De Mënsch gastric pathogen Helicobacter pylori huet e Potential acetone carboxylase datt seng Fähegkeet verbessert Mais bis colonize

De Mënsch gastric pathogen Helicobacter pylori VerfÜgung huet e Potential acetone carboxylase datt seng Fähegkeet verbessert Mais VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Helicobacter pylori VerfÜgung bewunnt de Mënsch Mo an ass der etiological Agent vum peptic oppent Krankheet ze colonize . All dräi H. pylori VerfÜgung analyséieren, fir Datum e Potential operon hir Produiten deelen homology mat der subunits vun acetone carboxylase (encoded vun acxABC VerfÜgung) aus Xanthobacter autotrophicus VerfÜgung Deformatioun Py2 an Rhodobacter capsulatus enthale Nepgen gewiescht
Deformatioun B10. Acetone carboxylase catalyzes den Ëmbau vun acetone zu acetoacetate. Genen Offloss vun der operon gerannt Enzymen VerfÜgung putative acxABC datt acetoacetate geflunn zu acetoacetyl-Coa, déi weider metabolized ass zwee Molekülle vun acetyl-Coa ze generéieren. VerfÜgung Resultater VerfÜgung wann den H. pylori acxABC Fir erauszefannen
operon huet eng Roll an Provider Kolonisatioun war den acxB VerfÜgung homolog an der Maus-ugepasst H. pylori VerfÜgung SS1 Deformatioun mat engem chloramphenicol-Resistenz (cat VerfÜgung) Kassett inactivated. An Maus Kolonisatioun Studien VerfÜgung d'Zuelen vum H. pylori aus Mais mat der acxB inoculated wéint: Kaz VerfÜgung Mann- allgemeng een zu zwee aner Stänn vun Magnitude méi kleng ass wéi mat den Elteren Deformatioun inoculated aus Mais wéint deenen goufen. A statistesch Analyse vun den Donnéeën engem Wilcoxin Gemeng Test mat uginn d'Differenzen an der Zuel vun H. pylori aus Mais mat den zwee analyséieren inoculated isoléiert VerfÜgung um 99% Vertraue Niveau bedeitend goufen. Niveau vun acetone mat gastric Otemschwieregkeeten aus uninfected Mais geläscht verbonne waren gemooss an fonnt vun 10-110 μmols pro Gramm naass Gewiicht Otemschwieregkeeten zu Gamme VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung D'Kolonisatioun Feeler vun der acxB:. Kaz VerfÜgung Mann- eng Roll proposéieren fir d'acxABC VerfÜgung operon am Iwwerliewe vun de Bakterie am Mo.. Produiten vun der H. pylori acxABC VerfÜgung operon vläicht virun allem zu acetone beluecht Funktioun oder vläicht eng ähnlech Reaktioun Meat datt fir Iwwerliewe oder Wuesstem vun der Provider wichteg ass. H. pylori VerfÜgung bedeitendst Niveau vun acetone am Mo. awer déi et als potentiell Elektronen Donateur fir microaerobic sin benotze konnt. VerfÜgung Background VerfÜgung Helicobacter pylori VerfÜgung ass eng microaerophilic, Gramm-negativ Bakterie datt en ass wesentleche pathogen vun der mënschlecher gastric mucosa [1, 2]. Kolonisatioun vun der gastric mucosa vum H. pylori VerfÜgung féiert zu chronescher inflammation datt zu enger Rei vu Krankheeten, dorënner chronescher gastritis, peptic oppent, gastric Kriibs an mucosal-verbonne lymphoma Fortschrëtter kënnen [3-5]. An d'Flichte vun antimicrobial Therapie, ass de Provider wahrscheinlech eng Liewensdauer H. pylori VerfÜgung Wonn vun der gastric mucosa ze leiden. VerfÜgung D'Kapazitéit vun H. pylori VerfÜgung vun der mënschlecher Mo. fir verlängert Perioden erëm beweist, datt et ass och de Buedem ze leien, ugepasst et fir de Wuesstem an dëser eenzegaarteger gratis Sproochenunterricht brauch. Zum Beispill, ass d'Panz Layer vun der Maus Mo. bedeitend Montanten vun molekulare Waasserstoff (17-93 μM) ursprünglech aus metabolic Aktivitéit vun microbial Flora zu der grousser Daarm [6]. H. pylori VerfÜgung ass kapabel dëser molekulare Waasserstoff als Elektronen Donateur fir microaerobic sin vun schreiwen an engem funktionell hydrogenase ass fir erfollegräich Kolonisatioun vun Mais et vum H. pylori VerfÜgung [6, 7]. Anescht wéi vill Waasserstoff-oxidizing Bakterien, awer, H. pylori VerfÜgung ass net kapabel autotrophic CO 2 zéien. VerfÜgung puer Studien iwwerpréift hunn d'Fähegkeet vum H. pylori VerfÜgung zu verschiddenen Kuelestoff Quellen kritiséiert. H. pylori VerfÜgung eng limitéiert Kapazitéit huet -Gedrénks ze kafen an Alldag, eng Blumm, déi mat der Analyse vun de Frankräich Message vum H. pylori VerfÜgung analyséieren 22695 an J99 konsequent ass [8]. Zocker ass déi eenzeg rechnen, datt H. pylori VerfÜgung vun schreiwen kapabel ass, déi et iwwer de Entner-Doudoroff