Protein Ausdrock Profil vun Gasterophilus intestinalis Larven dauernd Päerd gastric myiasis an characterization vu Päerd immun reaction

Protein Ausdrock Profil vun Gasterophilus intestinalis VerfÜgung Larven dauernd Päerd gastric myiasis an characterization vu Päerd immun Reaktioun VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Little Informatiounen ass op der immunological Aspekt vun parasitic Gasterophilus intestinalis VerfÜgung (Diptera, Oestridae) Larven dauernd Päerd gastric myiasis sinn. D'Ziler vun dëser Fuerschung sech d'FAQ Inhalt vun larval Brutto dovu vun der wanderen zweet an drëtt Larven (L2 an L3) vun G. intestinalis fir d'immun Äntwert vu Päerd zu Markenzeeche VerfÜgung ze analyséieren. VerfÜgung Resultater
D'proteomic Profil vun L2 an L3, ze propagéieren duerch een an zwou Dimensiounen Approche benotzt, Teamchef bei all larval Etapp eng Wanderung Muster spezifesch. Ausserdeem, huet Western blots mat Päerd Sera an mat Sera vun Balb /c Mais mat der larval Brutto dovu vun L2 oder L3 immunized gesuergt, enger anerer immun Reaktioun vun natierleche Krankheet Päerd vs VerfÜgung demaskéierte. Fëschweier immun Reaktioun am Mais entschlof. Déi Vergläicher vun der immunoblot Profiler bewisen, datt d'Bühn L2 méi immunogenic wéi d'Etapp L3 Wahrscheinlechkeet wéi en Effekt vun der héchster enzymatic Produktioun vun L2 ass iwwerdeems duerch d'Provider Stoffer wanderen. Fifteen Proteinen sech duerch Mass spectrometry identifizéiert. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Dës Aarbecht an de Versteesdemech vun der Interaktioun tëscht G. intestinalis weider Informatiounen stellt VerfÜgung an hirem Provider a vun engem Roman Schema vun der proteomic Profil vun der Haaptrei larval Contributioun Etappen. VerfÜgung Background VerfÜgung néng Arten vun Gasterophilus VerfÜgung (Diptera, Oestridae) hunn flitt an de larval Etapp, dauernd, gastrointestinal myiasis zu equids beschriwwe ginn. Iwwerdeems Gasterophilus intestinalis VerfÜgung (De Geer, 1776) an Gasterophilus nasalis VerfÜgung (Linnaeus, 1758) si weltwäit verdeelt a ginn oft déi eenzeg an villen Deeler vun der New World gemellt Arten, ginn déi reschtlech Arten nëmmen an ganz limitéiert gemellt Beräicher vun Europa, östleche Länner [1] an Afrika [2]. Erwuessener Bot flitt hir Eeër op der Luerenzweiler 'Hoer op verschiddene Plazen je op d'Mënschegeschlecht vun Gasterophilus VerfÜgung Dreckstipp [3]. G. pecorum VerfÜgung ass eng Ausnam well Weibercher hir Eeër op Gras, Blieder zougemaach a staamt vun Planzen [1]. Wonn geschitt, wann Eeër an Päerd Mond vum Déier asiatesch an GROOMING agefouert ginn. Déi éischt larval Etapp (L1) Liichten, fänkt wanderen an moulting an der zweeter larval Etapp (L2) am Elysée Discours [4]. Larve vun verschidden Arten vun Gasterophilus VerfÜgung an een oder méi Regioune vun der gastrointestinal TRACT speziell präsent sinn, wou d'drëtt larval Etapp (L3) zu der mucosa fir ronn 8-10 Méint verbonnen bleift [5]. D'Medeziner Schëlder mat der Migratioun an maturation Etappe vun der Larven verbonne sinn schwéier depressiv, mä et gewise gouf, datt verschidden Arten vun Gasterophilus VerfÜgung schwéieren Schuedenersaz während hirem Liewenszyklus verursaache kann [6-9]. VerfÜgung Am leschte Joer Studien der Immunologie an immunopathology vu ville oestrid myiasis dauernd Larven betreffend hunn wéinst hire wichteg Donnéeën am Diagnos fräi an immunization Programmer [10]. Iwwerdeems immunological Studien sech haaptsächlech op Hypoderma do VerfÜgung Ranner dann Wonn [11], a Schof nasal oestrosis vun Oestrus ovis VerfÜgung [12], de Vierdergrond