Beziehung zwischen H.Pylori Infektion und klinisch-pathologischen Eigenschaften und die Prognose von Magen cancer

Beziehung zwischen H.Pylori Infektion und klinisch-pathologischen Eigenschaften und die Prognose von Magenkrebs
Zusammenfassung
hintergrund und richtet sich die Beziehung zwischen H.Pylori und das zu beurteilen klinisch-pathologischen Eigenschaften und die Prognose von Magenkrebs durch den quantitativen Nachweis von H.Pylori.
Methoden
157 Patienten eingeschrieben waren, hatten alle Patienten eine Aufzeichnung von klinischen Parametern. Proben, einschließlich der Tumor und nicht-neoplastischen wurden für H.Pylori durch Real-Time PCR detektiert und analysiert retrospektiv klinische Daten. . Variablen unabhängig Prognose beeinflussen durch multivariate Analyse untersucht wurden die Modell-Proportional-Hazards Cox mit
Ergebnisse | H.Pylori Infektion größer war in nicht-neoplastischen Gewebe als Tumorgewebe (p < 0,05), H.Pylori Infektion und seine Kopien wurden an die Tumorstelle und N im Zusammenhang mit Staging (p < 0,05). Das Gesamtüberleben (OS) in allen 157 Patienten hat keine Korrelation mit dem H.Pylori Infektionsstatus (p = 0,715). Zu den Patienten, die eine kurative Operation unterzog, das rezidivfreie Überleben (RFS) hat keine Korrelation mit dem H.Pylori Infektionsstatus (p = 0,639). Unter den H.Pylori positiven Patienten, OS und RFS von Personen mit höheren Kopien waren länger als bei Patienten mit niedrigen Kopien, aber es gab keinen statistisch signifikanten Unterschied.
Schlussfolgerungen
H.Pylori Infektionsstatus und seine Kopien waren verwandten N-Staging. Das OS und RFS bei Patienten mit positiven H.Pylori Status hat keinen signifikanten Unterschied gegenüber den Patienten mit negativem H.Pylori Status.
Hintergrund
Magenkrebs ist die zweithäufigste Ursache für Krebstod, obwohl die Häufigkeit verringert hat dramatisch in einigen entwickelten Ländern in den letzten Jahrzehnten [1], Patienten mit dieser Krankheit haben häufig eine schlechte Aussichten [2]. Auch nach potenziell kurative Operation, mehr als die Hälfte der Patienten haben ein Tumorrezidiv. Lymphknotenbefall, Tiefe der Invasion, Alter und Tumorlokalisation wurden als die wichtigsten klinisch-pathologische prognostische Faktoren identifiziert [3, 4]. Allerdings NCCN Clinical Practice Guideline von Magenkrebs legt nahe, dass Patienten mit Magenkrebs sollte Helicobacter Pylori (H.Pylori) auszurotten, das Risiko eines erneuten Auftretens zu reduzieren, die als Klasse Beweis definiert wurde [5].
H.Pylori, ein Gram -negative microaerophilic Spirale Bakterium, wurde vorgeschlagen, zunächst mit Magenkrebs durch Co-Entdecker Marshall 1983 [6] zugeordnet werden. Im Jahr 1994 die Internationale Agentur für Krebsforschung (IARC) H.Pylori als definitiver Classi krebserzeugend eingestuft [7, 8]. Danach haben viele Studien durchgeführt worden ist, einschließlich epidemiologischer Untersuchungen [9], experimentelle Studien [10], tierexperimentelle Daten [11, 12], Fall-Kontroll-Studien [13, 14]. Die meisten dieser Studien verstärkt die Tatsache, dass H.Pylori die Hauptursache für Adenokarzinom des Magens ist. Jedoch ist dieser Gesichtspunkt noch umstritten und zuverlässigere Daten erforderlich ist. Wie H.Pylori Infektion führt zu Magenkrebs ist noch nicht ganz klar, wie eine Vielzahl von pathogenen Faktoren auf verschiedenen Stufen wirken können, wie Virulenzfaktoren [15], DNA-Schäden, Wirtsfaktoren [16, 17] und COX-2 [ ,,,0],18]. Das Auftreten von Magenkrebs ist ein Multi-Faktor und mehrstufiges Verfahren.
