Genetikai polimorfizmusok a oszteopontin promoter növeli a távolság metasztázis és halál kínai betegek gyomor cancer

genetikai polimorfizmusok az oszteopontin promoter növeli a távolság metasztázis és halál kínai betegek gyomorrák
Abstract
Háttér
in vitro
és in vivo
vizsgálatok arra utaltak, hogy az oszteopontin (OPN) van társítva sokféle rák. Azonban nem tanulmány arról számolt be előfordulásának OPN polimorfizmusok és a kockázat a gyomorrák. A cél az volt, hogy vizsgálja meg a szövetség között OPN polimorfizmusok és a gyomorrák a kínai betegcsoportban. Katalógusa módszerei katalógusa Három genetikai variánsok OPN promoter genotipizálása direkt szekvenálás 200 gyomorrákos betegek és 200 nemi és korban illesztett rák-mentes ellenőrzéseket. A 4 éves túlélési görbét a Kaplan-Meier-módszerrel, és összehasonlítottuk a log-rank teszt minden egyes nukleotid polimorfizmus (SNP) honlapján. Mértük a promoter aktivitását -443 T → C polimorfizmus segítségével kettős luciferáz riporter vizsgálat. Katalógusa eredménye
A variáns nt -443 (CC), nem volt szignifikáns különbség a betegek száma színpadi IV és az I. stádiumú gyomorrák (IA + IB; P = 0,014 katalógusa), és azok között, a színpadi IV és az összes többi szakaszában gyomorrák (IA + IB + II + III, P = katalógusa 0,02). A variáns nt -443 (CT), nem volt szignifikáns különbség a száma gyomorrák stádiumú IV és azok a Stage II (P =
0,013). A túlélési arányokat a betegek számára a C /C genotípus szignifikánsan alacsonyabbak voltak, mint a betegek számára a másik két genotípus (C /T, T /T). Ezenkívül, jelentősen magasabb, luciferáz-aktivitás volt megfigyelhető a pGL3-C konstrukciót, mint a pGL3-T-konstrukciót.
Következtetések
Ez a tanulmány, az első bizonyíték arra, hogy variáció nt -443 az OPN promoter növeli a lehetséges gyomor- rák áttétek és az azt követő halál a kínai lakosság. katalógusa Kulcsszavak katalógusa osteopontin Gyomorrák polimorfizmus genetikai variánsok metasztázis Háttér katalógusa Gyomor adenocarcinoma marad a második vezető oka a rák összefüggő halálesetek világszerte, számviteli 738.000 ember halálát okozza évente [1] . Gyomorrák a harmadik leggyakoribb daganatos Kínában. A gyomorrák kialakulásával jár elsősorban Helicobacter pylori-fertőzés katalógusa [2], de más kockázati tényezők közé tartozik a diéta magas só-, a dohányzás, a fogyasztás az ecetes élelmiszerek, és specifikus genetikai háttérrel [3]. Bebizonyosodott, hogy a H. pylori
fertőzés egy független kockázati tényező, amely elvezet a tartós kolonizáció és krónikus gyulladás a gyomor nyálkahártya, ezáltal növeli a kialakulásának kockázatát peptikus fekély és gyomorrák [2, 4-6]. Vannak azonban olyan inter-individuális különbségek a gyulladás mértékét személyek közül H. pylori fertőzés katalógusa, és klinikai következményei kizárólag akkor alakulhat ki egy kisszámú gyomorrák esetek. Multifaktoriális modellek azt sugallják, hogy a genetikai hajlam miatt sajátos variáns allél polimorfizmusok hatással lehet az eredményeket a környezeti expozíció [7].
Osteopontin (OPN) egy szekretált ragasztó phosphoglycoprotein, amely tartalmaz egy funkcionális Gly-Arg-Gly-Asp-Ser sejt-kötő szekvencia [8]. Az OPN
gént leképezve kromoszóma 4q24-Q25, és bebizonyosodott, hogy az OPN fontos szerepet játszik a tumor metasztázis [9]. OPN kimutatták, hogy kifejezhető belül tumorsejtek és a környező stroma számos emberi rákos megbetegedések, mint például a vastagbél, emlő, tüdő, gyomor, endometrium, és a pajzsmirigy, amely egy kapcsolat rosszindulatú invázió [10-13]. Korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy az OPN gyakran túlzott mértékben expresszálódik a humán gyomorrák [14], és ez a kifejezés az OPN mRNS szignifikánsan magasabb volt gyomorrák szövetekben, mint a nem tumoros szövetekben.