vun Gasterophilus VerfÜgung niwweleg. ëmmer myiasis scho wéineg Opmierksamkeet. Dëst ass och wéinst der Onfruchtbarkeet Schwieregkeeten an der gastrointestinal mucosa Interface immunological Provider-Luucht Interaktioune ënnersicht. Als Konsequenz, hunn sou wäit keng gréisser immunogens gemellt ginn [13]. Eng eenzeg Etude diskutéiert der Entwécklung vun antibodies fir d'Diagnos vun myiasis vum G. intestinalis VerfÜgung Larven obwuel d'Spezifizitéit vun der immun Reaktioun net an d'Optriede vun concomitant Päerd parasitic Wonn [14] getest gouf. Méi kuerzem, vill proteomics-baséiert gebueden, kombinéiert mat zwee-Dimensiounen gelies-electrophoresis, hunn eng ëmfaassend Approche proposéiert fir besser ze verstoen biologescher an immunological Prozesser vun pathogens a Krankheeten [15-17]. D'Zil vun dëser Etude war L2 an L3 Proteinen vun G. intestinalis zu Markenzeeche VerfÜgung an der immun Äntwert vun Päerd an immunized Mais géint larval antigens ze analyséieren. VerfÜgung Resultater VerfÜgung 1-D Analyse vun der larval Brutto Extrait (LCE) vun L2 an L3 VerfÜgung Migratioun vun der LCE2 op der 1-d sëlwer-Kierchefënster gelies huet eng spezifesch Muster (Dorënner 1A) mat 14 Bands, déi aus der gelies fir weider Identifikatioun vun Mass spectrometry (MS) isoléiert sech ( Table 1). D'Auswiel vun de Bands op d'Intensitéit vun der Band op d'Sëlwer Kierchefënster gelies, souwéi der Jonker-ofbaubar der immunoblotting mat Päerd serum (Dorënner 1B) oder L2-Mais serum (Dorënner 1c) observéiert war baséiert. Dräi Proteinen zu 4 aus dem 14. ausgewielt Bands huet e wesentleche stoung (p &Si besteet; 0,05) an huet als actin (Dorënner 1A, Band 8) identifizéiert, glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (Dorënner 1A, Band 9) an glycosilée (Well 1A, Bands 13 an 14). A verschiddene Migratioun Muster war fir d'LCE3 op der 1-D Sëlwer-Kierchefënster gelies (Dorënner 1D) observéiert. Sënngeméiss, immunoblots sech mat Päerd Sera (Dorënner 1E) an Sera vun L3-Mais (Dorënner 1F) gesuergt. D'Auswiel vun 13 Gruppen, mat Feiler (Dorënner 1D) uginn, war den uewen op der selwechter Critèrë baséieren. Si goufen fir weider Identifikatioun vun MS (Table 2) isoléiert. Zéng Proteinen aus de 13 ausgewielt Bands huet e wesentleche stoung (p &Si besteet; 0,05) an huet als alpha Kette vun larval serum FAQ (Dorënner 1D, Bands 1-4) identifizéiert, arylphorin (Dorënner 1D, Band 6), Beta Kette vun larval serum FAQ (Dorënner 1D, Band 7), glycosilée (Dorënner 1D, Bands 10-12) an murein lipoprotein (Dorënner 1D, Band 13) .Table 1 Mass spectrometry Identifikatioun vun Proteinen vum LCE vun L2 identifizéiert. VerfÜgung Band ID
Protein Numm
Art
Zougank Zuel VerfÜgung
MW (Da)
Pi
Protein stoung
8 VerfÜgung Protein gläicht Actin-87E isoform 2 VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster VerfÜgung VerfÜgung AAM29410 VerfÜgung 37816 VerfÜgung 5,36 VerfÜgung 223 VerfÜgung 9 VerfÜgung Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase VerfÜgung Villäicht sollte hydei
S24630 VerfÜgung 35369 VerfÜgung 8.2
224 VerfÜgung 13 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis
O96457 VerfÜgung 17912 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 440 VerfÜgung 14 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis
zu O96457 VerfÜgung 17912 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 144 VerfÜgung Uerderen 1. Proteinen ze Dorënner kuckt Flecken opgezielt goufen mat enger grousser Wahrscheinlechkeet stoung op p &si besteet identifizéiert; 0,05 an MSDB. VerfÜgung Table 2 Mass spectrometry Identifikatioun vun Proteinen vum LCE vun L3 identifizéiert. VerfÜgung Band ID VerfÜgung VerfÜgung Protein Numm
