XiangshaLiujunzi decotto allevia i sintomi della dispepsia funzionale regolando l'asse cervello-intestino e la produzione di neuropeptidi

XiangshaLiujunzi decotto allevia i sintomi della dispepsia funzionale regolando l'asse cervello-intestino e la produzione di neuropeptidi
Abstract
sfondo
medicina cinese xiangshaliujunzi decotto (XSLJZD) svolge un ruolo chiave nel trattamento di dispepsia funzionale (FD), un comune disturbo gastrointestinale clinica. Tuttavia, il meccanismo di questa malattia è chiaro. asse cervello-intestino regola il comportamento assunzione di cibo, e questo meccanismo di regolazione è mediato da neuropeptidi. Cervello-gut asse di valore e neuropeptide alterazione possono essere i meccanismi patologici di FD, e regolazione dell'asse cervello-intestino possono influenzare l'azione della medicina.
Metodi
Nel nostro esperimento, l'effetto di XSLJZD su FD è stata valutata in termini di assunzione di cibo, test di preferenza di saccarosio e elettromiografia. . Le variazioni di neuropeptidi [grelina, colecistochinina (CCK) e peptide intestinale vasoattivo (VIP)] sono stati rilevati attraverso immunoistochimica, real-time PCR ed ELISA
Risultati
XSLJZD maggiore assunzione di cibo e la percentuale di preferenza saccarosio (> 75%). Tuttavia, la risposta al trattenimento gastrica diminuita. Inoltre, XSLJZD aumento grelina, CCK, proteine ​​e geni VIP nello stomaco. XSLJZD anche aumentato grelina, CCK e VIP proteine ​​nel siero. Al contrario, XSLJZD diminuito l'espressione di mRNA di questi neuropeptidi nell'ipotalamo.
Conclusioni
XSLJZD alleviato i sintomi di FD per upregulating la produzione di grelina, CCK e VIP e aumentando i livelli di questi neuropeptidi in circolazione. Questa scoperta può aiutare a chiarire il meccanismo di FD e in grado di fornire ulteriori indicazioni circa la farmacocinetica di XSLJZD.
Parole
Xiangshaliujunzi decotto funzionale dispepsia Cervello-gut asse cervello-intestino peptide Sfondo dispepsia
funzionale (FD) è un disturbo comune clinica gastrointestinale caratterizzata da dolore e disagio persistente o ricorrente. Questo disagio è vissuto soprattutto nella parte superiore dell'addome, senza evidenza di anomalie strutturali organici associati a questi sintomi. In una indagine sulle famiglie, circa il 25% della popolazione normale negli Stati Uniti soffre FD [1]. In Cina, un preciso utente per FD è carente; tuttavia, diverse opere indicano che 8,66-11% dei pazienti optare per il ricovero in ospedale a causa di pienezza addominale [2-4]. Un certo numero di meccanismi fisiopatologici sono stati proposti per spiegare diversi sintomi clinici, tra cui ipersensibilità alla distensione gastrica, alloggio gastrica alterata di un pasto, in ritardo svuotamento gastrico, alterata sensibilità duodenale di lipidi o acidi, anormale motilità duodenojejunal e del sistema nervoso centrale (SNC) erettile; Tuttavia, le prove relativo a questi sintomi varia in pazienti [5, 6]. Quindi, il meccanismo preciso rimane sconosciuta.
