Protein-Expressionsprofil von Gasterophilus intestinalis Larven verursachen Pferd Magen-myiasis und Charakterisierung von Pferd Immunreaktion

Protein-Expressionsprofil von Gasterophilus intestinalis
Larven verursachen Pferd Magen-myiasis und Charakterisierung von Pferd Immunreaktion
Zusammenfassung
Hintergrund
wenig Informationen über die immunologischen Aspekt der parasitären Gasterophilus intestinalis
verfügbar ist (Diptera, Oestridae ) Larven Pferd Magen myiasis verursacht. Die Ziele dieser Forschung waren den Proteingehalt der Larven Rohextrakten des wandernden zweiten und dritten Larven (L2 und L3) von G. intestinalis, um die Immunantwort von Pferden zu charakterisieren
zu analysieren.
Ergebnisse
Das Proteom-Profil von L2 und L3, untersucht durch ein- und zweidimensionale Ansätze, offenbart jede Larve einen Migrationsmuster spezifisch. Weiterhin wurden Western-Blots mit Pferdeserum und mit Seren von Balb /c-Mäuse mit den Larven Rohextrakten von L2 oder L3 immunisiert durchgeführt wird, eine andere Immunreaktion in natürlich infizierten Pferden vs
offenbaren. künstlich Immunreaktion in Mäusen induziert. Die Vergleiche der Immunblot-Profile zeigen, dass die Phase L2 immunogener als der Stufe L3 am wahrscheinlichsten als Effekt der höchsten enzymatischen Herstellung von L2 ist, während durch die Wirtsgewebe migrieren. Fünfzehn Proteine ​​wurden durch Massenspektrometrie identifiziert.
Fazit
Diese Arbeit in das Verständnis der Wechselwirkung zwischen G. intestinalis weitere Informationen bietet Karten und ihrem Wirt und durch ein neues Schema des Proteom-Profil des Hauptlarven beitragen Bühnen.
Hintergrund
Neun Arten von Gasterophilus
(Diptera, Oestridae) haben Fliegen im Larvenstadium, so dass, Magen-Darm-myiasis in equids beschrieben worden. Während Gasterophilus intestinalis
(De Geer, 1776) und Gasterophilus nasalis
(Linnaeus, 1758) werden weltweit vertrieben und sind oft die einzigen in vielen Teilen der Neuen Welt berichtet Arten, werden die übrigen Arten nur in sehr begrenzten berichtet Gebiete in Europa, Ost-Länder [1] und Afrika [2]. Erwachsene bot Fliegen ihre Eier auf der Gastgeber Haare an verschiedenen Orten in Abhängigkeit von der Art der Gasterophilus
deponieren [3]. G. pecorum
ist eine Ausnahme, da Weibchen ihre Eier auf Gras, Blätter legen und Stängel der Pflanzen [1]. Die Infektion tritt auf, wenn Eier in Pferd Mund von Tier lecken und Pflege eingeführt werden. Die ersten Larvenstadium (L1) Luken, beginnt die Migration und der Mauser in die zweite Larvenstadium (L2) in der Mundhöhle [4]. Larven verschiedener Arten von Gasterophilus
in einer oder mehreren Regionen des Gastrointestinaltrakts spezifisch vorhanden sind, wo das dritte Larvenstadium (L3) auf die Schleimhaut für etwa 8-10 Monate befestigt bleibt [5]. Die klinischen Symptome mit den Migration und Reifestadien der Larven verbunden sind, sind schwierig zu diagnostizieren, aber es hat sich gezeigt, dass verschiedene Arten von Gasterophilus