Art
Zougank Zuel
MW (Da)
Pi
Protein stoung
zu 1 VerfÜgung Larval serum FAQ 1 alpha Kette Virleefer VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
LSP1A_DROME VerfÜgung 98802 VerfÜgung 5,72 VerfÜgung 92 VerfÜgung 2 VerfÜgung Larval serum FAQ 1 alpha Kette Virleefer VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
LSP1A_DROME VerfÜgung 98802 VerfÜgung 5,72 VerfÜgung 89 VerfÜgung 3 VerfÜgung Larval serum FAQ 1 alpha Kette Virleefer VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster VerfÜgung
LSP1A_DROME VerfÜgung 98802 VerfÜgung 5,72 VerfÜgung 98 VerfÜgung 4 VerfÜgung Larval serum FAQ 1 alpha Kette Virleefer VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
LSP1A_DROME VerfÜgung 98802 VerfÜgung 5,72
102 VerfÜgung 6 VerfÜgung Arylphorin subunit A4 Virleefer VerfÜgung Calliphora vicina
ARY1_CALVI VerfÜgung 92282 VerfÜgung 5,59 VerfÜgung 71 VerfÜgung 7 VerfÜgung Larval serum Beta FAQ 1 Kette Virleefer VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
LSP1B_DROME VerfÜgung 95849 VerfÜgung 5,41 VerfÜgung 69 zu 10 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis
O96457 VerfÜgung 17912 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 247 VerfÜgung 11 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis
O96457 VerfÜgung 17912 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 132 VerfÜgung 12 VerfÜgung glycosilée
Gasterophilus intestinalis
LPEBWM VerfÜgung 17912 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 112 VerfÜgung 13 VerfÜgung Major baussegt Membran lipoprotein Virleefer (Murein-lipoprotein) VerfÜgung Pectobacterium atrosepticum
LPP_ERWCT VerfÜgung 8396 VerfÜgung 9,36 VerfÜgung 69 VerfÜgung Flecken Uerderen kuckt 1. Proteinen ze Dorënner opgezielt hunn mat enger grousser Wahrscheinlechkeet stoung op p &si besteet identifizéiert ginn; 0,05 (1, 2, 3, 4, 6, 7, 13: Expasy Datebank; 10, 11, 12: MSDB). VerfÜgung 1 1-D Analyse vum LCE vun L2 an L3 Dorënner. Vertrieder 1-D Sëlwer-Kierchefënster gelies vum LCE vun L2 (A) an L3 (D). D'Feiler weg de Bands, déi fir d'Mass spectrometry ausgewielt goufen. Western blot Analyse vun L2 mat Päerd serum incubated (B) a Maus serum (C). Western blot Analyse vun L3 incubated mat Päerd serum (E) a Maus serum (F). D'FAQ Identifikatioun vun MS ass an Table virgestallt 1 an 2. VerfÜgung 2-D Analyse vum LCE vun L2 VerfÜgung d'FAQ Migratioun vum LCE vun L2 op engem 2-D gelies (Dorënner 2A) zougedréckt a Presenz vun Proteinen all laanscht de pH Spektrum. Western blots sech mat L2-Mais serum (Dorënner 2B) a mat Päerd serum (Dorënner 2C) gesuergt. D'Sëlwer-Kierchefënster gelies gouf benotzt fonnt FAQ Flecken op béide immunoblot Profiler ze begréissen. Eng grouss Bandbreet vun Jonker-reaktiv Proteinen war op de Päerd immunoblot Profil observéiert wéi op der L2-Mais immunoblot. Kreeser weg 12 Plazen, déi als Jonker-reaktiv mat L2-Mais serum (Dorënner 2A, mof: 1, 2, 6, 8, 14-20, 25) considéréiert goufen a Feiler weg 24 Plazen, déi als immun reaktiv mat Päerd serum considéréiert goufen (Well 2A, mof: 1-13 an 16-26). Eng total vun 26 Flecken sech fir MS Analyse (Table 3) ausgewielt. Vun der 26. ausgewielt Flecken, huet 7 Proteinen erfollegräich identifizéiert (p &Si besteet; 0,05) vun MS: paramyosin (Dorënner 2A, Plaz 1), serum albumin (Dorënner 2A Plaz 5), tubulin (Dorënner 2A Plaz 9), enolase ( Figur 2A, Plaz 11), tropomyosin (Figur 2A, 14. Plaz), GAPDH (Figur 2A, Plaz 19) an glycosilée (Figur 2A, Plaz 20) .Table 3 Mass spectrometric identifications vu Proteinen vum LCE vun L2 identifizéiert.