FD, un esempio di disturbi gastrointestinali funzionali, è una condizione patologica comune che interessa l'intestino, che è controllata dal sistema nervoso [7]. Il tratto gastrointestinale (GIT) e il sistema nervoso, tra cui sistema nervoso centrale e sistema nervoso enterico (ENS), sono coinvolti in una comunicazione a due vie estrinseca dai nervi simpatico e parasimpatico. Questi nervi contengono fibre efferenti e fibre sensoriali afferenti necessarie per la segnalazione gut-cervello. nervi afferenti comprendono molti sensori ai terminali nell'intestino relative al meccano viscerale, chemio, e Noci-recettori; quando sono eccitati, questi sensori possono innescare vari riflessi viscerali che regolano le funzioni GIT, tra cui l'appetito [8-10]. I disturbi che interessano la regolazione della comunicazione a due vie tra il cervello e l'intestino (asse cervello-intestino) sono importanti nella patogenesi di queste malattie [11]. Neuropeptidi sono importanti mediatori del sistema nervoso e tra neuroni e altri tipi di cellule. Neuropeptidi, come la grelina, colecistochinina (CCK) e vasoattivo polipeptide intestinale (VIP), sono probabilmente implicati nella comunicazione gut-brain bidirezionale [12]. La grelina è un ormone di 28 amino acid peptide [13], che è prodotto prevalentemente da P /cellule D1 della ghiandola ossintiche gastrica; questo ormone si trova principalmente nello stomaco prossimale [14, 15]. La grelina è coinvolto in molte attività biologiche perché questo ormone svolge ruoli autocrini e paracrini nei processi normativi, come la regolazione dell'appetito, motilità intestinale, rilascio dell'ormone della crescita, immunomodulazione [16, 17] e l'avvio di assunzione di cibo sotto controllo neurale [18]. CCK appartiene alla famiglia intestino-cervello di ormoni peptidici [19]. Questo ormone è secreto dal sistema gastrointestinale in risposta all'assunzione di cibo; Inoltre, CCK è rilasciato dai neuroni specializzati nel plesso mioenterico e cervello [20]. In uno studio precedente, iniezione endovenosa di CCK sopprime la fame e l'alimentazione nell'uomo [21-23]. CCK partecipa anche nella trasduzione del segnale sull'asse cervello-intestino attraverso le principali fibre afferenti del nervo vago, e le stesse fibre probabilmente innescare l'espressione dei recettori per la grelina [24]. VIP, un neuropeptide acido 28-ammino, è distribuito in neuroni centrali e periferici; questo neuropeptide è coinvolto in molte funzioni fisiologiche intestinali, come la regolazione della motilità, l'attività secretoria e vasodilatazione, peristaltica inibizione riflessa nel relax circolare liscia strato muscolare e dello sfintere [25]. Neuronal VIP è anche un mediatore di risposta neurale all'aspirina indotta stomaco stato infiammatorio [26]. Questi studi hanno dimostrato che il disturbo dell'asse cervello-intestino può essere la patogenesi della FD
Xiangshaliujunzi decotto (XSLJZD), un decotto classico usato durante la dinastia Qing in Cina, svolge un ruolo chiave nel trattamento di FD.; XSLJZD è più efficace di farmaci procinetici nel trattamento di questa malattia [27]. Tuttavia, il meccanismo con cui XSLJZD allevia FD rimane sconosciuto. Abbiamo studiato il meccanismo della XSLJZD modifica per la prospettiva dell'asse cervello-intestino e neuropeptidi. Questo meccanismo di regolazione può essere la modalità specifica per il trattamento di FD.
Metodi
Animali
ratti maschi Sprague-Dawley sono stati utilizzati in tutti gli esperimenti (SPF animali da laboratorio Technology Co., Ltd., Pechino, Cina) . Gli esperimenti sono stati eseguiti in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio pubblicato dal National Institutes of Health (NIH Pubblicazioni No. 85-23, rivisti 1996) e con l'approvazione del Comitato Animal Care di Pechino Medical Centre. I 10 giorni di età cuccioli di ratto hanno ricevuto 0,2 ml di 0,1% iodoacetamide (IA) nel 2% di saccarosio mediante sonda gastrica al giorno per 6 giorni. Il gruppo di controllo ha ricevuto 0,2 ml di 2% di saccarosio [28]. Le 6 settimane di età ratti IA-trattati sono stati divisi casualmente in quattro gruppi: gruppo di modelli (n = 12
; hanno ricevuto lo stesso volume di acqua come veicolo), XSLJZD trattati gruppo (n =
12; trattato con XSLJZD), a basso dosaggio XSLJZD-gruppo trattato (n
= 12; trattato con la metà della dose di XSLJZD) e il gruppo domperidone-trattati (n =
12). Le 6 settimane di età ratti saccarosio trattati sono stati designati come gruppo di controllo (n =
12). Le 6 settimane di età ratti hanno ricevuto 5 ml /kg di ciascun farmaco o di acqua al giorno mediante sonda gastrica per 10 giorni.
