Relazione tra infezione da H. pylori e le caratteristiche clinico-patologici e la prognosi di gastrico rapporto cancer

tra l'infezione da H. pylori e le caratteristiche clinico-patologici e la prognosi del cancro gastrico
Abstract
Background
lo scopo di valutare il rapporto tra H. pylori e la caratteristiche clinico-patologiche e la prognosi del cancro gastrico per la rilevazione quantitativa di H. pylori.
Metodi
157 pazienti sono stati arruolati, tutti i pazienti avevano un record di parametri clinico-patologici. I campioni tra cui il tumore e non neoplastica sono stati rilevati per H. pylori da Real-Time PCR ed analizzati in modo retrospettivo i dati clinici. . Le variabili che influenzano in modo indipendente la prognosi sono stati indagati mediante analisi multivariata utilizzando il modello di rischio proporzionale di Cox
Risultati
infezione da H. pylori è risultato maggiore nel tessuto non neoplastico rispetto al tessuto tumorale (p < 0,05), H. pylori infezione e le sue copie sono state collegate al sito del tumore e N messa in scena (p < 0,05). La sopravvivenza globale (OS) in tutti i 157 pazienti non ha alcuna correlazione con lo stato di infezione da H. pylori (p = 0.715). Per quanto riguarda i pazienti che hanno subito un intervento chirurgico curativo, la sopravvivenza libera da recidiva (RFS) non ha alcuna correlazione con lo stato di infezione da H. pylori (p = 0,639). Tra i pazienti positivi H. pylori, sistema operativo e RFS di quelli con copie superiori erano più lunghi che in pazienti con bassi copie, ma non vi era alcuna differenza statisticamente significativa
. Conclusioni
stato di infezione da H. pylori e le sue copie sono state correlate a N messa in scena. Il sistema operativo e RFS nei pazienti con stato positivo H. pylori non ha alcuna differenza significativa dai pazienti con stato negativo H. pylori.
Sfondo
cancro gastrico è la seconda causa più comune di morte per cancro, anche se l'incidenza è diminuita drammaticamente in alcuni paesi sviluppati negli ultimi decenni [1], i pazienti affetti da questa malattia comunemente hanno una prospettiva poveri [2]. Anche dopo l'intervento chirurgico potenzialmente curativa, più della metà dei pazienti hanno recidive tumorali. Di metastasi linfonodali, profondità di invasione, l'età, e la posizione del tumore sono stati identificati come fattori prognostici clinico-patologiche più significativi [3, 4]. Tuttavia, NCCN Clinical Practice Guideline di cancro gastrico suggerisce che i pazienti con cancro gastrico dovrebbe sradicare Helicobacter pylori (H. pylori) per ridurre il rischio di recidiva, che è stata definita come una prova di classe [5].
H. pylori, un batterio gram -negativa microaerofili batterio a spirale, per la prima volta proposto per essere associate a cancro gastrico da co-scopritore Marshall nel 1983 [6]. Nel 1994, l'Agenzia Internazionale per la Ricerca sul Cancro (IARC) classificati H. pylori come un classico agente cancerogeno definito [7, 8]. Dopo di che, molti studi sono stati effettuati, comprese indagini epidemiologiche [9], studi sperimentali [10], animale dati sperimentali [11, 12], gli studi clinici caso-controllo [13, 14]. La maggior parte di questi studi rafforzato il fatto che H.pylori è la principale causa di adenocarcinoma gastrico. Tuttavia, questo punto di vista è ancora controverso e più è richiesto di dati affidabili. Come l'infezione da H. pylori conduce al cancro gastrico non è ancora del tutto chiaro, come una varietà di fattori patogeni può agire su diversi livelli, come i fattori di virulenza [15], il danno al DNA, fattori dell'ospite [16, 17] e COX-2 [ ,,,0],18]. L'incidenza di cancro gastrico è un multi-fattore e il processo multi-step.
