 an PARP sech bewäert. MGC 803 Zellen an HGC27 Zellen sech mat SPARC siRNA transfected. Wéi 5 zu Dorënner gewisen, sech Et Differenze vun der Ausstralung vun Bax an BCL-2 zu MGC 803 Zellen an HGC27 Zellen am Verglach mat den negativen Kontroll Grupp (P &Si besteet; 0,05 an P &Si besteet; 0.01). An enger Äntwert op apoptotic stimuli, procaspase-3 ass e Brochstéck 20 kDa eenalecn, an der nächster autocatalytic Reaktioun féiert zu der Opstellung vun der aktiver 17 kDa ofgesprengt. Wann der caspase-3 ageschalt ass, ass PARP eenalecn. Sou Rëss vun PARP ass wéi eng Luucht vun apoptosis benotzt. Fir der Relatioun vun caspase Aktivéierung an apoptosis direkte Beweis weist, procaspase-3 Rëss an PARP ze kréien goufen an MGC 803 Zellen an HGC27 Zellen der SPARC siRNA transfected iwwerpréift. Als zu Dorënner 5 gewisen, SPARC SiRNA der Rëss vun 32 kDa procaspase-3 an hir aktiv 17 kDa Form an Rëss vun PARP wossten vun MGC 803 Zellen an HGC27 Zellen entschlof. Figur 5 Den Ausdrock vun apoptosis Proteinen vun MGC 803 an HGC27 Zellen der transfection mat entweder Kontroll oder SPARC siRNA. D'Zell lysates waren op 10% SDS-PAGE gelies getrennt, fir nitrocellulose Membran transferéiert an Komedie mat anti-PARP, anti-caspase-3, anti-BCL-2, an anti-Bax. Protein Inhalter sech duerch Betong der selwechter Membran mat anti-β-actin normalized. . D'lénks Halschent Donnéeën vertrieden Daten aus MGC kritt 803 Zellen an d'Recht hues vertrieden Daten aus HGC 27 Zellen kritt VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Secreted FAQ a räich an cysteine, SPARC (och als osteonectin bekannt; oder Keller-Membran-40 , well d-40), ass e Member vun enger Famill vu matricellular Proteinen, hir Funktioun ass ouni Participatioun vun der struktureller scaffold vun der extracellular Matrixentgasung Zell-Matrixentgasung Molekülle an Zell Funktioun ze well. Overexpression vun SPARC gouf an e puer Zorte vu staark erhéijen, wéi Broscht [7], Aarbecht [8], melanoma [9] an glioblastomas [10] dokumentéiert. Am Géigesaz, ënneschten Niveau vun SPARC Ausdrock goufen an aner Zorte vun Cancers, wéi spillt [11], colorectal [12], pancreatic [13, 14] an de Fouss myelogenous Leukämie [15] fonnt. Dës Observatioune hindeit datt tumorigenic Effet vun SPARC Zell Typ speziell ass an kann vun der entholl Zell Ëmfeld Ëmwelt ofhängeg gin. VerfÜgung D'Wëssen iwwer SPARC Funktiounen am gastric Kriibs Zellen ass nach hunn. Verschidde immunohistochemical Studien [16-20, 22] gemellt zesummen eng weider-Regulatioun vun SPARC zu gastric Kriibs Verglach mat nonneoplastic mucosa. WEWER et al. [17] beschriwwen engem Ënnerscheed Ausdrock vun SPARC an der epithelial an stromal compartments vu sechs gastric Kriibs uplanzen. Maeng [18] fonnt dass SPARC ass héich an reaktiv stroma ausgedréckt mat invasiv ënnerscheet adenocarcinomas assoziéiert an datt et vläicht als nëtzlech Medeziner diagnostic Bewaacher fir Mo. Kriibs déngen. Wang et al. [16] fonnt och eng SPARC differentially zu gastric Kriibs Patienten als évaluéieren ausgedréckt war vun der Gentherapie vill Analyse, grouss RT-Hinnen alleguer, a immunostaining, héich SPARC Ausdrock vill mat entholl Werdegang an der fortgeschratt Etappe vun gastric Kriibs assoziéiert. Franke et al. [20] bewisen op engem erweiderten Patient Serie datt SPARC ass differentially zu gastric Cancers ausgedréckt