Számos polimorfizmust írtak le az OPN katalógusa gén, amelyek közül néhány társuló oligoarticularis (vagy pauciarticular) juvenilis idiopátiás arthritis, nephrolithiasis, és a krónikus hepatitis C [15-18]. Egy nemrégiben készült tanulmány [19] beszámolt arról, hogy a betegek egy G /G genotípus nt -156 az OPN promoter gyakrabban diagnosztizáltak előrehaladott stádiumú (IIIB-IV) nem-kissejtes tüdőrák (NSCLC), mint a más genotípusok míg a másik jelentés azt javasolta, hogy az OPN polimorfizmus lehet a genetikai tényező a hepatitis B vírus-clearance és a hepatocellularis carcinoma előfordulása [20].
jelenleg nincs publikált vizsgálatok értékelésekor kapcsolatát OPN
genetikai polimorfizmusok és a kockázat a gyomor rák kialakulásához. Ezért a jelen vizsgálat célja az volt, hogy meghatározzák, hogy egy egyesület áll fenn OPN polimorfizmusok és a kockázat a gyomorrák a kínai lakosság. Katalógusa Módszerek katalógusa alanyok 2005-től 2008-310 független gyomorrákos betegeknél (a GC csoport) vontunk a First Affiliated Kórház Nanjing Orvosi Egyetem. Az összes beteg etnikai han kínai lakosok, akik szövettanilag igazolt gyomor adenokarcinóma. A kontroll csoport (a nem GC-csoport) állt egy véletlenszerűen kiválasztott 591 etnikai han kínaiakat Jiangsu tartomány. Azt követően, hogy írásos beleegyezését adta, minden résztvevő volt, hogy adjanak vérmintát. Ez a tanulmány által jóváhagyott etikai bizottság az első Kapcsolt Nanjing Orvosi Egyetem (É0-SR-073).
Előtt szekvenálása genotípusok OPN katalógusa promoter, SPSS v10.0 (SPSS Inc. ., Chicago, IL, USA) program véletlenszerűen választja ki a 200 GC betegek és a nem és életkor azok megfeleltetését 200 véletlenszerűen kiválasztott ellenőrzés a nem GC-csoport. Értékeltük a beteg és kontroll H. pylori
segítségével közvetett szilárd fázisú immun (ICM) vizsgálata A jelenlét elleni IgG antitestek H. pylori katalógusa (Genelabs Diagnostics, Szingapúr). Ezt a vizsgálati eljárást a korábban validált a mi Lab pontossággal 92,3% [21].
Genomiális DNS-vezérlők és gyomor rákos betegek t extraháltunk etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA) -anticoagulated perifériás vér szerint a hagyományos proteináz K és fenol -kloroform módszer, és -70 ° C-on.
elemzése polimorfizmusok az OPN szabályozó régió katalógusa az OPN-66, -156 (rs17524488), és -443 (rs11730582) variánsok genotipizálása közvetlen szekvenálása az értelemben, és az anti-szensz szál következő polimeráz-láncreakció (PCR) amplifikáció a promoter szabályozó régió -473 -3 (forward primer 5 '- CAA GCT ACT GCA TAC TCG AAA TCA CA-3 '; reverz primer 5 '- ACA ACC AAG CCC TCC CAG AAT TTA-3 '), a korábban leírtak [19]. A PCR-t 50 ng DNS-t templátként a következő körülmények között: 95 ° C-on 10 percig, majd 36 ciklus 94 ° C-on 30 s, a hőkezelés 60 s, és 72 ° C-on 60 s, a végső extenzió 72 ° C-on 15 percig. Miután affinitás membrán tisztítási eljárással a QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Carlsbad, CA, USA), a PCR-termékeket vetettük alá ciklus szekvenciáló a megfelelő előre és reverz primer alkalmazásával egy automatizált ABI 3100 DNS szekvenáló által GeneCore Bio Technologies (Shanghai Kína) .
luciferáz vizsgálatban SNP nukleotidnál (nt) -443 a OPN promoter
250 bp hosszúságú fragmenseket az OPN promóter (-tól -590 hogy -340) hordozó vagy a T vagy C allél szintetizáltuk az Invitrogen és behelyezve upstream a szentjánosbogár luciferáz gént a pGL3-Enhancer plazmid vektorba (Promega, USA) külön eljárásokat. Mindegyik konstrukciót szekvenálással igazoljuk. Egy sorozat OPN promóter-luciferáz riporter konstrukciókat tranziensen transzfektáltunk a gyomor rákos sejtvonalak MKN28 (Shanghai Intézet Digestive Disease) és az SGC-7901 (Shanghai Cancer Institute), és transzfekciós végeztük Lipofectamine 2000 reagens (Invitrogen) alkalmazásával a gyártó protokollja. A MKN28, SGC-7901 sejtvonalak tenyésztettünk Dulbecco-féle módosított Eagle-féle közegben (DMEM), kiegészítve 10% hővel inaktivált borjúembrió-szérumot. A tevékenység a különböző genotípusú promoterek alkalmazásával mértük a luciferáz riportergén Assay System (Promega, USA). Minden kísérletet megismételtük három párhuzamosban.