Derzeit gibt zwischen H.Pylori Infektionsstatus oder Kopien und der klinisch-pathologischen Merkmale keine überzeugende Daten für die Beziehung ist. Außerdem sind die Prognose Unterschiede im Überleben von Patienten, die für H.Pylori positiv sind, verglichen mit denen, die negativ sind weiterhin unbekannt. In einem variablen Anteil von Patienten mit Magenkrebs kann H.Pylori Infektion nicht haben werden, wurden in dieser Untergruppe [19, 20] erkannt und verschiedene klinische und pathologische Merkmale beschrieben. Weiterhin ist eine neuere deutsche Studie lieferte Hinweise auf eine bessere Prognose bei Patienten mit H.Pylori Infektion im Vergleich zu negativen Fällen [21] und eine italienische Studie zeigte, dass negative H.Pylori Status mit einer schlechten Prognose bei Patienten mit Magenkrebs in Verbindung gebracht wurde [22] . Doch zu unserem Wissen, diese klinisch relevanten Ergebnisse wurden noch nicht in großen Erfahrungen aus anderen Zentren validiert. Die meisten dieser Studien serologische Analyse als einzige Methode verwendet H.Pylori Status zu beurteilen, einige von ihnen auch das Molekül Methode der PCR zugegeben; so dass die Ergebnisse dieser Studien sind wenig überzeugend. In der Tat gibt es viele Arten von Verfahren zur Verfügung gestellt, um die H.Pylori Erfassung, einschließlich Kultur, histopathologische Diagnose, Urease-Test, Molekül Verfahren, serologische Analyse und UBT, aber nur Kultur, Real-Time PCR und UBT haben ein hohes Maß an Sensibilität und Spezifität [23].
In der aktuellen Studie verwendeten wir die Methode der Real-Time PCR H.Pylori Infektionsstatus und seine Kopien zu erkennen, und das Ziel, die möglichen Auswirkungen der H.Pylori Status auf den klinisch-pathologischen Eigenschaften zu untersuchen in Folge von Magenkrebs von Patienten, die Operation und wurden für einen längeren Zeitraum unterzogen, gefolgt von bis zu Unterschieden in das rezidivfreie Überleben und das Gesamtüberleben zu bewerten.
Patienten und Methoden
Patienten
Die Studienpopulation umfasste 157 geplanten Patienten (107 Männer und 50 Frauen) für Chirurgie vom 1. Januar 2002 bis 31. Dezember 2006 bei Sun Yat-Sen University Cancer Center, Guangzhou, China. Das mittlere Alter der Patienten betrug 57,2 Jahre (Bereich: 27-78 y), die alle in dieser Studie teilnehmenden Patienten hatten eine histologisch Diagnose der primären Magenkrebs bestätigt, dass pathologisch nach der Operation bestätigt wurde. Patienten, die nicht resektive operiert, und jene mit Siewert Typ-I-Cardia Adenokarzinom wurden von der Studie, Patienten mit H. pylori-Eradikation oder eine Behandlung mit Antibiotika, Wismut-haltigen Verbindungen, H2-Rezeptor-Blocker oder Protonenpumpenhemmer innerhalb von 4 Wochen ausgeschlossen ebenfalls von der Studie ausgeschlossen worden war. Chirurgie bestand aus subtotale oder totale Gastrektomie bei allen Patienten. Eine standardisierte Technik wurde für die chirurgische Resektion und Lymphadenektomie verwendet wird, wie an anderer Stelle beschrieben ist [3]. Alter, Geschlecht, Art der Chirurgie, Tumorlokalisation, TNM-Stadium, Chemotherapie, Probenlänge, Tumorgröße und Tumordifferenzierung, wurden für jeden Patienten in einer Datenbank erfasst. Tumor Länge und die Breite der frischen Proben wurden durch Pathologen aufgezeichnet. pTNM Klassifizierung folgte den Kriterien der 6. Ausgabe der UICC [24]. Alle Patienten, die jede Art von Chemotherapie unterzogen wurden auf 5-FU basierenden Therapie, und die Basisregime war FOLFOX6 oder XELOX. Alle Experimentelle Forschung, die in der Handschrift berichtet haben informierte Einwilligung von den Probanden der Studie erhalten und wurde Ethisch mit Zustimmung einer entsprechenden Ethikkommission in Sun Yat-sen University of Cancer Center.
Tumorgewebe und nicht-neoplastischen durchgeführt Gewebe aus allen Patienten wurde aus den resezierten Probe im Operationssaal innerhalb von 30 Minuten nach der Entfernung des Magens gesammelt. Nicht-neoplastischen Gewebe wurde aus der normalen Magengewebe in einem Abstand von mindestens 5 cm von dem Tumor entfernt. Wenn Neoplasma die gesamte Antrum beteiligt, nicht-neoplastischen Mucosa wurde aus dem mittleren oder oberen Drittel des Magens entnommen. Die Proben wurden sofort in flüssigem Stickstoff eingefroren, verarbeitet, codiert und bei -80 ° C in einer Gewebebank im Labor der Abteilung der wissenschaftlichen Forschung befindet gespeichert.