Farmaci
XSLJZD è composto da otto diverse erbe medicinali cinesi (Tabella 1). I componenti sono stati preparati dal Dipartimento Farmaceutico di Xiyuan Hospital, affiliato con Accademia cinese di TCM. sono stati preparati estratti puri dei componenti. I componenti sono stati sciolti in acqua. metà dose (12,5 mg /kg) e la dose piena (25 mg /kg) di XSLJZD sono stati somministrati ai ratti nella rispettivamente basso dosaggio e gruppi XSLJZD-trattati,. Domperidone (3 mg /kg Xian Janssen Pharmaceutical Ltd.) è stato somministrato ai ratti del gruppo domperidone-trattata. Il dosaggio pieno di XSLJZD somministrata a ratti è stato convertito dal dosaggio somministrato agli esseri umani. Nel frattempo, i gruppi di modelli e di controllo hanno ricevuto 5 ml /kg al giorno di acqua mediante sonda gastrica per 10 days.Table 1 componenti della soluzione XSLJZD
Nome scientifico
parte utilizzata
Proporzione di ingredienti (100%)
Astragalus mongholicus
Root
12
Codonopsis pilosula
Root
12
Rhizoma atractylodis Macrocephalae
Rhizome
12
poria cocos
Sclerotium
12
Fructus aurantii
frutta
12
Amomum villosum
frutta
6.4
Ligusticum Chuanxiong Hort.
Sclerotium
9.6
Rhizoma Corydalis
Rhizoma
9.6
medicato lievito di fermentazione
prodotti
12
Glycyrrhiza uralensis Fisch.
Root
2.4 misura l'assunzione di
alimentare
l'assunzione di cibo è stata misurata prima e dopo il trattamento farmacologico. Dopo 18 ore di digiuno, i topi sono stati alloggiati individualmente. Il cibo è stato fornito per 7 ore, e il consumo di cibo è stato calcolato.
Test saccarosio preferenza (SPT)
SPT [29-31] è stato condotto prima e dopo i farmaci sono stati somministrati ai topi. Prima stati effettuati i test, i ratti sono stati trattati per adattarsi alla soluzione di saccarosio. Nella sessione di formazione, i ratti sono stati alloggiati individualmente per 48 h in una gabbia con due bottiglie; una bottiglia conteneva 1% soluzione di saccarosio, mentre l'acqua del rubinetto altra bottiglia contenuta. Le bottiglie sono stati collocati sul lato sinistro e sul lato destro del vano di alimentazione; le posizioni di queste bottiglie sono passati a un intervallo di 12 h per prevenire possibili effetti di preferenza lato di consumo di alcol. Dopo la sessione di allenamento è stata completata, solo acqua del rubinetto è stato fornito per 6 ore. Cibo e acqua sono stati poi trattenuti dai topi per 18 ore. Nella sessione di test, i topi sono stati forniti accesso a due bottiglie contenenti 1% soluzione di saccarosio e acqua per 1 h. preferenza saccarosio (SP) è stata quantificata con la seguente equazione: SP = [aspirazione saccarosio (g)] /[aspirazione saccarosio (g) + ingresso dell'acqua (g)]. La percentuale di topi in ciascun gruppo con un valore SP di >. Il 75% è stato contato e confrontati attraverso test chi-quadrato
distensioni palloncino gastrico per elettromiografico (EMG) test [28]
Dopo essere stato sottoposto a digiuno , i ratti sono stati anestetizzati intraperitoneale con 1% di sodio pentobarbital (3 mg /kg) dopo i farmaci sono stati somministrati per 10 giorni. Balloons (2,5 cm di lunghezza) a base di preservativi in ​​lattice sono attaccati ad una lunga catetere. Un'incisione epigastric stato fatto, e il pallone è stato posto nello stomaco attraverso un'incisione sulla punta del fondo. Il piloro non è stato ostacolato, ed è stato osservato alcun blocco di svuotamento gastrico. Un tubo di polietilene per gonfiare il palloncino gastrico di aria è stato esteriorizzato sul retro del collo. Elettromiografico (EMG) studi sono stati condotti una settimana dopo l'intervento chirurgico. Prima l'esperimento, tutti gli animali sono stati anestetizzati per via intraperitoneale con 1% di sodio pentobarbital (3 mg /kg). . Poi, una coppia di fili di acciaio inossidabile è stato impiantato nel acromiotrapezius (un collo muscolare superficiale) e esternalizzato sul retro del collo per le registrazioni EMG
Nell'esperimento, i ratti hanno ricevuto una serie di 20 s dilatazioni palloncino gastrico: 10, 20, 30, 40 e 50 mmHg (misurata con uno sfigmomanometro) con un intervallo di 2 min tra dilatazioni. Un sistema sperimentale BL-420S biologica e funzionale è stato utilizzato per registrare EMG continuo e per visualizzare i dati. EMG è stata corretta, e l'area sotto la curva è stata calcolata per 20 s periodo di distensione. L'attività di base, ha ottenuto 20 s prima di distensione, è stata sottratta dalla EMG indotta da distensione. I dati sono stati presentati come il cambiamento dal basale in funzione della pressione di distensione.