Allo stato attuale, non ci sono dati convincenti per il rapporto tra stato di infezione da H. pylori o copie e le caratteristiche clinico-patologici. Inoltre, le differenze in termini di sopravvivenza prognosi dei pazienti che sono positivi per H. pylori rispetto a coloro che sono negativi rimane sconosciuto. In una percentuale variabile di pazienti affetti da cancro gastrico, l'infezione da H. pylori non può essere rilevato e le caratteristiche cliniche e patologiche distinte sono state descritte in questo sottogruppo [19, 20]. Inoltre, un recente studio tedesco ha fornito la prova di una prognosi migliore nei pazienti con infezione da H. pylori rispetto ai casi negativi [21] e uno studio italiano ha dimostrato che lo stato negativo H. pylori è stata associata con prognosi sfavorevole nei pazienti con cancro gastrico [22] . Tuttavia, a nostra conoscenza, questi risultati clinicamente rilevanti sono state non sono ancora stati convalidati in grandi esperienze di altri centri. La maggior parte di questi studi hanno utilizzato l'analisi sierologiche come unico metodo per valutare lo stato H. pylori, alcuni di loro anche aggiunto il metodo molecola di PCR; quindi i risultati di questi studi sono poco convincente. In realtà, ci sono molti tipi di metodi previsti per la rilevazione della H. pylori, tra cui la cultura, la diagnosi istopatologica, prova dell'ureasi, metodo molecola, analisi sierologiche e UBT, ma solo la cultura, Real-Time PCR e UBT hanno un alto grado di sensibilità e specificità [23].
In questo studio, abbiamo usato il metodo di Real-time PCR per rilevare H. pylori stato di infezione e le sue copie, e volto ad indagare il potenziale impatto dello stato di H. pylori sulle caratteristiche clinico-patologiche del cancro gastrico dei pazienti che hanno subito un intervento chirurgico e sono stati seguiti per un periodo di tempo significativo per valutare le differenze nella sopravvivenza libera da recidiva e la sopravvivenza globale.
pazienti e metodi
pazienti
La popolazione in studio consisteva di 157 consecutivi pazienti (107 uomini e 50 donne) in programma per la chirurgia a partire dal 1 gennaio 2002 al 31 dicembre 2006 al Sun Yat-Sen University Cancer center, Guangzhou, Cina. L'età media dei pazienti era di 57,2 y (range: 27-78 y), Tutti i pazienti arruolati in questo studio avevano un istologicamente confermata la diagnosi di cancro gastrico primaria che è stata confermata patologicamente dopo l'intervento chirurgico. I pazienti che hanno subito un intervento chirurgico non resettiva, e quelli con il tipo Siewert I cardias adenocarcinoma sono stati esclusi dallo studio i pazienti con la terapia di eradicazione H. pylori o il trattamento con antibiotici, composti del bismuto contenenti, antagonisti del recettore H2 o inibitori della pompa protonica entro 4 settimane inoltre erano stati esclusi dallo studio. Chirurgia consisteva di subtotale o gastrectomia totale in tutti i pazienti. Una tecnica standardizzata è stato usato per la resezione chirurgica e linfoadenectomia, come descritto altrove [3]. L'età, il sesso, il tipo di intervento chirurgico, localizzazione del tumore, stadio TNM, la chemioterapia, il campione di lunghezza, le dimensioni del tumore, e la differenziazione del tumore, sono stati registrati per ciascun paziente in un database. lunghezza del tumore e la larghezza di campioni freschi sono stati registrati dai patologi. pTNM classificazione ha seguito i criteri della 6 ° edizione del UICC [24]. Tutti i pazienti che hanno subito alcun tipo di chemioterapia erano sul regime-a base di 5-FU, e il regime di base era FOLFOX6 o XELOX. Tutte le ricerche sperimentali che viene segnalato nel manoscritto hanno ottenuto il consenso informato da parte dei soggetti dello studio ed è stato eticamente eseguita con l'approvazione di un comitato etico appropriate a Sun Yat-sen University of Cancer Center.
Tessuto tumorale e non neoplastica tessuto da tutti i pazienti è stato raccolto dal campione resecati in sala operatoria entro 30 minuti dopo la rimozione dello stomaco. tessuto non-neoplastico è stato rimosso dal tessuto gastrico normale ad una distanza di almeno 5 cm dal tumore. Quando neoplasia coinvolto l'intera antro, mucosa non neoplastica è stato rimosso dal terzo medio o superiore dello stomaco. I campioni sono stati immediatamente congelati in azoto liquido, elaborati, codificati e conservati a -80 ° C in una banca dei tessuti situata nel laboratorio del dipartimento di ricerca scientifica
. DNA Estrazione e Real-Time PCR per H. pylori
sia tessuto tumorale e tessuto non-neoplastico ottenuto da tutti i pazienti inclusi nello studio è stata recuperata dalla banca dei tessuti. DNA è stato estratto da 50 mg di tessuto solido (sia tumore e non neoplasitic) utilizzando sgabello minikit QIAamp DNA (Qiagen). Al fine di aumentare la resa di DNA purificato, tutta surnatante (500 microlitri) è stato utilizzato per ulteriore purificazione DNA dopo l'aggiunta della compressa Inhibitex, adattando le seguenti fasi del protocollo Qiagen a questo importo campione alterato. Da H. pylori isola, il DNA è stato estratto utilizzando il minikit QIAamp DNA secondo il protocollo per l'isolamento del DNA genomico da colture batteriche (Qiagen).
