Odnos između H. pylori infekcije i kliničkopatološkim značajke i prognozi raka želuca pregled apstraktne pregled pozadine
Usmjeren je procijeniti odnos između H. pylori i kliničkopatološkim značajke i prognozi raka želuca by kvantitativnu detekciju H. pylori .
Metode pregled 157 pacijenata koji su distribuirani, svi bolesnici imali evidenciju kliničkopatološkim parametara. Primjerci uključujući tumora i ne-neoplastičnih nađene su za H. pylori pomoću real-time PCR i analizirane kliničke podatke retrospektivno. . Varijable nezavisno utječu na prognozu su ispitivani pomoću multivarijantne analize pomoću Cox proporcionalnih rizika modela pregled Rezultati
H. pylori infekciju bio je veći u ne-neoplastičnog tkiva od tumorskom tkivu (p < 0.05) H. pylori infekcija i njezini primjeraka odnosi na mjestu tumora i N skele (p < 0.05). Ukupno preživljenje (OS) u svim 157 pacijenata nema korelaciju sa statusom H. pylori infekcije (p = 0,715). Što se tiče pacijenata koji su se podvrgnuli ljekovito operaciju, preživljavanje recidiv bez (RFS) nema korelaciju sa statusom H. pylori infekcije (p = 0,639). Među H. pylori pozitivnih bolesnika, OS i RFS onih s višim primjeraka bilo je više nego u bolesnika s niskim primjeraka, ali nije bilo statistički znatna razlika. Pregled Zaključci
status H. pylori infekcije i njene kopije su vezani u N inscenacije. OS i RFS u bolesnika s pozitivnim H. pylori status nema značajnih razlika u odnosu na bolesnike s negativnim statusom H. pylori. Pregled Pozadina pregled, raka želuca je drugi najčešći uzrok smrti od raka, iako je incidencija je smanjen dramatično u nekim razvijenim zemljama u posljednjih nekoliko desetljeća [1], pacijenti s ovom bolešću obično imaju lošu prognozu [2]. Čak i nakon što potencijalno ljekovito operacije, više od polovice pacijenti imaju recidiv tumora. Zahvaćenost limfnih čvorova, dubina invazije, dobi i lokaciji tumora su identificirani kao najznačajnijih kliničko prognostičkih čimbenika [3, 4]. Međutim, NCCN kliničku praksu Smjernica za rak želuca upućuje na to da pacijenti s rakom želuca treba iskorijeniti Helicobacter pylori (H. pylori) kako bi se smanjio rizik od recidiva, koji je definiran kao klasa dokaza [5].
H. pylori, gram -negativno microaerophilic spiralna bakterija, prvi je iznio da je povezan s karcinomom želuca od suotkrivač Marshall 1983. [6]. Godine 1994., Međunarodna agencija za istraživanje raka (IARC) klasificirane H. pylori kao kona klasi kancerogen [7, 8]. Nakon toga, puno istraživanja su provedena, uključujući i epidemioloških istraživanja [9], eksperimentalnih studija [10], životinjskih pokusnih podataka [11, 12], kliničkim ispitivanjima kontrole slučaj [13, 14]. Većina tih studija ojačao činjenicu da H. pylori glavni uzrok želučanog adenokarcinoma. Međutim, to je gledište još uvijek kontroverzna i pouzdanije podatke je potrebno. Kako H. pylori infekcija uzrokuje karcinom želuca nije još u potpunosti jasan, kao niz patogenih faktora mogu djelovati na različite faze, kao što su faktori virulencije [15], oštećenja DNA, utječu brojni [16, 17] i COX-2 [ ,,,0],18]. Učestalost karcinoma želuca je multi-faktor i multi-korak proces.
Trenutno nema uvjerljivih podataka za odnos između H. pylori statusu infekcije ili primjeraka i kliničkopatološkim značajke. Osim toga, prognoza razlike u preživljavanju bolesnika koji su pozitivni na H. pylori u usporedbi s onima koji su negativni ostaje nepoznat. U promjenjivom broja bolesnika s karcinomom želuca, H. pylori infekcija ne može se otkriti i različite kliničke i patološke značajke su opisane u ovoj podgrupi [19, 20]. Osim toga, nedavno njemački studija pruža dokaze o boljoj prognozi bolesnika s H. pylori infekcije u usporedbi s negativnim slučajevima [21] i talijanski studija pokazala je da negativna stanja H. pylori je povezana s lošom prognozom u bolesnika s karcinomom želuca [22] , Međutim, na naše znanje, te klinički relevantni rezultati su još uvijek nije potvrđen u velikim iskustvima iz drugih centara. Većina tih istraživanja se koriste serološke analize kao jedina metoda za procjenu stanja H. pylori, neki od njih čak i dodao metodu molekuli PCR; tako da su rezultati ovih studija su jedva uvjerljivo. U stvari, postoje mnoge vrste postupaka predviđenih za detekciju H. pylori, uključujući i kulturu, histološki dijagnoze, ureaza testom, molekula metodu, serološke analize i UBT, ali samo kultura, real-time PCR i UBT imaju visok stupanj osjetljivosti i specifičnost [23].