Immunoistochimica
Dopo 10 giorni di trattamento farmacologico, i ratti sono stati anestetizzati con 1% di sodio pentobarbital. Cervelli e stomaci sono stati rimossi, fissati con formalina al 10% e inclusi in paraffina. I tessuti sono stati quindi tagliati in 10 sezioni micron, montate su Superfrost più slitte (1 sezione /vetrino) e conservati a temperatura ambiente. Prima l'esperimento è stato condotto, i vetrini sono stati deparaffinised utilizzando xilene, sottoposto a microonde calore mediata recupero dell'antigene utilizzando tampone citrato a pH 6 per 45 minuti e sono stati raffreddati a temperatura ambiente. I campioni sono stati immersi nel 3% H 2O 2 per 20 minuti per inattivare la perossidasi endogena e sono stati successivamente lavati con PBS (tre volte per 2 minuti ciascuno). Le sezioni sono state incubate overnight a 4 ° C con i seguenti anticorpi: policlonale di coniglio anti-grelina (1: 100, Abbiotec), policlonale di coniglio anti-VIP (1:20, Abcam) e policlonale di coniglio anti-CCK-8 (1: 100, Abbiotec) in tampone contenente 0,01 M PBS. Con 9:00 del giorno successivo, le diapositive sono state lavate con PBS (tre volte per 2 minuti ciascuno) e sono stati incubati in Polink-2 Plus® Polimero HRP Detection System (ZSGB-BIO, Pechino) secondo le istruzioni del produttore. Successivamente, le sezioni sono state lavate tre volte con PBS, visualizzato utilizzando DAB per 10 min a 37 ° C e lavate con acqua corrente per 2 min. Dopo la disidratazione, i vetrini sono stati montati con balsamo neutro. Le sezioni sono state visualizzate sotto un microscopio, e le immagini sono state acquisite utilizzando una fotocamera. Almeno tre sezioni per ratto e tre ratti per gruppo sono stati analizzati. Significa densità ottica integrata (MOD) è stato calcolato utilizzando Immagine-Pro Plus versione del software 6.0 di analisi. Real-time PCR
Dopo 10 giorni di trattamento farmacologico, i ratti sono stati anestetizzati con 10% di cloralio idrato. L'ipotalamo e stomaci di questi ratti sono stati rimossi. mRNA è stata quantificata mediante RT-PCR. L'RNA totale è stato estratto da ipotalamo e lo stomaco dei ratti utilizzando Promega SV sistema di isolamento di RNA totale (Promega, USA) secondo le istruzioni del produttore. RNA totale (2 mg) è stato retrotrascritto utilizzando PromegaGoScript (Promega, USA) secondo le istruzioni del produttore. Le condizioni di cicli termici utilizzati sono elencati come segue: attivazione iniziale a 95 ° C per 30 s; 40 cicli di denaturazione a 95 ° C per 5 s, annealing a 60 ° C per 30 s; e sciogliere determinazione curva a 65 ° C a 95 ° C per 5 s. I primer sono stati progettati utilizzando Primer-BLAST (NCBI, USA) secondo le sequenze di mRNA (da GenBank) di grelina (NM_021669.2), VIP (NM_053991.1), CCK (NM_012829.2) e gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi ( GAPDH; NM_017008.4, come controllo). I prodotti di PCR sono stati analizzati su gel di agarosio 0,8% per confermare che questi prodotti erano della dimensione attesa. I risultati sono stati normalizzati contro espressione GAPDH. Le sequenze di primer sono elencati come segue. I primer in avanti e all'indietro del gene GAPDH erano 5'-GGCACAGTCAAGGCTGAGAATG-3 'e 5'-ATGGTGGTGAAGACGCCAGTA-3', rispettivamente. I primer in avanti e all'indietro del gene grelina erano 5'-CCAAGGCCATGGTGTCTTCA-3 'e 5'-CTGCAGTTTAGCTGGTGGCTTC-3', rispettivamente. I primer in avanti e all'indietro del gene VIP erano 5'-TCAGTTCCTGGCGATCCTGAC-3 'e 5'-CTCCGCTAAGGCATTCTGCAA-3', rispettivamente. I primer in avanti e all'indietro del gene CCK erano 5'-CCCGATACATCCAGCAGGTC-3 'e 5'-AAATCCATCCAGCCCATGTAGTC-3', rispettivamente. 2 -ΔΔCt è stato calcolato, e le differenze tra i gruppi sono stati analizzati utilizzando test non parametrici.