Passerelle [9, 10]. Héicht Saieren déngen och als Kuelestoff Quelle fir H. pylori VerfÜgung a si zéien déi H. pylori VerfÜgung zu Wuesstem Medien mat enger Mëschung vun Zocker an Héicht Saieren geheescht [9, 11]. Pyruvate, e Schlëssel Tëscherapport vun Mëtt ukuerbelt, schéngt aus lactate, alanine an serine allem generéiert ginn, anstatt Zockerspigel am H. pylori VerfÜgung [12, 13]. Pyruvate ass herrlech ze acetyl-Coa vun pyruvate: flavodoxin oxidoreductase zu H. pylori VerfÜgung, wat dann an der tricarboxylic Seier (TCA) zréckbruecht feed kann [14]. Zousätzlech, alanine, lactate, acetate, formate an succinate kann duerch H. pylori VerfÜgung Zellen aerobically incubated produzéiert ginn [12]. D'Produktioun vun acetate an formate als metabolic Produiten proposéiert d'Existenz vun engem Stéier gemëscht-Seier Fermentatioun Passerelle an H. pylori VerfÜgung, obwuel Sauerstoff fir Wuesstem vun der Bakterie essentiel ass [12]. VerfÜgung Analys vum Daniel Nepgen Message vun H d'Produiten vun deenen 50-63% Aminosaier Identitéit mat der β gedeelt. pylori VerfÜgung 26695 analyséieren, J99 an HPAG1 e Potential operon vun dräi Genen (designéierte als HP0695, HP0696 an HP0697 zu H. pylori VerfÜgung 26695) verroden , α, an γ subunits vun acetone carboxylase aus Xanthobacter autotrophicus VerfÜgung Deformatioun Py2 an Rhodobacter capsulatus VerfÜgung Deformatioun B10 [15]. Homologs vun acetone carboxylase sinn zu enger Rei vu Bakterien, mä den X. autotrophicus VerfÜgung an R. capsulatus VerfÜgung Enzymen sinn déi beschte charakteriséiert fonnt. Acetone carboxylase catalyzes der ATP-ofhängeg carboxylation vun acetone zu acetoacetate an ass fir Wuesstem vun X. autotrophicus VerfÜgung an R. capsulatus VerfÜgung mat acetone als eenzege Kuelestoff Quell an Elektronen Donateur néideg fir vlaicht verbrannt [15-17]. X. autotrophicus VerfÜgung acetone carboxylase huet eng héich Affinitéit fir acetone (km = 8 μM) mee den Ëmsaz Taux vun der Aktivitéit ass ganz luesen (~ 45 pro min) [15]. Fir fir d'niddereg Ëmsaz Taux vun acetone carboxylase geluegt, X. autotrophicus VerfÜgung produzéiert héich Zommen vun der Aktivitéit (17-25% vum ganzen soluble FAQ) wann op acetone ugebaut [15] zu Genen bei den H. pylori VerfÜgung HP0695-HP0696-HP0697 operon gerannt Enzymen dës acetoacetate ze konvertéieren zu acetoacetyl-Coa, déi weider metabolized ass zu acetyl-Coa [8, 18]. Acetone, acetoacetate an 3-β-hydroxybutyrate sinn ketone Kierper vun mammalian perivenous hepatocytes während fatty Seier ofgeschnidden produzéiert a sinn als Elektronen Donateuren fir vlaicht verbrannt benotzt wann Kuelenhydrater sinn net erhale sinn [19]. Just als ketone Kierper wichteg Energiequellen fir Mënschen sinn, wou vill Gluciden net sinn, kann dës awer déngen wéi Otmungsproblemer Elektronen Donateuren fir H. pylori colonizing VerfÜgung der gastric mucosa. Fir festzestellen, ob de HP0695-HP0696-HP0697 operon eng Roll an Provider Kolonisatioun huet mir HP0696 zu H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1 inactivated. D'HP0696 Mann- war an hirer Fäegkeet kompromettéiert Mais bis colonize suggeréiert datt acetone carboxylation oder eng wëssenschaftlech enzymatic Aktivitéit catalyzed vun Produite vun der HP0695-HP0696-HP0697 operon ass eng wichteg Contributioun Faktor Kolonisatioun zu Gaascht. VerfÜgung Resultater VerfÜgung H. pylori VerfÜgung enthält eng Sammlung vun de Genen virausgesot VerfÜgung déi dräi H. pylori VerfÜgung analyséieren hir genomes engem Koup vun aacht conserved Genen vun acetone ukuerbelt Équipe ze ginn innerhalb vun engem ~ 10 kB DNA Haaptrei, sechs vun deem Nepgen goufen gerannt Enzymen virausgesot acetone zu Alldag an acetoacetate zu acetyl-Coa (ausstinn. 