DNA-Extraktion und Real-Time PCR für H.Pylori
Beide Tumorgewebe und Nichtneoplastische von allen Patienten erhalten Gewebe, die in der Studie von der Gewebebank abgerufen wurde. Die DNA wurde aus 50 mg festes Gewebe (beide Tumor und Nicht-neoplasitic) extrahiert durch die QIAamp DNA Stuhl minikit (Qiagen). Um die Ausbeute an gereinigter DNA, die gesamte Überstand (500 ul) wurde für die weitere DNA-Reinigung nach der Zugabe der Inhibitex Tablette verwendet zu erhöhen, die folgenden Schritte des Qiagen-Protokoll zu dieser veränderten Probenmenge anzupassen. Von H.Pylori Isolaten wurde die DNA unter Verwendung des QIAamp DNA minikit gemäß dem Protokoll für die Isolierung genomischer DNA aus Bakterienkulturen (Qiagen) extrahiert.
GenBank für Sequenzen der Gene, die für 16S-rRNA von H.Pylori sucht wurde. Die veröffentlichten Sequenzen wurden unter Verwendung von CLUSTALW http ausgerichtet:... //Www ebi ac uk /clustalw /und Primer und Sonden wurden entwickelt unter Verwendung von Primer Express Software (Perkin-Elmer /Applied Biosystems, Foster City Calif.) und dem LightCycler Sonde Design-Software (Roche Diagnostics, Mannheim, Deutschland). Eine BLAST-Suche wurde durchgeführt, um die Spezifität der DNA-Sequenzen der Primer und Sonden http zu überprüfen:.. //Www ncbi NLM nih gov /BLAST /
Der Test bestand aus zwei PCR... Primer (Daan Gene Co., Ltd von Sun Yat-sen Universität in Guangzhou, China): primer1 F (5 'GCT AAG AGA TCA GCC TAT GTC-3') und Primer2 R (5 'CCG TGT CTC AGT TCC AGT GT- 3 ') entworfen, um eine 118 Basenpaar-Fragment des 16S-rDNA zu verstärken, zusammen mit einer Sonde, Tensensor (5'-LCRed705-GCA TGT GGT TTA ATT CGA AGA TAC ACphos- 3'), mit dem Fluorophor markiert LC Red 705 (Daan Gene Co., Ltd von Sun Yat-sen Universität in Guangzhou, China).
Alle Real-Time PCR wurde in einem Endvolumen von 50 &mgr; l, die einen Puffer von 10 &mgr; l (10 mM Tris-HCl durchgeführt (pH 8,0), 50 mM KCl und 1,5 mM MgCl 2), 2 &mgr; l cDNA, 1 &mgr; l jedes Primers (F 10 pmol /&mgr; l, R 10 pmol /ul), 1 ul jeder Desoxynukleotid (10 mM), 1 ul Taq-Polymerase (3HE /ul) (Daan Gene Co., Ltd von Sun Yat-sen University, Guangzhou, China) und 1 &mgr; l-Sonde (Daan Gene Co., Ltd von Sun Yat-sen-Universität , Guangzhou, China). Jedes Reaktionsgemisch amplifiziert wurde, wie folgt: Denaturierung bei 93 ° C für 3 Minuten, gefolgt von 40 Zyklen Denaturierung bei 93 ° C für 30 Sekunden; Annealing bei 55 ° C für 45 Sekunden; und Extension bei 72 ° C für 40 Sekunden. Amplifikationen wurden mit einem ABI 7500 DNA Engine (Applied Biosystems Inc., CA, USA) durchgeführt. Gebrauchte H.Pylori Standard Amplifikationskurven die Standardkurve lineare Regression Diagramm zu machen, und wechselte dann die Ct-Werte in die Anzahl der H.Pylori Kopien.
Alle Patienten Follow-up nach der Entlassung aus dem Krankenhaus, trat ein Follow-up-Programm gemäß Standardprotokoll [25]. Innerhalb der ersten 2 Jahre nach der Operation, ein Follow-up bestand alle 3 Monate einer klinischen Prüfung, Routine-Bluttests, die Beurteilung der Konzentration von Tumormarkern und Abdomensonographie oder CT-Scan; Endoskopie wurde alle 6 Monate für die ersten 2 Jahre nach der Operation durchgeführt. Für die nächsten 3 Jahre, wurden gefolgt Patienten alle 6 Monate und unterzog Endoskopie alle 12 Monate. Bei Rezidiv (definiert als ein lokales Rezidiv oder Metastasen an entfernten Stellen) wurden alle Patienten vollständig zu erfassen Krankheit an anderen Standorten in Szene gesetzt. Das Überleben war ab dem Zeitpunkt der Tumorentfernung zum Tod oder bis zum letzten Tag gemessen der Patient bekannt war, am Leben zu sein. Das Follow-up wurde im Dezember 2008. Die Mitte Follow-up geschlossen Zeitraum 24,4 Monate war (Bereich: 0,2-81,8 Monate).
