Genetski polimorfizmi u osteopontina promotora povećava rizik od udaljenosti metastaza i smrti kineskih pacijenata s rakom želuca

Genetski polimorfizmi u osteopontina promotora povećava rizik od udaljenosti metastaza i smrti kineskih pacijenata s rakom želuca pregled apstraktne pregled pozadine pregled In vitro pregled i in vivo
studije pokazale su da osteopontin (OPN) je povezan s mnogim oblicima raka. Međutim, nema istraživanja su izvijestili učestalost OPN polimorfizama i rizik od raka želuca. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati povezanost između OPN polimorfizama i raka želuca u kineskoj populaciji pacijenata. Pregled metoda
tri genetske varijante u OPN promotora genotipizirane pomoću izravnog sekvenciranja u 200 bolesnika s rakom želuca i 200 spola i dobi-podudarne kontrole raka-free. 4 godine Krivulja preživljavanja je izračunata pomoću Kaplan-Meier metodi i uspoređeni pomoću log-rank testa za svaki polimorfizma jednostrukog nukleotida (SNP) stranice. Izmjerili smo promotora aktivnost T → C polimorfizma na -443 koristeći dvojno luciferaze testa. pregled Rezultat pregled Za varijantu na nt -443 (CC), postojala je značajna razlika između broja pacijenata s pozornice IV i one s pozornice sam rak želuca (IA + IB; P = 0,014 pregled) i između onih s stadiju IV i svim drugim fazama raka želuca (IA + IB + II + III; P = pregled 0,02). Za varijantu na nt -443 (CT), postojala je značajna razlika između broja oboljelih od raka želuca sa Stage IV i one s pozornice II (P = 0,013) pregled. Stope preživljavanja za pacijente s C /C genotipom bio je značajno manji nego kod pacijenata s druga dva genotipa (C /T, T /T). Osim toga, značajno više aktivnosti luciferaze uočene su u pGL3-C konstrukt u odnosu na pGL3-T konstrukt.
Zaključci pregled Ova studija daje prve dokaze da varijacije na nt -443 u OPN promotora povećava potencijal za želuca metastaze karcinoma i naknadno smrt u kineskom populacijom. pregled Ključne riječi pregled osteoponinske rak želuca polimorfizmi genetske varijante metastaza Pozadina pregled želuca adenokarcinoma ostaje drugi vodeći uzrok smrti od raka povezanih širom svijeta, što čini 738,000 smrtnih slučajeva godišnje [1] , Želučani karcinom je treći najčešći rak u Kini. Razvoj karcinoma želuca je povezana uglavnom s Helicobacter pylori pregled infekcije [2], ali i drugi faktori rizika uključuju visoku prehrane u sol, pušenje, konzumacija kiselog hrane i specifične genetske pozadine [3]. Pokazano je da se H. pylori infekcija pregled je neovisni faktor rizika koji dovodi do perzistentne kolonizacije i kroničnom upalom sluznice želuca, čime se povećava rizik za razvoj peptičke ulceracije i rak želuca [2, 4-6]. Međutim, tu su označene inter-individualne razlike u stupnju upale među osobama s H. pylori pregled infekcije i kliničke posljedice samo razvijati u malom broju slučajeva raka želuca. Multifaktorijalna modeli sugeriraju da je genetička podložnost zbog specifičnih promjene alela u polimorfizma mogu utjecati na rezultate izlaganja okolini [7]. Pregled Osteopontin (OPN) je izlučeni ljepilo phosphoglycoprotein koji sadrži funkcionalnu Gly-Arg-Gly-Asp-Ser vezanje stanica sekvenca [8]. OPN pregled gen na kromosomu 4q24 mapirani-P25, a pokazano je da OPN ima važnu ulogu tumorskih metastaza [9]. OPN je pokazano da se izražava u tumorskim stanicama i okolnog stromi brojnih humanih karcinoma, kao što je kolona, ​​dojke, pluća, želuca, endometrija, štitnjače i pruža vezu s malignim invazije [10-13]. Prethodne studije su pokazale da OPN često prisutan u ljudskoj raka želuca [14], te da ekspresija OPN mRNA bila je znatno viša u želučanom tkivu karcinoma u usporedbi s ne-tumorskih tkiva.
Nekoliko polimorfizama su opisani u OPN
gen, od kojih su neki su povezani s oligoartikularnim (ili pauciarticular) juvenilnog idiopatskog artritisa, nefrolitijazu i kroničnog hepatitisa C [15-18]. Nedavno istraživanje [19] izvijestili da pacijenti s G /G genotipa na nt -156 u OPN promotora s uznapredovalom stadiju (IIIB-IV) ne-malih stanica pluća (NSCLC) od onih kod drugih genotipova, češće se dijagnosticira, dok je drugi izvještaj sugerirao da je polimorfizam OPN može biti genetski faktor za hepatitis B virusne vrijeme i pojavu hepatocelularnog karcinoma [20].
trenutno nema objavljenih studija koje su procjenjivale odnos između OPN
genetskih polimorfizama i rizik od želuca razvoj raka. Stoga je cilj ovog istraživanja bio je utvrditi je li postoji povezanost između OPN polimorfizama i rizik od karcinoma želuca u japanskom stanovništvu.