schweren Schäden, die während ihres gesamten Lebenszyklus führen kann [6-9].
Im vergangenen Jahren Studien über die Immunologie und Immunpathologie vieler oestrid myiasis verursacht Larven über haben wegen ihrer wichtige Implikationen in der Diagnostik erhöht und in Immunisierungsprogrammen [10]. Während immunologische Untersuchungen wurden vor allem auf Hypoderma konzentriert
Rinder grub Infektion [11], und Schafe nasal oestrosis von Oestrus ovis
[12], der Immunologie von Gasterophilus
spp. verursacht myiasis wenig Beachtung. Dies ist auch aufgrund der inhärenten Schwierigkeiten, an der Magen-Darm-Schleimhaut-Schnittstelle immunologische Wirt-Parasit-Wechselwirkungen zu studieren. Als Folge davon haben bisher keine nennens Immunogene berichtet [13]. Eine einzige Studie diskutiert die Entwicklung von Antikörpern für die Diagnose von myiasis von G. intestinalis
Larven obwohl die Spezifität der Immunreaktion nicht in dem Auftreten von Begleit Pferd parasitäre Infektion [14] getestet wurde. In jüngster Zeit viele Proteomik-basierte Analysen, kombiniert mit zweidimensionalen Gel-Elektrophorese, haben einen umfassenden Ansatz angeboten, besser zu verstehen biologische und immunologische Prozesse von Krankheitserregern und Krankheiten [15-17]. Das Ziel dieser Studie war es L2 und L3-Proteine ​​von G. intestinalis zu charakterisieren
und die Immunantwort von Pferden und immunisierten Mäuse gegen Larvenantigene zu analysieren.
Ergebnisse
1-D-Analyse des Larven- Rohextrakt (LCE) von L2 und L3
Migration des LCE2 auf dem 1-D silbergefärbten Gels zeigte ein spezifisches Muster (1A) mit 14 Bänder, die aus dem Gel zur weiteren Identifizierung durch Massenspektrometrie (MS) wurden isoliert ( Tabelle 1). Die Auswahl der Bänder von der Intensität der Bande auf dem silbergefärbten Gel, sowie die Immunreaktivität nach Immunoblotting mit Pferdeserum (1B) oder L2-Mäuse-Serum (1C) beobachtet wurde, berechnet. Drei Proteine ​​in 4 der 14 ausgewählten Bands gab einen signifikanten Score (p < 0,05) und wurden als Aktin (1A, Band 8) identifiziert, Glyceraldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase (GAPDH) (1A, Band 9) und Hämoglobin (1A, Bänder 13 und 14). Eine unterschiedliche Wanderungsmuster wurde für die LCE3 auf dem 1-D silbergefärbten Gel (Figur 1D) beobachtet. Analog Immunoblots wurden mit Pferd Seren (Abbildung 1E) und Seren von L3-Mäuse (1F) durchgeführt. Die Auswahl von 13 Bands, mit Pfeilen (1D) angegeben ist, wurde wie oben auf den gleichen Kriterien. Sie wurden zur weiteren Identifizierung von MS (Tabelle 2) isoliert. Zehn Proteine ​​aus den 13 ausgewählten Bands gab einen signifikanten Score (p < 0,05) und wurden als die Alpha-Kette der Larvenserumprotein (1D, Bänder 1-4) identifiziert, Arylphorin (1D, Band 6), beta-Kette von Larvenserumprotein (1D, Band 7), Hämoglobin (1D, Bands 10-12) und Mureins Lipoprotein (1D, Band 13) .Tabelle 1 Massenspektrometrie Identifizierung von Proteinen aus dem LCE von L2 identifiziert.
Band ID
Protein Name
Spezies
Zugangsnummer