GenBank è stato cercato per le sequenze dei geni che codificano 16S rRNA di H. pylori. Le sequenze pubblicate sono state allineate utilizzando CLUSTALW http:... //Www EBI ac uk /ClustalW /e primer e le sonde sono stati progettati utilizzando il software Primer Express (Perkin-Elmer /Applied Biosystems, Foster City , Calif.) e il software di progettazione della sonda LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Germania). Una ricerca BLAST è stata effettuata per verificare la specificità delle sequenze di DNA del primer e sonde http:.. //Www NCBI nlm NIH gov /BLAST /
Il test conteneva due PCR... primer (Daan Gene Co, Ltd di Sun Yat-sen University, Guangzhou, Cina): primer1 F (5'-GCT AAG AGA TCA GCC TAT GTC -3 ') e Primer2 R (5'-CCG TGT CTC AGT TCC AGT GT- 3 '), progettato per amplificare una coppia frammento di 118 base del 16S rDNA, insieme con una sonda, Tensensor (5'-LCRed705-GCA TGT GGT TTA ATT CGA AGA TAC ACphos- 3'), marcato con il fluoroforo LC Red 705 (Daan Gene Co, Ltd di Sun Yat-sen University, Guangzhou, Cina).
Ogni Real-time PCR è stata effettuata in un volume finale di 50 ml contenente un buffer di 10 ml (10 mM Tris-HCl (PH8.0), 50 mM KCl e MgCl 1,5 mm 2), 2 ml di cDNA, 1 ml di ciascun primer (F 10 pmol /ml, R 10 pmol /ml), 1 ml di ogni deossinucleotide (10 mM), 1 ml di Taq polimerasi (3U /ml) (Daan Gene Co, Ltd di Sun Yat-sen University, Guangzhou, Cina) e 1 sonda microlitri (Daan Gene Co, Ltd di Sun Yat-sen University , Guangzhou, Cina). Ogni miscela di reazione è stato amplificato come segue: denaturazione a 93 ° C per 3 minuti seguito da 40 cicli di denaturazione a 93 ° C per 30 secondi; annealing a 55 ° C per 45 secondi; ed estensione a 72 ° C per 40 secondi. Amplificazioni sono state effettuate con un motore di DNA ABI 7500 (Applied Biosystems Inc, CA, USA). Usato H. pylori curve di amplificazione standard per rendere il grafico di regressione della curva lineare standard, e quindi cambiato i valori Ct nel numero di copie H. pylori.
