Entholl suppressor Mir-24 restrains gastric Kriibs Werdegang vun RegIV downregulating

Entholl suppressor Mir-24 restrains gastric Kriibs Werdegang vun RegIV VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background downregulating VerfÜgung microRNAs si kleng noncoding RNAs datt eng ganz Rei vun bewosst Prozesser well duerch multiple Ziler Regulatioun, déi kann d'Entwécklung vun malignant Verhaalen Promotioun oder inhibit . Aktueller Beweiser mobiliséiert Mir-24 wichteg Roll am mënschleche carcinogenesis spillt. Allerdéngs bleift hir präzis biologescher Roll schiddene Synch. Dës Etude iwwerpréift d'Roll vum Mir-24 zu gastric Kriibs (GC). VerfÜgung Method VerfÜgung Den Ausdrock vun Mir-24 zu GC Stoffer Verglach mat reagéiert Net-entholl Stoffer an GC Zellen vun qRT-Hinnen alleguer festgestallt gouf. Synthetesch kuerz eenzel oder duebel gekëmmert RNS oligonucleotides an lentiviral vectors sech benotzt Mir-24 Ausdrock am GC Zellen ze regléieren hir Funktioun am kënschtlech VerfÜgung ze ermëttelen an zu VIVO VerfÜgung. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Mir-24 war vill am GC Stoffer downregulated Verglach mat reagéiert Net-entholl Stoffer a war mat entholl dat assoziéiert. Ectopic Ausdrock vu Mir-24 zu SGC-7901 GC Zellen Trupen Zell Prolifératioun, Migratioun an Invasioun kënschtlech VerfÜgung souwéi tumorigenicity zu VIVO VerfÜgung vun Zell Zyklus verhaft Pinguin an G0 /G1 Phase an Spur Zell apoptosis. Ausserdeem, mir RegIV wéi engem Zil vu Mir-24 identifizéiert a bewisen, dass Mir-24 RegIV Ausdrock reegelen via seng 3 'untranslated Regioun bindend. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung Mir-24 Funktiounen als Roman entholl suppressor am GC an der anti -oncogenic Aktivitéit seng inhibition vun der Zil- Gentherapie RegIV Debate kann. Dës Conclusiounen proposéiere d'Méiglechkeet fir Mir-24 als eng therapeutesch Zilscheif vun GC. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Mir-24 RegIV Gastric Kriibs prolifération Missiounen Metastasen Background VerfÜgung Gastric Kriibs (GC) ass eent vun de meescht gemeinsam mënschlech Cancers. Obwuel d'Heefegkeet an veruerteelt weltwäit iwwer de leschten 20 Joer ofgeholl hunn, verléiert GC nach als déi véiert stäerkste gemeinsam an d'zweet Équipe spektakulärer Kriibs weltwäit [1]. Obwuel Fuerschung zu GC grouss Fortschrëtter gemaach huet, hunn d'molekulare Mechanismen Basisdaten GC nach net vollstänneg opgekläert ginn. VerfÜgung MicroRNAs (miRNAs) si kleng noncoding, double-gekëmmert RNS Molekülle datt den Ausdrock vun Zil- Genen vun beaflossen de post- well kann transcriptional Prozesser Gene Ausdrock Regulatioun. miRNAs unerkennen Zil- mRNAs baséiert op komplett oder onkomplett Haaptrei complementarity an der Produktioun vun FAQ verhënneren fir d'3 'untranslated Regioun (UTR) oder déi oppen liesen Rumm (ORF) vun Zil- mRNA vun bindend [2, 3]. miRNAs gewiescht bewisen zu bewosst Prolifératioun an dat Prozesser ze fonktionnéieren, dorënner de epithelial-mesenchymal Transitioun [4] an endodermal dat vun mënschlech embryonal Stammzellen [5]. Nieft allgemenge bewosst Funktiounen vun miRNA, dës Molekülle Leeschtung och wichteg Roll an enger Rei vu erhéigen. Multiple Studien hun gewisen dass d'misregulation vun miRNAs mat Kriibs Zesummenhang ass [6, 7], an deem si hir Aarbecht entweder oncogenes oder entholl suppressors. miRNAs muss gemellt ginn zu Fouss Servicer sinn Leukämie, Broscht Kriibs, Net-kleng Zell haett carcinoma, hepatocellular carcinoma, Colon Kriibs, GC an aner Cancers [8-13] Équipe ze ginn. Overexpression oder downregulation vun miRNAs féiert zu enger Diversifizéierung vun FAQ Ausdrock, also bis tumorigenesis Contributioun vun modulating Prolifératioun, angiogenesis an Invasioun. Fuerscher hunn erausfonnt, datt Ausdrock miRNA Profiler benotzt ka mënschlech Cancers ze klassifizéieren, an dat fannen fir