1 an 2). Helicobacter acinonychis VerfÜgung, e Korset Zesummenhang Aarten déi grouss felines infects, leie och dëst Gentherapie Stärekoup. Wéi uewendriwwer uginn, deelen dräi vun deene Genen homology mat acxABC VerfÜgung, obwuel den éischten zwee Genen vun der operon den Genen ugewise sinn Zeechesaatz hydantoin beluecht FAQ A an methylhydantoinase, respektiv, vun der forcéiert H. pylori VerfÜgung genomes. Hydantoinases Meat der hydrolysis vun 5-membered Réng via hydrolysis vun intern imide Emissioun an oft hun zimmlech breet Realitéiten Spezifizitéit. Vu Proteinen an der Datebank hir biochemical Funktiounen bewisen hunn, Teamchef Blast Analyse, datt déi virausgesot Produkter vum H. pylori VerfÜgung Genen stäerkste enk déi vun der sp VerfÜgung Xanthobacter Match. Py2 acxABC VerfÜgung operon (59-68% Aminosaier Identitéit iwwer de ganze Virsaz vun den dräi virausgesot subunits). Fir déi viru kuerzem H. pylori VerfÜgung an H. Nepgen acinonychis VerfÜgung d'lescht Gentherapie vun der operon genomes ass wéi acxC VerfÜgung forcéiert [20, 21]. Sou, encodes den H. pylori VerfÜgung HP0695-HP0696-HP0697 operon wahrscheinlech acetone carboxylase anstatt hydantoinase, a mir domat fir dës operon als acxABC VerfÜgung leeden. Figur 1 Organisatioun vun der Équipe Genen vun acetone ukuerbelt an H. pylori an H. acinonychus analyséieren. Gene Bezeechnung ënnert all Pfeil (net opgesat zu Skala) uginn. Open liesen Rummen datt am forcéiert Nepgen Message engem Gene Bezeechnung net entscheet huet si mat entweder eng HP Bezeechnung uginn (fir H. pylori VerfÜgung 26695), e jhp Bezeechnung (fir H. pylori VerfÜgung J99), oder nëmmen déi oppen liesen Frame Zuel (fir H. pylori VerfÜgung HPAG1 an A. acinonychis VerfÜgung Deformatioun Sheeba). Orthologous Genen vun de véier analyséieren sinn der selwechter Faarf. D'Genen jhp0628 zu H. pylori VerfÜgung J99 an 0671 zu H. pylori VerfÜgung HPAG1 sëlwecht fir eng Fusioun vun hp0688 an hp0689 vum H. pylori VerfÜgung 26695. H. pylori VerfÜgung J99 an HPAG1 hunn zwee Genen innerhalb vun dëser Regioun, jhp0629 (HPAG1_0672) an jhp0630 (HPAG1_0672), datt en Typ II DNA methyltransferase an engem Typ II Restriktioun Aktivitéit, respektiv, a si net fonnt an H. pylori VerfÜgung 26695. Virtrag vun de Produkter vun de Genen gerannt bannent der acetone ukuerbelt Stärekoup sinn am Text beschriwwen. Déi proposéiert Funktiounen vun de Produkter vum Ëmfeld Genen sinn: fecA VerfÜgung, Eisen (III) dicitrate Transport FAQ; feoB VerfÜgung, Eisen (II) Transport FAQ; dgkA VerfÜgung, diacylglycerol kinase; gyrA VerfÜgung, subunit Eng vun DNA gyrase; dcuA VerfÜgung, selwescht C4-dicarboxylate Fernsehn; an ansB VerfÜgung, asparaginase II. VerfÜgung Dorënner 2 proposéiert Passerelle fir acetone Benotze vun H. pylori. Déi proposéiert Passerelle fir den Ëmbau vun acetone zu acetyl-Coa zu H. pylori VerfÜgung an H. acinonychis VerfÜgung gewise gëtt. Reaktiounen an Genen Zeechesaatz vum Enzymen responsabel fir all Reaktioun catalyzing ugewise sinn VerfÜgung zwee aner Genen bannent der Gentherapie Stärekoup, scoA VerfÜgung (HP0691) an scoB VerfÜgung (HP0692), gerannt succinyl Coa:. Acetoacetate Coa-transferase ( SCOT), déi den Ëmbau vun acetoacetate plus succinyl-Coa catalyzes zu acetoacetyl-Coa plus succinate [18]. Acetoacetyl-Coa vun SCOT produzéiert gëtt metabolized weider duerch acetoacetyl-Coa thiolase, déi vun VerfÜgung Fada encoded ass (HP0690; Gentherapie ass forcéiert als Thl VerfÜgung zu H. pylori VerfÜgung J99 an atoB VerfÜgung zu H. pylori VerfÜgung HPAG1 an H. acinonychis VerfÜgung), déi erstallt zwee Molekülle vun acetyl-Coa aus acetoacetyl-Coa plus coenzyme a (Coa) [8]. Déi zwou reschtlech Genen bannent deem Stärekoup, HP0693 an HP0694, si virausgesot engem kuerzen Kette fatty Seier permease an en baussenzegen Membran FAQ fir gerannt, respektiv, an am Transport vun acetoacetate Funktioun kënnen. VerfÜgung der aacht Genen bannent dëser putative acetone ukuerbelt Stärekoup déi selwecht Bekannten Moundphasen an der dräi H. pylori VerfÜgung analyséieren si arrangéiert, mä de Stärekoup ass an entweder vun den zwou potentielle Richtungen konzentréiert (Figebam. 1) beweist d'Optriede vun engem DNA Stuerz vun dëser Regioun während der Entwécklung vun H. pylori VerfÜgung. Alignementer vun DNA Message vun der dräi analyséieren gemaach Site vun Stuerz ze ~ 40 BP afgerappt vun der acxC VerfÜgung homolog an ~ 160 BP Offloss vun Ufank codon fir Fada VerfÜgung (Donnéeën net gewisen). Nee grousse direkt oder Inverted Widerhuelung si bei deene Regiounen fonnt dass zu Stuerz Équipe gewiescht kéint, an esou kënne mir net wéi zu de Mechanismus fir dës Stuerz spekuléieren. Fir H. pylori VerfÜgung analyséieren J99 an HPAG1, mä net 26695, sinn do eng Zort II DNA methyltransferase virausgesot (jhp0629 an HPAG1_0673) an engem Typ II Restriktioun Aktivitéit (jhp0630 an HPAG1_0672) nieft dem putative Gentherapie Stärekoup acetone ukuerbelt.