Statistische Analyse Hüllen wurden als positiv für H.Pylori wenn die 16S rRNA vorhanden war auf Real-Time-PCR-Produkt-Amplifikation in entweder Tumorgewebe oder dem Nichtneoplastische Gewebe und die Fälle wurden für H.Pylori als positiv definiert im normalen Gewebe, wenn die 16S rRNA, die auf Real-Time-PCR-Produkt-Amplifikation in Nichtneoplastische Gewebe war . Alle Patienten wurden in zwei Gruppen aufgeteilt; Gruppe A von 82 Patienten wurde von Patienten umfasste, die für H.Pylori Infektion, Gruppe B von 75 Patienten waren positiv wurde von Patienten umfasste, die negativen Ergebnisse für Real-Time-PCR-Produkt Verstärkung hatte. Darüber hinaus wurde durch den Median in zwei Gruppen aufgeteilt Gruppe A (1338.5copies) Kopien Anzahl der H.Pylori, eine Gruppe von HP-Infektion mit High-Kopien (≥1338.5 Kopienzahl) von 41 Fällen, die andere Gruppe von HP-Infektion mit niedrigen -Kopien (< 1338,5 Kopienzahl). von 41 Fällen
wurde für Windows unter Verwendung von SPSS Software statistische Analyse durchgeführt (Version 13.0, SPSS Inc., Chicago, IL). Der Zusammenhang zwischen H-pylori-Infektion Status und klinisch-pathologischen Eigenschaften verglichen mit Pearson Chi-Quadrat-Test (2-tailed Tests in jedem). Die unabhängige-Probe Student t-Test wurde zum Vergleich von Alter zum Zeitpunkt der Operation. Rezidivfreie Überleben wurde für alle Patienten berechnet, die nicht hatten lokale oder entfernte Rückfall und das Gesamtüberleben wurde für diejenigen Patienten berechnet, die noch am Leben waren, und zwar unabhängig von Rezidiven Status. Langzeit-Überleben wurde mit der Kaplan-Meier-Methode bewertet, wenn man bedenkt Tod oder Rückfall von Krebs als Endpunkt; Patienten, die von anderen Ursachen als ein Tumorrezidiv starben, wurden die zum Zeitpunkt des Todes als zensiert betrachtet. Der Log-Rank-Test wurde für die statistische Vergleiche zwischen den Faktoren verwendet. Variablen unabhängig Prognose beeinflussen wurden mittels multivariate Analyse unter Verwendung des Cox-Regression Cox untersucht. Der Score-Statistik wurde verwendet, um Variablen in das Modell für Eintrag auszuwählen. Eine statistische Ebene von P < 0,05 wurde für die Aufnahme von prognostischen Variablen verwendet.
Ergebnisse | H.Pylori Stand Bestimmt durch Real-Time PCR
quantitativen Nachweis von H.Pylori von 157 Fällen von Patienten mit Magenkrebs, von denen jeder Tumor und nichtneoplastische Gewebe; Insgesamt 314 Proben. 49 Patienten (31,2%) zeigten positive H.Pylori im Tumorgewebe, und 69 Patienten (43,9%) zeigten positive in dem nicht-neoplastischen Gewebe (Abbildung 1). Die kombinierte positive sowohl in Tumor- und nicht-neoplastischen Gewebe 36 Patienten (22,9%), während 82 (52,2%) Patienten mit H.Pylori in einem der Proben nachgewiesen werden. Die Anzahl der Kopien H.Pylori reicht von 2,51 x 10 2 ~ 1,45 × 10 8. Abbildung 1: Nachweis von H.Pylori in Tumor- und Nicht-Tumorgewebe (zwei Gruppen Vergleich P = 0,003).
