Tumor supresor de miR-24 frena la progresión del cáncer gástrico mediante la regulación negativa RegIV

Tumor supresor de miR-24 frena la progresión del cáncer gástrico mediante la regulación negativa RegIV
Resumen Antecedentes

microARN son pequeños ARN no codificantes que modulan una variedad de procesos celulares mediante la regulación de múltiples objetivos, que puede promover o inhibir el desarrollo de conductas malignas . La evidencia acumulada sugiere miR-24 juega un papel importante en la carcinogénesis humana. Sin embargo, su función biológica exacta sigue siendo en gran medida difícil de alcanzar. Este estudio examinó el papel de miR-24 en el cáncer gástrico (CG).
Métodos
La expresión de miR-24 en tejidos GC en comparación con los tejidos no tumorales y las células coincidentes GC fue detectado por QRT-PCR. Synthetic oligonucleótidos de ARN cortas cadena sencilla o doble y vectores lentivirales se utilizaron para regular miR-24 expresión en células de GC para investigar su función in vitro y in vivo

.
Resultados
miR-24 fue significativamente downregulated en los tejidos de GC en comparación con los tejidos no tumorales emparejados y se asoció con la diferenciación del tumor. La expresión ectópica de miR-24 en las células GC SGC-7901 suprimió la proliferación celular, la migración y la invasión in vitro
, así como tumorigenicidad in vivo
mediante la inducción de la detención del ciclo celular en la fase G0 /G1 y promoción de la apoptosis celular. Por otra parte, hemos identificado RegIV como un objetivo de miR-24 y demostró que el miR-24 regula la expresión RegIV a través de su unión a la región no traducida 3 '.
Conclusiones
miR-24 funciona como una novela supresor tumoral en el GC y el anti -oncogenic actividad puede implicar la inhibición del gen diana RegIV. Estos hallazgos sugieren la posibilidad de que el miR-24 como diana terapéutica en el GC.
Palabras clave
miR-24 RegIV cáncer gástrico Proliferación la invasión de metástasis Antecedentes
cáncer gástrico (CG) es uno de los cánceres más comunes en humanos. Aunque la incidencia y la mortalidad han disminuido en todo el mundo durante los últimos 20 años, GC aún se ubica como el cuarto más común y el segundo cáncer más letal en todo el mundo [1]. Aunque la investigación en el GC ha hecho grandes progresos, los mecanismos moleculares que subyacen GC aún no han sido completamente aclarada.
Los microARN (miRNA) son pequeñas moléculas no codificantes, ARN de doble cadena que pueden modular la expresión de genes objetivo de influir en el post los procesos de transcripción que regulan la expresión génica. miRNAs reconocen mRNAs diana, según completo o incompleto complementariedad de secuencia y evitar la producción de proteínas mediante la unión a la región 3 'no traducida (UTR) o el marco de lectura abierto (ORF) de ARNm objetivo [2, 3]. miRNAs se han demostrado para funcionar en los procesos de proliferación y diferenciación celular, incluyendo la transición epitelial-mesenquimal [4] y la diferenciación endodérmico de las células madre de embriones humanos [5]. Además de las funciones celulares generales de miARN, estas moléculas también juegan un papel importante en una variedad de enfermedades humanas. Múltiples estudios han demostrado que la regulación deficiente de miRNAs está relacionada con el cáncer [6, 7], en el que funcionan ya sea como oncogenes o supresores tumorales. Se han reportado miRNAs estar implicado en la leucemia mieloide aguda, cáncer de mama, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, carcinoma hepatocelular, cáncer de colon, GC y otros tipos de cáncer [8-13]. La sobreexpresión o regulación a la baja de miRNAs conduce a la diversificación de la expresión de la proteína, por lo tanto, contribuir a la tumorigénesis mediante la modulación de la proliferación, angiogénesis y la invasión. Los investigadores encontraron que los perfiles de expresión de genes miARN se pueden utilizar para clasificar los cánceres humanos, y este hallazgo fue antes de la utilización de perfiles de ARN mensajero para la clasificación de los tumores poco diferenciados [14, 15].
Expresión aberrante de miRNAs específicos de GC ha sido ya se ha informado y se correlaciona con la progresión y pronóstico de GC [16-18]. Hemos determinado anteriormente que miR-24, que puede servir como un supresor de tumores a través de un polimorfismo sitio diana [19], fue un miARN downregulated significativamente en células de GC y los tejidos en comparación con los tejidos no tumorales. En este estudio, se analizaron miR-24 niveles de expresión en tejidos de GC en comparación con los tejidos no tumorales emparejados, y se evaluaron las correlaciones entre el miR-24 y el nivel de parámetros clínico. Se evaluó la influencia de la sobreexpresión de miR-24 en el crecimiento y la apoptosis de SGC-7901 células GC tanto in vitro como in vivo