ELISA
I ratti sono stati anestetizzati con 10% di cloralio idrato dopo 10 giorni di trattamento farmacologico. I campioni di sangue sono stati raccolti in provette sterili in bianco e lasciato coagulare per 2 ore a temperatura ambiente. Successivamente, questi campioni sono stati centrifugati a 1000 rpm per 15 min. Siero è stato rimosso e conservato a -80 ° C. La grelina, VIP, e CCK sono stati quantificati utilizzando specifici kit ELISA forniti da CUSABIO (Wuhan, Cina). Ogni siero (100 ml) è stato mescolato con il diluente campione secondo le istruzioni del produttore. Assorbanza è stata determinata a 450 nm.
Analisi dei dati
Tutti i valori, tranne quelli ottenuti mediante test di preferenza saccarosio, presentati come media ± SE. ANOVA o test non parametrico è stato condotto per il confronto. confronti post hoc sono stati eseguiti utilizzando test di Student-Newman-Keuls o Mann-Whitney U
test. L'analisi statistica è stata eseguita in SPSS 17.0. P
. ≪ 0.05 è stato considerato statisticamente significativo
Risultati
XSLJZD aumentato l'assunzione di cibo dei ratti con FD
dopo il digiuno durante la notte, ratti con FD consumati minore quantità di cibo rispetto ai ratti di controllo nel corso di una 7 periodo h (10,7 ± 0,6 vs 8,7 ± 0,5; P = 0.01
; n = 10
in ciascun gruppo). Il gruppo trattato con XSLJZD consumata una maggiore quantità di cibo rispetto al gruppo del modello (10,7 ± 0,9 vs 8,7 ± 0,5; P = 0.04
; n = 10
in ciascun gruppo). Allo stesso modo, il gruppo trattato con thedomperidone consumata una maggiore quantità di cibo rispetto al gruppo del modello (12,4 ± 0,7 vs 8,7 ± 0,5; P = 0.00
). è stata osservata alcuna differenza significativa tra il gruppo trattato con XSLJZD a basso dosaggio e il gruppo di modelli (8,4 ± 1,2 vs 8,7 ± 0,5; P
> 0,1) (Fig. 1). Figura. assunzione 1 Qualità di ogni gruppo. L'assunzione di cibo era più bassa nel gruppo di modelli rispetto al gruppo di controllo. Nel gruppo trattato con XSLJZD e il gruppo trattato con Domperidone, è stato più alto rispetto al gruppo di modelli. * P
< 0,05 rispetto al gruppo di controllo; ** P
< 0,01 rispetto al gruppo di controllo; △ P
< 0,05 rispetto al gruppo del modello; △△ P
< 0,01 rispetto al gruppo di modello. I dati sono stati presentati come media ± SE
XSLJZD ha aumentato la percentuale di consumo di saccarosio (> 75%) dei ratti con FD
nel test di preferenza di saccarosio, nessuna differenza significativa è stata osservata in termini di saccarosio e l'assunzione di acqua tra il gruppi (P
> 0,05). Tuttavia, la percentuale di ratti con valore SP di > 75% era significativamente ridotta nei ratti con FD (30%) rispetto ai ratti di controllo (80%, p = 0,001
; n =
10 in ciascun gruppo ), come indicato dal test del chi-square. La percentuale significativamente aumentato nel gruppo XSLJZD trattato (75%) e nel gruppo trattato con domperidone (75%) rispetto ai ratti con FD (30%, p = 0,004
; n = 10
in ciascun gruppo). Il gruppo a basso dosaggio XSLJZD trattati non ha mostrato differenze significative dal gruppo del modello (Fig. 2). Figura. 2 Percentuale di ratti di ogni gruppo con preferenza saccarosio valore >(PS); il 75%. La percentuale di valore di SP > 75% nel gruppo modello è stato inferiore rispetto al gruppo di controllo. Nel gruppo trattato con XSLJZD e il gruppo trattato con Domperidone, la percentuale era più alta rispetto al gruppo di modelli. ** P