H. acinonychis VerfÜgung der putative Stärekoup acetone ukuerbelt Gentherapie hiérarchique an de Genen am Stärekoup sinn an der selwechter Orientatioun wéi déi zu H. pylori VerfÜgung J99. Am H. acinonychis VerfÜgung dës Genen ze dgkA VerfÜgung an gyrA VerfÜgung bascht sinn wéi se an H. pylori VerfÜgung sinn, mä sinn op der entgéintgesate Enn vun dcuA VerfÜgung an ansB VerfÜgung Agang. D'fecA VerfÜgung an feoB VerfÜgung Genen, déi bei der acetone ukuerbelt Gentherapie Stärekoup am H. pylori VerfÜgung analyséieren etabléiert sinn, sinn ~ 69 KB aus dëse Stärekoup Gentherapie zu H. acinonychis VerfÜgung. Soumat huet blouf der famill Unuerdnung vun den Genen am acetone ukuerbelt Stärekoup bemierkenswäert während der Entwécklung vum H. pylori VerfÜgung conserved an H. acinonychis VerfÜgung obschonn datt d'bascht Regioun am genomes vun dësen zwou Aarte huet weiderentwéckelt . extensiv rearrangements VerfÜgung Den H. pylori acxB: Kaz VerfÜgung Mann- ass an hirer Fäegkeet erhéijen Mais bis colonize VerfÜgung D'acxB VerfÜgung Gentherapie zu H. pylori VerfÜgung SS1, déi eng Maus-ugepasst ass Deformatioun , war mat enger chloramphenicol Resistenz (cat VerfÜgung) Kassett erofgaangen. Kulturen vu Wëllschwäin-Typ H. pylori VerfÜgung SS1 an der acxB: Kaz VerfÜgung Mann- sech zu Mueller-Hinton läschen mat Päerd serum oder e virdrun beschriwwen definéiert mëttelfristeg [22] nà ugebaut. Verännerlech Montanten vun acetone rangéiert vun 1,3 mm bis 26 mm huet an der Wuesstem Medien abegraff ze bestëmmen wann acetone Wuesstem betraff vun entweder Klischee. Zell Wuesstem war vun liewensfäeg Zell zielt wéi och optesch Inhaltsverzeechnes vun Kulturen bei verschiddenen Zäiten iwwerwaacht. Dorënner acetone zu entweder Wuesstem Medien hu keen Effet op d'Lut oder Finale Zell Rendement vun H. pylori VerfÜgung SS1 oder acxB: Kaz VerfÜgung Mann- (Donnéeën net gewisen). Den Echec vun acetone ze stimuléieren Wuesstem vun H. pylori VerfÜgung SS1 ënner getest Konditiounen ass net onerwaart zanter dem Wuesstem Medien fir H. pylori VerfÜgung ganz Nährwert räich ass. Dës Conclusiounen proposéieren och, datt acxABC VerfÜgung net fir acetone detoxification néideg ass VerfÜgung D'Géigner vun der acxB:. Kaz VerfÜgung Mann- Mais bis colonize war am Verglach mat deem vun den Elteren H. pylori VerfÜgung SS1 Klischee an zwee separat Prozesser. An all Prozess, huet eelef Mais mat der Show-Typ Deformatioun inoculated an eelef sech mat der acxB inoculated: Kaz VerfÜgung Mann-. Dräi Wochen Post-inoculation vun der Mais mat den H. pylori VerfÜgung analyséieren, huet de Mais geaffert an den Zuelen vum H. pylori VerfÜgung an der Mamm vun den Déieren huet alles. Fir d'Mais dat mat der Show-Typ Deformatioun inoculated ginn hat, déi meescht vun den Déieren (19/22 Déieren) haten H. pylori VerfÜgung zielt dat och virun der erkennen limitéiert sech, déi 500 cfu pro Gramm Mo. (Lalumi war. 3). D'Zuel vun H. pylori VerfÜgung an Echantillonen, déi aus 10 gounge virun der erkennen limitéiert sech 4 - 10 6 cfu pro Gramm Moo. Déi meescht vun de mat de acxB inoculated Mais: Kaz VerfÜgung Mann- och moossbar Niveau vun H. pylori VerfÜgung (15/22 Déieren), mä d'Zuel vun H. pylori haten VerfÜgung mat deene Mais verbonne waren allgemeng eng ze zwee aner Stänn vun Magnitude méi déif wéi déi an Mais dat mat der Show-Typ Deformatioun inoculated schonn haten. A statistesch Analyse vun den Donnéeën ubelaangt engem Wilcoxin Gemeng Test mat, datt d'Differenzen an den Zuelen vum H. pylori aus Mais inoculated isoléiert VerfÜgung 99% Selbstvertrauen am wesentleche mat der zwee analyséieren huet, wat beweist, datt acetone carboxylase der Fähegkeet vun verstäerkte H. pylori VerfÜgung SS1 der Maus Mo ze colonize. Well mir net capabel sinn de acxABC VerfÜgung operon zu Klon kéinten mir net vun complementation behaapt dass de acxB VerfÜgung stattfannen fir d'Mängel an Kolonisatioun responsabel war. Mä, ass et onwahrscheinlech, datt d'Kolonisatioun phenotype vun der acxB VerfÜgung Mann- wéinst war bis polare Effekter well et keng zousätzlech Genen vun der operon VerfÜgung acxABC sinn an all vun den dräi H. pylori VerfÜgung analyséieren hir genomes goufen Nepgen zu Datum (Figebam. 