u trenutnoj studiji, koristili smo metodu real-time PCR za detekciju H. pylori status infekcije i njene kopije, a čiji je cilj istražiti potencijalni utjecaj H. pylori status na kliničkopatološkim značajke karcinoma želuca pacijenata koji su se podvrgnuli operaciji te su praćeni značajnim razdoblje za procjenu razlike u recidiva slobodnog opstanak i ukupno preživljenje. pregled, Ispitanici i metode pregled pacijenata
Ispitivana populacija sastojala se od 157 uzastopnih bolesnika (107 muškaraca i 50 žena) na rasporedu za operaciju od 1. siječnja 2002. do 31. prosinca 2006. godine u Sun Yat-Sen University Cancer Center, Guangzhou, Kina. Srednja dob bolesnika bila je 57,2 y (raspon: 27-78 y), Svi pacijenti uključeni u ovu studiju imali histološki potvrđena dijagnoza primarnog karcinoma želuca koji je potvrdio patološki nakon operacije. Pacijenti koji su podvrgnuti non-resective operacije, a oni s tipom Siewert sam cardia adenokarcinom su isključeni iz studije, pacijenti s H. pylori uspješnosti terapije ili liječenja antibioticima, spojevi bizmuta sadržavaju, blokatori H2 receptora ili inhibitora protonske pumpe u roku od 4 tjedna također je bio isključen iz studije. Operacija se sastojala od zbir ili ukupnog gastrektomije u svih bolesnika. Standardizirani tehnika se koristi za kirurške resekcije i Limfadenektomija, kao što je opisano na drugom mjestu [3]. Dob, spol, vrstu operacije, lokacija tumora, TNM stadiju, kemoterapija, primjerak dužinu, veličinu tumora, i diferencijacije tumora, zabilježena su za svakog pacijenta u bazi podataka. duljina tumora, a širina svježih uzoraka je zabilježeno od strane patologa. pTNM klasifikacija slijedio kriterije 6. izdanje UICC [24]. Svi pacijenti koji su bili podvrgnuti bilo koju vrstu kemoterapije bili na 5-FU-based režimu, a osnovni režim bio FOLFOX6 ili XELOX. Sve Eksperimentalna istraživanja koje je objavljeno u rukopisu su dobili informirani pristanak od ispitanika u istraživanju i bio Etički izvode uz odobrenje odgovarajućeg etičkog povjerenstva u Sun Yat-sen University of Cancer Center.
Tumorskom tkivu i ne-neoplastičnim tkivo iz svih pacijenata je sakupljen iz reseciranog uzorka u operacijskoj sali u roku od 30 minuta nakon uklanjanja želuca. Ne-neoplastičnih tkivo se ukloni iz normalnog tkiva želuca na udaljenosti od najmanje 5 cm od tumora. Kada novotvorina uključeni cijeli antruma, ne-neoplastičnih sluznica je uklonjena iz srednjeg ili gornju trećinu želuca. Uzorci su odmah zamrznuti u tekućem dušiku, obrađivati, kodiraju, i pohranjeni na -80 ° C u banci tkiva koji se nalazi u laboratoriju znanstveno-istraživačkog odjela. Pregled, DNA Vađenje i real-time PCR za H. pylori Netlogu oba tumorsko tkivo i bez tumora, dobiven od svih bolesnika uključenih u istraživanje je izvučen iz banke tkiva. DNA je ekstrahirana iz 50 mg čvrstog tkiva (i tumora, a ne-neoplasitic) pomoću stolice minikit QIAamp DNA (Qiagen). Kako bi se povećala iskorištenja pročišćene DNA, cijeli supernatant (500 ul) je korišten za daljnje pročišćavanje DNA nakon dodatka tablete InhibitEX, prilagođavajući sljedeće korake Qiagen protokola ovom izmijenjenom količinom uzorka. S H. pylori izolata DNA je ekstrahirana pomoću QIAamp DNA minikit prema protokolu za izolaciju genomske DNA iz bakterijskih kultura (Qiagen).
