Un modulador selectivo del receptor de aril hidrocarburos 3,3-Diindolilmetano inhibe celular de cáncer gástrico growth

Un arilo modulador selectivo del receptor de hidrocarburos 3,3'-Diindolilmetano inhibe el crecimiento de células de cáncer gástrico
Resumen Antecedentes

receptor de aril hidrocarburos (AHR) es un factor de transcripción activados por ligando asociado con la carcinogénesis gástrica. 3,3'-Diindolilmetano (DIM) es un modulador selectivo Ahr relativamente no tóxico. Este estudio fue detectar los efectos de la DIM en el crecimiento de células de cáncer gástrico.
Métodos
gástrico SGC7901 célula de cáncer fue tratado con DIM a diferentes concentraciones (0,10,20,30,40,50 mmol /L) con o sin un antagonista de AhR, resveratrol. La expresión de Ahr y citocromo P4501A1 (CYP1A1), un gen diana clásico de la vía de Ahr, fueron detectados por RT-PCR y Western blot; la viabilidad celular se midió mediante el ensayo de MTT, y los cambios en el ciclo celular y la apoptosis se analizaron por citometría de flujo.
: Resultados de la RT-PCR y Western-blot mostraron que con el aumento de la concentración de DIM, proteína Ahr gradualmente disminuyó y la expresión CYP1A1 aumentó, lo que sugiere que DIM activa la vía de Ahr y causó la translocación de Ahr de citoplasma al núcleo. ensayo de MTT indicó que la viabilidad de las células SGC7901 se redujo significativamente de una manera de la concentración y dependiente del tiempo después del tratamiento DIM y esto podría ser revertido parcialmente por resveratrol. La citometría de flujo El análisis mostró que el DIM detenido ciclo celular en la fase G1 y la apoptosis celular inducida.
Conclusión
modulador selectivo del receptor de aril hidrocarburos 3,3'-Diindolilmetano inhibe la proliferación celular mediante la inducción de la apoptosis SGC7901 y retrasar la progresión del ciclo celular. Ahr puede ser una posible diana terapéutica para el tratamiento del cáncer gástrico.
Palabras clave
receptor de aril hidrocarburos cáncer gástrico 3,3'-Diindolilmetano citocromo P4501A1 Antecedentes
El cáncer gástrico es una de las neoplasias más frecuentes. En los países económicamente desarrollando, el cáncer gástrico es el segundo cáncer más frequntly diagnosticados y en la tercera causa de muerte por cáncer en los hombres [1], la tasa de supervivencia global a los 5 años es baja (15% a 35%) debido a la alta recurrencia las tasas de metástasis ganglionar, y la respuesta de corta duración a la quimioterapia [2]. En la actualidad, cada vez más estudios se centran en el diagnóstico y la terapia del cáncer gástrico molecular [3].
Receptor de aril hidrocarburos (AHR) es un factor de transcripción activado por ligandos. Después de ligandos tales como hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP) y los hidrocarburos halogenados (HAH) se unen con AHR en el citoplasma, el complejo ligando-Ahr se transloca al núcleo y heterodimerizes con el translocador nuclear de AhR (ARNT). El complejo se une a la secuencia de promotor de cognado y posteriormente activa la expresión de genes aguas abajo [4].
Estudios tradicionales de la función Ahr centrado en su papel en la regulación de la expresión de enzimas que metabolizan xenobióticos (XMEs) y mediar el metabolismo xenobióticos. Estudios recientes demostraron que Ahr puede implicar en muchos procesos fisiológicos y patológicos importantes, incluyendo el desarrollo individual, la diferenciación celular, y la carcinogénesis [5]. expresión Ahr es upregulated en pulmón [6], glándula mamaria [7], de páncreas [8] y el cáncer gástrico [9]. Otros estudios encontraron que Ahr desempeñó papeles improtant en la regulación de la proliferación celular, apoptosis, ciclo celular, la migración y la invasión [10]. Como una proteína relacionada con el cáncer, Ahr quizás un objetivo prometedor para la terapia del cáncer. Nuestro trabajo previo encontró que un agonista Ahr, 2,3,7,8 -tetrachlorodibenzo -para-dioxina (TCDD), inhibe el crecimiento de células de cáncer gástrico [9]. Pero sí TCDD es cancerígena moduladores Ahr [11], Así que para encontrar no tóxicos o de baja toxicidad pueden ser una nueva dirección para la terapia dirigida molecular en el cáncer gástrico.
Modulador del receptor selectivo Ahr 3,3 'Diindolilmetano (DIM ) es una clase de derivados de indol relativamente no tóxicos. DIM es un producto consendation-ácido catalyed de indol-3-carbinol, un consititudent de verduras crucíferas, y se forma en el estómago [12]. DIM es un agente anti-cáncer, se suprime la proliferación de células de cáncer de mama en [13], de colon [14] y de páncreas [15] cánceres.
Había habido pocos informes sobre los efectos de la DIM en gástrica crecimiento celular del cáncer, la Este estudio fue diseñado para observar los efectos de la DIM en el crecimiento de las células del cáncer gástrico y explorar los posibles mecanismos.
Métodos línea celular