Follow-up
Tutti i pazienti, dopo la dimissione dall'ospedale, entrarono in un follow-up del programma in base al protocollo standard [25]. Entro i primi 2 anni dopo l'intervento chirurgico, un follow-up ogni 3 mesi consisteva in un esame clinico, esami di routine del sangue, la valutazione della concentrazione di marcatori tumorali, e ecografia addominale o TAC; l'endoscopia è stato fatto ogni 6 mesi per i primi 2 anni dopo l'intervento. Per i prossimi 3 anni, i pazienti sono stati seguiti ogni 6 mesi e sono stati sottoposti a endoscopia ogni 12 mesi. Alla ricaduta (definito come recidiva locale o di metastasi a siti distanti), tutti i pazienti sono stati in scena completamente a individuare la malattia in altri siti. La sopravvivenza è stata misurata a partire dalla data di resezione del tumore alla morte o per l'ultima data il paziente è stato conosciuto per essere vivi. Il follow-up è stato chiuso nel dicembre 2008. Il periodo di follow-up medio è stato di 24,4 mesi (range, 0.2-81.8 mesi)
. Analisi statistica
I casi sono stati considerati positivi per H. pylori quando il 16S rRNA era presente su Real-time PCR amplificazione di prodotto sia in tessuto tumorale o il tessuto non-neoplastico, ei casi sono stati definiti come positivi per H. pylori nel tessuto normale quando il 16S rRNA era presente sul Real-time PCR amplificazione di prodotto nel tessuto non neoplastiche . Tutti i pazienti sono stati divisi in due gruppi; Gruppo A di 82 pazienti era composto da pazienti che erano positivi per l'infezione da H. pylori, Gruppo B di 75 pazienti era composto da pazienti che hanno avuto risultati negativi per l'amplificazione del prodotto Real-Time PCR. Inoltre, Gruppo A è stata divisa in due gruppi per la mediana numero (1338.5copies) copie di H. pylori, un gruppo di infezione HP ad alta copie (numero ≥1338.5 copia) di 41 casi, l'altro gruppo di infezione HP con basso -copies (< 1338,5 numero di copie). di 41 casi
analisi statistica è stata effettuata utilizzando il software SPSS per Windows (versione 13.0, SPSS Inc., Chicago, IL). L'associazione tra stato di infezione H-pylori e le caratteristiche clinico-patologici è stata confrontata usando Pearson Test chi-quadro (2-coda test in ciascuna). Il test t di Student-campione indipendente è stato utilizzato per il confronto di età al momento dell'intervento. la sopravvivenza libera da recidiva è stato calcolato per tutti i pazienti che non avevano avuto recidiva locale oa distanza e la sopravvivenza globale è stato calcolato per quei pazienti che erano in vita, indipendentemente dallo stato ricaduta. La sopravvivenza a lungo termine è stata valutata utilizzando il metodo di Kaplan-Meier, considerando la morte o recidiva di cancro come endpoint; pazienti che sono morti per cause diverse da recidiva del tumore sono stati considerati come censurato al momento della morte. Il log-rank test è stato utilizzato per i confronti statistici tra fattori. Le variabili che influenzano in modo indipendente la prognosi sono state studiate mediante analisi multivariata utilizzando il modello di rischio proporzionale di Cox. La statistica di punteggio è stato utilizzato per selezionare le variabili per l'ingresso nel modello. Un livello statistico di P < 0.05 è stato utilizzato per l'inserimento di variabili prognostiche
. Risultati
H. pylori Stato come determinato dal Real-Time PCR
Rilevazione quantitativa degli H. pylori da 157 casi di pazienti con cancro gastrico, ogni tumore inclusi e tessuto non-neoplastico; un totale di 314 esemplari. 49 pazienti (31,2%) hanno dimostrato positivo H. pylori nel tessuto tumorale, e 69 pazienti (43,9%) hanno dimostrato positivo nel tessuto non-neoplastico (Figura 1). Il positivo combinato sia tumore e tessuto non-neoplastico è 36 pazienti (22,9%), mentre 82 (52,2%) pazienti possono essere rilevati con H. pylori in uno qualsiasi dei campioni. Il numero di copie H. pylori varia da 2.51 × 10 2 ~ 1.45 × 10 8. Figura 1 Rilevazione di H. pylori nel tumore e tessuto non neoplastico (due gruppi di controllo P = 0.003).