Metode pregled tema od 2005. do 2008. godine, 310 nesrodnih pacijenata s rakom želuca (GC skupina), upisano na Prvom SRODNE bolnici Nanjing Medical University. Svi pacijenti bili su etnički Han Kineza stanovnici koji su histološki potvrđene želučane adenokarcinom. Kontrolna skupina (non-GC skupina) sastojala se od slučajnom uzorku od 591 etničkih Han Kineza iz provincije Jiangsu. Nakon pismene informirani pristanak, svi sudionici su zatražili da daju uzorak krvi. Ova studija je odobren od strane Etičkog povjerenstva Prvog SRODNE Nanjing Medical University (É0-SR-073).
Prije redoslijeda genotipova u OPN pregled, promotora, koristili smo SPSS v10.0 (SPSS, Inc. ., Chicago, IL, USA) softver za nasumično odabrali 200 GC pacijente i spolno i dobno-ih uskladiti na 200 nasumično odabranih kontrola non-GC grupe. Procijenili smo svi pacijenti i kontrole za H. pylori
koristeći neizravnu čvrsta faza immunochromatographic (ICM) testom ispitati prisutnost IgG protutijela na H. pylori
(Genelabs Diagnostics, Singapur). Ova ispitna metoda je prethodno potvrđen u našem laboratoriju s točnošću od 92,3% [21].
Genomske DNA iz kontrole i oboljelima od raka želuca je izvađen iz etilendiamintetraoctena kiseline (EDTA) -anticoagulated periferne krvi prema tradicionalnoj proteinaze K i fenola -kloroformskiproduktpnpajanja metoda, i pohranjeni na -70 ° C. pregled Analiza polimorfizama u OPN regulacijskoj regiji
OPN-66, -156 (rs17524488) i -443 (rs11730582) varijante su genotipizirani direktnim sekvencioniranjem Osjećaj i anti-sense lancima Sljedeći lančane reakcije polimeraze (PCR) pojačanje promotorske regulatorne regije -473 do -3 (prednji primer 5 '- CAA GCT ACT OKS TAC TCG AAA TCA CA-3 '; obrnuti primer 5 '- ACA ACC AAG CCC TCC CAG AAT TTA-3 '), kao što je prethodno opisano [19]. PCR je bio proveden s 50 ng DNA kao kalupa, pod sljedećim uvjetima: 95 ° C tijekom 10 minuta, a zatim 36 ciklusa od 94 ° C za 30 s, postizanje temperature od 60 sekundi, te na 72 ° C 60 sekundi, s finalna ekstenzija na 72 ° C tijekom 15 min. Nakon čišćenja afinitet za membranu pomoću QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Carlsbad, CA, USA), PCR produkti su bili podvrgnuti ciklusa sekvenciranja s odgovarajućim naprijed i natrag primer pomoću automatiziranog ABI 3100 DNA sekvencer po GeneCore Bio Technologies (Shanghai Kina) . pregled luciferaza analitički sa SNP na nukleotida (nt) -443 u OPN promotora pregled 250 bp fragmenti OPN promotora (od -590 do -340) koji nose ili T ili C alel su sintetizirani Invitrogcna i umetnuti ispred gena luciferaze krijesnice u pGL3 Enhancer plazmid vektor (Promega, USA) u odvojenim postupcima. Svaki konstrukt je potvrđena sekvencioniranjem. Niz OPN promoter-luciferaze konstrukata kratkotrajno transfektirane u želuca staničnim linijama raka MKN28 (Shanghai Institute of Digestive Disease) i SGC-7901 (Shanghai Cancer Institute), te Transfekcija je vršena uz reagens lipofektamin 2000 (Invitrogen), u skladu s proizvođača protokol. U MKN28 i SGC-7901 uzgajane su u Dulbeccovom modificiranom Eagle mediju (DMEM) uz dodatak 10% toplinski inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma. Aktivnost različitih genotipova promotora je mjerena pomoću reporterskog sistema ispitivanja (Promega, SAD). Svi eksperimenti su ponovljeni tri puta.
Statistička analiza pregled Statistička analiza izvedena je pomoću SPSS 10,0 softvera. Kvantitativne varijable odstupanja od normalne distribucije, uključujući dob, sažeti su kao srednja vrijednost i standardna devijacija (SD). Usporedba dobi između predmeta i kontrola je izveden korištenjem pregled -test samostalna Studentov t. Usporedba ekstra želučanih tumora, H. pylori pregled infekcije i frekvencije genotipova između predmeta i kontrola procijenjena je pomoću hi-kvadrat test i Fisherov egzaktni test. Preživljavanja je izračunata od Kaplan-Meier metodi. Svi vjerojatnosti (P ​​
) vrijednosti su dvosmjerni, a statistička značajnost je označen kao P Netlogu < 0,05. Pregled Rezultati
demografske i kliničke slike pacijenata
karcinoma želuca (GC) skupina sastojala se od 200 osoba (64% muških), s prosječnom dobi od 56,29 ± 3,46 godina. Kontrola (non-GC) skupina sastojala se od 200 osoba, od kojih su 64% bili su muškarci, s prosječnom dobi od 55.67 ± 4.21 godina (Tablica 1). Nije bilo značajne razlike u pogledu raspodjele dobi i spolu, kao i H. pylori pregled seropozitivnosti. Kliničko karakteristike bolesnika i kontrola prikazane su u tablici 1.Table 1 kliničko karakteristike bolesnika sa želučanim karcinoma raka i zdravih kontrola
Karakterističan
br bolesnika ili kontrola
P