línea celular de cáncer gástrico humano SGC7901 se obtuvo del Instituto del cáncer de la Academia china de Medicina Ciencia. SGC7901 Las células se mantuvieron en medio RPMI-1640 (Gibco, Carlsbad, California, EE.UU.) suplementado con 10% de suero bovino fetal (Hyclone, EE.UU.), 1 × 10 5 U /L de penicilina y 0,1 g /L de gentamicina. El medio celular se mantuvo en 50 ml de CO2 /L y 37 ° C.
El tratamiento de células
DIM se adquirió de la empresa Enzo Ciencias de la Vida (Plymouth Meeting Bulter Pike, PA, EE.UU.), el resveratrol y dimetilsulfóxido (DMSO ) fueron adquiridos de Sigma Chemical Company (Bellefonte, PA, EE.UU.). DIM y resveratrol se disolvieron en DMSO. Después de incubar durante 24 h, un grupo de células se trató con DIM a diferentes concentraciones (0, 10, 20, 30, 40, 50 mmol /L) durante 24 horas. Un segundo grupo se trató con DIM (30 mmol /L), además de resveratrol (0, 1, 5, 10, 20 mmol /L) durante 6 h. Otro grupo fue tratado con DIM (30 mmol /L) para diferentes intervalos de tiempo (0, 1, 6, 24, 48, 72 h), respectivamente. Las células de control recibieron 1 ml /L de DMSO solamente.
inversa de la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR)
Después de recoger las células, el ARN total se extrajo usando el kit Qiagen RNeasy Mini (Qiagen, Alemania) de acuerdo con la Instrucciones del fabricante. Se sintetizó ADNc con 1 mg de ARN total usando la transcriptasa inversa, ReverTraAceTM (Toyobo Co., Osaka, Japón) bajo las siguientes condiciones: 30 ° C durante 10 min, 42 ° C durante 20 min, 99 ° C durante 5 min, y 4 ° C durante 5 min. reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se realizó con 2 l de ADN complementario y 0,6 Taq ADN Ex U de polimerasa (Takara, Dalian, China) en el sistema de reacción de 20 l y 30 ciclos con 94 ° C desnaturalización durante 30 s, 55 ° C recocido . durante 30 s y 72ºC durante 45 s elongación Empresas El primer secuencias fueron los siguientes: reacción en cadena reversa de transcripción de polimerasa (RT-PCR): Ahr, 5'-ACT CTT CAG CCA CCA CCA TC-3 '( hacia delante) y 5'-ATG GGA GGC CTC ACA ATA AA-3 '(hacia atrás), el tamaño propuesto del producto de PCR de 204 pb. CYP1A1, 5'-CCA TGT CGG CCA CGG AGT T-3 '(hacia delante) y 5'-ACA GTG CCA GGT GGT GCG T-3' (hacia atrás), el proposedsize del producto de PCR fue de 174 pb. Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH), 5'-GGG AAA CTG TGG CGT GAT-3 '(hacia delante) y 5'-AAA GGT GGA GGA GTG GGT-3' (hacia atrás), el tamaño de la prospección de producto de PCR fue 309 pb. Los productos de PCR se sometieron a electroforesis posteriormente en un gel de agarosa al 1,5%, y se visualizaron bajo un transiluminador de UV.
análisis de transferencia de Western
Las células se lisaron en tampón que contenía 20 mmol /L de HEPES, 1 mmol /L EGTA, 50 mmol /L β-glicerofosfato, /L ortovanadato de sodio 2 mmol, 100 mL /L de glicerol, 10 ml /L de Triton X-100, 1 mmol /L de DTT, y 1 × inhibidor de la proteasa Cocktail (Roche, Mannheim, Alemania). El lisado se centrifugó a 13 000 g y 4 ° C durante 10 min. El sobrenadante era el lisado celular total. La concentración de proteínas se midió usando el kit de ensayo de proteína BCA (Pierce Chemical Co., Rockford, IL, EE.UU.). Treinta microgramos de proteína se cargaron por carril, separados por 100 g /L de SDS-PAGE, y se transfirieron a una membrana de difluoruro de polivinilideno equilibrada por electrotransferencia. Las membranas se bloquearon con leche no grasa al 5% en tampón TBS-T 1% durante 