zu Protein Numm VerfÜgung icon_thumright ID
Art
Zougank Zuel VerfÜgung VerfÜgung MW (Da)
Pi
Protein stoung
1 VerfÜgung Paramyosin VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
S22028
zu 5.5 VerfÜgung 97 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung Serum albumin Virleefer VerfÜgung Bos Littrow
ABBOS VerfÜgung 69225 VerfÜgung 5.8 VerfÜgung 99 VerfÜgung 9
Tubulin alpha-1 Kette VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
A26488 VerfÜgung 49876 VerfÜgung 5.0 VerfÜgung 260 VerfÜgung 11 VerfÜgung Enolase VerfÜgung Oryza sativa
Q7XBE4 VerfÜgung 47942 VerfÜgung 5,4 VerfÜgung 80 zu 14 VerfÜgung Tropomyosin VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
C25242 VerfÜgung 32740 VerfÜgung 4,7 VerfÜgung 78 zu 19
Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase VerfÜgung Villäicht sollte hydei
S24630 VerfÜgung 35369 VerfÜgung 8.2 VerfÜgung 100 VerfÜgung 20 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis
O96457 VerfÜgung 17912 VerfÜgung 8.4 VerfÜgung 209 VerfÜgung Flecken Uerderen kuckt 2. Proteinen ze Dorënner opgezielt hunn mat enger grousser Wahrscheinlechkeet stoung op p &si besteet identifizéiert ginn; 0,05 an MSDB. VerfÜgung 2 2-D Analyse vum LCE vun L2 Dorënner. Silver-Kierchefënster Vertrieder 2-D FAQ Plang vun der LCE vun L2 mat pH Temperaturgefäll vun 3 bis 11 Joer mat der MWs vun 10 bis 250 KDa Ranking (A). D'Sëlwer-Kierchefënster gelies gouf benotzt fonnt FAQ Flecken op der Western blots mat serum vun Mais mat den LCE vun L2 (B) a mat Päerd serum (C) immunized standing anzesetzen. D'Kreeser weg den Flecken, déi mat Mais serum immunolabelled waren (B; Flecken 1,2,6,8,14-19,25,26) an d'Feiler weg den Flecken, déi mat Päerd serum (C immunolabelled goufen; Flecken 1-13 an 16-26). Eng total vun 26 Plazen goufen fir weider MS Identifikatioun isoléiert. D'FAQ Identifikatioun vun MS ass an Table virgestallt 3. VerfÜgung 2-D Analyse vum LCE vun L3 VerfÜgung der proteomic Profil vum LCE vun L3 op Figur 3A virgestallt weist, datt déi meescht vun de Proteinen an enger basidic Rei etabléiert sinn tëschent pH 7-11. Western blots sech mat L3-Mais serum (Dorënner 3B) a mat Päerd serum (Dorënner 3C) gesuergt. D'Intensitéit vun der immun Reaktioun Ënnerscheed wann der LCE vun L3 mat L3-Mais serum oder mat Päerd serum ausgesat ass, mä de immunoblot Profiler waren ähnlech. No Verglach vun der immunoblots mat der Sëlwer-Kierchefënster gelies, 39 Plazen, déi Kreeser agestallt goufen fir weider MS Identifikatioun (Table 4) ausgewielt. 19 aus dem 39. isoléiert Flecken waren erfollegräich identifizéiert (p &Si besteet; 0,05), deen zu 8 verschidde Proteinen: filamin (Dorënner 3A, Plaz 1), Hëtzt Schock FAQ (HSP-70) (Dorënner 3A, Plaz 2), serum albumin Virleefer (Dorënner 3A, Plaz 3,18-20), phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK) (Dorënner 3A, Plaz 8), enolase (Dorënner 3A, 22,23 Plaz), fumarase (Dorënner 3A, Plaz 1), Beta-actin ( Figur 3A, Plaz 27), glycosilée (Figur 3A, Plaz 32-39) .Table 4 Mass spectrometric identifications vu Proteinen vum LCE vun L3 identifizéiert. VerfÜgung icon_thumright ID
Protein Numm
Art
Zougank Zuel VerfÜgung MW (Da)
Pi

Protein stoung
1 VerfÜgung Filamin 1 VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
Q8T3K7 VerfÜgung 151931 VerfÜgung 5,72 VerfÜgung 76 VerfÜgung 2
Heat Schock 70. kDa FAQ 70C VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
HSP7A_DROME VerfÜgung 70871 VerfÜgung 5,34 VerfÜgung 70 VerfÜgung 3 VerfÜgung serum albumin VerfÜgung Bos Littrow VerfÜgung
AAN17824 VerfÜgung 71274 VerfÜgung 5,82 VerfÜgung 171 VerfÜgung 8 VerfÜgung Phosphoenolpyruvate carboxykinase VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
PPCK_DROME VerfÜgung 71882 VerfÜgung 6,07 VerfÜgung 79