L'associazione tra le caratteristiche clinico-patologiche e H. pylori infezione Stato
La tabella 1 mostra i risultati di un confronto del caratteristiche cliniche e patologiche tra i pazienti del gruppo a e gruppo B. tra i pazienti del gruppo a, neoplasie sono stati più frequentemente trovano nella parte superiore dello stomaco (37,8% vs 18%), e una classificazione più avanzata pN (N2 /N3) era osservato mentre una classificazione pN più basso (N0 /N1) è stata osservata nel gruppo B. Prima di un intervento chirurgico, i pazienti che erano negativi per H. pylori avevano alte concentrazioni di antigene carcinoembrionario (CEA) rispetto a quelli che erano positivi per H. pylori. Non sono state osservate differenze significative statistiche per quanto riguarda sesso, l'età, le dimensioni del tumore, sito del tumore, il tipo di lordo, profondità di invasione del tumore, metastasi a distanza, stage UICC, CA 19-9 e l'espressione del gene P53 tra i due groups.Table 1 associazione tra le caratteristiche clinico-patologiche e H. pylori Stato
Caratteristiche clinico-patologiche
Gruppo A (positivo)
(n = 82) (%)
Gruppo B (negativo)
(n = 75) (%)
valore P
genere
0,287
Maschio
59 (72,0)
48 (64,0)
femminile
23 (38,0)
27 (36.0)
Età
0,128
< 57,2 anni
45 (54,9)
32 (42.7)
≥57.2 anni
37 (45,1)
43 (57,8) Il portale di tumore
0,040
Alto
31 (37,8)
18 (24,0)
Medio o inferiore
51 (62,2)
57 (76,0)
Le dimensioni del tumore (media ± DS)
5.64 ± 2.82
5.84 ± 2.99
0,671
tipo lordo
0,816
precoce GC I
1 (1,2)
1 (1,3)
precoce GC III
10 (12.2)
7 (9.3)
Borrmann I
15 (18.3)
12 (16,0)
Borrmann II
37 (45,1)
32 (42,7)
Borrmann III
11 (13.4)
15 (20,0)
Borrmann IV Pagina 8 (9.8) Pagina 8 (10,7)
istologico Differenziare
0.236
Bene
36 (43,9)
28 (37,3)
mal
35 (42,7)
31 celle (41,3)
mucoso /anello con castone
11 (13.4)
16 (21,3)
profondità di invasione tumorale
0,749
T1
4 (4.9) Pagina 2 (2.7)
T2
9 (11,0)
9 (12.0)
T3
58 (70,7)
54 (72.0 )
T4
11 (13.4)
10 (13.3)
linfonodo metastasi
0,039
N0
30 (36,6)
16 (21,3)
N1
29 (35,4)
29 (38,7)
N2
14 (17.1)
19 (25,3)
N3
9 (11,0)
11 ( 14.7)
Distant metastasi
0,822
M0
71 (86,6)
64 (84,0)
M1
11 (13.4)
11 (16,0)
UICC fase
0,124
I
10 (12.2)
6 (8,0)
II
20 (24,4)
13 (17,3)
III
32 (39,0)
32 (42,7)
IV
20 (24,4)
24 (32,0)
chirurgia
0.943
curativo
65 (79,8)
62 (85.3)
palliative 17 (20,7)
11 (14,7)
marcatore tumorale
CEA
0,026
< 5 mg /L
64 (11.0 )
51 (68,0)
≥5 mg /L
9 (78,0)
19 (25,3)
CA 19-9
0,346
< 30 mg /L
44 (53,7)
44 (58,7)
≥30 mg /L
12 (14,6)
18 (24,0)
P53
0,827
positivo 9 ( 11.0) Pagina 8 (10,7)
negativo
40 (48,8)
40 (53.3)
L'associazione tra le caratteristiche clinico-patologiche e le copie H. pylori
Le tre caratteristiche clinico-patologiche sopra menzionati che sono stati associati con lo stato di infezione da H. pylori sono stati analizzati per vedere se sono stati associati con le copie H. pylori. Nella tabella 2, un confronto tra le caratteristiche cliniche e patologiche tra i pazienti del gruppo 1, high-copie H. pylori e Gruppo 2 con basse copie H.pylori è reported.Table 2 L'associazione tra le caratteristiche clinico-patologiche e le copie H. pylori

H. pylori alto titolo
(41cases,%)
H. pylori basso titolo
(41cases,%)
valore P
sito del tumore
0.013
Alto
21 (51,2)
10 (24,4)
Medio o inferiore
20 (48,8)
31 (75,6)
linfonodo metastasi
0.014
N0
20 (48,8)
10 (24,4)
N1
13 (31,7)
16 (39,0)
N2
6 (14,6) Pagina 8 (19,5)
N3 Pagina 2 (4.9) Pagina 7 (17.1)
CEA
0.269
< 5 mg /L
34 (82,9)
30 (73,2)
≥ 5 mg /L
3 (7.3) Pagina 6 (14,6)
Tra i pazienti nel gruppo ad alta copie H. pylori, neoplasie sono stati più frequentemente trovano nella parte superiore dello stomaco (51,2% vs 18%), ed una più bassa pN classificazione (N0 /N1) è stata osservata mentre un più avanzato pN classificazione (N0 /N1) è stata osservata nel gruppo con basse copie H. pylori. Tuttavia, nessuna differenza statisticamente significativa è stata osservata nelle concentrazioni di CEA tra i due gruppi (Tabella 2).