2 h a temperatura ambiente. Ahr, CYP1A1, y GAPDH se detectaron por 2 h utilizando anticuerpos contra Ahr (SC-5579, Santa Cruz Biotechnology, EE.UU., dilución de trabajo 1: 150), CYP1A1 (AB1258, Chemicon International, EE.UU., dilución de trabajo 1: 500), y GAPDH (2118, Cell Signaling Technology, EE.UU., dilución de trabajo 1: 1000). Después de la incubación del anticuerpo secundario (7074, Cell Signaling Technology, EE.UU., trabajando dilución 1: 2000) durante 2 h, se detectaron bandas de proteínas usando el sistema ECL (Pierce Biotechnology, Inc., EE.UU.) ensayo de viabilidad celular
El. efecto de DIM sobre la proliferación de células de cáncer gástrico se determinó mediante el ensayo de MTT. Brevemente, un total de 1 × 10 4 células tripsina dispersa en 0,1 ml de medio de cultivo se sembraron en cada pocillo de una placa de 96 pocillos y se cultivaron durante 24 horas. A continuación, las células se trataron con DIM como se describe anteriormente. Después, se añadieron 20 l de MTT (5 g /L) a cada pocillo y la incubación se continuó durante 4 horas a 37 ° C. Por último, el medio de cultivo se retiró y se añadió 150 ml de DMSO a cada pocillo. La absorbancia se determinó con un lector ELISA a 490 nm. El porcentaje de viabilidad celular se calculó como:. Porcentaje de viabilidad (%) = (valor de absorción del grupo de experimento) /(valor de absorción de grupo de control) x 100%
análisis de citometría de flujo
SGC7901 células se sembraron en placas de 60 mm placas de cultivo de diámetro y tratados con DIM a diferentes concentraciones (10, 20, 30, 40, 50 mmol /L) durante 48 h. El control sólo contenía 1 ml /L de DMSO. Antes de la cosecha, las células se lavaron dos veces con
0,01 mol /L de PBS, se trataron con tripsina, y se sedimentaron. Las células fueron fijadas con 70% de etanol enfriado en hielo a 4 ° C durante la noche. Finalmente, las células se lavaron dos veces con PBS y se tiñeron con PI. El contenido de ADN se analizó con un citómetro de flujo (Beckman-Coulter, Brea, EE.UU.). El ciclo celular de las células SGC7901 fueron analizados utilizando el software MULTYCYCLE y winMDI2.9 (Phoenix, AZ, EE.UU.). Para el análisis de apoptosis de las células, después de la incubación durante 48 h, las células fueron teñidas con anexina V-FITC y PI. Las células con anexina V (-) y PI (-) fueron considerados células viables. Las células con anexina V (+) y PI (-), se consideró células apoptóticas temprana. Las células con tanto anexina V (+) y PI (+) se consideraron finales de células apoptóticas.
El análisis estadístico
Todos los datos cuantitativos se expresan como media ± desviación estándar y se analizaron usando un análisis unidireccional de la varianza (ANOVA). Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el paquete estadístico SPSS (versión 11.0, SPSS Inc. Chicago, EE.UU.). P < 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
La activación de Ahr vía por la DIM
Para probar si la vía de señalización Ahr podría ser activado por el DIM, se trataron el SGC7901 línea celular de cáncer gástrico con DIM. RT-PCR y análisis de transferencia Western mostraron que después del tratamiento DIM, proteína de Ahr en el total de los lisados ​​de células disminuyó gradualmente (Figura 1). CYP1A1, un gen diana clásico de Ahr, se utilizó como indicador de la activación de la vía de señal de AhR. El nivel básico de expresión CYP1A1 no se observó en las células SGC7901, pero ambos mRNA CYP1A1 y la expresión de proteínas se aumentó