de Gebrauch vun Messenger RNS Profiler fir Klassifikatioun vun Pro ënnerscheet erhéijen Welpen war [14, 15]. VerfÜgung Aberrant Ausdrock vu spezifesche miRNAs am GC ass virdru gemellt a gouf mat de Werdegang an hätt vun GC soll [16-18]. Mir hunn virdrun dass Mir-24, déi als entholl suppressor duerch eng gezielte Site polymorphism déngen kann [19], eng bedeitend downregulated miRNA am GC Zellen an Stoffer Verglach mat Net-entholl Stoffer war. An dëser Etude, analyséiert mir Mir-24 Ausdrock Niveauen am GC Stoffer Verglach mat Net-entholl Stoffer reagéiert, an évaluéieren kennenzeléieren tëscht Mir-24 Niveau an clinicopathologic Parameteren. Mir Uschléi Afloss vun overexpression vum Mir-24 op de Wuesstem an apoptosis vun SGC-7901 GC Zellen souwuel kënschtlech VerfÜgung an VIVO VerfÜgung. Mir sech och déi biologesch Wierkung vun downregulation vum Mir-24 Ausdrock op GC Zellen. Ausserdeem, identifizéiert mir RegIV (islet-ofgeleet Famill regeneréiert, Member 4) als ee vun der Zil- Genen vun Mir-24. Mir hypothesize dass Mir-24 der Invasioun an Metastasen vun GC Zellen duerch direkt gezielt RegIV Gentherapie regléieren kann. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Overexpression vum Mir-24 GC Zell Prolifératioun bremst VerfÜgung den Ausdrock vun Mir-24 ze wëssen an GC, grouss ass real-Zäit RT-Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) war gesuergt. Ausdrock vun Mir-24 war an néng GC Zell Linnen am Verglach mat der och normal gastric mucosal epithelial Zell GES-1 (Dorënner 1A) allgemeng downregulated. Ausdrock vun Mir-24 war weider mat qRT-Hinnen alleguer zu entholl Stoffer iwwerpréift an Net-entholl Stoffer aus 63 GC Patienten (Dorënner 1B) iwwereneestëmmen. D'Moyenne Ausdrock Niveau vum Mir-24 war am entholl Stoffer Verglach zu reagéiert Net-entholl Stoffer (Dorënner 1c) bedeitend downregulated. Zesumme, gëtt dës Resultater staarke Beweis datt Mir-24 bedeitend an GC downregulated war. Figur 1 Mir-24 ass vill an GC downregulated an inhibited SGC-7901 Zell Wuesstem. (A) famill Ausdrock vu Mir-24 an néng GC Zell Linnen Verglach mat GES-1 sech duerch qRT-Hinnen alleguer vun dräi onofhängeg Experimenter (** P &Si besteet; 0,01, *** P &Si besteet; 0.001). (B) famill Ausdrock vu Mir-24 an chirurgesch uplanzen vun 63 GC sech duerch qRT-Hinnen alleguer. All Experiment an triplicate gesuergt. Date sinn als -ΔΔCT Wäerter gewisen, S.D. net gewisen. (C) D'heeschen an Liewesniveau deviation vum Mir-24 Ausdrock Niveauen an chirurgesch uplanzen vun 63 GC Stoffer a reagéiert Net-entholl Stoffer sinn gewisen. Date sinn den 2-ΔCT Wäerter virgestallt (** P &Si besteet; 0,05). U6 snRNA war fir normalization benotzt. (D) Mir-24 inhibited de Wuesstem vun SGC-7901 Zellen als vun WST fonnt, iwwerdeems anti-Mir-24 Zell Wuesstem fräi (* P &Si besteet; 0,05). Date sinn als mengen ± S.D. dës vun dräi onofhängeg Experimenter. VerfÜgung Mir iwwerpréift nächst der kennenzeléieren tëscht Ausdrock Niveau vum Mir-24 an clinicopathologic Facteuren zu Mënsch GC. De Medeziner a pathologic Charakteristiken vun 63 GC Patienten an Table gëtt si 1. Baséierend op relativ Ausdrock nennen vum Mir-24 /U6 = 1, huet de Fäll an zwou Gruppen agedeelt: d'Mir-24 héich-Ausdrock Grupp (n = 29) an der Mir-24 niddereg-Ausdrock Grupp (n = 34). De Mir-24 niddereg-Ausdrock Grupp Schatzkummer wesentlech méi entholl dat (P = 0.021). Allerdéngs huet de Bord-24 Ausdrock Niveau weisen keng Relatioun mam Alter, Geschlecht, entholl Site, d'Déift vun lokal Invasioun, lymph Node Metastasen, oder TNM stage.Table 1 Bezéiung tëscht Mir-24 Ausdrock Niveau an clinicopathologic Verännerlechen zu 63 GC Patienten VerfÜgung Clinicopathologic Parameteren VerfÜgung Mir-24 Ausdrock
P Wäert
High VerfÜgung (n = 29)
Low (n = 34)
zu Geschlecht
Männlech VerfÜgung 17 zu 21 VerfÜgung 0,799 VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 12 zu 13 VerfÜgung Alter (Joer)