Infezione da H. pylori e Sopravvivenza
Il potenziale impatto dello stato di H. pylori sulla sopravvivenza a lungo termine dei pazienti è stata studiata mediante analisi univariata e multivariata. analisi di sopravvivenza globale è stata eseguita in 157 pazienti sottoposti a intervento chirurgico. Al termine del follow-up, 75 pazienti erano ancora in vita, 82 pazienti erano morti di tumore, e 1 paziente erano morti per altre cause; il tasso di sopravvivenza a 5 anni correlate al cancro in tutta la serie è stata del 48,4%.
analisi univariata ha mostrato un'associazione tra sopravvivenza globale e differenziare istologico, la chirurgia, la fase UICC e la concentrazione di CA-199 (dati non riportati). Tuttavia, tale associazione non può essere trovato tra lo stato di infezione da H. pylori e la sopravvivenza generale (p = 0.715) (Figura 2). All'analisi multivariata, differenziare istologico, la chirurgia e la fase UICC sono stati fattori prognostici indipendenti per la sopravvivenza totale. Concentrazione di CA-199 non è stato significativamente associato con la sopravvivenza globale nelle analisi multivariata (dati non riportati). L'effetto dello stato di H. pylori sulla prognosi è stato osservato in tutti i sottogruppi a seconda dello stadio UICC esaminato; la differenza non è risultata statisticamente significativa (dati non mostrati), inoltre, l'effetto dello status H. pylori sulla prognosi sono stati valutati in tutti i sottogruppi relazione ai diversi siti tumorali, la differenza non è risultata statisticamente significativa ( file aggiuntivi 1 e 2). Ulteriori analisi per i pazienti che erano positivi per H. pylori sono stati eseguiti; Kaplan Meier analisi di sopravvivenza ha mostrato che la sopravvivenza globale nei pazienti con alti copie H. pylori infezione era meglio che nei pazienti con bassi copie, ma la differenza non era statisticamente significativa (p = 0. 068) (Figura 3) L'associazione tra copie H. pylori e la prognosi sono stati valutati in tutti i sottogruppi per quanto riguarda i diversi siti tumorali, non c'è alcun significato statistico (file aggiuntivi 3 e 4). Figura 2 associazione tra sopravvivenza globale e H. pylori Stato infezione di 157 pazienti con cancro gastrico (p = 0.715).
Figura 3 di associazione tra la sopravvivenza complessiva e il numero di copie H. pylori nei pazienti che erano positivi per H. pylori (P = 0. 068).
analisi libera da recidiva di sopravvivenza è stato eseguito in 129 pazienti sottoposti a resezione R0. Al termine del follow-up, 73 pazienti erano ancora in vita, 56 pazienti erano morti di recidiva o di metastasi a distanza. Il potenziale impatto dello stato di H. pylori sulla sopravvivenza libera da recidiva dei pazienti è stata studiata mediante analisi univariata e multivariata.
Univariata analisi hanno mostrato un'associazione tra la sopravvivenza libera da recidive e differenziare istologico, sito del tumore, profondità di invasione tumorale (stadio pt), linfonodi metastasi (pN stadio). Tuttavia, tale associazione non può essere trovato tra stato di infezione da H. pylori (p = 0,639) (Figura 4), il numero di copie H. pylori, l'infezione da H. pylori nella sopravvivenza dei tessuti e libera da recidive non neoplastica. All'analisi multivariata, differenziare istologica, sito del tumore, profondità di invasione tumorale (Pt stadio), linfonodi metastasi (PN stadio) erano fattori prognostici indipendenti per la sopravvivenza libera da recidive. L'effetto dello status H. pylori sulla prognosi stato osservato in tutti i sottogruppi secondo la fase UICC esaminato, la differenza non è risultata statisticamente significativa (dati non mostrati). I dati per la sopravvivenza globale dei pazienti sottoposti a resezione R0 erano quasi gli stessi di quelli per la sopravvivenza libera da recidive. differenziare istologica, sito del tumore, profondità di invasione tumorale (Pt stadio), linfonodi metastasi (PN fase) sono risultati fattori prognostici indipendenti per la sopravvivenza totale (dati non riportati). Figura 4 di associazione tra la sopravvivenza libera da recidiva e l'infezione da H. pylori di 129 pazienti sottoposti a chirurgia curativa (p = 0,639)
. Discussione