de una manera dosis-y dependiente del tiempo después del tratamiento DIM (Figura 1). Para confirmar aún más la expresión de CYP1A1 DIM inducida por Ahr era dependiente, se trató SGC7901 células con un antagonista específico Ahr, el resveratrol [16, 17]. las células fueron tratadas con DIM (30 mmol /L) solamente o DIM (30 mmol /L), además de diferentes concentraciones de resveratrol (0, 1, 5, 10, 20 mmol /L), respectivamente durante 6 h (Figura 2). En concordancia con los resultados anteriores, el tratamiento de células SGC7901 con 30 mmol /L DIM provocó un aumento notable en la expresión de CYP1A1. Sin embargo, esta expresión CYP1A1 DIM inducida se invirtió parcialmente por el resveratrol de una manera dependiente de la dosis (Figura 2A y B). Figura 1 Ahr y expresión de CYP1A1 en SGC7901 células después del tratamiento DIM. A y B: RT-PCR; C y D: transferencia Western. El tratamiento de células con SGC7901 Ahr modulador DIM resultó en un tiempo - (A y C) y dependiente de la concentración (B y D) inducción de la expresión CYP1A1. Los resultados mostrados son representativos de tres experimentos independientes.
Figura 2 Inhibición de la DIM inducida por CYP1A1 ARNm y la expresión de la proteína por el resveratrol. A: CYP1A1 mRNA se detectó mediante RT-PCR; B: proteína de CYP1A1 fue detectada por Western Blot. RSV: el resveratrol. Los resultados mostrados son representativos de tres experimentos independientes. El tratamiento de células con SGC7901 30 mmol /L DIM provocó un aumento notable en la expresión de CYP1A1. Esta expresión CYP1A1 DIM inducida se invirtió parcialmente por el resveratrol de una manera dependiente de la concentración.
Efecto de DIM sobre la proliferación cellur
proliferación de SGC7901 células se determinó mediante el ensayo de MTT después de 6 a 72 h de tratamiento con concentraciones crecientes de DIM (0-50 mmol /L). Los resultados mostraron que el DIM inhibe SGC7901 la proliferación celular de una manera de la concentración y dependiente del tiempo, el resveratrol (10 mmol /L) podría revertir parcialmente los efectos de inhibición de DIM (30 mmol /L) sobre la proliferación cellur en los puntos temporales: 6 h y 12 h (Figura 3), pero no hemos encontrado los efectos de reversión en otros puntos de tiempo (24 h, 48 hy 72 h, los datos no se muestran). Figura 3 Viabilidad de las células después del tratamiento SGC7901 DIM se evaluó mediante el ensayo de MTT. La viabilidad de las células SGC7901 se redujo significativamente de una manera concentración-dependiente del tiempo y después del tratamiento DIM. El resveratrol (10 mmol /L) podría revertir parcialmente los efectos de inhibición de la DIM (30 mmol /L) sobre la proliferación cellur.
Efecto de la DIM en el ciclo celular
análisis citométrico de flujo reveló que el tratamiento DIM indujo cambios en la distribución del ciclo celular , con aumento de la acumulación de SGC7901 células en la fase G1 y la compensación para este cambio por una disminución de células en la fase S (Figura 4 y Tabla 1). Figura 4 El efecto de DIM en el ciclo celular de las células SGC7901. SGC7901 células se trataron con diferentes concentraciones de DIM y se sometieron a análisis de citometría de flujo. El porcentaje de cada fase se indica en cada panel. Los resultados mostrados son representativos de tres experimentos independientes.
Tabla 1 El efecto de la DIM en el ciclo celular de las células SGC7901
DIM concentración (mol /L) guía empresas Porcentaje de ciclo celular (%)