GenBank se tražili sekvenci gena koji kodiraju 16S rRNA od H. pylori. Objavljeni Sekvence su poravnate pomoću ClustalW http:... //Www ebi ac uk /ClustalW /i početnice i probe su dizajnirani pomoću programa Primer Express (Perkin-Elmer /tnom City , Kalifornija), a LightCycler sonda dizajn softver (Roche Diagnostics, Mannheim, Njemačka). Pretraživanje BLAST je izveden za provjeru specifičnosti DNA sekvence primera i sondi. Http:. //Www NCBI NLM NIH gov /BLAST /pregled Test sadržavao dva PCR.,. klice (Daan Gene Co, Ltd Sun Sveučilišta Yat-sen, Guangzhou, Kina): primer1 F (5'GCT AAG AGA TCA GCC TAT GTC 3 ') i primer2 R (5'-CCG TGT CTC AGT TCC AGT tvrtka GT 3 ') koji je namijenjen da se pojača 118 parova baza fragment 16S rDNA, zajedno sa sondom, Tensensor (5'-GCA TGT LCRed705-GGT TTA ATT CGA AGA TAC ACphos- 3'), označen s fluorofora LC Red 705 (Daan Gene Co, Ltd Sun Yat-sen University, Guangzhou, Kina). pregled Svaki real-Time PCR je izvršena u konačnom volumenu od 50 ul sadrži pufer od 10 ul (10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM KCl i 1,5 mM MgClz
2), 2 ul cDNA, 1 ul svakog primera (F 10 pmol /ml, R10 pmol /ul), 1 ul svakog deoxynucleotide (10 mM), 1 ul Taq polimeraze (3U /ul) (Daan Gene Co, Ltd Sun Yat-sen University, Guangzhou, Kina) i 1 ul sondom (Daan Gene Co., Ltd Sun Yat-sen University , Guangzhou, Kina). Svaka reakcijska smjesa je amplificiran kao što slijedi: denaturiranje na 93 ° C tijekom 3 minute, nakon čega slijedi 40 ciklusa denaturacije na 93 ° C u trajanju od 30 sekundi, nalijeganjem na 55 ° C kroz 45 sekundi; i ekstenzije pri 72 ° C tijekom 40 sekundi. Povećavanje provedeno s ABI 7500 DNA motora (Applied Biosystems Inc., CA, USA). Rabljeni H. pylori krivulje standardni umnažanja napraviti standardnu krivulju linearne regresije graf, a potom promijenila vrijednosti CT u broju H. pylori primjeraka. Pregled Praćenje
svih bolesnika nakon otpuštanja iz bolnice, ušao praćenje programa u skladu sa standardnim protokolom [25]. U okviru prve 2 godine nakon operacije, follow-up svakih 3 mjeseca sastojao se od kliničkog pregleda, rutinske krvne testove, ocjene koncentracije tumorskih markera i trbuhu ultrazvuk ili CT; endoskopija je učinjeno svakih 6 mjeseci za prve 2 godine nakon operacije. Za naredne 3 godine, bolesnici su praćeni svakih 6 mjeseci, a prošli endoskopija svakih 12 mjeseci. Na relapsa (definirano kao lokalnog recidiva ili metastaza u udaljenim mjestima), svi pacijenti su u potpunosti postavljena za otkrivanje bolesti na drugim mjestima. Preživljavanje je mjerena od dana odstranjivanja tumora do smrti ili do zadnjeg dana pacijent je poznato da je živ. Follow-up je bio zatvoren u prosincu 2008. Sredinom perioda praćenja bio je 24,4 mjeseci (raspon, 0.2-81.8 mjeseca). Pregled, statistička analiza pregled Slučajevi su smatrane pozitivnim na H. pylori kada je 16S rRNA bio prisutan u stvarnom vremenu PCR amplifikacije proizvoda u bilo tumorskog tkiva ili Non-tumora, i slučajeva su definirani kao pozitivno za H. pylori u normalnom tkivu kada je 16S rRNA bio prisutan na real-time PCR amplifikacije proizvoda u Non-tumora, , Pacijenti su podijeljeni u dvije skupine; Skupina A od 82 pacijenata je bio sastavljen od pacijenata koji su bili pozitivni na H. pylori infekcije, skupina B od 75 pacijenata je bio sastavljen od pacijenata koji su imali negativne rezultate za Real-Time PCR amplifikacije proizvoda. Nadalje, Grupa A je bila podijeljena u dvije skupine od medijana (1338.5copies) primjerka broj H. pylori, jedna grupa HP infekcije s visokim kopija (broj kopija ≥1338.5) od 41 slučajeva, s druge skupine HP infekcije s niskim -copies (< 1338,5 broj kopija). 41 slučajeva
Statistička analiza je provedena pomoću SPSS programa za Windows (verzija 13.0; SPSS Inc., Chicago, IL). Povezanost između H-pylori statusu infekcije i kliničkopatološkim značajki je uspoređen korištenjem Pearson Chi-kvadrat testa (2-tailed ispitivanja u svakoj). Neovisni-uzorak Student t-test je korišten za usporedbu Dob u vrijeme operacije. Relapse bez preživljavanja je izračunata za sve pacijente koji nisu imali lokalni ili udaljeni recidiv i ukupno preživljenje je izračunati za one pacijente koji su bili na životu, bez obzira na relapsa status. Dugotrajno preživljavanje vrednovan je Kaplan-Meier metodi, s obzirom na smrt ili povraćaj od raka, kao krajnje točke; pacijenata koji su umrli od uzroka osim recidiva tumora se smatralo da su cenzurirani u trenutku smrti. Log-rank test je korišten za statističke usporedbe između faktora. Varijable nezavisno utječu na prognozu su ispitivani pomoću multivarijatne analize pomoću Cox proporcionalnih rizika model. Rezultat statistika se koristi za odabir varijabli za ulazak u modelu. Statistička razina P < 0.05 je korištena za uključivanje prognostičkih varijabli.