&Si besteet; 60 zu 15 zu 18 VerfÜgung 0,923 VerfÜgung ≥60 VerfÜgung 14 zu 16 VerfÜgung entholl Standuert
Distal drëtt VerfÜgung 8 VerfÜgung 8
0,310 VerfÜgung Middle drëtt VerfÜgung 6 VerfÜgung 13 VerfÜgung Proximal drëtt VerfÜgung 15 zu 13 VerfÜgung DÉI Klassifikatioun
Adenocarcinoma VerfÜgung 25 zu 28
0,155 VerfÜgung Signet-Ring Zell carcinoma VerfÜgung 1 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung Mucinous adenocarcinoma VerfÜgung 3 VerfÜgung 1 VerfÜgung dat
Majo, mëttelméisseg VerfÜgung 15
8 VerfÜgung 0,021 VerfÜgung LINN VerfÜgung 14 zu 26 VerfÜgung Borrmann Klassifikatioun
ech /II VerfÜgung 11 zu 12 VerfÜgung 0,828 VerfÜgung III /IV VerfÜgung 18 zu 22 VerfÜgung lokal Invasioun
T1 /T2 VerfÜgung 1 VerfÜgung 7 VerfÜgung 0,098 VerfÜgung T3 /T4 VerfÜgung 28 zu 27
Lymph Node Metastasen VerfÜgung Nee
23 zu 30 VerfÜgung wäit Metastasen VerfÜgung Nee
28 zu 31 VerfÜgung 0,724 VerfÜgung Jo VerfÜgung 1 VerfÜgung 3 VerfÜgung TNM Etapp
ech /II VerfÜgung 7 VerfÜgung 8 VerfÜgung 0,955 VerfÜgung III /IV VerfÜgung 22 zu 26 VerfÜgung fir d'biologesch Funktioun vum mir-24 an Entwécklung an Werdegang vun GC ermëttelen, mir transfected SGC-7901 Zellen mat mir-24 mimics (SGC-7901 /mir-24) oder Mir-24 inhibitor (SGC-7901 /anti-Mir-24). Als zu Weider Fichier dës 1: Dorënner S1A an S1B, ausgewielt mir 100 nm als Bauland Konzentratioun zu Kierzunge Experimenter. Ectopic Ausdrock vu Mir-24 zu SGC-7901 Zellen war vun qRT-Hinnen alleguer confirméiert. Next, iwwerpréift mir Zell Prolifératioun vun WST assay. Overexpression vum Mir-24 inhibited den Taux vun SGC-7901 Zellen am Verglach mat Mir-Kontroll transfected Zellen (P &Si besteet; 0,05), wobäi anti-Mir-24 Zell Wuesstem Aktivitéiten fräi (P &Si besteet; 0,05, well 1D).
Overexpression vum mir-24 bremst d'Wanderung an Invasioun vun GC Zellen VerfÜgung Next mir den Effet vum mir-24 op Zell Wanderung an Invasioun an GC bewäert. Zell Wanderung an Invasioun assays zougedréckt datt overexpression vum Mir-24 Trupen Zell Migratioun (SGC-7901 /Mir-24 Grupp, 63,0 ± 3.6 Zellen pro Terrain; Kontroll Grupp, 126,3 ± 7.0 Zellen pro Terrain; P &Si besteet; 0,05) an Invasioun ( SGC-7901 /Mir-24 Grupp, 34,7 ± 2.1 Zellen pro Terrain; Kontroll Grupp, 63,7 ± 3,5 Zellen pro Terrain; P &Si besteet; 0,05) (Dorënner 2A, B). Am Géigesaz, knockdown vum Mir-24 bedeitend fräi Zell Migratioun (SGC-7901 /anti-Mir-24 Grupp, 182,3 ± 5.0 Zellen pro Terrain; Kontroll Grupp, 105,3 ± 3,8 Zellen pro Terrain; P &Si besteet; 0.01) an Invasioun (SGC -7901 /anti-Mir-24 Grupp, 124,3 ± 3,8 Zellen pro Terrain; Kontroll Grupp, 62,7 ± 2,5 pro Terrain; P &Si besteet; 0.01) (Dorënner 2A, C). Figur 2 Mir-24 inhibited Wanderung an Invasioun vun SGC-7901 Zellen. (A) Vertriederin Felder vun SGC-7901 Zellen am transwell assays. (B, C) Vertriederin Felder vun SGC-7901 Zellen vun der Migratioun an Invasioun assays, bzw.. Duerchschnëttlech Zuel vun Wanderung an Invasioun Zellen pro Terrain aus dräi onofhängeg Experimenter (* P &Si besteet; 0,05, ** P &Si besteet; 0.01). VerfÜgung Overexpression vum Mir-24 ënnerstëtzt d'apoptosis vun GC Zellen an induces Zell Zyklus verhaft an G0 /G1 Phase VerfÜgung Tatsaach datt bewosst Wuesstem observéiert kënne vun den Tariffer vun apoptosis an Zell Zyklus Werdegang betraff sinn, iwwerpréift mir d'Effete vun mir-24 op apoptosis an Zell Zyklus vun VIVO VerfÜgung duerch onkontrolléiert cytometry. Mir hu fonnt, datt ronn 12-15% vun SGC-7901 /Mir-24 Zellen morphologic Fonctiounen typesch vun apoptosis Schatzkummer, dorënner kondenséiert chromatin an nuklear véiermol vun Hoechst33342 staining fir DNA Inhalt. Am Géigesaz, no an SGC-7901 Zellen fir de rare spontan apoptosis Comptabilitéit, de SGC-7901 /anti-Mir-24 group show huet keng bedeitendst Ännerungen vun Hoechst33342 staining (Dorënner 3A). Flow cytometry gewisen, datt d'apoptotic Taux war wesentlech