Die Assoziation zwischen klinisch-pathologische Merkmale und H.Pylori Infektionsstatus
Tabelle 1 zeigt die Ergebnisse für einen Vergleich der klinischen und pathologischen Merkmale zwischen den Patienten in der Gruppe A und Gruppe B. von den Patienten in der Gruppe A wurden mehr Neoplasmen häufig im oberen Magen (37,8% vs 18%) liegt, und eine erweiterte pN-Klassifikation (N2 /N3) war beobachtet, während eine niedrigere pN-Klassifikation (N0 /N1) wurde in der Gruppe B. Vor der Operation gesehen, Patienten, die für H.Pylori negativ waren, hatten höhere Konzentrationen von carcinoembryonales Antigen (CEA) als auch diejenigen, die sich für H.Pylori positiv waren. Keine statistisch signifikanten Unterschiede in Bezug auf Geschlecht, Alter, Größe des Tumors, Tumorstelle, Brutto Art, Tiefe der Tumorinvasion, Fernmetastasen, UICC-Stadium, Ca 19-9 und dem P53 Genexpression wurden zwischen den beiden groups.Table 1 Assoziation zwischen klinisch-pathologische Merkmale beobachtet und H.Pylori Der Status
klinisch-pathologischen Eigenschaften
Gruppe A (positiv)
(n = 82) (%)
Gruppe B (Negative)
(n = 75) (%)
P-Wert
Geschlecht
0.287
männlich
59 (72,0)
48 (64.0)
Weiblich
23 (38,0)
27 (36,0)
Alter
0.128
< 57,2 Jahre
45 (54,9)
32 (42,7)
≥57.2 Jahre
37 (45,1)
43 (57,8)
Tumor
0.040
Ober
31 (37,8)
18 (24,0)
mittleren oder unteren
51 (62,2)
57 (76,0)
Tumorgröße (Mittelwert ± SD)
5,64 ± 2,82
5,84 ± 2,99
0.671
Gross Typ
0.816 Frühe GC
I 1 (1.2)
1 (1.3) Frühe GC III
10 (12.2)
7 (9,3)
Borrmann I
15 (18.3)
12 (16,0)
Borrmann II
37 (45,1)
32 (42,7)
Borrmann III
11 (13,4)
15 (20,0)
Borrmann IV
8 (9.8)
8 (10,7)
Histologische Differenzieren
0.236
Well
36 (43,9)
28 (37,3)
Poorly
35 (42,7)
31 (41,3)
Schleimgranulom /Siegelring Zelle
11 (13,4)
16 (21,3)
Tiefe der Tumorinvasion 0.749
T1
4 (4.9)
2 (2.7)
T2
9 (11,0)
9 (12,0)
T3
58 (70,7) 54
(72,0 )
T4
11 (13,4)
10 (13.3)
Lymphknotenmetastasen
0,039
N0
30 (36,6)
16 (21,3)
N1
29 (35,4)
29 (38,7)
N2
14 (17,1)
19 (25,3)
N3
9 (11,0)
11 ( 14.7)
Fernmetastasen
0.822
M0
71 (86,6)
64 (84,0)
M1
11 (13,4)
11 (16,0)
UICC-Stadium
0.124
I
10 (12.2)
6 (8,0)
II
20 (24,4) 13
(17.3)
III
32 (39.0)
32 (42,7)
IV
20 (24,4)
24 (32,0)
Chirurgie
0.943
Heil
65 (79,8)
62 (85,3)
palliative
17 (20,7)
11 (14,7)
Tumormarker CEA

0,026
< 5 &mgr; g /l
64 (11.0 )
51 (68,0)
≥5 g /L
9 (78,0)
19 (25,3)
Ca 19-9
0.346
< 30 &mgr; g /l
44 (53,7)
44 (58,7)
≥30 g /L
12 (14,6)
18 (24,0)
P53
0.827
positiv
9 ( 11.0)
8 (10,7)
negativ
40 (48,8)
40 (53,3)
Die Assoziation zwischen klinisch-pathologische Merkmale und H.Pylori Kopien
Die drei klinisch-pathologischen Merkmale, die oben erwähnt, dass wurden mit dem Status H.Pylori Infektion assoziiert wurden analysiert, um zu sehen, ob sie mit den H.Pylori Kopien verbunden waren. In Tabelle 2 ist ein Vergleich der klinischen und pathologischen Merkmale zwischen den Patienten in Gruppe 1 mit hoher Kopien H.Pylori und Gruppe 2 mit Low-Kopien H.Pylori ist reported.Table 2 Die Assoziation zwischen klinisch-pathologische Merkmale und H.Pylori Kopien

H.Pylori hochtitriger
(41cases,%)
H.Pylori Low-Titer
(41cases,%)
P-Wert
Tumor
0,013
Ober
21 (51,2)
10 (24,4)
mittleren oder unteren
20 (48,8)
31 (75,6)
Lymphknotenmetastasen
0,014
N0
20 (48,8)
10 (24,4)
N1
13 (31.7)
16 (39,0)
N2
6 (14,6)
8 (19,5)
N3
2 (4.9)
7 (17,1)
CEA
0.269
< 5 ug /L
34 (82,9)
30 (73,2)
≥ 5 g /L
3 (7.3)
6 (14,6)
Von den Patienten in der Gruppe mit hoher Kopien H.Pylori wurden Neoplasien häufiger im oberen Magen (51,2% vs 18%) liegt, und eine niedrigere pN-Klassifikation (N0 /N1) beobachtet, während eine fortgeschrittenere pN-Klassifikation (N0 /N1) wurde in der Gruppe mit niedrigem Kopien H.Pylori gesehen. Jedoch wurde in den Konzentrationen von CEA zwischen den beiden Gruppen (Tabelle 2) beobachtet kein statistisch signifikanter Unterschied.