18 VerfÜgung Serum albumin Virleefer VerfÜgung Bos Littrow
ALBU_BOVIN VerfÜgung 71244 VerfÜgung 5,82 VerfÜgung 108 VerfÜgung 19 VerfÜgung Serum albumin Virleefer VerfÜgung Bos Littrow VerfÜgung VerfÜgung ALBU_BOVIN VerfÜgung 71244 VerfÜgung 5,82 VerfÜgung 117 VerfÜgung 20 VerfÜgung Serum albumin Virleefer VerfÜgung Bos Littrow
ALBU_BOVIN VerfÜgung 71244 VerfÜgung 5,82 VerfÜgung 165 VerfÜgung 22 VerfÜgung Enolase (ofgesprengt) VerfÜgung Villäicht sollte subobscura
O44101 VerfÜgung 44548 VerfÜgung 5,92 VerfÜgung 142 VerfÜgung 23 VerfÜgung Enolase VerfÜgung Schistosoma MANSONI
zu ENO_SCHMA VerfÜgung 47421 VerfÜgung 6,18 VerfÜgung 163 VerfÜgung 24 VerfÜgung Fumarase VerfÜgung Villäicht sollte melanogaster
Q9VTI5 VerfÜgung 51239 VerfÜgung 8,47 VerfÜgung 111
27 VerfÜgung Beta-actin VerfÜgung Danio rerio
ACTB1_BRARE VerfÜgung 42082 VerfÜgung 5.3 VerfÜgung 184 VerfÜgung 32 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis VerfÜgung
O96457 VerfÜgung 18026 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 95 zu 33 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis
O96457 VerfÜgung 18026 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 113 VerfÜgung 34 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis
O96457 VerfÜgung 18026 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 131 VerfÜgung 38 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis
O96457
18026 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 415 VerfÜgung 39 VerfÜgung glycosilée VerfÜgung Gasterophilus intestinalis
O96457 VerfÜgung 18026 VerfÜgung 8,44 VerfÜgung 410 VerfÜgung Flecken Uerderen kuckt an Figur 3. Proteinen opgezielt goufen mat enger grousser Wahrscheinlechkeet stoung op p &si besteet identifizéiert; 0,05 (2, 8, 18, 19, 20, 23, 27: Expasy Datebank; 1, 3, 22, 24, 32, 33, 34, 38, 39: MSDB) VerfÜgung 3 2-D Analyse Figur. den LCE vun L3. Silver-Kierchefënster Vertrieder 2-D FAQ Plang vun der LCE vun L3 mat pH Temperaturgefäll vun 3 bis 11 Joer mat der MWs vun 10 bis 250 KDa Ranking (A). D'Sëlwer-Kierchefënster gelies gouf benotzt fonnt FAQ Flecken op der Western blots mat serum vun Mais mat den LCE vun L3 (B) a mat Päerd serum (C) immunized standing anzesetzen. 39 Plazen immunolabelled mat béiden Sera sech fir weider MS Identifikatioun isoléiert. D'FAQ Identifikatioun vun MS an Table presentéiert ass 4. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung de Verglach vun der Migratioun Musteren vun der LCE2 an LCE3 zu souwuel Dimensiounen Analyse (1-D an 2-D), beweist, datt d'larval proteinic Profil ass Etapp spezifesch, also enger anerer Zesummesetzung vun larval ukuerbelt an antigenic Eegeschafte suggeréiert. Den 1-D Sëlwer-Kierchefënster gels vun der larval Brutto dovu uginn engem ganz dichten Konzentratioun vu Proteinen; doduercher d'Formatioun vun de Jonker-reaktiv Bands vum Päerd erwëscht an Mais vläicht e puer Differenzen presentéieren. D'proteomic Approche confirméiert de spezifeschen FAQ Profil souwuel larval Etappen an erlaabt besser Identifikatioun vun de verschiddene Plazen. VerfÜgung Mais sech Fëschweier immunized géint eng Brutto FAQ Extrait aus ganz Larven. Eng grouss Zuel vu Proteinen déi normalerweis net direkt am Kontakt mat Päerd si sech un d'immun System vun de Mais presentéiert. Ausserdeem, am Géigesaz zu den natierlechen Wonn engem Päerd immun Reaktioun geduecht, induces subcutaneous Sprëtzen am Mais eng systemesch immun Reaktioun op engem Th1 Äntwert vun der adjuvant verréckelt. Dës Differenz zu immun Reaktioun erkläert de Fait datt déi meescht vun de L2 an L3 Proteinen déi mat Mais Sera geklot eng méi intensiv Signal zougedréckt a wann mat der Reaktioun mat Päerd Sera Verglach. Zënter der lifecycle vun G. intestinalis VerfÜgung an der Gastro-intestinal TRACT vu Päerd existeiert, ass