méi an SGC-7901 /Mir-24 Zellen am Verglach mat Kontroll Zellen (13.62% ± 1,25% vs. 6,15% ± 0,95%, respektiv; P &Si besteet; 0.01), an erofgaangen bedeitend an SGC -7901 /anti-Mir-24 Verglach mat Kontrollen (3.92% ± 0,52% vs. 6,35% ± 0,83%, respektiv; P &Si besteet; 0,05). (d'Grondidee 3B, d) VerfÜgung fir weider de Mechanismus vun miR- entschlësselen 24-mediated Wuesstem inhibition vun GC Zellen, Zell Zyklus Analyse war gesuergt (Dorënner 3C, E). Beim upregulation vum Mir-24, de Prozentsaz vun den Zellen an G0 /G1 Phase fräi vun 40,51% ± 3,15% an Kontrollen op 72,24% ± 3,65% (P &Si besteet; 0.01), während knockdown Mir-24 de Prozentsaz vun Zellen an G0 reduzéiert /G1 Phase vun 42,35% ± 2,78% an Kontrollen op 30,25% ± 1,25% (P &Si besteet; 0,05). Figur 3 Mir-24 entschlof Zell apoptosis an G0 /G1 Zell Zyklus verhaft. (A) Vertriederin histograms nuklear Wirklechkeet vun SGC-7901 Zellen transiently transfected mat 100 nm Mir-24 mimics oder inhibitor an hir jeeweileg Kontrollen (Hoechst33342 staining, original Vergréisserung 400 ×) alldeegleche Liewen. (B) Vertriederin histograms alldeegleche apoptosis vun SGC-7901 Zellen transiently transfected mat 100 nm Mir-24 mimics oder inhibitor an hir jeeweileg Kontrollen. (C) Vertriederin histograms alldeegleche Zell Zyklus vun SGC-7901 Zellen transiently transfected mat 100 nm Mir-24 mimics oder inhibitor an hir jeeweileg Kontrollen. (D, E) De Prozentsaz vun apoptotic an G0 /G1 Phase Zellen vun dräi onofhängeg Experimenter, mengen ± S.D. (* P &Si besteet; 0,05, ** P &Si besteet; 0.01). VerfÜgung RegIV ass eng Zilscheif Gentherapie vum Mir-24 VerfÜgung Fir méi enk de Mechanisme vum Mir-24 zu GC iwwerpréifen, mir fir Kandidat Zil- Genen gesichte vun Bioinformatik. TargetScan, miRBase Tatget an StarBase sech fir potentiell Ziler vum Mir-24 bis Sich applizéiert. Ënnert der virausgesot Ziler, war RegIV als eent vun den Zil- Genen vun Mir-24 identifizéiert, a mir bestëmmt eng potentiell Mir-24 bindend Site bannent seng 3'UTR (Dorënner 4A). Next, iwwerpréift mir den Ausdrock vun RegIV an néng GC Zellen an GES-1. Mir hu fonnt, datt RegIV an néng GC Zellen am Verglach mat GES-1 overexpressed war, an Schatzkummer en ëmgedréit, et gesäit Ausdrock Muster Verglach mat Mir-24 (Zousätzleche Fichier 2: Dorënner S2A an S2B). Ze ermëttelen, ob d'3'UTR vun RegIV mRNA engem funktionell Zil vum Mir-24 war, huet luciferase reporter Gentherapie assays gesuergt. Mir bewäert éischt d'Aktivitéit vum Mir-24 (oder Mir-Kontroll) Co-transfected an SGC-7901 Zellen mat Luc-RegIV plasmid oder de Luc-RegIV-Mut plasmid (zu deem de putative Mir-24 bindend Site war mutated), zesumme mat der Praxis-TkLanguage plasmid der Renilla luciferase Gentherapie wéi eng intern Kontroll (Dorënner 4B) mat. Zellen bewisen Co-transfected mat Mir-24 e groussen Verloscht vun luciferase Aktivitéit am Verglach mat der Raumstatioun-Kontroll Grupp (P &Si besteet; 0,05). Allerdéngs Mir-24 Co-transfected mat de Luc-RegIV-Mut plasmid kee groussen Ënnerscheed zu reporter Aktivitéit zougedréckt Verglach mat Zellen Co-transfected mat Mir-Kontroll. Anerersäits, fräi anti-Mir-24 der luciferase Aktivitéit vu Wëllschwäin-Typ Luc-RegIV, mä hat keen Effekt op Luc-RegIV-Mut plasmid (Dorënner 4C; P &Si besteet; 0,05). Mir standing och luciferase reporter Gentherapie assays zu SNU-16 vum Afloss vun endogenous Mir-24 ze minimiséieren. Um éischten, ectopic Ausdrock vu Mir-24 zu SNU-16 Zellen war vun qRT-Hinnen alleguer confirméiert. Ausdrock vun Mir-24 mat Mir-24 mimics transfected war iwwer 50 Mol méi héich wéi déi vun Mir-Kontroll Grupp vun SNU-16 (P &Si besteet; 0.01), iwwerdeems keng statistesch Ënnerscheed mat der transfection vun Anti-Mir-24 (Zousätzleche Fichier 3: Dorënner S3A). Zellen Co-transfected mat Mir-24 bewisen, e groussen Verloscht vun luciferase Aktivitéit am Verglach mat der Raumstatioun-Kontroll Grupp (P &Si besteet; 0.001), iwwerdeems keng statistesch Ënnerscheed mat anti-Mir-24 transfection (Zousätzleche Fichier 3: Dorënner S3B an S3C) . Dës Resultater uginn staark, dass d'3'UTR vun RegIV direkt bindend Siten fir Mir-24 enthält. Figur 4 Mir-24 geziilte der 3'UTR vun RegIV Gentherapie an immunostaining vun RegIV zu gastric Stoffer. (A) Sënn Grafik vun der putative bindend Siten vum Mir-24 an d'RegIV 3'UTR. RegIV-Mut beweist de RegIV-3'UTR mat stattfannen an Mir-24-verbindlech Siten. (B) Mir-24 mimics downregulated Aktivitéit vun engem luciferase Rapporteur mat Wëld-Typ RegIV 3'UTR (* P &Si besteet; 0,05), mee net de Rapporteur mat Mann- RegIV 3'UTR. (C) Anti-Mir-24 fräi luciferase Aktivitéit vu Wëllschwäin-Typ Luc-RegIV (* P &Si besteet; 0,05), mee hu keen Effet op d'Mann-. (D) Forty--aacht Stonnen nom Mir-24 rescht a Kontroll transfection vun SGC-7901 Zellen, war d'FAQ Niveau vun RegIV vill mat der Raumstatioun-Kontroll erofgaangen am Verglach wéi vun Elisa alles. Anti-Mir-24 fräi Meenungsäusserung vun RegIV Verglach mat der anti-Mir-Kontroll (* P &Si besteet; 0,05, ** P &Si besteet; 0.01). (E) Twenty-véier Stonnen nom Mir-24 rescht oder inhibitor an de respektiven Kontroll transfection zu SGC-7901 Zellen, gouf et keen Ënnerscheed zu de mRNA Niveau vun RegIV Verglach mat der Raumstatioun-Kontroll alles esou duerch qRT-Hinnen alleguer (P > 0,05). Date sinn als mengen ± S.D. dës vun dräi onofhängeg Experimenter. (F) Keen Ausdrock vun RegIV war zu normal gastric mucosa fonnt. (G) RegIV war zu intestinal metaplasia vun Mo. ausgedréckt. (H) Strong Ausdrock vun RegIV war zu gastric signet-Ring Zell carcinoma observéiert. VerfÜgung Next mir iwwerpréift Mir-24 Regulatioun vun RegIV mRNA an FAQ Niveauen am transfected SGC-7901 Zellen. Elisa Analyse gewisen, datt RegIV FAQ Niveauen an daitlech opgeléist goufen SGC-7901 /Mir-24 Zellen, am Ufank RegIV FAQ Niveauen am SGC-7901 /anti-Mir-24 Zellen (Dorënner 4D upregulated goufen; * P &Si besteet; 0,05, ** P &Si besteet; 0.01). qRT-Hinnen alleguer Analyse uginn keen Ënnerscheed an de Niveau vun RegIV mRNA zu all transfected Zell Gruppen (Dorënner 4E; P > 0,05). Mëttlerweil, nogewise mir den Ausdrock vun c-MYC am GC Zellen als positive Kontroll transfected mat Mir-24 [20]. Mir hu fonnt, datt Mir-24 downregulated RegIV an c-MYC (Zousätzleche Fichier 4: Dorënner S4A an S4B). VerfÜgung virdrun Etuden bewisen, dass RegIV mat Prolifératioun an Metastasen vun GC verbonne war. Mir benotzt nächst immunohistochemical Analyse vum Ausdrock vun RegIV am GC ze diskutéieren. Eis Conclusiounen bestätegt overexpression vun RegIV am GC. D'FAQ Niveau vun RegIV zu normal gastric mucosa niddreg wéi intestinal metaplasia vun Mo. an gastric signet-Ring Zell carcinoma (Dorënner 4F-H). Fir de Medeziner Relevanz vun dëse Conclusiounen bewäerten, iwwerpréift mir d'Korrelatioun tëscht der Ausstralung vun RegIV an Mir-24 zu GC Stoffer. Mir hu fonnt, datt RegIV an Mir-24 an ëmgedréit, et gesäit Ausdrock Muster am GC Stoffer (Table 2) Schatzkummer. Dës Resultater Ënnerstëtzung der Notioun dass downregulation vum Mir-24 schéinen fräi FAQ Niveau vun RegIV zu GC.Table 2 RegIV an Mir-24 Collectioun ëmgedréit, et gesäit Ausdrock Muster am GC
Mir-24 Ausdrock
P Wäert
Low
High
Reg IV (IHC) VerfÜgung Negativ VerfÜgung 9 VerfÜgung 16 VerfÜgung 0,038 * VerfÜgung positiv VerfÜgung 25 zu 13 VerfÜgung * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 considéréiert gouf statistesch relevant VerfÜgung Overexpression vum Mir-24 bremst tumorigenicity zu VIVO Bezug VerfÜgung dass Mir-24 vum verbessert. Prolifératioun vu GC Zellen kënschtlech VerfÜgung, mir iwwerpréift ob mir-24 tumorigenicity Afloss konnt an VIVO VerfÜgung. Aen do-mediated SGC-7901 /Mir-24 an SGC-7901 /Mir-Kontroll stabil Zell Linnen kritt huet an déi Methoden Rubrik ëmschriwwen. SGC-7901 /RV-Mir-24 an SGC-7901 /RV-Mir-Kontroll