Statisztikai analízis
Statisztikai analízist végeztünk SPSS 10.0 szoftver. Mennyiségi változók eltérne a normális eloszlás, mint a kor, összegeztük és szórását (SD). Összehasonlítása kor közötti esetek és kontrollok alkalmazásával vizsgáltuk független Student-féle t-próba katalógusa. Összehasonlítás extra gyomor tumorok, a H. pylori fertőzés katalógusa, és genotípus frekvenciák közötti esetek és a kontrollok alkalmazásával vizsgáltuk a chi-négyzet próba és a Fisher-féle egzakt tesztet. Túlélési számoltuk a Kaplan-Meier-módszerrel. Minden valószínűség (P katalógusa) értékeket kétfarkú és szignifikancia jelzett P katalógusa < 0.05.
Eredmények katalógusa demográfiai és klinikai jellemzői a beteg katalógusa A gyomorrák (GC) csoportba 200 személy (64% férfi), egy átlagos életkora 56,29 ± 3,46 év. A kontroll (nem GC) csoportba 200 személy, ebből 64% -a volt férfi, az átlagos életkora 55,67 ± 4,21 év (1. táblázat). Nem volt szignifikáns különbségeket a megoszlása ​​életkor és a nemek, valamint a H. pylori katalógusa szeropozitivitást. Klinikopatológiai jellemzői a betegek és a kontrollok táblázat 1.Table 1. klinikopatológiai jellemzőit betegek gyomorrák karcinóma és egészséges kontrollok
Jellegzetes Matton No. A betegek vagy ellenőrzés
P
esetek (n) Matton vezérlés (n)
sz
200 katalógusa 200 katalógusa Életkor, év katalógusa > 0,05 katalógusa átlagos katalógusa 56.29 katalógusa 55.67 katalógusa Szórás katalógusa 3,46 katalógusa 4.21 katalógusa tartomány katalógusa 63 katalógusa 65 katalógusa nemek katalógusa > 0,05 katalógusa Férfi katalógusa 130 katalógusa 130 fiatal női katalógusa 70 katalógusa 70 katalógusa Helicobacter pylori fertőzés katalógusa katalógusa 0,12 katalógusa Szeronegatív
62 katalógusa 77
szeropozitív
138 katalógusa 123 katalógusa érinvázió katalógusa hiánya katalógusa 155 -
jelenlét katalógusa 45 -
nyirokcsomó áttétek katalógusa hiányában katalógusa 80 -
jelenlét katalógusa 120 -
máj metasztázis katalógusa hiányában katalógusa 182 -
jelenlét katalógusa 18 katalógusa -
peritoneális terjesztése katalógusa hiánya katalógusa 172 -
jelenlét katalógusa 28 -
TNM -
IA
39 katalógusa -
IB katalógusa 40 -
II katalógusa 33 -
III katalógusa 45 -
IV katalógusa 43 katalógusa -
SNP a promoter régió a humán OPN-gén
közvetlen szekvenálása a DNS-fragmensek között NT -473 és az NT -3 betegekben és életkor és nem illesztett feltárta 3 SNP az OPN promoter, található NT -156 [ ,,,0],GG /GG homozigóta, GG /G- (törlés) heterozigóták, G- /G- homozigóták], NT -443 [CC homozigóták, CT heterozigóták, TT homozigóták], és az NT -66 (1. ábra), amint azt a 2. táblázatban . nem volt szignifikáns különbség a elosztása ezek SNP (NT -66, -156, -443) között GC betegek és a kontrollcsoport. A genotípusok eloszlását a TNM szakaszaiban gyomorrák 3. táblázatban mutatjuk be az 1. ábrán sematikus diagram és szekvenálási adatok az OPN promóter. Reprezentatív adatként a szekvencia-analízis a promóter. Az SNP nt -443 az alábbi allélek: CC, CT és TT. Van egy kis behelyezés nt-156, amely három allél: G /G, G /GG GG /GG. Az SNP nt -66 csak egy allél: TT. Katalógusa 2. táblázat összehasonlítása OPN promoter között gyomorrákos betegek és egészséges kontrollok
Controls Matton betegeket Matton
Gyomorrák
genotípusok
n
n Matton P
LN (+) Matton LN (-) Matton P katalógusa