H.Pylori Infektion und Überleben
Die möglichen Auswirkungen der H.Pylori Status auf die langfristige Überleben von Patienten wurde mittels univariate und multivariate Analyse untersucht. Gesamtüberlebensanalyse wurde in 157 Patienten durchgeführt, die sich einer Operation unterzog. Am Ende des Follow-up, waren 75 Patienten noch am Leben, 82 Patienten der Tumor gestorben war, und 1 Patient an anderen Ursachen gestorben war; die krebsbezogene 5-Jahres-Überlebensrate in der gesamten Serie 48,4% betrug.
univariate Analysen einer Assoziation zwischen Gesamtüberlebenszeit und histologischen differentiate, Chirurgie, UICC Phase und der Konzentration der CA-199 zeigte (Daten nicht gezeigt). Allerdings ist eine solche Assoziation kann nicht zwischen H.Pylori Infektionsstatus und Gesamtüberlebenszeit (p = 0,715) (Figur 2) entnommen werden. In der multivariaten Analysen wurden histologische differenzierbare, Chirurgie und UICC-Stadium unabhängige prognostische Faktoren für das Gesamtüberleben. Konzentration von CA-199 nicht signifikant mit Gesamtüberleben in multivariate Analyse assoziiert war (Daten nicht gezeigt). Die Wirkung von H.Pylori Status auf die Prognose wurde in allen Untergruppen nach der UICC-Stadium untersucht beobachtet; der Unterschied statistisch nicht signifikant befunden wurde (Daten nicht gezeigt), Darüber hinaus wurden die Auswirkungen der H.Pylori Status auf die Prognose in allen Untergruppen ausgewertet hinsichtlich der verschiedenen Tumorstellen wurde der Unterschied statistisch nicht signifikant befunden ( Zusätzliche Dateien 1 und 2). Eine weitere Analyse für die Patienten, die für H.Pylori positiv waren durchgeführt wurden; Kaplan-Meier-Überlebensanalyse zeigte, dass die Gesamtüberlebenszeit bei Patienten mit hohem Kopien H.Pylori Infektion war besser als bei den Patienten mit niedrigem Kopien, aber der Unterschied war statistisch nicht signifikant (p = 0. 068) (Abbildung 3) Der Zusammenhang zwischen H.Pylori Kopien und Prognose wurden in allen Untergruppen hinsichtlich der verschiedenen Tumorstellen ausgewertet, Es gibt keine statistisch signifikant (Zusätzliche Dateien 3 und 4). Abbildung 2 Assoziation zwischen Gesamtüberleben und H.Pylori Infektionsstatus von 157 Patienten mit Magenkrebs (p = 0,715).
Abbildung 3 Assoziation zwischen Gesamtüberlebenszeit und die Anzahl der Kopien H.Pylori bei Patienten, die positiv waren für H.Pylori (P = 0. 068).
rezidivfreie Überlebensanalyse wurde in 129 Patienten durchgeführt, die R0-Resektion unterzogen. Am Ende des Follow-up, 73 Patienten noch am Leben waren, 56 Patienten ein Tumorrezidiv oder Fernmetastasen gestorben war. Die möglichen Auswirkungen von H.Pylori Status auf der rezidivfreie Überleben der Patienten wurde mittels uni- und multivariate Analyse untersucht.
Univariate Analysen einen Zusammenhang zwischen rezidivfreie Überleben und histologische Differenzierung Tumorstelle, die Tiefe der Tumorinvasion zeigte (pT-Stadium), Lymphknotenmetastasen (pN-Stadium). Allerdings ist eine solche Assoziation kann nicht zwischen H.Pylori Infektionsstatus (p = 0,639) (Figur 4), die Anzahl der Kopien H.Pylori, H.Pylori Infektion in dem nicht-neoplastischen Gewebe und das rezidivfreie Überleben finden. In der multivariaten Analysen wurden histologische Differenzierung Tumorstelle, die Tiefe der Tumorinvasion (pT-Stadium), Lymphknotenmetastasen (pN-Stadium) unabhängige prognostische Faktoren für das rezidivfreie Überleben. Die Wirkung von H.Pylori Status auf die Prognose in allen Untergruppen beobachtet wurde nach der UICC Stadium untersucht wurde der Unterschied statistisch nicht signifikant gefunden (Daten nicht gezeigt). Daten für das Gesamtüberleben der Patienten, die R0-Resektion unterzogen waren fast die gleichen wie die für das rezidivfreie Überleben. Histologische Differenzierung Tumorstelle, die Tiefe der Tumorinvasion (pT-Stadium), Lymphknotenmetastasen (pN-Stadium) waren unabhängige prognostische Faktoren für das Gesamtüberleben (Daten nicht gezeigt). Abbildung 4 Assoziation zwischen rezidivfreie Überleben und H.Pylori Infektion von 129 Patienten, die kurative Operation unterzogen (p = 0,639).