< 0,01 rispetto al gruppo di controllo e △△ P
< 0,01 rispetto al gruppo di modelli con il test chi-quadrato. I dati sono stati presentati come percentuale di ratti di ogni gruppo con un valore SP di > 75%
XSLJZD ridotto l'ipersensibilità alla distensione gastrica di ratti con FD
Dopo il trattamento di 10 giorni, è stata eseguita test SME. Rispetto ai ratti di controllo, i ratti con FD significativamente aumentati in EMG a pressioni distensione di 20 mmHg (179,3% rispetto al 282,5%; P = 0.000
; n = 3
in ciascun gruppo), 30 mmHg (254,9% vs 420,1%; P = 0,000
) e 40 mmHg (315,4% contro 412,3%; P = 0,002
). Tuttavia, nessuna differenza significativa è stata osservata a 50 mmHg. XSLJZD inibito l'attività EMG di ratti con FD di distensione gastrica in modo dose-dipendente. XSLJZD suscitato un effetto significativo a 20 (277,2% rispetto al 282,5%; P = 0,016
), 30 (398,3% rispetto al 420,1%; P = 0.003
) e 40 mmHg (405,5% contro 412,3%; P = 0,015
). A basse dosi significativamente influenzato le risposte EMG solo al 30 (362,4% rispetto al 420,1%; P = 0.034
) e 40 mmHg (353,3% contro 412,3%; P = 0,038
) rispetto ai ratti con FD, come indicato con ANOVA. Inoltre, il gruppo di controllo non differiva significativamente dal gruppo domperidone-trattamento (P
> 0,1) (Fig. 3). Figura. 3 elettromiografica (EMG) risposta alla distensione gastrica di ratti di ciascun gruppo. una risposta EMG alla distensione gastrica di ciascun gruppo a distensione di 10 mmHg a 50 mmHg. Nel gruppo trattato con XSLJZD, EMG è stato ridotto in modo significativo rispetto al gruppo di modelli a distensione di 20 mmHg, 30 mmHg e 40 mmHg. ** P
< 0,01 rispetto al gruppo di controllo. I dati sono stati presentati come media ± SE. b risposta Rappresentante EMG a 30 mmHg di ogni gruppo
Espressione di neuropeptidi relativi nel cervello e lo stomaco di ogni gruppo
grelina, CCK-8 e VIP sono stati espressi come neuropeptidi granulari nel citoplasma dell'ipotalamo (Figg. 4, 5 e 6) e strato basale dello stomaco (figg. 7, 8 e 9). Le espressioni di questi neuropeptidi erano inferiori nel cervello e nello stomaco di ratti con FD rispetto a quelli dei ratti di controllo. Nello stomaco e l'ipotalamo, grelina, CCK-8 e VIP dei ratti con FD erano inferiori a quelli dei ratti di controllo (P
< 0.05; n = 3
in ciascun gruppo). Basse dosi di gruppi XSLJZD trattati non differivano significativamente dal gruppo modello. Tuttavia, XSLJZD significativamente aumentato la grelina, CCK-8 e VIP di ratti con FD (P
< 0.05; n
= 3). La grelina, CCK-8 e VIP del gruppo domperidone-trattati erano superiori a quelli del gruppo del modello, fatta eccezione per VIP nell'ipotalamo (P
< 0.05; n
= 3) (Tabella 2 e Fig . 10). Figura. 4 L'espressione di grelina in ipotalamo di ogni gruppo. un gruppo di controllo. b gruppo Modello. Gruppo C XSLJZD-trattata. d XSLJZD basso dosaggio gruppo trattato. Gruppo E Domperidone-trattata. La grelina distribuita nel citoplasma di ipotalamo. (Sezioni di tessuto sono state viste a 100 × ingrandimenti.) Cellule positive per grelina erano marrone e circolare o a forma di pera. Meno cellule positive possono essere visti nel gruppo modello di