-66
TT
200
200
1.00
124
76
1.00
-156
G/G
86
67
1.00
41
25
1.00
G/GG
78
92
0.064
57
36
0.92
GG/GG
36
41
0.18
25
16
0.91
-443
CC
22
15
1.00
8
8
1.00
CT
93
94
0.28
63
33
0.23
TT
85
91
0.22
53
35
0.45
3. táblázat A genotípusok megoszlása ​​a TNM szakaszában gyomorrák
A TNMs gyomor- cancer

Genotypes

IA

IB

II

III

IV

-66
TT
38
44
26
52
40
-156
G/G
16
16
13
20
19
G/GG
16
15
15
16
18
GG/GG
7
9
5
9
6
-443
CC
1
2
1
4
14
CT
17
19
19
19
19
TT
14
18
5
19
29
Tekintetében azonban a tumor-node-metasztázis TNM szakaszban, azt találtuk, hogy az SNP nt -443, betegek között a CT genotípusú volt szignifikáns különbség stádiumú II és IV (p
< 0,01) között, valamint a IV-es szint és az összes többi szakaszában (IA + IB + II + III, P =
0,04; 4. táblázat). Hasonlóképpen betegek körében a CC genotípus nt -443 volt szignifikáns különbség stádiumú IV stádium I (IA + IB; P = 0,011 katalógusa), valamint a színpadi IV és az összes többi szakaszában (IA + IB + II + III P katalógusa = 0,012; 4. táblázat). Nem volt szignifikáns különbség az TNM szakaszban, és a másik két SNP (NT -66 és az NT -156) az OPN promóter. Azt is találtak összefüggést a SNP OPN promóter és nyirokcsomó metastasis.Table 4 genotípus megoszlása ​​nt -443 az OPN promoter által gyomorrák TNM Matton A TNM szakaszában gyomorrák katalógusa
genotípusok Matton IA + IB Matton IV Matton P
II Matton IV Matton P
III Matton IV Matton P
IA + IB + II + III Matton IV
katalógusa P katalógusa