slučajeva (N)
Control (n)
br
200 pregled 200 pregled Age, godina izvoznici > 0.05 pregled Srednja pregled 56.29 pregled 55.67 pregled Standardna devijacija pregled 3.46
4,21 pregled Raspon pregled 63 pregled, 65 pregled Spol izvoznici > 0,05 pregled muški pregled 130 pregled 130 pregled Ženski pregled 70 pregled, 70 pregled, Helicobacter pylori pregled infekcije pregled 0,12 pregled seronegativne
62
77 pregled seropozitivnih
138 pregled 123 pregled vaskularnu invaziju pregled Absence
155
- prisutnosti pregled 45
- limfnih čvorova metastaze
odsutnost pregled 80
- prisutnosti pregled 120
- Jetra metastaze pregled odsutnost pregled 182
- prisutnosti pregled 18 pregled - pregled Peritonejska širenje pregled Odsutnost pregled 172
- prisutnosti pregled 28
- TNM stadij
- IA
39 pregled - pregled IB pregled 40
- II pregled, 33
- III pregled, 45
- IV pregled 43 pregled -
SNP u promotorske regije ljudskog gena OPN
izravno sekvenciranje DNA fragmenata između nt -473 i nt -3 kod bolesnika i dobnih i rodnih podudarnih kontrola otkrila je 3 SNP-ova u OPN promotora, koji se nalazi na nt -156 [ ,,,0],GG /GG homozigoti, GG /g- (brisanje) heterozigota, G- /G- homozigoti] nt -443 [CC homozigoti, CT heterozigoti, TT homozigoti] i nt -66 (slika 1), kako je prikazano u tablici 2 . nije bilo značajne razlike u raspodjeli ovih SNP-ova (nt -66, -156, -443) između GC bolesnika i kontrola. Distribucija genotipova za TNM stadija raka želuca prikazan je u tablici 3. Slika 1 Shematski prikaz i sekvenciranja podatke o OPN promotora. Predstavnik brojka za analizu sekvenciranja na promotora. SNP nt -443 ima sljedeće alela: CC, CT i TT. Tu je i mala umetanje na nt-156, koja ima tri alela G /G, G /GG, GG /GG. SNP nt -66 ima samo jedan alel. TT pregled Tablica 2. Usporedba OPN promotora između bolesnika s karcinomom želuca i zdravih kontrola
Kontrole
Pacijenti