an datt hiren Ausdrock deemolegt Weltbild mat entholl Werdegang an nodal verbreet mat Otemschwieregkeeten microarrays (TMAs), de Niveau vum Ausdrock vun SPARC, vun immunohistochemistry alles, soll zu intestinal-Typ gastric Kriibs mat der lokal entholl Wuesstem, nodal verbreet, an entholl Etapp no ​​der International Union Géint Cancer. Zhao ZS et al. [19] fonnt dass SPARC war zu 334 vun 436 mënschlech gastric Kriibs Fäll festgestallt a war an 239 erhéijen héich ausgedréckt. An Etappen sin, II an III, de 5-Joer Iwwerliewe Taux vu Patienten mat engem héich Ausdrock vun SPARC war wesentlech méi déif wéi déi an Patienten mat niddereg Ausdrock. Weider multivariate Analyse ugeholl datt upregulation vun SPARC, MMP-2, an integrin beta1, fir d'Krankheet onofhängeg prognostic Indicateuren goufen. VerfÜgung Mir hun 49 Stoffer gastric Kriibs gesammelt an entspriechend normal Stoffer duerch chirurgesch Prozeduren (Jie Yin, Guowei Chen, Infraktiounen Liu, Jianxun Zhao, Yucun Liu: Expression vun SPARC zu Mënsch gastric Kriibs ass mat de Medeziner-agebousst Fonctiounen assoziéiert, proposéiert). D'Verdeelung an Ausdrock vun SPARC sech duerch immunohistochemistry, Western Blotting an RT-Hinnen alleguer observéiert, bzw.. SPARC FAQ a mRNA ausgedréckt däitlech méi héich zu gastric Kriibs Stoffer Verglach zu normal Stoffer. De Grad vun hiren Ausdrock sech mat dat vun entholl, TNM Divisioun, peritoneal Morden a wiere Invasioun bemierkenswäert assoziéiert. Patienten mat héije Ausdrock vun SPARC hu sech verschlechtert hätt wéi déi mat niddereg Ausdrock vun SPARC. VerfÜgung zesummen deelgeholl, héich SPARC Ausdrock vill mat entholl Werdegang an fortgeschratt Etappe vun gastric Kriibs verbonne war. Rezent Fuerschung vun Inoue M et al [23] souguer SPARC als Kandidat Zil- antigen fir immunotherapy vun verschiddenen Cancers dorënner gastric Kriibs vum Daniel Nepgen-grouss cDNA microarray identifed. Et ass spannend, datt Therapie déi SPARC subunit gezielt kënnen eng sënnvoll Approche ginn ze gastric Kriibs Wuesstem oofgesinn. Allerdéngs ass de molekulare Mechanismen responsabel fir d'oncogenesis vun SPARC zu gastric Kriibs net ganz verstanen. Duerch Ausdrock Analyse vun engem Rot vu gastric Kriibs Zell Linnen, awer mir dass SPARC och zu sevel Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen overexpressed ass. Dofir, getest mir eis hypotheses datt SPARC e Schlëssel Protein an gastric Kriibs Invasioun kann, an datt gezielt SPARC engem Roman therapeutesch Strategie fir anti-Invasioun vu gastric Kriibs Moment kann. VerfÜgung Verbreedung vu Kriibs Zellen, entweder lokalen oder um wäit metastatic Siten verlaangt, datt malignant Zellen d'Fähegkeet kritt de Keller Membran ze violéieren a fir aner matrices ze halen. Et gëtt ugeholl, datt SPARC eng Schlësselroll während dem éischte Schrëtt am Prozess vun entholl Invasioun an Metastasen spille kann [24]. Ausserdeem, kann SPARC den Ausdrock vun metalloproteinases oder Enzymen induce datt duerno eng wichteg Roll an der ofgeschnidden vun basal Schläimhait an extracellular Matrixentgasung Komponente [25] spillen. SPARC war mat der invasiveness vun meningiomas verbonne [26, 27] an gliomas [28]. Ausserdeem, Ennerdréckung vun SPARC Ausdrock antisense RNS inhibited motility an Invasioun vu mënschlechen Broscht Kriibs Zellen kënschtlech benotzt [21]. VerfÜgung