-443
TT
32
29
1.00
5
29
1.00
19
29
1.00
56
29
1.00
CT
36
19
0.16
19
19
< 0.01*
19
19
0.33
74
19
0.04*
CC
3
14
0.011*
1
14
0.98
4
14
0.18
8
14
0.012*
* Azt jelzi, szignifikáns különbséget (P < 0,05).
Egyesületek genotípusok között az OPN promoter régió és a túlélés
Kaplan-Meier-féle becslése különböző genotípusok nt -443 az OPN
promoter a 2. ábrán látható . a túlélési arányokat a betegek számára a C /C genotípus szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a túlélési arány a betegek a másik két genotípus (C /T, T /T). Nem volt szignifikáns összefüggést a túlélés és genotípusok a többi helyszínen (nt -156 és -66 nt). 2. ábra Kaplan-Meier túlélési lényegesen alacsonyabb a gyomor rákos betegek a C /C genotípus, mint a másik két genotípus nt -443 az OPN promóter.
hatása a -443 T → C polimorfizmus promoter aktivitását katalógusa hatását hogy megvizsgáljuk a -443 T → C promóter régió polimorfizmus átírását az OPN katalógusa gén mértünk promoter aktivitását egy kettős luciferáz riporter elemző rendszer, és összehasonlítottuk a tevékenységét a -443C és -443 T allél egy tranziens vizsgálatban a MKN28, SGC-7901 sejtvonalak. Amint a 3. ábrán látható, jelentősen magasabb, luciferáz aktivitásokat generált a pGL3-C konstrukciót, mint a pGL3-T konstrukcióval (p
= 0,001 a MKN28; p
= 0,021 SGC-7901). 3. ábra Hatása a -443 T → C polimorfizmus promoter aktivitását. Jelentősen magasabb luciferáz aktivitásokat által generált pGL3-C konstrukciót, összehasonlítva a pGL3-T-konstrukcióval (p
= 0,001 a MKN28; p
= 0,021 SGC-7901).
Megbeszélés
Mounting bizonyítékok arra utalnak, hogy az OPN szerepet játszik a szabályozás a tumor metasztázis és hogy az OPN kifejezés különösen magas metasztázisos daganatok [22]. OPN túlexpresszálódik rákok, amelyek nagy hajlandóságot kialakítására csontmetasztázisok. A csontáttétek, OPN általában társul a felület között a carcinoma és a csont felületén, és ez úgy tűnik, hogy kapcsolatban áll fokozott csontreszorpciós aktivitást az oszteoklasztok által [23]. Továbbá, nagy OPN kifejezés a primer tumor társul korai metasztázis és rossz klinikai eredmény humán gyomorrák és egyéb rákok [24-27].
Egy friss tanulmány szerint az OPN promoter járt NSCLC [19]. A jelen tanulmány témája a szövetség SNP GC, és bár a genotípusok megoszlása ​​az OPN katalógusa promóter nem volt szignifikáns különbség a két GC betegek és egészséges kontroll jelentős különbségek voltak a genotípusok megoszlása ​​( CC) nt -443 között stádiumú IV és I. stádiumú gyomorrák (IA + Ib) és közötti szakaszban a IV és az egyesített másik három szakaszában a gyomorrák (IA + IB + II + III; 4. táblázat). A túlélési arányokat a betegek számára a C /C genotípus szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a túlélési arány a másik két genotípus (C /T, T /T; 3. ábra). Ezenkívül, jelentősen magasabb, luciferáz aktivitásokat generált a pGL3-C konstrukciót, mint a pGL3-T-konstrukciót. Riporter gén analízis azt mutatta, hogy a haplotípus -443C /-156 G /-66 T társított jelentősen továbbfejlesztett promotor aktivitás képest öt másik allél variánsokat tesztelték [28]. Egy új tanulmány, melanoma metasztázisok találta, hogy azok homozigóta az -443C allél kifejezett szignifikánsan magasabb OPN mRNS, mint azok, amelyek vagy heterozigóta (CT) vagy homozigóta az -443 T allél [29]. Transzkripciós faktor c-myb-kötődik a régióban a OPN promoter egy allél-specifikus módon, és indukálja fokozott aktivitását a -443C képest -443 T OPN