G1 G2

S
0
55.90 ± 1.48 ± 0.95 10.5

33.63 ± 0.55
10
57.20 ± 0.36 *
9.10 ± 0.3
33,70 ± 0,53
20
61,03 ± 1,53 * 8,17 ± 0,68

30,77 ± 0,97 *
30
61,97 ± 0,32 * 9,83 ± 0,32

28.23 ± 0.60 * 40

62,77 ± 1,46 * 9,13 ± 0,91

28.10 ± 0.56 * 50

73.03 ± 4.05 *
9,17 ± 1,51 18,07 ± 0,57
*
* p < 0,05, frente al control.
Efecto de la DIM en la apoptosis celular
48 h después del tratamiento DIM, los cambios de apoptosis de las células se observaron por el análisis de citometría de flujo. En comparación con el grupo control, apoptosis de las células se indujo a concentraciones de 20 a 50 mmol /L, y la tasa de aumento de la apoptosis de una manera dependiente de la dosis. Estos resultados mostraron que DIM podría inducir la apoptosis celular en SGC7901 células (Figura 5 y Tabla 2). Figura 5 El efecto de la DIM en la apoptosis de las células SGC7901. SGC7901 células se trataron con diferentes concentraciones de DIM y se sometieron a análisis de citometría de flujo. Los resultados mostrados son representativos de tres experimentos independientes.
Tabla 2 El efecto de la DIM en la apoptosis de las células SGC7901
DIM concentración (mol /L)
tasa de apoptosis (%)

0
4,18 ± 0,23
10
4,81 ± 0,42
20
6,07 ± 0,33 *
30
7,23 ± 0,78(

7,39 ± 1,082

9.14 ± 0.32 #
* p < 0,05, #p < 0.01vs el control.
Discusión
Nuestro trabajo previo se encontró que la expresión de Ahr fue significativamente hasta reguladas en el cáncer gástrico, y puede estar implicado en las primeras etapas de la carcinogénesis gástrica, la regulación de la vía de Ahr puede tener una papel potencial en el tratamiento del cáncer gástrico. La hipótesis de que los ligandos de AhR se pueden utilizar para la terapia de cáncer gástrico. A continuación, nuestros estudios posteriores mostraron que la TCDD, un agonista Ahr potente, podría supresse el crecimiento de células de cáncer gástrico AGS de una manera dosis-y-tiempo depengent través de la inducción de la detención del crecimiento en la fase G1-S [9]. Pero sí TCDD es cancerígena, induce un amplio espectro de respuestas biológicas, incluyendo la inducción de CYP1A1, interrupción de las vías normales de señalización hormonal, reproductivo y defectos de desarrollo, inmunotoxicidad, daño hepático, el síndrome de desgaste, y el cáncer [18], por lo que no es tóxico o moduladores de baja toxicidad Ahr selectivos tal vez sirven como posibles agentes para el cáncer gástrico
partir de los estudios en cáncer de mama, Caja fuerte encontraron dos clases de moduladores selectivos Ahr:. Alternate-sustituidos (1,3,6,8- y 2, 4,6,8-) dibenzofuranos policlorados (PCDF alquilo) y diindolylmethanes sustituidos (DIMS), en comparación con TCDD, estos compuestos son relativamente no tóxico e inhiben ER-positivo y ER-negativo el crecimiento del tumor de mama, pero no inducen AhR- respuestas tóxicas mediadas inducidas por TCDD [19].
DIM representa una nueva clase de moduladores de Ahr, antitumoral relativamente no tóxicos que son de origen fitoquímico. En comparación con TCDD, DIM es un agonista débil de Ahr para la inducción de la expresión del gen CYP1A1 [20] y las actividades [21], y se nota capacidades para competir por la unión de TCDD a la AHR [22].
Para probar la wether la vía de señalización Ahr podría activited por DIM en células de cáncer gástrico, se trataron SGC7901 línea celular de cáncer gástrico con DIM. Los resultados mostraron que la proteína AHR en el total de lisados ​​celulares disminuyó gradualmente (Figura 4 C y D), fenómenos similares han sido reportados por nuestros laboratorios y varios otros grupos [9, 23], la baja regulación de AHR después la unión del ligando es considerado como una imprtant paso de la vía de señalización Ahr [23]. CYP1A1, un gen diana clásico de Ahr, fue elegido como un indicador de la activación de la vía de señal de AhR. Los niveles basales de expresión de CYP1A1 no se observaron en las células SGC7901 en el presente estudio. Sin embargo, la expresión de CYP1A1 se incrementó significativamente de una manera de la concentración y dependiente del tiempo después del tratamiento DIM, lo que indica la activación de Ahr. Para confirmar la activación de la vía de señal de AhR por DIM, se trataron SGC7901 células con un antagonista específico Ahr, resveratrol. Nuestros resultados mostraron que DIM inducida por la expresión de CYP1A1 se invirtió parcialmente por el resveratrol de una manera dependiente de la concentración. La reversión incompleta de expresión CYP1A1 por el resveratrol puede ser debido al hecho de que Ahr no es el único regulador de CYP1A1 transcripción [24]. Tomados en conjunto, estos resultados sugieren que DIM podría activar la vía de señal de Ahr en células de cáncer gástrico.