Fir erauszefannen, ob SPARC siRNA protumorigenic bewosst Verhaalen verbonne mat SPARC Ausdrock reduzéiere kënnt, alles mir éischter den Effet vun ofgeholl SPARC Ausdrock op entholl Zell Invasioun. Mir gemooss d'Kapazitéit vun gastric Kriibs Zellen duerch Matrigel, eng kënschtlech extracellular Matrixentgasung, no transfection mat SPARC siRNA oder engem Net-gezielt Kontroll siRNA ze violéieren. Ofgeholl SPARC Ausdrock fir d'inhibition vun Invasioun vun 69% an 79% vun MGC803 an HGC27, bzw. gefouert. Soumat kënnen SPARC siRNA kënschtlech gastric Kriibs Invasioun erofgoen. VerfÜgung Eng rezent Etude fonnt dass SPARC Zellen aus Stress-entschlof apoptosis kënschtlech duerch e Gespréich mat integrin β1 heterodimers schützt datt ganzer Regioun Aktivéierung an prosurvival Aktivitéit [28] verbesseren. Initialen Studien antisense RNS Strategien benotzt komplett Mënsch melanoma Wuesstem an Sauna Mais [21] abrogated. Horie et al. [29] weisen datt d'downregulation vun SPARC Ausdrock Wuesstem inhibition mat G entschlof 1 verhaft am mënschleche melanoma Zellen. Et ass confirméiert datt SPARC glioma Zell Iwwerliewe duerch Akt Aktivéierung duerch integrin sécher ënner serum-gratis Konditiounen [30] ënnerstëtzt. Dëse Rapporten staark hindeit datt SPARC eng Roll als antistress Faktor spillt. VerfÜgung Wéinst dem fonnt puer Artikelen déi SPARC apoptosis zu Kriibs Zellen Promotioun kann. Yiu a Kollegen [11] weisen datt exogenous Behandlung vun verschiddenen spillt Kriibs Zell Linnen mat SPARC entschlof apoptosis. Said a Motamed [31] fonnt SPARC aussetzt caspase 3 an Mënsch spillt carcinoma Zellen déi de fréiere observation ënnerstëtzt eenalecn fräi. Pancreatic [13] a spillt Cancers [30] Schatzkummer méi Wuesstem a reduzéiert apoptosis wann zu SPARC implanted - /-. An colorectal Kriibs Zell Linnen, overexpression vun SPARC reduzéiert Nuetsvolen Zell an verstäerkte apoptosis an zu verschiddenen chemotherapeutic Agenten ausgesat Zellen [32]. VerfÜgung Dës jiddwereen Foussvollek Observatioune bannent all Typ vu Kriibs a ganze verschiddene Cancers kann duerch vergesst d'Verständnis vun SPARC erkläert ginn Biologie [33]: kleng peptide Fragmenter vun SPARC vertrëtt de verschiddene Beräicher vun SPARC eegens biologescher Aktivitéiten déi bei Mol, FAQ deene vun anere Fragmenter oder déi gebierteg SPARC dogéint. Zënter der protease Profil vun der entholl microenvironment kann an verschidden Zorte vun Cancers ënnerscheeden, an als SPARC bekannt ass proteolysis vun Matrixentgasung metalloproteinases ze forméieren [34], dës Ënnerscheeder, a Kombinatioun mat Ännerungen an der lokal Zesummesetzung vun Matrixentgasung Molekülle an cytokines, kënnen all zu verschidden Zorte vu Kriibs Contributioun zu der komplex Behuele vun SPARC ginn. VerfÜgung fir d'Auswierkunge vun SPARC siRNA op gastric Kriibs Zell Wuesstem, MTT Prolifératioun assay entschlësselen war standing transfected d'Prolifératioun tëscht SPARC siRNA transfected a Kontroll MGC803 an 27 HGC ze vergläichen Zellen. MGC803 an HGC27 gastric Kriibs Zellen mat SPARC siRNA transfected erëmfonnt bei Tariffer ofgeholl famill ze reagéiert Zellen mat engem Net-gezielt Kontroll transfected siRNA (Dorënner 3). D'ofgeholl Iwwerliewe vun de mat SPARC siRNA transfected Zellen war mat fräi Tariffer vun apoptosis verbonne wéi déi Annexin V assay gemooss. Kierzen