Diskussion
Unter den zahlreichen Methoden, die oben beschrieben ist, die vielversprechendsten für die Zukunft ist die Anwendung von Real-Time PCR [26]. Die neue Echtzeit-PCR-Technik ist ein Durchbruch in der Diagnose von H.Pylori, weil es nicht nur eine schnelle und präzise Erfassung von H.Pylori ermöglicht, sondern auch die Quantifizierung [23]. Bei dem Verfahren der Echtzeit-PCR, gibt es viele Gene für die Amplifikation auszuwählen, und das Primerpaar 16S-rRNA und 23S-rRNA zeigte eine hohe Spezifität und Sensitivität [27]. In der aktuellen Studie haben wir uns für die 16S-rRNA für die Amplifikation von Real-Time PCR; . Die Ergebnisse zeigten, dass 52,2% von 157 Magenkrebs für H.Pylori Infektion positiv waren, die die Ergebnisse der anderen Studien mit der gleichen Methode angesprochen [28] Die wichtigsten Ergebnisse der aktuellen Studie
waren: 1) H.Pylori Infektion größer war in nicht-neoplastischen Gewebe als im Tumorgewebe; 2) wurde H.Pylori Infektion der Tumorstelle, N-Staging bezogen, sowie die Höhe der CEA; Außerdem Tumorstelle und N-Staging wurde der H.Pylori Kopien Anzahl bezogen. In Hoch-infizierten Patienten hatte die N-Staging eine frühere Stufe (N0 /N1) und Tumorstellen im oberen Magen gefunden wurden, während der CEA-Pegel auf den H.Pylori Kopien Zahl in keinem Zusammenhang war; und 3) die Gesamtüberlebenszeit und das rezidivfreie Überleben bei Patienten mit positiven H.Pylori Status hatte keinen signifikanten Unterschied gegenüber den Patienten mit negativem H.Pylori Status; und in H.Pylori positiven Patienten war die Prognose besser in solche mit hohen Kopien Anzahl von H.Pylori als in denen mit niedriger Kopien Zahl, aber das Ergebnis war nicht statistisch signifikanten Unterschied.
verzeichneten wir eine höhere Frequenz der Infektion mit H .Pylori in nicht-neoplastischen Gewebe als in Tumorgewebe von Patienten mit Magenkrebs. Die mögliche Erklärung könnte sein, dass 1) einmal ein Tumor in der Lage entstanden, wo die H.Pylori lebte, würde der Tumor die Mikroumgebung zu ändern, die nicht geeignet wäre für die H.Pylori in jedem more.2) Einige Wissenschaftler, um zu überleben [ ,,,0],29] wies darauf hin, dass die H.Pylori durch die neutrophilen Granulozyten verschlungen werden würde, die in dem neoplastischen Gewebe reichlich vorhanden ist. Der Host-Immunantwort auf den Tumor erhöht die Induktion der Apoptose durch die Bakterien., Die klinisch-pathologischen Eigenschaften von H.Pylori-positive Patienten wurden mit jenen der Gruppe von Patienten mit negativen H.Pylori Status verglichen. Die statistische Analyse ergab, dass oberen Magen Lage war häufiger in H.Pylori-positiven Patienten; unter den Patienten, die für H.Pylori positiv waren, waren die Kopien von H.Pylori im oberen Magen Lage auch höher als im mittleren oder unteren Magen. Im Allgemeinen ist der Magen, insbesondere die Magen Pylorus ist der am besten geeignete Ort für H.Pylori wachsen. Diagnose und Menge der H.pylori-Infektion wurde unter Verwendung von nicht-neoplastischem Gewebe in einem Abstand von mindestens 5 cm vom Tumor durchgeführt. Daher waren verschiedene Probenahmestellen nach Tumorstelle, beispielsweise der obere Magenkrebs nicht-neoplastische Gewebe aus dem mittleren oder unteren Magen kann probieren, und die mittleren oder unteren Magenkrebs kann von der oberen Probe. Darüber hinaus kann in Stichprobenfehler von H. pylori-Diagnose und Beurteilung von H. pylori-Menge ergeben Ein Punkt Probenahme aus Antrum oder Corpus, so dass wir denken, dieses Ergebnis nicht in der Lage ist zu dem Schluss, dass H.Pylori Infektion an die Tumorstelle verbunden war.
Wir fanden auch eine höhere Rate von fortgeschrittenen pN Stadium in H.Pylori-negativen Patienten; außerdem wurde pN Inszenierung auf die Kopien Nummer H.Pylori bezogen. In der High-Kopien Patienten, hat die N-Staging eine frühere Stufe (N0 /N1). Theoretisch mit den Matrix-Metalloproteinasen assoziiert, Tumorinvasion und Metastase (MMPs) durch die Magenkrebszelle sezerniert wird, die extrazelluläre Matrix abbauen können, um die Struktur des vaskulären Basalmembran verändern und Invasion von Krebszellen und Metastasierung [30, 31] zu fördern. MMP-2 ist eines der wichtigsten MMPs in den Prozess der Tumorinvasion und Metastasierung. Monig et al. [32] berichtet, dass MMP-2-Expression eine starke Korrelation mit dem Fortschritt von Lymphknotenmetastasen von Magenkrebs hat. Sobald H.Pylori den Magen infiziert hat, kann es die Sekretion von MMP-1, MMP-2, MMP-3 und TIMP-3 von Magenkrebszellen [33], zu stimulieren und schließlich aufgefordert, und den Fortschritt der Invasion und Metastasierung von beschleunigen Magenkrebs. die aktuelle Studie eine Umkehrschluss jedoch zeigte, so schlagen wir vor, dass die H.Pylori Infektion eine positive Faktor für Lymphknotenmetastasen ist.