rak želuca
genotipova
n
n
P
LN (+)
LN (-)
P pregled

-66
TT
200
200
1.00
124
76
1.00
-156
G/G
86
67
1.00
41
25
1.00
G/GG
78
92
0.064
57
36
0.92
GG/GG
36
41
0.18
25
16
0.91
-443
CC
22
15
1.00
8
8
1.00
CT
93
94
0.28
63
33
0.23
TT
85
91
0.22
53
35
0.45
Tablica 3. Raspodjela genotipova za TNM stadija karcinoma želuca pregled
TNMs želučanog cancer

Genotypes

IA

IB

II

III

IV

-66
TT
38
44
26
52
40
-156
G/G
16
16
13
20
19
G/GG
16
15
15
16
18
GG/GG
7
9
5
9
6
-443
CC
1
2
1
4
14
CT
17
19
19
19
19
TT
14
18
5
19
29
Međutim, s obzirom na tumor-čvor-metastaziranja stadija TNM, otkrili smo da je za SNP na nt -443, u bolesnika sa CT genotipa, postoji značajna razlika između bolesnika s fazama II i IV (P izvoznici < 0,01) te između stadiju IV i sve druge faze (IA + IB + II + III, P = pregled 0.04 Tablica 4). Isto tako, kod pacijenata s CC genotipom na nt -443, postoji značajna razlika između bolesnika s fazama IV i faze I (IA + IB; P = 0,011 pregled) i između stadiju IV i svim ostalim fazama (IA + IB + II + III P pregled = 0,012 Tablica 4). Nije bilo značajne razlike među fazama TNM i druga dva SNP-a (nt -66 i nt -156) od OPN promotora. Također smo otkrili povezanost između SNP u OPN promotora i limfnog čvora metastasis.Table 4. Raspodjela genotipova od nt -443 u OPN promotora želuca rak TNM stadij
TNM stadija želučanog raka Netlogu pregled Genotipovi
IA + IB
IV
P
II
IV
P
III
IV
P
IA + IB + II + III
IV
pregled P pregled