1). Ausserdeem, ass d'Kolonisatioun Flecken net wahrscheinlech wéinst attenuation oder engem Lycée stattfannen, well mir der acxB VerfÜgung Mann- an engem frëschen isoléieren vun Deformatioun SS1 vun enger Krankheet Maus wéint gebaut. Figur 3 Mouse Kolonisatioun assay vun H. pylori SS1 an eng isogenic acxB: Kaz Mann- Klischee. Date sinn als luucht Komplott vun Amphipolis virgestallt Unitéiten pro Gramm Mo. administrativ wéi déi Plack zielt alles. All Plaz vun der cfu Grof vu ee Maus duerstellt, ausgedréckt, wéi de Wäert vun log10 (cfu /g Mo) an der Y-Achs. Déi ënnescht Linn [log10 (cfu /g Mo) = 2,7] ass d'Detectioun Limite vun der assay, déi de Grof ënnert 500 cfu /g Mo. duerstellt. Acetone Niveauen an der Maus Mo.
Well d'Donnéeë vun der Maus Kolonisatioun assays ugeholl, datt ëmmer acetone vum H. Räich pylori VerfÜgung fir effikass Provider Kolonisatioun wichteg war, wollt mir VerfÜgung begéint bedeitendst acetone Niveauen an der Maus Mo. wann H. pylori ze bestëmmen. Obwuel acetone Niveauen hunn fir verschidde Beräich vu Flëssegkeeten gemellt gouf, huet mer vun all Rapporten vun acetone Niveauen verbonne mat gastric Jus oder Otemschwieregkeeten Reanimatioun. Dofir, gemooss mir acetone Niveauen mat Maus der gastric Otemschwieregkeeten verbonne séier d'Mamm aus Mais leeën an direkt d'Mamm an zouene serum vials Placement. Well mir acetone Niveauen Devis gewënscht datt H. pylori VerfÜgung während bestänneg Wonn begéine konnten, déi fir dës Etude benotzt Déieren sech op enger normaler erofzesetzen Retard haten an huet sech an de Moien geaffert virewech hir normal deeglech Liewensmëttel allotment ze feieren. D'zouene serum vials de Mais Mamm mat sech op Äis incubated der acetone mat der gastric Otemschwieregkeeten verbonne ze erlaben mat de Gas Phase am vials zu equilibrate, no deem Zäit Echantillon Gas Phas sech duerch Gas chromatography analyséiert. Dës Prozedur war am Ufank gemaach vun den Déieren Affere a leeën hir Mamm. Ähnlech Resultater, goufen andeems d'Mamm vum liewen Déieren awer, kritt dat Nodeel ass. De Montant vun acetone verbonne mat gastric Otemschwieregkeeten fir all eenzelne Maus variéiert, rangéiert vun ~ 10 bis 110 μmols acetone pro Gramm naass Gewiicht Otemschwieregkeeten (Figebam. 4), mat deene meeschten Wäerter (6/7) an de Beräich vun 10 an 35 μmols falend acetone pro Gramm naass Gewiicht Otemschwieregkeeten. Dës Donnéeë hindeit, datt millimolar Montanten vun acetone verbonne si mat gastric Otemschwieregkeeten Maus a konnt als potentiell Kuelestoff oder Energiequell fir H. pylori VerfÜgung sinn ginn. Dësen Niveau vun acetone mat der Maus gastric Otemschwieregkeeten verbonne war méi héich wéi dat wat mir erwaart zënter Niveau vun serum ketone Kierper variéieren am Mënschen an anere Mamendéieren Rei meeschtens aus &Si besteet; 0,5 mm zu e puer millimolar [23]. Acetone ass vun der spontan decarboxylation vun acetoacetate zu Mamendéieren produzéiert an dëser decarboxylation ass bei niddregen pH gestäerkt, an sou acetone am Mo. cumuléiert kann wéinst gastric Aciditéit. Figur 4 Acetone Niveauen verbonne mat gastric Otemschwieregkeeten Maus. Mo. acetone Niveauen sech fir dräi Mais sech nom Déieren Affere an direkt leeën hir Mamm (Post-Eenzegartegkeet vum Fall bestätegt), a fir véier Mais datt Nodeel huet no deenen hir Mamm erausgeholl goufen (Précoce-Eenzegartegkeet vum Fall bestätegt). Excised Maus Mamm huet sech direkt an zouene vials Faarwe datt dann fir op d'mannst 30 min op Äis geluecht goufen acetone mat der gastric Otemschwieregkeeten verbonne ze erlaben mat de Gas Phas ze equilibrate. Acetone Niveau vun de Gas Phasen vun der vials sech duerch Gas chromatography gemooss an geschate vum Standard Kéiren fir all Vial entsteet. All Wäert duerstellt Moyenne vun op d'mannst dräi Miessungen an Fehler Baren weg de Standard Hitparad fir all Prouf. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Mir Beweiser déi dat H. pylori VerfÜgung Besëtz vun engem funktionell acetone carboxylase wéi virdrun vun Fändel postulated an Zesummenarbecht -workers [15]. Den H. pylori acxABC VerfÜgung operon ass bei der scoAB VerfÜgung an fadB VerfÜgung Genen déi de Enzymen SCOT an acetoacetyl-Coa thiolase gerannt. Sou, encodes dëser Gentherapie Stärekoup enger Formatioun vun Enzymen kapabel acetone vun metabolizing zu acetyl-Coa. Acetyl-Coa produzéiert aus acetone an acetoacetate an den TCA Zyklus fidderen konnt Energie fir H. pylori VerfÜgung ze bidden. Wéi déi vun Pflock a Co-Aarbechter observéiert verbonne der acxABC VerfÜgung operon an aner Genen mat acetone ukuerbelt an H. präsent sinn acinonychis VerfÜgung [24]. Dës Genen sin do, awer, am anere enk Zesummenhang ε-Proteobacteria hir genomes goufen sou wäit Nepgen, déi Helicobacter hepaticus VerfÜgung ëmfaasst Campylobacter jejuni VerfÜgung, Thiomicrospira denitrificans VerfÜgung, an Wolinella succinogenes VerfÜgung. Der Acquisitioun an Ënnerhalt vun der Gentherapie Stärekoup acetone ukuerbelt an H. pylori VerfÜgung an H. acinonychis VerfÜgung un der Tatsaach Zesummenhang kann dat, am Géigesaz zu deenen aneren Zesummenhang ε-Proteobacteria, se de Mo. mucosa colonize. D'Käre vun dësen Genen an dem Fehlen vun orthologous Genen an aner enk Zesummenhang ε-Proteobacteria konnt weg méiglech Acquisitioun vun dësen Genen vun H. pylori VerfÜgung an H. acinonychus VerfÜgung duerch lateral Gentherapie Transfert. D'G + C Inhalt vun dëse Stärekoup vun acetone ukuerbelt Genen vun VerfÜgung H. pylori ass méi héich wéi d'Moyenne vun der ganzer Nepgen, mä dat schéngt wéinst de Produkter vun dësen Genen ganz räich an glycine Wiesen (~ 10% vergläichen zu 6% Nepgen Duerchschnëtt). Desweideren, compositional Charakteristiken vun deenen Genen, wéi dinucleotide relativ Heefegkeeten an codon Westen, sinn net schonns vun de rezenten lateral Transfert vun dëser Regioun [25] (J. Mrázek, perséinlech Kommunikatioun). VerfÜgung Jungblut an Co-Aarbechter confirméiert datt H . pylori VerfÜgung mat antibodies aus enger adenocarcinoma Patient AcxC (HP0698) Kräiz-geklot, datt [26] zu Gaascht ausgedréckt ass den H. pylori acxABC VerfÜgung operon ugëtt. Desweideren, weisen mir hei dat H. pylori VerfÜgung bedeitendst Niveau vun acetone an der Maus Mo. begéine kann an esou dëser Massa vläicht fir d'Bakterie am Provider als eng wichteg Otmungsproblemer Elektronen Donateur déngen. Konsequent mat dësem Hypothesen, war den H. pylori acxB VerfÜgung Mann- an seng Fähegkeet bedeitend reduzéiert der Maus Mo ze colonize déi mir Resultater aus der Daf vum Mann- soen acetone wéi eng Energiequell un kritiséiert. D'Daf vum acetone ze stimuléieren Wuesstem vun H. pylori VerfÜgung SS1 zu flësseg Kultur vun der Verfehlung vun der Wuesstem Medien Resultat ka benotzt fir Wuesstem Konditiounen vun der Bakterie begéint rescht wann der gastric mucosa colonizing. Eng Alternativ ugesi fir d'Kolonisatioun Feeler vun der acxB VerfÜgung Mann- ass dass acetone carboxylase fir detoxification vun acetone néideg ass. Mä eis Echec all inhibition zu Wuesstem vun der acxB VerfÜgung Mann- vun der Zousätzlech vun acetone an der Kultur mëttelfristeg PSA géint dës sëtze Hypothes ze observéieren. Aner Méiglechkeet ass, datt d'Produiten vun der acxABC VerfÜgung operon eng onbekannt Reaktioun Meat datt fir Iwwerliewe oder Zell Wuesstem vun H. pylori VerfÜgung an der gastric mucosa wichteg ass. Weider biochemical characterization vun de Produkter vun der H. pylori acxABC VerfÜgung operon sollen tëschent dësen possibililties fir z'ënnerscheeden hëllefen. VerfÜgung Eng rezent transcriptome Analyse vum H. pylori VerfÜgung 26695 mat engem ganz Nepgen microarray ugeholl, datt d'Äntwert regulator HP1021 staark ageschalt Transkriptiouns vun acxABC VerfÜgung an scoAB VerfÜgung, an ageschalt Transkriptiouns vun Fada VerfÜgung an hp0693 zu enger grousser Distanz Mooss [24]. D'Auteure vun dëser Etude weisen, datt HP1021 de Promoteur reglementaresche Regioun