Ensayo MTT demostraron que la viabilidad de las células SGC7901 se redujo significativamente de una manera de la concentración y dependiente del tiempo después del tratamiento DIM. Para aclarar aún más wether estos efectos fue AhR- dependiente, se trataron las células con SGC7901 DIM y resveratrol, se encontró que los efectos de inhibición de DIM sobre el crecimiento SGC7901 células fue parcialmente pero no completamente reservada por reservatrol, lo que sugiere que el DIM inhibe el crecimiento de células de cáncer gástrico parcialmente a través de la vía Ahr. Este resultado está de acuerdo con estudios previos: Hong, C descubrió que el DIM inhibe el crecimiento tanto de las células de cáncer de mama Ah-Ah-sensibles y no sensibles. algunas de las actividades anti-cancerígenos de la DIM son Ahr -independiente [25]. Curiosamente, se observó el efecto de reversión en la proliferación celular después de las células se trataron con DIM más reservatrol de 6 h o 12 h, pero no en puntos de tiempo más largos (24 h, 48 h y 72 h), esta tal vez relacionada con el tiempo la eficacia de resveratrol.
se han realizado algunos estudios sobre los machanisms anticancerígenos del DIM. Choi HJ mostró que DIM inducida G1 y G2 detención del ciclo celular de fase /M en células HT-29 de cáncer de colon humano [26]. Vivar OI y Hong C encontraron DIM indujo una G (1) detención en las células humanas de cáncer de próstata [27] y las células de cáncer de mama humano [28]. Por otra parte, algunos artículos informaron que el DIM puede promover la apoptosis en las células cancerosas mediante la survivina, UPA y uPAR o NF-kappaB sinaling [29-33].
A explorar más a fondo los mecanismos específicos de la inhibición del crecimiento de células de cáncer gástrico mediante la DIM , se trataron las células con SGC7901 DIM, a continuación, a prueba los cambios de ciclo celular y la apoptosis de las células por análisis de citometría de flujo. Los resultados mostraron que con el aumento de la concentración de DIM, las células en fase G1 aumentaron gradualmente, las células en fase S disminuyeron, pero las células en fase G2 se mantuvo sin cambios, lo que indica que podría DIM la detención del ciclo celular en la fase G1. Diferente de la TCDD, DIM apoptosis de las células también inducida, lo que sugiere que el DIM podría suprimir la proliferación de células de cáncer gástrico a través de la inducción de la apoptosis y la detención del ciclo celular, sin embargo, los mecanismos responsables de los efectos de la DIM en el ciclo celular de cáncer gástrico y la apoptosis aún se necesitan para ser más estudiados.
Conclusiones
en surmary, este informe mostró que no es tóxico selectivo modulador de Ahr DIM inhibe la proliferación de la línea celular de cáncer gástrico humano SGC7901 in vitro mediante la inducción de la apoptosis celular y la detención del ciclo celular en la fase G1. Nuestros hallazgos sugieren que Ahr podría ser un objetivo prometedor para el tratamiento del cáncer gástrico
Notas
Xiao Fei-Yin, Jie Chen contribuyeron igualmente a este trabajo
abreviaciones
Ahr:..
receptor de aril hidrocarburos
GAPDH:
gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa
RT-PCR: Read Transcripción inversa reacción en cadena de polimerasa
MTT:
metil tiazolil tetrazolio
DMSO: dimetilsulfóxido

FBS: Read suero bovino fetal
TCDD:
2,3,7,8-tetraclorodibenzoparadioxina-para-dioxina
TBST:
salina que contiene 0,05% de Tween 20. tamponada con Tris
Declaraciones
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por las subvenciones de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 30871145 y Nº 81072048), el proyecto de cultivo del profesor junior de la Universidad Sun Yat-sen (núm 09ykpy22), subvenciones para proyectos importantes y emergentes estudios interdisciplinarios de Sun Yat-sen Universidad (No.10ykjc23) apoyados por los Fondos de Investigación Fundamental para las universidades centrales.
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Los autores declaran que no tienen intereses en competencia contribuciones de los autores

Yin Chen J XF y contribuyeron igualmente a este trabajo.; Yin Chen J XF y realizaron la investigación y escribió el documento; Mao W organizó las figuras y analizó los datos; Wang YH asistido con cultivo celular. Chen MH diseñado investigación y supervisó el proceso de escritura y organización. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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