-443
TT
32
29
1.00
5
29
1.00
19
29
1.00
56
29
1.00
CT
36
19
0.16
19
19
< 0.01*
19
19
0.33
74
19
0.04*
CC
3
14
0.011*
1
14
0.98
4
14
0.18
8
14
0.012*
* Označava značajnu razliku (p < 0,05). Pregled povezanosti genotipa u OPN promotorske regije i opstanak
Kaplan-Meier procjenama različitih genotipova na nt -443 u OPN pregled promotora prikazani su na slici 2 . stope preživljavanja za pacijente s C /C genotipom bile su značajno niže od stope preživljavanja za pacijente s druga dva genotipa (C /T, T /T). Nije bilo značajne povezanosti između opstanka i genotipova na drugim mjestima (nt -156 i nt -66). Slika 2 Kaplan-Meier opstanak je znatno niža u bolesnika s rakom želuca, sa C /C genotipa u odnosu na druga dva genotipa na nt -443 u OPN promotora. pregled Utjecaj polimorfizma na -443 T → C na promotorske aktivnosti pregled Da bi se ispitala učinak polimorfizma promotora regije na -443 T → C na transkripcijom OPN pregled gena, izmjerili smo aktivnost promotora sa Dual luciferazu Reporter sustav analize i usporedili su aktivnosti -443C i -443 T alela pomoću prijelazne transfekcije testa s MKN28 i SGC-7901 staničnim linijama. Kao što je prikazano na slici 3, značajno veće aktivnosti luciferaze je generiran sa pGL3-C konstrukt u usporedbi sa pGL3-T konstrukta (p = 0,001
za MKN28 P pregled = 0.021 za sGC 7901). Slika 3 Učinak T → C polimorfizma na promotorske aktivnosti na -443. Značajno veća luciferaze aktivnosti generira pGL3-C konstrukt, u usporedbi sa pGL3-T konstrukta (P = 0,001 Netlogu za MKN28 P pregled = 0,021 za SGC-7901) pregled Rasprava
montažu. dokazi ukazuju da OPN ima ulogu u regulaciji metastaziranja tumora, te da OPN ekspresija je osobito visoka u metastatskih tumora [22]. OPN je prekomjerno eksprimiran u raku koji imaju visoku sklonost formiranju koštane metastaze. Metastazama na kostima, OPN je općenito povezan s sučelju između karcinoma i površine kosti, i to čini se da se odnose na povećana resorptivna aktivnost osteoklastima [23]. Osim toga, visoka OPN ekspresija u primarnom tumoru je povezana s ranim metastazama i lošom klinički ishod u ljudskoj raka želuca i drugih vrsta raka [24-27].
Nedavna studija pokazuje da je OPN promotor je bio povezan s NSCLC [19]. U ovom istraživanju, usredotočili smo se na organizaciji ovih SNP-ova s ​​GC, i iako je distribucija genotipova u OPN pregled promotor nije se značajno razlikovala između GC bolesnika i zdravih kontrola, postoje značajne razlike u raspodjeli genotipova ( CC) na nt -443 bolesnika s stadiju IV i faze i raka želuca (IA + IB), a između stadiju IV i sjedinjeni ostale tri stadija raka želuca (IA + IB + II + III, Tablica 4). Stope preživljavanja za pacijente s C /C genotipom bile su značajno niže od stope preživljavanja druga dva genotipa (C /T, T /T, slika 3). Osim toga, značajno veće aktivnosti luciferaze je generiran sa pGL3-C konstrukt u usporedbi s pGL3-T konstrukt. Analiza reporter gen je pokazala da je haplotip -443C /-156 G /T -66 povezan sa značajno pojačano djelovanje u usporedbi s promotora testirane pet alelne inačice [28]. Nedavna studija na melanoma metastaze su otkrili da oni homozigota za -443C alel izrazili značajno više razine OPN mRNA u odnosu na one koji su bili ili heterozigotnom (CT) ili homozigota za -443 alela T [29]. Transkripcijski faktor c-myb veže za regiju OPN promotora na način koji je alel specifičan i