Fig. 5 Espressione di CCK-8 nell'ipotalamo di ciascun gruppo. un gruppo di controllo. b gruppo Modello. Gruppo C XSLJZD-trattata. d XSLJZD basso dosaggio gruppo trattato. Gruppo E Domperidone-trattata. CCK-8 distribuisce principalmente nel citoplasma di ipotalamo. (Sezioni di tessuto sono state viste a 100 × ingrandimenti.) Delle cellule positive per CCK-8 erano marrone e circolare o ovale. Meno cellule positive possono essere visti nel gruppo del modello e basso dosaggio gruppo XSLJZD trattato
Fig. 6 L'espressione di VIP a dell'ipotalamo di ogni gruppo. un gruppo di controllo. b gruppo Modello. Gruppo C XSLJZD-trattata. d XSLJZD basso dosaggio gruppo trattato. Gruppo E Domperidone-trattata. Neuropepide VIP distribuisce principalmente nel citoplasma di ipotalamo. (Sezioni di tessuto sono state viste a 100 × ingrandimenti.) Cellule positive per VIP erano marrone e circolare o ovale. Meno cellule positive possono essere visti nel gruppo del modello e basso dosaggio XSLJZD-gruppo trattato e gruppo domperidone-trattati
Fig. 7 L'espressione di grelina nello stomaco di ogni gruppo. un gruppo di controllo. b gruppo Modello. Gruppo C XSLJZD-trattata. d XSLJZD basso dosaggio gruppo trattato. Gruppo E Domperidone-trattata. La grelina è stata espressa come neuropetide granulare nel citoplasma della strato basale dello stomaco (sezioni di tessuto sono state viste a 20 × ingrandimenti.) Cellule Brown sono stati positivi per grelina. gruppo Modello espresso inferiori grelina rispetto al gruppo di controllo, XSLJZD significativo aumento grelina di ratti con FD
Fig. 8 Espressione di CCK-8 nello stomaco di ciascun gruppo. un gruppo di controllo. b gruppo Modello. Gruppo C XSLJZD-trattata. d XSLJZD basso dosaggio gruppo trattato. Gruppo E Domperidone-trattata. CCK-8 distribuisce principalmente in strato germinativo di stomaco. (Sezioni di tessuto sono state viste a 20 × ingrandimenti.) Positivo CCK-8 espressa come granuli marrone, distribuita nel citoplasma. L'espressione di CCK-8 era più bassa nel gruppo di modelli e basso dosaggio gruppo XSLJZD-trattati, superiore nel gruppo di controllo, gruppo XSLJZD trattato e gruppo domperidone trattato
Fig. 9 L'espressione di VIP a stomaco di ogni gruppo. un gruppo di controllo. b gruppo Modello. Gruppo C XSLJZD-trattata. d XSLJZD basso dosaggio gruppo trattato. Gruppo E Domperidone-trattata. VIP è stata espressa come neuropetide granulare nel citoplasma della strato basale dello stomaco (sezioni di tessuto sono state viste a 20 × ingrandimenti.) Cellule Brown sono stati positivi per VIP. L'espressione di VIP era più bassa nel gruppo di modelli e più alto in gruppo di controllo, gruppo XSLJZD-trattati e domperidone-gruppo trattato
Tabella 2 Valore MOD di neuropeptidi relativi nello stomaco e ipotalamo di ogni gruppo
Part
Gruppi
grelina
CCK-8
VIP
stomaco
controllo
0,583 ± 0,008
0,714 ± 0,042
0,823 ± 0,025
Modello
0,368 ± 0,010 **
0,467 ± 0,057 *
0,486 ± 0,025 **
XSLJZD
0,716 ± 0,050 * △△
0,706 ± 0,090 △
0,861 ± 0,107 △△
basso XSLJZD dosi
0,356 ± 0,044 **
0,498 ± 0,039
0,652 ± 0,082
Domperidone
0,543 ± 0,163 △△
0,863 ± 0,122 △△
0,711 ± 0,092 △
ipotalamo
controllo
0,497 ± 0,036
0,825 ± 0,081
0,561 ± 0,077
Modello
0,268 ± 0,010 **
0,372 ± 0,006 **
0,365 ± 0,017 *
XSLJZD
0,417 ± 0,017 △△
0,995 ± 0,088 △△
0,594 ± 0,105 △