vun acxABC VerfÜgung Photo'en suggeréiert, dass dës Äntwert regulator seng Auswierkungen op Transkriptiouns vun acxABC VerfÜgung an dass d'Genen am acetone ukuerbelt Stärekoup direkt sinn Deel vun engem regulon mediates kontrolléiert vun HP1021. Pflock a Kollegen identifizéiert 79 Genen vun H. pylori 26695 VerfÜgung deem Ausdrock war an der HP1021 Mann- verännert - 51 Genen um ënneschten Niveau vun der Mann- ausserdeem huet iwwerdeems 28 Genen am héichen Niveau [24] ausgedréckt huet. HP1021 Ënnerscheed meescht aner Äntwert Legislateuren an datt et der héichgradeg conserved phosphate-unhuelen aspartate Ermächtegung Éloquence, an engem cognate histidine kinase fir HP1021 huet net identifizéiert ginn. Et sinn contraire Reportagen op der Reunioun vun HP1021 an Äntwert ze dono pH, wéi och op der Reunioun vun H. pylori acxABC VerfÜgung an Äntwert pH ze niddreg [27-29]. Dës Ënnerscheeder kann un der Manéier wéinst ginn an déi d'Bakterien cultured goufen. Obwuel dëse Rapporten Konflikt mat wat fir Transkriptiouns vun HP1021 an Äntwert ze dono pH, Resultater aus béide Studie weisen, dass Bedingunge vun acxABC VerfÜgung op fräi Meenungsäusserung an Ugrëff-Regulatioun vun HP1021 Resultat Féierung. Dëst schéngt counterintuitive der visueller Roll vun HP1021 entscheet an activating Transkriptiouns vun acxABC VerfÜgung. Déi eenzeg aner Bakterie VerfÜgung fir déi Regulatioun vun der acxABC VerfÜgung operon iwwerpréift gouf X. autotrophicus VerfÜgung ass. Transcriptional Kontroll vun acxABC VerfÜgung zu X. autotrophicus VerfÜgung Ënnerscheed datt an H. pylori VerfÜgung. X. autotrophicus VerfÜgung Éloquence engem homolog vun HP1021, mä éischter reguléieren Transkriptiouns vun acxABC VerfÜgung via σ 54 (RpoN) an der σ 54-ofhängeg activator AcxR [15]. Obwuel H. pylori VerfÜgung σ 54 leie, ass de acxABC VerfÜgung operon net Deel vun der H. pylori VerfÜgung RpoN regulon [30]. VerfÜgung Trotz eis observation datt Stéierungen acxB VerfÜgung ongerecht schellt Kolonisatioun vun Mais vun H. pylori VerfÜgung SS1, rezent ganz Nepgen microarray Studie mat fofzeg-sechs weltwäit Vertrieder analyséieren vun H. pylori VerfÜgung a véier H. acinonychis VerfÜgung analyséieren uginn, datt d'acxABC VerfÜgung Genen presentéieren an all H. pylori sinn net VerfÜgung analyséieren [31]. Et wier ganz interessant, wann der isolates subtil acxABC ze bestëmmen VerfÜgung manner kompetitiv sinn an hir natierlech Lëntgen wéi analyséieren colonizing datt dës Genen besëtzen. Alternativ analyséieren suivéiert, acxABC VerfÜgung Adaptatiounen kann hunn, datt fir d'Feele vun acetone carboxylase Aktivitéit geluegt. Resultater vun de microarray Studie vun Gressmann a Kollegen uginn dass scoAB VerfÜgung, Fada VerfÜgung, HP0693 an HP0694 an all de H. präsent waren pylori VerfÜgung an H. acinonychis VerfÜgung analyséieren iwwerpréift [31]. Sou, VerfÜgung der selektiv Drock vun Erhalen d'Fähegkeet acetoacetate als potentiell Elektronen Donateur an H. pylori VerfÜgung an H. acinonychis VerfÜgung grouss gin schéngt wéi datt fir acetone ukuerbelt. VerfÜgung Conclusioun Räich Den H . pylori acxABC VerfÜgung operon encodes wahrscheinlech acetone carboxylase datt den Ëmbau vun acetone catalyzes zu acetoacetate an intim mat Genen hir Produiten sinn dermat ze Meat der mi Ëmbau vun acetoacetate zu acetyl-Coa verbonnen ass. Inspection vun genomes vun anere enk Zesummenhang ε-Proteobacteria hindeit datt zu acetone ukuerbelt Équipe Genen vun Bakterien bannent dëser subphylum nëmmen präsent sinn, datt de gastric mucosa colonize. D'acxABC VerfÜgung operon war net wichteg fir Maus Kolonisatioun vum H. pylori VerfÜgung SS1, mee et huet vläicht Kolonisatioun ze verbesseren. Weider characterization vun der putative H. pylori VerfÜgung acetone carboxylase an d'Produite vun der aner Genen am acetone ukuerbelt Gentherapie Stärekoup soll Abléck an wéi ketone Organer aus dem Provider bäidroen d'metabolic Wirtschaften vun H. déi pylori VerfÜgung an H d'Kapazitéit vun deene Bakterien. acinonychis VerfÜgung a wéi dës awer