SPARC Ausdrock fräi apoptosis vun 91% vun MGC803 an 92% vun HGC27 (Dorënner 4B). VerfÜgung Aktiv caspases eng wichteg Roll an der Aféierungs- vun apoptosis Leeschtung. Wann caspase-3 ageschalt huet, ass PARP spéiden eenalecn. Normalerweis d'Rëss vun PARP war wéi eng Luucht vun apoptosis benotzt. Am Moment studéieren, hunn mir SPARC siRNA ageschalt caspase-3 eenalecn caspase-3 (p17) Fragmenter vun MGC 803 Zellen an HGC 27 op 48 h ze produzéieren. Gläichzäiteg gouf d'Rëss vun PARP och fonnt. D'Resultater weisen, datt SPARC véiermol vun PARP entschlof souwéi fräi caspase-3 Aktivitéit zu MGC 803 Zellen. VerfÜgung der BCL-2 Famill Proteinen gemellt goufen apoptosis ze regléieren vun der Kënschtlech Membran permeability Kontrollfunktioun. SPARC an den Ausdrock vun Bax reglementéiert an Ugrëff duerch d'Expressioun vun BCL-2 zu MGC 803 Zellen an HGC 27 Zellen reegelen. Mir hu fonnt, datt SPARC siRNA gastric Kriibs Zell apoptosis induce konnt a gläichzäiteg d'Verhältnis vu BCL-2 zu Bax reduzéieren. Dofir, kann d'Regelung vun der BCL-2 an Bax Ausdrock e Schlëssel Mechanismus SPARC Aféierungs- vun apoptosis zu gastric Kriibs Zellen ginn Basisdaten. VerfÜgung Also uginn eis Daten datt downregulation vun SPARC Zell Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen vun apoptosis Initiatioun inhibited, déi Gewësse mat melanoma an glioma, mä contrairement zu spillt an pancreatic Kriibs. D'Aféierungs- vun apoptosis war deelweis regulariséiert ze Kënschtlech Passerelle wéi Aktivéierung caspase Passerelle souwéi Rëss vun PARP. Zukunft Studium op der geneeër Mechanismus ze duerchbriechen brauch. VerfÜgung An Conclusioun, eis aktuell Donnéeën ugeholl datt SPARC wichteg Roll an apoptosis an Metastasen vun gastric Kriibs huet. Am Moment, sinn et keng effektiv Approche fir spéiden Etapp gastric Kriibs Réischtermaschinn. Als nik SPARC Ausdrock mat ofgeholl gastric Kriibs Patient Iwwerliewe [16] verbonnen ass, gleewe mir, datt mir eis Resultater, Invasioun ofgeholl Musiktherapie- a fräi mat siRNA Zell Doud géint SPARC française, proposéiere datt SPARC Ausdrock falender Patienten therapeutesch Virdeel fir gastric Kriibs hun kann.
Deklaratioune VerfÜgung Merci VerfÜgung Dëst Wierk war vun der National wëssenschaftlech Technologic Ennerstëtzung Project Fund [30901417] ënnerstëtzt. Mir Merci Professer Yang Ke an Xiaojuan Du vun Korea University Gesondheet Science Center, Peking, China, fir technesch Ënnerstëtzung. VerfÜgung Auteuren 'original deposéiert Fichieren fir Biller VerfÜgung sinn ennen d'Linken op d'Auteuren' original deposéiert Fichieren fir Biller. 13046_2010_306_MOESM1_ESM.jpeg Auteuren 'original Datei fir Figur 1 13046_2010_306_MOESM2_ESM.jpeg Auteuren' original Datei fir Figur 2 13046_2010_306_MOESM3_ESM.jpeg Auteuren 'original Datei fir Figur 3 13046_2010_306_MOESM4_ESM.jpeg Auteuren' original Datei fir Figur 4 original Datei '13046_2010_306_MOESM5_ESM.jpeg Auteuren fir Figur 5 konkurréiert Interessen VerfÜgung D'Auteuren erklären, datt se keng Competitioun Interessen hunn. VerfÜgung

• Metallothionein 2A bremst NF-κB Passerelle Aktivéierung an enger renomméierter däitscher Zeitung Medeziner Resultat mat TNM Bühn gefall an gastric Kriibs Patienten folgenden radikal resection
• Deep sequencing vun gastric carcinoma verréid somatic kennen relevant fir personaliséiert medicine