Zellen sech subcutaneously an véier-Woch-alen Mann Sauna Mais, an entholl Opstellung iwwerwaacht war heijen. Erhéijen gewuess lues an der SGC-7901 /RV-Mir-24 Grupp wéi déi vun der SGC-7901 /RV-Mir-Kontroll Grupp (Dorënner 5A). D'Moyenne entholl Volumen am Mais mat SGC-7901 /RV-Mir-24 Zellen am Dag 28 war wiesentlech méi kleng inoculated Verglach zu Mais inoculated mat SGC-7901 /RV-Mir-Kontroll Zellen (397.45 ± 93,07 mm 3 vs. 1083,56 ± 101,56 mm 3, bzw.) (Dorënner 5B an C; P &Si besteet; 0,05). Figur 5 Mir-24 inhibited tumorigenicity an Prolifératioun vun VIVO. (A) däcidäiert vun ofgeleet erhéijen vum RV-Mir-24 oder RV-Mir-Kontroll Zellen an Sauna Mais. (B) Wuesstem Kinetik vun erhéijen an Sauna Mais. Entholl Duerchmiesser huet all 7 Deeg gemooss. De Volume vun der Sauna Mais vun Baren uginn, S.D. (* P &Si besteet; 0,05). (C) D'Moyenne Gewiicht vun erhéijen an Sauna Mais. Date sinn dës als Mëttel ± S.D. (* P &Si besteet; 0,05). (D) Vertriederin Fotoen vun immunohistochemical Analyse vun Ki-67 antigen zu erhéijen vun Sauna Mais (Original Vergréisserung, 200 ×). (E) Vertriederin proliferative Index vun erhéijen an RV-Mir-24 a RV-Mir-Kontroll Sauna Mais. Date sinn dës als Mëttel ± S.D. (** P &Si besteet; 0,05). (F) Expression Niveau vun RegIV zu entholl Stoffer vun Sauna Mais. Date sinn dës als Mëttel ± S.D. (* P &Si besteet; 0,05). (G) Expression Niveau vun RegIV mRNA zu entholl Stoffer vun Sauna Mais (P > 0,05). Date sinn als mengen ± S.D. dës vun dräi onofhängeg Experimenter. VerfÜgung ob inhibition entholl Wuesstem zu SGC-7901 /RV-Mir-24 Zellen wéinst dem Ophiewe vun Prolifératioun war deelweis ze bewäerten, immunohistochemical Analysë vun entholl Stoffer goufen gesuergt. Als mat Ki-67 antigen staining gewisen, déi vun der overexpression vum Mir-24 ëmmer d'Verréngerung entholl Wuesstem zu Mais mat SGC-7901 heijen /RV-Mir-24 Zellen ginn deelweis manner Prolifératioun wéinst kann. De Prozentsaz vun Ki-67-antigen-positiv Zellen war an der entholl ënneschten ofgeleet vun SGC-7901 /RV-Mir-24 Zellen wéi d'entholl ofgeleet vun SGC-7901 /RV-Mir-Kontroll Zellen (37.1% ± 3.6% vs . 79,5% ± 5.2%, respektiv) (Dorënner 5D an E; P &Si besteet; 0.01). Den Ausdrock Niveau vun RegIV wéi vun Elisa alles méi niddreg am entholl vun Zellen ofgeleet overexpressing Mir-24 wéi aus Kontroll Zellen ofgeleet entholl (1.77 ± 0,15 Dummeldéng /ml zu SGC-7901 /RV-Mir-24 vs. 3,13 ± 0,25 Dummeldéng /ml zu SGC-7901 /RV-Mir-Kontroll) (Dorënner 5F; P &Si besteet; 0,05). Allerdéngs war et kee statistesch Differenz an der famill Ausdrock vun RegIV mRNA (Dorënner 5G). Dofir, goufen d'tumorigenicity vun SGC-7901 /RV-Mir-24 Zellen bedeitend reduzéiert an VIVO VerfÜgung. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung aktueller Beweiser huet fir miRNAs wichteg Rollen ënnerstëtzt, déi entweder als entholl suppressors oder oncogenes Akt, an GC [21-23]. Ausserdeem hu vill miRNAs gouf therapeutesch Potential ze weise gewisen. Well vun hirer Funktioun als Meeschter Reglementatioun vum Daniel Nepgen a Roman Mechanismus vun Aktiounen, miRNAs sinn eng villverspriechend Technologie fir therapeutesch Entwécklung [24] considéréiert. Mir-26A huet antitumorigenic Eegeschaften a Potential therapeutesch Déngscht fir Liewer Kriibs kënschtlech VerfÜgung an VIVO VerfÜgung, a war mat rapid an nohalteg inhibition vun Kriibs Zell Prolifératioun an héich spezifesch Aféierungs- vun entholl Zell Doud [25] assoziéiert. Déi spezifesch Mechanismus vun de Rollen vun dysregulated miRNAs zu gastric carcinogenesis bleift Synch. VerfÜgung An dëser Etude, mir der inhibitory Auswierkunge vum Mir-24 op entholl Metastasen um Medeziner, bewosst a molekulare Niveau an eng experimentell Déier Modell bewisen. Mir gëtt detailléiert mechanistic experimentéierte Beweis fir d'Roll vum Mir-24 zu GC vun den Ausdrock vun RegIV suppressing. Studien weisen, dass