Impakt hir Gäscht ze colonize. VerfÜgung Method VerfÜgung bakteriell analyséieren a Medien VerfÜgung Plasmid Bauen a Klonen war zu Kolibakterie VerfÜgung Deformatioun DH5α gemaach déi war bei 37 ° C an Luria-Bertani mëttelfristeg cultured. H. pylori VerfÜgung Deformatioun 26695 war wéi de Schablounen fir polymerase Kette Reaktioun (Hinnen alleguer) benotzt. H. pylori VerfÜgung SS1 war wéi d'Wild-Typ Efforten fir all Experimenter benotzt a gouf cultured op entweder Blutt Agar oder tryptic Soja Agar ergänzt mat 5% Päerd serum (TSA-serum) bei 37 ° C ënner eng Atmosphär vu 4% O 2, 5% CO 2 an 91% N 2. Wann cultured zu flësseg mëttelfristeg, H. pylori VerfÜgung Kulturen sech zu Mueller-Hinton läschen ugebaut mat 5% Päerd serum nà an 30 μg /ml bacitracin oder mëttelfristeg definéiert Wuesstem beschriwwen Bruggrabber a Co-Aarbechter [22]. Kulturen (10-15 ml mëttelfristeg ugebaut) sech zu 150-ml serum vials zouene mat 20 mm Teflon /Kachläffel discs an Al Mutzen an ënnert eng Atmosphär vu 4% O 2, 5% CO 2, 10 ugebaut % H 2, 81% N 2. Anescht uginn, wann Antibiotiken an der mëttel- abegraff waren goufen se zu de folgende Konzentratioune notéiert: 100 μg /ml ampicillin, 30 μg /ml chloramphenicol, 200 μg /ml bacitracin 10 μg /ml vancomycin, an 10 μg /ml amphotericin B. VerfÜgung Inactivation vun acxB VerfÜgung (HP0696) zu H. pylori VerfÜgung SS1 VerfÜgung enger 2,3-kB DNA ofgesprengt datt acxB VerfÜgung vun Hinnen alleguer aus H. pylori VerfÜgung 22695 Deformatioun Implikatioune duerchgefouert gouf an gekloonten an pGEM-T (Promega). Eng Kaz VerfÜgung Kassett gouf op en 47III Site VerfÜgung Eco an dëser plasmid agefouert ongeféier an der Mëtt vun der gekloonten acxB VerfÜgung wellkomm. Déi doraus resultéierend plasmid war fir inactivating der chromosomal Kopie vun acxB VerfÜgung zu H. pylori VerfÜgung SS1 als Suizid Vecteure benotzt. De Selbstmord Vecteure agefouert an H. pylori VerfÜgung analyséieren ATCC 43504 an SS1, engem Klischee datt Mais colonize kann. Well widderholl Passage vum H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1 op mëttel- gemellt gouf an Verloscht vun infectivity zu Mais bis Resultat, war d'acxB VerfÜgung Mann- an engem frëschen isoléieren vun Deformatioun gebaut SS1 vun enger Krankheet Maus erholl. D'Zuel vun de Passage vun acxB VerfÜgung Mann- am SS1 Deformatioun gouf limitéiert an opgeholl, an de Mann- bei -80 ° C gefruer war gespäichert. D'Elteren SS1 Deformatioun war haten an gefruer an eng identesch Manéier gespäichert. Mir trieden vun Hinnen alleguer, datt d'chromosomal Kopie vun acxB VerfÜgung vun allelic Austausch mat der plasmid-dréit Kopie vun der Gentherapie mat engem Set vu primers datt de Site vun Stéierungen. VerfÜgung Wuesstem Kéiren fir H. pylori Agang erofgaangen ass
analyséieren VerfÜgung H. pylori VerfÜgung Zellen aus TSA-serum Placken op deen d'analyséieren op der viregter Dag streaked gouf zu phosphate-gefiermt Salins (PBS) a benotzt fir inoculate flësseg mëttelfristeg op e bëss 600 vun 0,03. Wou uginn, war aseptically bis mëttelfristeg acetone notéiert. Echantillon waren op verschiddene Mol an Zell Inhaltsverzeechnes geholl goufen duerch Liicht Effekt op sel gemooss 600. Alternativ, goufen liewensfäeg Zell zielt folgenden Serien dilution vun der Echantillon sech an di op TSA-serum. No 4 bis 5 Deeg incubation, d'Nummere vun Amphipolis administrativ Ënnerdeelunge (cfu) waren fir d'Placke sech. VerfÜgung Mouse Kolonisatioun VerfÜgung Mouse Kolonisatioun assays sech am Fong standing ëmschriwwen virdrun [32]. Dës Prozedure respektéiert mat den zoustännege Bundeslänner Richtlinnen an institutionell Politik fir d'Betreiung an Ëmgank Labo Déieren. Kuerz, goufen H. pylori VerfÜgung Zellen no 48 h vu Wuesstem op Blutt Agar Telleren an Spär vun PBS fir eng sel 600 vun 1,7 recoltéiert. Headspace am Kielech war mat Argon sparged Sauerstoff Belaaschtung ze minimiséieren.

• engem mechanistic exploration.
• Morphium-ofhängeg inhibition vun gastric Verletzung vum Waasserstoff am alkaline electrolyzed drénken water