izaziva pojačano djelovanje u usporedbi s -443C -443 T OPN pregled promotora [30]. Uzeti zajedno, ovi podaci ukazuju na to da je varijacija na nt -443 u OPN promotora igra ulogu u GC napredovanja i metastaze, posebno za CC genotipa na nt -443 u glavnici OPN pregled promotora. Li polimorfizmi OPN se odnosi na ekspresiju OPN u raka pacijenti ostaju nepoznati iako. Prekomjerna ekspresija OPN je pronađena u uzorcima karcinoma želuca u prethodnoj studiji [14]. Dakle, dodatne studije su potrebne za daljnje tumačenje ovaj nalaz.
U ovom istraživanju, otkrili smo da je CT genotip na nt -443 u OPN promotora pokazala je značajne razlike između stadiju IV i stadiju II raka želuca, kao i između pozornici IV i druge faze raka želuca (IA + IB + II + III), ali ne i između stadiju IV i III faza ili faza I. glavni razlog za to može biti zbog ograničenog broja bolesnika u svakoj podgrupi. Također je moguće da je transkripcijski faktor c-myb mogao pojačati aktivnost na području OPN pregled promotor koji je sadržavao CC ili CT genotipova, ali ne i drugi genotip (tj TT) [29]. Međutim, ove hipoteze zahtijevaju daljnje istraživanje u većim studijama.
Sadašnjeg genomske nalaze u zdravih kontrola nije identična prethodnim nalazima među japanskim i talijanskim kontrolnih ispitanika [30, 31]. Iako je prethodna izvješća sugeriraju da visoke OPN se izražava u visokim razinama u GC [17], našli smo povezanost između genotipova u OPN pregled promotora s rizikom GC. Međutim, našli smo etničke razlike u SNP-u nekoliko gena domaćina u GC bolesnika [30, 31]. Stoga, ovi rezultati ne moraju se odnositi na sve populacije. Ipak, iako nije bilo povezanosti između OPN SNP i GC želučanog karcinoma osjetljivosti ili jakosti u kineskim pacijenata, naši rezultati ne ukazuju na to da postoji povezanost s metastazama GC. Pregled Zaključak
U zaključku, ovo je prva studija OPN genetskih polimorfizama i rizik od GC u kineskoj populaciji. Mi smo pokazali da se genetski polimorfizam na -443 u OPN promotor povezan s metastazama i zatim smrt GC. Dakle, ti rezultati mogu ponuditi pristup predvidjeti klinički ishod GC pacijenata. Međutim, dodatne studije su potrebne koristeći veću skupinu pacijenata kako bi potvrdili ove rezultate. Pregled Bilješke
Fujun Zhao, Xiaoyi Chen doprinijeli jednako na taj posao. Pregled deklaracija
Zahvale
Ovaj rad bio podržan od prirodnih znanosti fondova Kine (br 81072032 i 30770992). Autori zahvaljuju Medjaden bioznanosti Limited za korektura rukopisa.
Autora originalne dostavljeni datoteke za slike
Ispod su linkovi na autora izvornika dostavljenih datoteka za slike. 12885_2012_3447_MOESM1_ESM.pdf autora izvorna datoteka za Slika 1 12885_2012_3447_MOESM2_ESM.tiff autorskim izvorne datoteke za sliku 2 12885_2012_3447_MOESM3_ESM.tiff autorskim izvorne datoteke na Slici 3 suprotstavljenih interesa
Autori proglasiti nema suprotstavljene interese.
Autora doprinosa
ZF sudjelovao u izradi studije i izveo statističke analize, CX je proveo luciferaze, mT, HB zamišljen studije i particpated u svom dizajnu i koordinacije, ZZ, ZG sudjelovao u dizajnu studije. Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Faktor transkripcije FOXO4 se regulirati na dolje i inhibira proliferaciju tumora i metastaza u želučanom cancer
• Faza studiram imatinib, cisplatinom i 5-fluorouracil ili kapecitabin u naprednom jednjaka i želuca adenocarcinoma