Tra i numerosi metodi sopra descritti, il più promettente per il futuro è l'applicazione di real-time PCR [26]. La nuova tecnica PCR in tempo reale è un passo avanti nella diagnosi di H. pylori perché permette non solo un rilevamento rapido e preciso di H. pylori ma anche la sua quantificazione [23]. Nel metodo di Real-Time PCR, ci sono molti geni per selezionare per l'amplificazione, e il primer coppia 16S rRNA e 23S rRNA hanno mostrato una elevata specificità e sensibilità [27]. In questo studio, abbiamo scelto il 16S rRNA per l'amplificazione di Real-Time PCR; . I risultati hanno mostrato che il 52,2% dei 157 cancro gastrico è risultato positivo per l'infezione da H. pylori, che avvicinava i risultati di altri studi che utilizzano lo stesso metodo [28]
I principali risultati di questo studio sono stati: 1) H. pylori l'infezione è stata maggiore nel tessuto non-neoplastico che nel tessuto tumorale; 2) l'infezione da H. pylori è stata legata al sito del tumore, N staging, così come il livello di CEA; Inoltre, il sito del tumore e N messa in scena è stata in relazione al numero di H. pylori copie. Nei pazienti altamente infetti, la messa in scena N ha avuto una fase precedente (N0 /N1) e siti tumorali parte superiore dello stomaco sono stati trovati, mentre il livello del CEA è stato correlato al numero di copie H. pylori; e 3) la sopravvivenza globale e la sopravvivenza libera da recidive nei pazienti con stato positivo H. pylori avevano alcuna differenza significativa dai pazienti con stato negativo H. pylori; e nei pazienti positivi H. pylori, la prognosi era migliore nei pazienti con alto numero di copie di H. pylori che in quelli con più basso numero di copie, ma il risultato era alcuna differenza statisticamente significativa.
Abbiamo registrato una frequenza più alta di infezione da H .Pylori nel tessuto non-neoplastico che nel tessuto tumorale dei pazienti con cancro gastrico. La possibile spiegazione potrebbe essere che 1) una volta che un tumore è sorto nel luogo in cui il H. pylori vissuto, il tumore avrebbe cambiato il microambiente, che non sarebbe adatto per il H. pylori per sopravvivere in qualsiasi more.2) Alcuni studiosi [ ,,,0],29] ha sottolineato che il H. pylori sarebbe inghiottita dal granulociti neutrofili, che è abbondante nel tessuto neoplastico. La risposta immunitaria al tumore aumenta l'induzione di apoptosi da parte dei batteri.
Le caratteristiche clinico-patologici dei pazienti H. pylori-positivi sono stati confrontati con quelli del gruppo di pazienti con stato negativo H. pylori. L'analisi statistica ha rivelato che posizione superiore dello stomaco era più frequente nei pazienti H. pylori-positivi; tra i pazienti che erano positivi per H. pylori, le copie di H. pylori in posizione superiore dello stomaco sono stati anche superiori nello stomaco mezzo o inferiore. In generale, lo stomaco, specialmente il piloro gastrico è il luogo più adatto per H. pylori a crescere. La diagnosi e la quantità di infezione da H. pylori è stata eseguita usando il tessuto non-neoplastico ad una distanza di almeno 5 cm dal tumore. Pertanto, siti di campionamento erano differenti secondo il sito del tumore, per esempio, il cancro allo stomaco superiore possono campione di tessuto non-neoplastico dallo stomaco centrale o inferiore, e la metà o cancro allo stomaco inferiore può campionare dal superiore. Inoltre, un campionamento punto da antro o corpus può causare errore di campionamento della diagnosi H. pylori e la valutazione di H. pylori quantità, quindi pensiamo che questo risultato non è in grado di concludere che l'infezione da H. pylori è stato legato al sito del tumore.
Abbiamo anche trovato un più alto tasso di più avanzato stadio pN nei pazienti H. pylori-negativi; Inoltre, pN messa in scena è stato correlato al numero di H. pylori copie. Nei pazienti ad alto copie, la messa in scena N ha una fase precedente (N0 /N1). Teoricamente, l'invasione del tumore e metastasi associate con le metalloproteinasi della matrice (MMP) secrete dalla cellula cancro gastrico, che possono degradare la matrice extracellulare, cambiare la struttura della membrana basale vascolare e promuovere l'invasione delle cellule tumorali e metastasi [30, 31]. MMP-2 è una delle MMPs più importanti nel processo di invasione tumorale e metastasi. Monig et al. [32] hanno riportato che MMP-2 ha una forte correlazione con il progresso del linfonodo metastasi del cancro gastrico. Una volta che ha infettato H. pylori nello stomaco, può stimolare la secrezione di MMP-1, MMP-2, MMP-3 e TIMP-3 da cellule cancro gastrico [33], e, infine, chiederà e velocizzare l'invasione e metastasi dei progressi tumore gastrico. Tuttavia, l'attuale studio ha mostrato una conclusione opposta, in modo da suggeriamo che l'infezione da H. pylori è un fattore benefico per linfonodi metastasi.