MW (Da)
pI
Protein-Score

8 Protein ähnlich wie Actin-87E-Isoform 2
Drosophila melanogaster

AAM29410
37816
5,36
223
9
Glyceraldehyd-3-Phosphat-Dehydrogenase
Drosophila hydei
S24630
35369
8.2
224
13
Hemoglobin
Gasterophilus intestinalis
O96457
17912
8,44
440
14
Hemoglobin
Gasterophilus intestinalis

O96457
17912
8,44
144
Zuweisungen 1. Proteine ​​Abbildung beziehen Spots aufgeführt wurden mit einer signifikanten Wahrscheinlichkeit Punktzahl bei p <identifiziert; 0,05 in MSDB.
Tabelle 2 Massenspektrometrie Identifizierung von Proteinen aus dem LCE von L3 identifiziert.
Band ID

Protein Name
Spezies
Zugangsnummer Bei
MW (Da)
pI
Protein-Score
seite 1 Larval Serumprotein 1 alpha-Kette Vorläufer
Drosophila melanogaster
LSP1A_DROME
98802
5,72
92
2 Larval Serumprotein 1 alpha-Kette Vorläufer
Drosophila melanogaster
LSP1A_DROME
98802
5,72
89
3
Larval Serumprotein 1 alpha-Kette Vorläufer
Drosophila melanogaster

LSP1A_DROME
98802
5,72
98
4 Larval Serumprotein 1 alpha-Kette Vorläufer
Drosophila melanogaster
LSP1A_DROME
98802
5,72
102
6 Arylphorin Untereinheit A4 Vorläufer
Calliphora vicina
ARY1_CALVI
92282
5,59
71
7
Larval Serum-beta-Protein 1 Kettenvorstufe
Drosophila melanogaster
LSP1B_DROME
95849
5,41
69 10
Hemoglobin
Gasterophilus intestinalis
O96457
17912
8,44
247
11
Hemoglobin
Gasterophilus intestinalis
O96457
17912
8,44
132
12
Hämoglobins
Gasterophilus intestinalis
LPEBWM
17912
8,44
112
13
Haupt äußeren Membran-Lipoprotein-Vorstufe (Murein-Lipoprotein)
Pectobacterium atrosepticum
LPP_ERWCT
8396
9,36
69
Spots Zuweisungen beziehen 1. Proteine ​​Abbildung aufgeführt haben mit einer signifikanten Wahrscheinlichkeit Punktzahl bei p <identifiziert worden; 0,05 (1, 2, 3, 4, 6, 7, 13: Expasy Datenbank; 10, 11, 12: MSDB).
1 1-D-Analyse des LCE von L2 und L3 Figur. Representative 1-D Silber-gefärbtes Gel von LCE von L2 (A) und L3 (D). Die Pfeile zeigen die Bands, die für die Massenspektrometrie ausgewählt wurden. Western-Blot-Analyse von L2 mit Pferdeserum inkubiert (B) und Mausserum (C). Western-Blot-Analyse von L3 inkubiert mit Pferdeserum (E) und Mausserum (F). Die Proteinidentifikation durch MS ist in Tabelle 1 und 2 of 2-D-Analyse des LCE von L2
die Proteinmigration des LCE von L2 auf einem 2-D-Gel (2A) zeigte die Anwesenheit von Proteine ​​entlang der pH Spektrums. Western-Blots wurden mit L2-Mäuseserum (2B) und mit Pferdeserum (2C) durchgeführt. Das Silber-gefärbtes Gel verwendet wurde nachgewiesen Proteinspots auf beiden Immunoblot Profile auszurichten. Eine größere Auswahl an immunreaktiven Proteine ​​wurde auf dem Pferd Immunoblot Profil beobachtet, als auf der L2-Mäuse Immunoblot. Kreise zeigen 12 Punkte, die als immunreaktiven mit L2-Mäuse-Serum (2A, Flecken: 1, 2, 6, 8, 14-20, 25) betrachtet wurden und Pfeile zeigen 24 Punkte, die als immunreaktiven mit Pferdeserum in Betracht gezogen wurden (2A, Flecken: 1-13 und 16-26). Insgesamt 26 Spots wurden für MS-Analyse (Tabelle 3) ausgewählt. Unter den 26 ausgewählten Stellen wurden 7-Proteine ​​erfolgreich identifiziert (p < 0,05) durch MS: Paramyosin (2A, Spot 1), Serumalbumin (2A, Spot 5), Tubulin (2A, Spot 9), Enolase ( 2A, Spot 11), Tropomyosin (2A, 14 Punkt), GAPDH (2A, Spot 19) und Hämoglobin (2A, Spot 20) .Tabelle 3 massenspektrometrische Identifizierungen von Proteinen aus dem LCE von L2 identifiziert.

Protein Name
Spot-ID
Arten
Zugangsnummer

MW (Da)
pI
Protein-Score
1

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