Mir-24 kënnen als oncogene zu malignant effusions Akt [26], mëndlech carcinoma [27, 28], Aarbecht Kriibs [3] an haett Kriibs [29, 30], mee kann als entholl suppressor vun Colon Kriibs [Akt ,,,0],19] an retinoblastoma erhéijen [31]. Lal Eng et al. fonnt dass Mir-24 inhibited Zell Prolifératioun an Zyklus Werdegang Zell vun den Ausdrock vun E2F2, MYC an aner Zell Zyklus reglementaresche Genen vun verbindlech bis "seedless" 3'UTR miRNA Unerkennung Elementer [20] suppressing. Wu J. et al. confirméiert datt transfection vum Mir-24 an GC Zellen den Ausdrock vun AE1 FAQ reduzéiert, déi zu inhibiting bewosst Prolifératioun schéinen [32]. Allerdéngs, d'komplett Basisdaten Mechanismen fir Mir-24 zu GC sinn nach net kloer. VerfÜgung Eis Rapport identifizéiert Mir-24 als Kandidat entholl suppressor am GC. Mir fonnt downregulation vum Mir-24 Ausdrock souwuel am GC Stoffer an Zell Linnen. Overexpression vum Mir-24 zu SGC-7901 GC Zellen bedeitend reduzéiert Prolifératioun an Invasioun souwuel kënschtlech VerfÜgung an VIVO VerfÜgung, demaskéierte d'Potential therapeutesch Wierkung vum Mir-24 zu GC. Déi entgéintgesate Resultat kritt huet, wann de Wëllen vum Mir-24 vun Anti-Mir-24 inhibited war. Zesumme dës Resultater hindeit, datt Mir-24 als entholl suppressor zu Mënsch GC Funktioun kënnen. VerfÜgung miRNAs kruet zu Rëss vun Zil- mRNAs oder inhibition vun hire Iwwersetzung op perfekt oder bruëcht ergänzen "Som" Message vun Zil- mRNAs, Virwaat [33] . An dëser Etude, identifizéiert mir RegIV als Zil Gentherapie vum Mir-24. Mir-24 annerem mat onkomplett complementarity zu RegIV mRNA geplatzt an direkter respektiv inhibition vun RegIV mRNA mä mat keen Effekt op Punkto mRNA Stabilitéit. Wéi de verschiddenen Aktiounen Verkéiersmëttel vun miRNA, Mir-24 Afloss rauszesichen der mRNA Niveau vun RegIV mä de respektiv inhibition. RegIV ass e Member vun der mënschlecher Reg Gentherapie Famill, déi Haaptrei Ähnlechkeet mat der rechnen-verbindlech Domän vun C-Typ lectins deelt, a war éischter isoléiert a mënschlechen demagogesch bowel Krankheet charakteriséiert [34]. RegIV ass een Typ vun secreted Proteinen, a spillt eng biologesch Roll op der extracellular secreted Proteinen je, sou datt mir Elisa wéi eng Method léifste erkennen huet. Western blot war och d'FAQ Niveau vun RegIV standing ze validéieren, a mir kritt der ähnleche Resultater. Virdrun Studien hu bericht, dass den RegIV Gentherapie dacks am GC war overexpressed an as potenziell zu Invasioun, Metastasen Équipe, an carcinogenesis vun GC. RegIV Ausdrock war zu noncancerous Stoffer Judoka limitéiert [35, 36]. RegIV Ausdrock Ofstand héich an Patienten mat peritoneal Metastasen Verglach zu deenen ouni peritoneal Metastasen. RegIV kéint peritoneal Metastasen am GC an Niveauen an lavage Flëssegkeeten Boost als eng gutt ofgerëselt fir peritoneal Metastasen déngen kéinten [37-39]. RegIV als serum uweist fir GC Patienten Funktioun kënnen an bremst 5-FU-entschlof apoptosis vun Aféierungs- vun BCL-2 an dihydropyrimidine dehydrogenase [40]. VerfÜgung An der aktueller Etude, mir identifizéiert Mir-24 als potentiell Offloss regulator vun RegIV. Éischt, overexpression vum Mir-24 erofgaangen d'Aktivitéit vun enger luciferase reporter Gentherapie der 3'UTR vun RegIV, iwwerdeems stattfannen vun der "Som Regioun" Siten an der 3'UTR vun RegIV ofgeschaf de reglementaresche Effet vum Mir-24 mat. Déi entgéintgesate Resultat kritt huet, wou mir anti-Mir-24 gebraucht. Zweet, ausgedréckt Mënsch GC Stoffer wesentlech méi Niveaue vu Mir-24 wéi Net-entholl Stoffer, iwwerdeems GC Stoffer wéi Stoffer Net-entholl bedeitend méi héich Niveauen vun RegIV FAQ enthalen. Drëtt, overexpression vum Mir-24 downregulated RegIV op d'FAQ Niveau, iwwerdeems downregulation vum Mir-24 RegIV FAQ fräi. Véiert, overexpression vum Mir-24 war vill mat Prolifératioun an Metastasen ze dinn, eng funktionell