. También se determinó el efecto biológico de la regulación a la baja de la expresión de miR-24 en las células de GC. Además, hemos identificado RegIV (regeneración familia derivadas de islotes, miembro 4) como uno de los genes diana de miR-24. Nuestra hipótesis es que el miR-24 se puede regular la invasión y metástasis de las células GC apuntando directamente el gen RegIV.
Resultados
La sobreexpresión de miR-24 inhibe la proliferación de células GC
Para explorar la expresión de miR-24 en GC, se realizó cuantitativa en tiempo real RT-PCR (QRT-PCR). La expresión de miR-24 se downregulated generalmente en nueve líneas celulares de GC en comparación con los GES-1 inmortalizadas normales de la mucosa gástrica de células epiteliales (Figura 1A). La expresión de miR-24 se examinó adicionalmente con QRT-PCR en los tejidos tumorales y coincide tejidos no tumorales de 63 pacientes GC (Figura 1B). El nivel medio de expresión de miR-24 se downregulated significativamente en los tejidos tumorales en comparación con tejidos no tumorales emparejados (Figura 1C). En conjunto, estos resultados proporcionan una fuerte evidencia de que el miR-24 fue significativamente downregulated en GC. Figura 1 miR-24 está regulada negativamente de manera significativa en GC y se inhibe el crecimiento celular SGC-7901. (A) expresión relativa de miR-24 en nueve líneas celulares de GC en comparación con GES-1 determinados por qRT-PCR de tres experimentos independientes (** p < 0,01, *** P < 0,001). (B) Expresión relativa de miR-24 en muestras quirúrgicas de 63 GC determinado por QRT-PCR. Todos los experimentos fueron realizados por triplicado. Los datos se muestran como valores -ΔΔCT, S.D. no mostrada. (C) La media y la desviación estándar de miR-24 niveles de expresión en muestras quirúrgicas de 63 tejidos GC y tejidos no tumorales emparejados se muestran. Los datos se presentan como valores 2-Ct (** P < 0,05). U6 snRNA se utilizó para la normalización. (D) miR-24 inhibió el crecimiento de células SGC-7901 como se detecta por WST, mientras que anti-miR-24 aumentó el crecimiento celular (* P < 0,05). Los datos se muestran como media ± S.D. de tres experimentos independientes.
A continuación examinó la correlación entre el nivel de expresión de miR-24 y los factores clínico-patológicos en GC humana. Las características clínicas y patológicas de 63 pacientes GC se proporcionan en la Tabla 1. Sobre la base de las proporciones relativas de expresión de miR-24 /U6 = 1, los casos fueron divididos en dos grupos: el grupo de alta expresión de miR-24 (n = 29) y el grupo de baja expresión de miR-24 (n = 34). El grupo de baja expresión de miR-24 mostró significativamente menor diferenciación tumoral (p = 0,021). Sin embargo, el nivel de expresión de miR-24 no mostró ninguna relación con la edad, sexo, localización tumoral, la profundidad de la invasión local, metástasis a los ganglios linfáticos, o TNM stage.Table 1 Relación entre el nivel de expresión de miR-24 y las variables clínico-patológicas en 63 GC
pacientes parámetros clínico

expresión de miR-24
P valor
alta (n = 29) guía empresas bajo (n = 34)

Sexo Masculino

17
21
0.799
Mujer página 12 página 13
Edad (años)
< 60
15
18
0,923
≥60 página 14
16
tumor Ubicación y mapa distal de terceros 8 página 8
0.310
medio de terceros 6 página 13
proximal de terceros 15 página 13
clasificación de la OMS
Adenocarcinoma
25
28
0,155 carcinoma de células en anillo de sello

1 página 5
adenocarcinoma mucinoso página 3
1

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