de mucosal immun System am Kontakt mat de Larven an domat zu excreted oder secreted Substanzen während larval Migratioun an Entwécklung ausgesat [18]. Obwuel L2 Migratioun Musteren vum Mond ze Mo. onkloer bleift, kéint de immun Reaktioun zu Päerd erwëscht an am experimentally immunized Mais hindeit, datt d'larval Etapp L2 méi antigenic Proteinen wéi d'larval Etapp L3 leie, wahrscheinlech nëtzlech fir larval enzymatic Migratioun [19]. An anere Wierder, huet enolase vun MS identifizéiert an huet schonns als eng wichteg Aktivitéit op der Uewerfläch vun e puer pathogens en der gemellt ginn, wann Otemschwieregkeeten hypothetesch [20]. L2 ass eng Etapp eng staark Provider immun Äntwert Pinguin sou datt hir Entwécklung an L3 am Mo. kéinten e Goal Mechanismus vun der Larven ginn d'Päerd immun Befestegunge z'évitéieren. Ëmgedréit, bleift d'Tatsaach datt L3 verbonnen fir 8-10 Méint op de Mo Mauer mobiliséiert engem hypometabolic Status, oder reduzéiert immunogenic Eegeschaften. Dëst kann de schwaach immun Reaktioun vun der Presenz vu Päerd serum géint d'L3 observéiert erklären. VerfÜgung Zwou wichteg larval Proteinen, arylphorin an LSP-2 (larval serum FAQ), bzw. homologous zu Calliphora vicina VerfÜgung an Villäicht sollte melanogaster
, goufen an der L3 identifizéiert. An holometabolous Insekten verlaangt de Bau vun Erwuessenen Stoffer während metamorphosis eng grouss Quantitéit vun Energie. Et ass bekannt, dass virun Opstellung vun der puparium, d'Fett Kierper Zellen Proteinen an aner macromolecules reabsorb datt an der haemolymph während der larval erofzesetzen Period cumuléiert hunn [21]. Déi grouss Ëmwandlung vum Uerden Proteinen besteet aus arylphorins an LSP-2 [22]. Ausserdeem war glycosilée Souwuel larval Etappe vum G. intestinalis VerfÜgung identifizéiert. Dëst räich a libre Protein ass an héich tracheated Zellen presentéieren d'posterior spiracular zappen ze grënnen a erlaabt d'Larven besser Notzung vun liichte Kontakt ze maachen wann Loft mat Liewensmëttel Verhaftung ass [23]. Déi meescht vun den anere identifizéiert Proteinen am L2 VerfÜgung (paramyosin , tubulin, tropomyosin, GAPDH an enger FAQ gläicht actin) oder an L3 (filamin, fumarase, PEPCK, HSP-70, enolase) sinn mat deenen vun Villäicht sollte VerfÜgung niwweleg gedeelt. suggeréiert datt strukturell oder metabolic homologies tëscht dësen Aarte do existéieren. VerfÜgung Während dëser Fuerschung, verschidden intestinal Parasiten (Anoplocephala perfoliata VerfÜgung, Parascaris equorum VerfÜgung, Cyathostominae) waren an der Gastro gläichzäiteg präsent mat G. intestinalis VerfÜgung -intestinal TRACT vun der geschluecht Päerd. De Risiko vun Kräiz-ofbaubar huet nach evaluéiert ginn. Mä am Géigesaz puer immunological Etuden iwwer intestinal helminths zu equids [24-26], d'Kräiz-ofbaubar tëscht G. intestinalis VerfÜgung an Gastro-intestinal Parasiten huet nach net studéiert ginn. VerfÜgung Dës Aarbecht gëtt weider Informatiounen an de Versteesdemech vun der Interaktioun tëscht G. intestinalis VerfÜgung an hirem Provider a vun engem Roman Schema vun der proteomic Profil vun der Haaptrei larval Etappen matmaacht. Sou wäit eis Resultater an der Komplexitéit vun dësem Provider-Luucht Interaktioun beweisen. Iwwerhaapt, verréid dëser Etude d'Noutwennegkeet vun engem zouverlässege serological Instrument ze entwéckelen bekannt Päerd ze entdecken, virun allem well d'nëmmen heescht e G. intestinalis z'entdecken VerfÜgung infestation vum Becken ass. VerfÜgung D'Identifikatioun vun meescht vun de Proteinen gëtt de ginn nächst Schrëtt hir Roll ze definéieren, hir bewosst oder Otemschwieregkeeten Lokalisatioun an hiren Potential antigenic Eegeschaften. VerfÜgung Method VerfÜgung Larval Kollektioun an antigen Virbereedung VerfÜgung Gasterophilus