Daten aus der aktuellen Studie zeigte, dass H.Pylori Infektion auf das Niveau der CEA verwandt war in dem Wirtsserum. Unseres Wissens ist dies das erste Mal einen solchen Einfluss dieses Faktors auf die Höhe der CEA zu melden. Patienten mit positiven H.Pylori Status hatte eine niedrige Niveau im Vergleich zu denen, die negativ waren, aber das Niveau der CEA war auf die H.Pylori Kopien Nummer ohne Bezug; eine mögliche Erklärung war Autoimmunreaktionen induziert durch H.Pylori das Wachstum von Krebszellen [34] gehemmt, und verringert schließlich die Höhe der CEA im Wirtsserum.
bis 1995 Studien aus Taiwan stammt [35, 36], unseres Wissens war die erste, die die Beziehung zwischen H.Pylori Infektionsstatus und die Ergebnisse der Patienten mit Magenkrebs, multivariate Analyse zeigte, dass nur TNM-Stadium war der unabhängiger prognostischer Faktor zu berichten; jedoch wurde die Definition des Status H.Pylori durchgeführt nur durch Serologie, die Zahl der Patienten war klein, und Follow-up ziemlich kurz war. Im Jahr 2006 identifizierte eine prospektive Studie H.Pylori Status als unabhängiger prognostischer Faktor [21]. Kultur Untersuchung, histologische Analyse und serologischen Assays wurden durchgeführt H.Pylori Status zu definieren. Die bessere Prognose bei Patienten festgestellt, mit H.Pylori Infektion wurde auf der Grundlage einer verbesserten Immunantwort gegen den Tumor [21] erläutert. Es wurde auch angenommen, dass, weil H.Pylori Komponenten spezifischen Rezeptoren oder Oberflächenmoleküle auf Magenepithelzellen imitieren, Auto-Antikörper konnte eine Kreuzreaktion gegen Magenkrebszellen [34] zu induzieren. Allerdings haben einige Autoren jedoch Zweifel an der realen prognostischen Wert von H.Pylori Status, was darauf hindeutet, dass H.Pylori Negativität kann einfach zu fortgeschrittenen Tumorprogression in Beziehung gesetzt werden [37, 38]. Eine kürzlich durchgeführte Studie in Italien [22] zeigten, dass Patienten mit negativen H.Pylori Status erschien eine schlechte Prognose haben, aber die Verfahren dieser Studie ist auch zweifelhaft, da sie die Kombinationsverfahren für PCR vacA und serologische Analyse verwendet, um den Status zu definieren, von H.Pylori Infektion. Theoretisch kann PCR nur eine Kopie der Ziel-DNA erkennen, wenn in Wasser untersucht, aber die meisten Studien haben gezeigt, dass die Standard-PCR-Sensitivität und Wirksamkeit nicht so genau waren [23, 39], und die serologische Analyse kann nicht unterscheiden, ob der Patient eine ist mit Strominfektion oder eine Infektion der Vergangenheit [23, 40]; beide Verfahren werden teilweise zu einem falsch-negativen beitragen.
Wir haben gezeigt, dass die UICC-Stadium, histologische differenzierbar und Chirurgie die unabhängige prognostische Faktoren des Gesamtüberleben aller Patienten mit Magenkrebs waren, und der Tumorstelle, histologische Differenzierung Tiefe der Tumorinvasion, Lymphknotenmetastasen waren die unabhängige prognostische Faktoren des rezidivfreie Überleben für die Patienten, die kurative Operation unterzogen. Jedoch war die H.Pylori Infektionsstatus nicht ein unabhängiger prognostischer Faktor, da es keinen Unterschied in der Überlebenszeit dieser Patienten mit oder ohne H.Pylori war, aber eine weitere Analyse von H.Pylori positiven Patienten zeigten, dass die Prognose der Patienten mit hohen Kopien Anzahl der H.Pylori war besser als jene mit niedrigen Kopien Zahl, aber das Ergebnis war nicht statistisch signifikanten Unterschied. in Impfversuche [41] mit Cholera-Toxoid in Menschen
, wirkt H.Pylori Infektion als Adjuvans zur Induktion einer lokalen B-Zell-Antwort in der Magenschleimhaut.

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