iwwerlageren mat RegIV ugëtt. All dës Resultater weisen, datt RegIV kéint eng direkt uschwätzt Gentherapie vum Mir-24 zu GC gin. VerfÜgung Carcinogenesis enger Serie vu mi Evenementer ass, dorënner huele wëllt, Migratioun, lokal Invasioun, angiogenesis, intravasation, Iwwerliewe vun der circulatory System, extravasation an regrowth zu verschidden Organer [41, 42]. Hei weisen mir dat Mir-24 konnten d'carcinogenesis vun GC duerch modulating Prolifératioun, Migratioun a lokal Invasioun regléieren. Doriwwer eraus, seet eis Beweiser d'Méiglechkeet fir Mir-24 als eng therapeutesch Zilscheif vun GC. Weider Studien sinn néideg fir voll den detailléierte Mechanisme vum Mir-24 zu GC carcinogenesis a wéi eng potentiell therapeutesch Approche verstoen. VerfÜgung Method VerfÜgung ethneschen Ausso VerfÜgung Schrëftlech Awëllegung vun all de Bedeelegten gesammelt huet, an studéieren Protokoll gouf guttgeheescht vun der Ethik Comité vun Ruijin Spidol, Shanghai Jiaotong University School vun Medezin. All Maus Experiment vun den Déieren Care (hänktÉ20810) guttgeheescht an Benotzt Comité an am Aklang mat der offizieller Recommandatioune vun der Care an Benotzt schafft Déieren vun Ruijin Spidol, Shanghai Jiaotong University School vun Medezin. VerfÜgung Zell Linnen gehaal
De Mënsch GC Zell Linnen SNU-1, SNU-16, NCI-N87, a Kato III goufen aus American Type Kultur Collection (ATCC) kaaft. D'Zell Linnen SGC-7901, MKN-28, BGC-823, MKN-45, an AGS sech vu Shanghai Institut fir Biologesch Sciences, Chinese Akademie vun de Wëssenschaften kaaft. D'och normal gastric mucosal epithelial Zell Linn (GES-1) war e Cadeau vum Prof. Feng bi (Huaxi Medical University, Chengdu, Effort'en Province, PR China). D'embryonal Nier Zell Linn 293 T war an eiser Labo an haten an Dulbecco d'geännert Eagle d'mëttel- (DMEM) mat 10% An et Bovine serum (FBS) bei 37 ° C an enger humidified Atmosphär mat 5% CO 2 agekacht. All GC Zellen sech cultured zu RPMI 1640 mat 10% FBS zu engem humidified incubator ergänzt mat 5% CO 2 op 37 ° C. VerfÜgung Ray Echantillon VerfÜgung primär Kriibs Stoffer a vläit bascht Net-entholl Stoffer sech gesammelt vu Patienten mat GC mécht radikal gastrectomy am Departement vun befënnt, Ruijin Spidol, Shanghai JIAO Tong University School vun Medezin. Niewendru normal Stoffer goufen iwwer 5 cm aus der Primärschoul Kriibs kritt huet. Ray Echantillon waren direkt an flëssegem Stéckstoff virgezunnen-gefruer an zu engem Frigo bei -80 ° C gespäichert. Stoffer fir immunohistochemistry goufen zu 4% paraformaldehyde an paraffin-Ënnerbewosstsinn fest. Clinicopathological Date goufen iwwerschafft, an TNM Stadium Klassifikatioun baséiert op Critèrë vun American Gemeinsam Comité op Cancer (AJCC, 6. Editioun). All Echantillon sech duerch agebousst Examen ubelaangt. VerfÜgung RNS Isolatioun a qRT-Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS war vun Otemschwieregkeeten Echantillonen an Zell Linnen mat Trizol reagent (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) laut den Hiersteller d'Instruktioune isoléiert. Den Ausdrock Niveau vun miRNAs sech folgend Fabrikant d'Protokoll mat der Hairpin-itTM miRNAs qPCR Quantitation Kit (GenePharma, Shanghai, PR China) bewäert. D'U6 klengen Nuklearsécherheet RNS (RNU6B; GenePharma) war fir normalization benotzt. Der relativer Ausdrock Verhältnis vu Mir-24 vun all vläit entholl an Net-entholl Otemschwieregkeeten war den 2 -ΔΔCT Method berechent benotzt. De Mir-24 Ausdrock Niveau war wéi upregulated definéiert, wou d'famill Ausdrock Verhältnis war > 1, an als downregulated definéiert, wou d'famill Ausdrock Verhältnis war &Si besteet; 1. All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Gastric versus Post-pyloric erofzesetzen: eng systematesch review
• Déngscht vun intranasal Ketamine an Midazolam gastric aspirates vun Kanner ze maachen: en double-blann, Placebo, zoufälleg study