I dati provenienti da questo studio hanno indicato che l'infezione da H. pylori è stato correlato al livello di CEA nel siero host. A nostra conoscenza, è la prima volta per segnalare tale influenza di questo fattore sul livello di CEA. I pazienti con stato positivo H. pylori avevano un livello basso rispetto a coloro che sono risultati negativi, ma il livello di CEA è stato correlato al numero di copie H. pylori; una possibile spiegazione è stata risposte autoimmuni indotte da H. pylori ha inibito la crescita delle cellule del cancro [34], e, infine, è diminuito il livello del CEA nel siero host.
Risalente al 1995, gli studi da Taiwan [35, 36], a nostra conoscenza, è stato il primo a segnalare la relazione tra infezione da H. pylori stato e l'esito dei pazienti con cancro gastrico, l'analisi multivariata ha dimostrato che solo stadio TNM è stato il fattore prognostico indipendente; Tuttavia, la definizione dello status di H. pylori è stata effettuata solo da sierologia, il numero di pazienti era piccolo, e il follow-up è stato piuttosto breve. Nel 2006, uno studio prospettico ha identificato lo status H. pylori come un fattore prognostico indipendente [21]. esame la cultura, l'analisi istologica, e test sierologici sono stati eseguiti per definire lo status H. pylori. La prognosi migliore osservato nei pazienti con infezione da H. pylori è stata spiegata sulla base di una risposta immunitaria contro il tumore migliorato [21]. Inoltre è stato ipotizzato che, poiché i componenti H. pylori imitano specifici recettori o molecole di superficie sulle cellule epiteliali gastriche, auto-anticorpi potrebbero indurre una reazione crociata contro le cellule di cancro gastrico [34]. Tuttavia, diversi autori hanno sollevato dubbi per quanto riguarda il vero valore prognostico dello stato di H. pylori, il che suggerisce che H. pylori negatività può essere semplicemente legata alla progressione del tumore più avanzata [37, 38]. Un recente studio in Italia [22] ha rivelato che i pazienti con stato negativo H. pylori sembrava avere una prognosi sfavorevole, ma i metodi di questo studio è anche in dubbio, dal momento che hanno usato la modalità di combinazione PCR per vacA e sierologico analisi per definire lo status di infezione da H. pylori. In teoria, la PCR in grado di rilevare solo una copia del DNA bersaglio durante il test in acqua, ma la maggior parte degli studi hanno dimostrato che la sensibilità PCR standard e l'efficacia non sono stati così esatto [23, 39], e l'analisi sierologici non può distinguere se il paziente sta avendo un infezione in corso o un'infezione del passato [23, 40]; entrambi i metodi contribuirà in parte ad un falso negativo.
Abbiamo dimostrato che la fase UICC, differenziare istologico e la chirurgia sono stati i fattori prognostici indipendenti della sopravvivenza globale di tutti i pazienti con cancro gastrico, e il sito del tumore, differenziare istologica, profondità di invasione del tumore, metastasi dei linfonodi sono stati i fattori prognostici indipendenti di sopravvivenza libera da recidiva per i pazienti sottoposti a chirurgia curativa. Tuttavia, lo stato di infezione da H. pylori non è stato un fattore prognostico indipendente in quanto non vi era alcuna differenza nella sopravvivenza di questi pazienti con o senza H. pylori, ma ulteriori analisi dei pazienti positivi per H. pylori ha rivelato che la prognosi di quelli con alti copie numero di H. pylori era migliore rispetto a quelli con un basso numero di copie, ma il risultato era alcuna differenza statisticamente significativa.
in esperimenti di vaccinazione [41] con il colera tossoide di esseri umani, l'infezione da H. pylori agisce come coadiuvante per l'induzione di una risposta B-cellula locale nella mucosa gastrica.

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