VerfÜgung niwweleg. L2 an L3 sech aus der pyloric Deel vun de Mo. vu Päerd aus zwee Häff an der District vun der Schwäizer Jura wellkomm Origine gesammelt; Delémont: N 47 ° 21 '; E 7 ° 20 ', Schwäiz. Parallel gouf d'Gastro-intestinal TRACT vun all Déier iwwerpréift an der Präsenz vun P. equorum VerfÜgung, A. perfoliata VerfÜgung an Cyathostominae war an all Fall observéiert. VerfÜgung de All Larven gesammelt an eng steril phosphate zou sech Salins Prellbock (PBS 0,1 M, pH 7,2), den G. intestinalis identifizéiert VerfÜgung op der Basis vun morphological Schlësselen [1] a bei -20 ° C gefruer. VerfÜgung fir Virbereedung vun der larval Brutto dovu, 10 L2 Larven op zwou verschiddene Päerd vun engem selwechten näicht recoltéiert, a siwen L3 Larven op ee Päerd aus dem zweeten näicht Origine gesammelt, waren op Äis ënner steril Konditiounen sonicated an homogenised. D'homogenate war Iwwernuechtung an engem 0,1 M ofgebaut pH 9,6 kënne gefiermt mat 1 mm phenylmethylsulfonyl fluorid (PMSF) an 5 mm ethylenediamin tetraacetic Seier (héich) duerch weider Schan 1 ml /gr vun engem protease inhibitor (Fläch-Aldrich, Buchs, Schwäiz) . D'dovu ware fir 30 Minutte bei 20'000 × g VerfÜgung centrifuged (4 ° C). D'supernatant der antigens wouvun war gesammelt an der Finale FAQ Inhalt vun spectrometry (Bradford Method, BioRad) alles. LCE war bei -20 ° C lyophilized an gespäichert. VerfÜgung Horse serum Echantillon VerfÜgung Bluttprouwen op engem Grupp vun zwanzeg Päerd aus den zwee Häff an der uewen beschriwwen Géigend ursprünglech geholl huet. Obwuel Bluttprouwen an larval Kollektioun net op der selwechter Déiere gemaach ginn hätt eiser Observatioune während engem gläichzäiteg standing epidemiological Ëmfro gemaach (Roelfstra et al, an Ëmfro.), Dorënner Terrain Observatioune liewen Déieren an slaughterhouses, confirméiert den héije Niveau vun endemicity vun G. intestinalis VerfÜgung virdrun duerch Brocard [19] zu der selwechter Géigend beschriwwen an erlaben eis ze choix datt all an dëser Etude benotzt Päerd vum G. intestinalis VerfÜgung bekannt sinn. Foetal Päerd serum war als negativ Kontroll fir de Western blots benotzt. D'Blutt ass fir 15 Minutte bei Raumtemperatur bei 3500 × g VerfÜgung centrifuged an der Sera bei -20 ° C gespäichert goufen. VerfÜgung Immunisation vu Mais a Balb /c Mais VerfÜgung serum Echantillon waren mat LCE vun L2 immunized (L2 Mais) oder mat LCE vun L3 (L3 Mais) vum G. intestinalis VerfÜgung. Zwee Gramm L3 an zwee Gramm L2 sech sonicated, homogenised zu engem steril gefiermt PBS pH 7,2 an centrifuged bei 20'000 × g VerfÜgung. D'supernatant war dann am selwechte Volume vun Freund d'onkomplett Adjuvant emulsified (Fläch-Aldrich, Buchs, Schwäiz). VerfÜgung Eng Portioun 100 μg FAQ /Maus, an e Volume vun 200 μl, war all 2 Wochen duerch intramuscular Wee heijen duerch 6 Wochen. Déieren sech siwe Wochen no der éischter immunization Bled. Kontroll Mais sech mat enger Kombinatioun vun PBS an Freund d'onkomplett Adjuvant virun all Zäit inoculated. Anerer Blutt war bei 3500 × g VerfÜgung fir 15 Minutte bei Raumtemperatur an Sera gespäichert bei -20 ° C centrifuged. All Prozedure goufen vun der responsabel lokal Comité op Déier experimentations guttgeheescht. One Dimensiounen electrophoresis VerfÜgung (1-D) VerfÜgung D'Proteinen vun L2 (5 μg /gutt) an L3 (5 μg /gutt) sech op packt SDS getrennt -PAGE gels (4-20%) ënnert reduzéieren Konditiounen (2-β-mercaptoethanol, 95 ° C fir 5 min). Electrophoresis war um 80/100 V fir 30 min /2 Stonnen gesuergt. Eng Formatioun vun der gels war mat Sëlwer fir Mass spectrometry Kierchefënster, an déi zweet war op nitrocellulose Schläimhait transferéiert (GE Gesondheetswiesen, Uppsala, Schweden) fir Western blot Analyse. VerfÜgung Zwee Dimensiounen