basse dosi XSLJZD
0,372 ± 0,011 * △
0,540 ± 0,050 *
0,391 ± 0,012
Domperidone
0,441 ± 0,059 △△
0,824 ± 0,163 △△
0,449 ± 0,046
* P
< 0,05 rispetto al gruppo di controllo; ** P
< 0,01 rispetto al gruppo di controllo; Δ P
< 0,05 rispetto al gruppo del modello; ΔΔ P
< 0,01 rispetto al gruppo di modello di
Fig. 10 valore medio di densità ottica integrata (MOD) di neuropeptidi relativi. un valore MOD di neuropeptidi nello stomaco. b valore MOD di neuropeptidi in dell'ipotalamo. * P
< 0,05 rispetto al gruppo di controllo; ** P
< 0,01 rispetto al gruppo di controllo. △ P
< 0,05 rispetto al gruppo del modello; △△ P
< 0,01 rispetto al gruppo di modello. I dati sono stati presentati come media ± SE
XSLJZD aumentato i neuropeptidi nel siero di ratti con FD
grelina è stato ridotto nel siero di ratti con FD rispetto a quello dei ratti di controllo (46,72 ± 4,92 vs. 189.9 ± 49.96; P = 0.007
; n = 7
in ciascun gruppo). Al contrario, la grelina è stata aumentata nel gruppo XSLJZD trattato rispetto al gruppo del modello (186.4 ± 40.13 vs 46.72 ± 4.92; P = 0.009
; n = 7
in ciascun gruppo). Nessuna differenza significativa è stata osservata tra il gruppo di controllo, a basso dosaggio gruppo XSLJZD trattato e gruppo domperidone trattato in termini di grelina nel siero. Simile a grelina, CCK è stato ridotto nel siero di ratti con FD rispetto a quello dei ratti di controllo (22.77 ± 3.59 vs 77.19 ± 14.36; P
= 0,003; n = 7
in ciascun gruppo). CCK è stato aumentato di XSLJZD in modo dose-dipendente. I gruppi XSLJZD trattati con basse dosi non differivano in modo significativo con i ratti con FD in termini di CCK nel siero (P
> 0,10); Tuttavia, il gruppo trattato con XSLJZD mostrato un aumento significativo CCK siero rispetto a quello dei ratti con FD (82.97 ± 13.47 vs 22.77 ± 3.59; P = 0.001
; n = 7
in ciascun gruppo). VIP è stato ridotto nel siero di ratti con FD (16,95 ± 5,15 vs 75.61 ± 20.12; P = 0,003
; n = 7
in ciascun gruppo) rispetto a quella del gruppo di controllo. VIP nel gruppo trattato con XSLJZD aumentato in modo significativo rispetto a quella del gruppo del modello (62.71 ± 19.05 vs 16.95 ± 5.15; P = 0.017
; n = 7
in ciascun gruppo). è stata osservata alcuna differenza significativa nel VIP di basso dosaggio gruppi XSLJZD trattati e gruppi domperidone trattati. Tuttavia, una dose moderata di XSLJZD potrebbe aumentare VIP nel siero (Fig. 11). Figura. 11 Espressione dei neuropeptidi relativi nel siero. una espressione di grelina di ogni gruppo. b Espressione di CCK di ciascun gruppo. c Espressione di VIP di ogni gruppo. ** P
< 0,01 rispetto al gruppo di controllo; ΔΔ P
< 0,01 rispetto al gruppo di modello. I dati sono stati presentati come media ± SE
XSLJZD aumentato l'espressione genica dei relativi neuropeptidi nello stomaco
Nello stomaco, le espressioni mRNA di grelina, CCK e VIP di ratti con FD erano inferiori rispetto a quelli del controllo ratti (P ​​
< 0.05; n = 6
in ciascun gruppo). Le espressioni di mRNA di CCK e VIP del gruppo XSLJZD trattati erano superiori a quelli del gruppo di modelli. Nessuna differenza significativa nell'espressione grelina è stata osservata nel modello e gruppi trattati con farmaci. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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