promoter [30]. Összefoglalva, ezek az adatok azt sugallják, hogy a variációs nt -443 az OPN promoter szerepet játszik a GC progresszió és metasztázis, különösen a CC genotípust nt -443 az OPN
promóter. Azt, hogy a polimorfizmus OPN kapcsolatos kifejezése OPN rákos beteg marad ismeretlen, bár. Túlzott expressziója OPN találták gyomorrák mintákat egy korábbi vizsgálatban [14]. Ezért további vizsgálatokra van szükség, hogy jobban megismerje ezt a megállapítást.
A jelen tanulmányban azt találták, hogy a CT genotípusú nt -443 az OPN promoter szignifikáns különbség a szakaszban IV szakasz és a II gyomorrák, valamint közötti szakasz IV és egyéb szakaszaiban gyomorrák (IA + IB + II + III), de nem közötti szakasz IV stádium III vagy az I. szakaszban a fő oka az lehet az oka, hogy a korlátozott számú beteg mindegyik alcsoportban. Az is lehetséges, hogy a transzkripciós faktor c-myb-volna fokozott aktivitását a régióban a OPN katalógusa promoter, amely tartalmazta a CC és CT genotípusok, de nem a többi genotípus (azaz, tt), [29]. Azonban ezek a hipotézisek további vizsgálatot igényelnek nagyobb tanulmányok.
A jelen genomi megállapítások egészséges kontrollok nem voltak azonosak az előző megállapítások között japán és olasz kontroll [30, 31]. Bár a korábbi jelentések azt sugallják, hogy a magas OPN fejezik magas szinten GC [17], nem találtunk összefüggést a genotípusok között az OPN katalógusa promoter kockázatával GC. Azonban azt találtuk, etnikai különbségeket SNP több fogadó gének GC betegeknél [30, 31]. Ezért a jelen megállapítások nem vonatkoznak minden populáció. Ennek ellenére, bár nem volt összefüggés a OPN SNP-k és GC gyomorrák hajlamosító vagy súlyosságának kínai betegek, eredményeink azt sugallják, hogy összefüggés van a metasztázis a GC. Katalógusa Következtetés
Összefoglalva, ez az első tanulmány az OPN genetikai polimorfizmusok és a kockázat a GC egy kínai populációban. Kimutattuk, hogy a genetikai polimorfizmusok a -443 a OPN promoter társított metasztázis és az ezt követő halála GC. Ezért ezek a megállapítások kínálnak megközelítés megjósolni a klinikai kimenetelét GC betegeknél. Azonban további vizsgálatok szükségesek a nagyobb csoportjának a betegek érdekében, hogy erősítse ezeket a megállapításokat. Katalógusa Notes katalógusa Fujun Zhao, Xiaoyi Chen hozzájárult egyaránt ezt a munkát. Katalógusa nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás Ez a munka katalógusa támogatott Természettudományi alapok Kína (No. 81072032 és 30770992). A szerzők köszönetet mondanak Medjaden Bioscience Limited lektorálás a kéziratot. Katalógusa Szerzők eredeti beküldötteknek képeket
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12885_2012_3447_MOESM1_ESM.pdf A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti 12885_2012_3447_MOESM2_ESM.tiff A szerzők eredeti fájl 2. ábrán 12885_2012_3447_MOESM3_ESM.tiff A szerzők eredeti fájl 3. ábra Érdekütközés
A szerzők kijelentik, nincs versengő érdekek. Katalógusa szerzôk hozzájárulása
ZF részt vett a vizsgálat kialakítása és végezte a statisztikai elemzést, CX végzett luciferázvizsgálatban, MT, HB fogant a tanulmány, és particpated a tervezés és koordináció, ZZ, ZG részt vett a vizsgálat kialakítása. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges kéziratot. Katalógusa

• A transzkripciós faktor FOXO4 le szabályozott és gátolja a tumor proliferációját és metasztázis gyomorrák
• I. fázisú imatinib, ciszplatin és 5-fluoruracil vagy kapecitabin előrehaladott nyelőcsőrák és gyomor adenokarcinóma