electrophoresis (2-D) VerfÜgung Lyophilized LCE Echantillon waren zu 2-DE lysis Prellbock (9 M urea, 2 M thiourea, 1% dithioerythriol, 4% Haréi, 2,5 μM EGTA, an 2,5 μM héich) solubilised. Immobiline dréchen Dicher pH 3-11 Net linear, 11 cm (GE Gesondheetswiesen, Uppsala, Schweden) waren Iwwernuechtung zu lysis gefiermt Beweegung mat 75 μg FAQ Echantillonen, zousätzlech 1% Pharmalyte pH 3-10 (GE Gesondheetswiesen, Uppsala, Schweden), an 0,5% bromphenol blo. IEF op engem Multiphor (GE Gesondheetswiesen) fir 15 kV · h op 20 ° C war vun Trennung op packt SDS-PAGE gels (9-15%) op konstant 45 V pro gelies gefollegt. Eng Formatioun vun gels war Kierchefënster mat Sëlwer fir MS an der zweeter war op nitrocellulose Schläimhait transferéiert (GE Gesondheetswiesen, Uppsala, Schweden) fir Western blot Analyse. VerfÜgung Western blot Analyse (WK) VerfÜgung Non-spezifësch virbildlech obligatoresch mat 1% polyvinylpyrrolidone vun PBS-Tween fir 1 Stonn. an zou:; (1000 Päerd Sera oder Mais Sera 1 Iwwernuechtung op 4 ° C) Blots sech duerno mat der Primärschoul antibody vun PBS-Tween incubated. D'immunoreactive Flecken huet mat enger Geess anti-Maus IgG (H + L) fonnt (1: 20000, Nordic Immunologie Laboratoiren, Tilburg, Holland) oder eng anti-Päerd IgG (1: 10000, Fläch-Aldrich, Buchs, Schwäiz) antibody conjugated mat horseradish peroxidase. Signaler sech mat ECL (coopération chemiluminescence) op Hyperfilm ECL (GE Gesondheetswiesen, Uppsala, Schweden) fonnt [27]. No ECL erkennen, sech de blots dono mat colloidal Gold fir Kierchefënster der siichtbar Flecken ze beurtelen Muster op Sëlwer-Kierchefënster gels ze markéieren. VerfÜgung Mass spectrometry (MS) VerfÜgung sech Ausgewielten Flecken aus 2-D gels excised, destained , déi proteolysis mat trypsin Filteren [28] an duerch MALDI-Ënnerportal an MS /MS op engem MALDI-Ënnerportal /Ënnerportal zwee Mass Spektrometer (Abi 4700 Proteomics Organer, Obwuel Biosystems) analyséieren. Kombinéiert PMF (peptide Mass Fangerofdrock) an MS /MS ufroën sech mat Maskottchen gemaach © Datebank Sich Moteur v1.9 [29] (MATRIX Science) Ënnerbewosstsinn an GPS-Explorer Software (Versioun 3.6, Obwuel Biosystem) op der Swiss- PROT Datebank (Versioun 20051206; 201594 Message; 73123101 Reschter) oder MSDB (Versioun 20040703; 1501893 Message; 480537664 Reschter). Protein Identifikatioun war positiv geduecht (Bedeitung 1, 2, 3 a 4) wann (ech) d'Wahrscheinlechkeet-baséiert MOWSE stoung [30] kritt aus béide MS an MS /MS Analyse bedeitendst war (dh Fändelen > 66 bedeitendst sech bei p &Si besteet; 0,05 fir Expasy Datebank, an Fändelen > 74 op p &Si besteet bedeitendst; 0,05 fir MSDB Datebank; Vertrauen nolauschterer > 99% als vun GPS Entdecker entscheet, Versioun 3.6); (II) de reagéiert peptide Sonnemassen am Spektrum räich waren; an (III) d'theoretesch molekulare Gewiichter (MW) vun de groussen Hits fit d'experimentell observéiert Wäerter. VerfÜgung Deklaratioune VerfÜgung Merci VerfÜgung Dës Aarbecht vun SFB 571 heimat A5 Deeg ënnerstëtzt gouf. D'Auteuren sinn dankbar fir Prof. D. Otranto an Prof. D.D. Colwell fir hire kriteschen Bemierkungen. VerfÜgung Auteuren 'original deposéiert Fichieren fir Biller VerfÜgung sinn ennen d'Linken op d'Auteuren' original deposéiert Fichieren fir Biller. 13071_2008_54_MOESM1_ESM.pdf Auteuren 'original Datei fir Figur 1 13071_2008_54_MOESM2_ESM.pdf Auteuren' original Datei fir Figur 2 13071_2008_54_MOESM3_ESM.pdf original Datei 'Auteuren fir Figur 3 Wettsträit Interessen VerfÜgung D'Auteuren erklären, datt se keng Competitioun Interessen hunn. VerfÜgung

• Bild vum Zoumaache vun gastric Rouer perforations mat souzesoen te: e véier-Fall report
• Grousse gastric bezoar déitlech Eeër, en ongewéinlechen Komplikatiounen vun Gesondheet faddism: e Fall Rapport