La evaluación y la importancia clínica del modelo de la era del estómago para evaluar el envejecimiento del estómago, un estudio multicéntrico en China

La evaluación y la importancia clínica del modelo de la era del estómago para evaluar el envejecimiento del estómago, un estudio multicéntrico en
Resumen de China
Antecedentes
Una mayor prevalencia de gastritis atrófica crónica (CAG) se produce en adultos más jóvenes en Asia. Utilizamos estómago Edad para examinar los diferentes mecanismos de CAG entre los adultos más jóvenes y los ancianos, y establecimos un modelo simple del riesgo de cáncer que se puede aplicar a la vigilancia del CAG.
Métodos
Edad estómago se determinó mediante el examen FISH de los telómeros longitud en biopsias de estómago. Δψm también se determinó por citometría de flujo. Sesenta voluntarios fueron utilizados para confirmar la relación lineal entre la longitud de los telómeros y la edad, mientras que 120 sujetos fueron utilizados para construir un modelo matemático de un análisis multivariado. En general, 146 sujetos fueron utilizados para evaluar la validez del modelo, y 1.007 sujetos se utilizaron para evaluar la relación entre el pronóstico y Δage (calculado a partir del modelo matemático). Las curvas ROC se utilizaron para evaluar la relación entre el pronóstico y Δage y para determinar el punto de corte para Δage.
Resultados
Hemos establecido que una relación lineal hermético entre la longitud de los telómeros y la edad. La longitud de los telómeros era obvio diferentes entre los pacientes con y sin CAG incluso en la misma edad. Δψm disminuyó en individuos cuya edad de estómago era mayor que la edad real, especialmente en los adultos más jóvenes. Un modelo matemático de estómago edad (edad real + Δage) se construyó con éxito, que era fácil de aplicar en el trabajo clínico. Un mayor Δage se correlaciona con un peor resultado. El criterio de Δage > 3.11 debe ser considerado como el punto de corte para seleccionar el subgrupo de pacientes que requieren vigilancia endoscópica
Conclusión
La variación en el estómago Edad entre individuos de la misma edad biológica se confirmó.. Se debe prestar atención a los que tienen una mayor edad de estómago, especialmente en los adultos más jóvenes. El Δage en el modelo simple se puede utilizar como criterio para seleccionar a los pacientes CAG para la vigilancia del cáncer gástrico.
Palabras clave
estómago Edad crónica gastritis atrófica cáncer gástrico vigilancia Modelo Antecedentes
gastritis atrófica crónica (CAG) fue catalogado como en 1978. se ha observado condición precancerosa de cáncer gástrico por la OMS de que un aumento moderado del riesgo de cáncer gástrico con la presencia de CAG después de 10 años de seguimiento [1]. Debido a CAG tiende a ser de por vida, y la curación espontánea es rara [2], es, sin duda, que los adultos más jóvenes con CAG tendrían un mayor riesgo de cáncer gástrico debido a la larga duración de la enfermedad.
Algunos expertos creen que la patológica cambios degenerativos del CAG pueden ser un fenómeno fisiológico semi-especialmente en la población de edad avanzada [3]. Sin embargo, una alta prevalencia entre los adultos más jóvenes se encuentra en algunas regiones de alto riesgo para el cáncer gástrico en Asia [4]. Nuestra investigación busca investigar las diferentes causas subyacentes de la CAG entre los diferentes grupos de edad.
La erosión de los telómeros puede ser considerado como un reloj biológico [5]. Como los telómeros se acortan con la edad en seres humanos y los síndromes de envejecimiento prematuro a menudo se asocian con los telómeros acortados, se ha propuesto que la longitud de los telómeros es un parámetro importante en el envejecimiento. reducción de la longitud de los telómeros se ha confirmado en enfermedades tales como la hipertensión [6], la diabetes y las enfermedades coronarias [7, 8], y también se ha confirmado en las células de la tiroides humana y paratiroidea [9], así como el hígado, el riñón y la piel [10]. Sin embargo, si este es también el caso con CAG o en el proceso de envejecimiento de estómago sigue siendo poco clara.
Para abordar estas cuestiones, la cuantificación de la longitud de los telómeros es esencial. muestras de tejido Estudios recientes han descrito un método de fluorescencia in situ
hibridación (FISH) que es más rápida y más fiable que las técnicas comparables [11-14], que también se pueden aplicar a embebidos en parafina-[15]. Mediante FISH, hemos sido capaces de medir la longitud de los telómeros de los cromosomas en las células del estómago a partir de muestras de biopsias obtenidas por endoscopia.
En este estudio, se define un nuevo término de "estómago Edad", que se puede utilizar para evaluar el envejecimiento de el estómago y se basa en la longitud de los telómeros de las células del estómago. Hemos tratado de utilizar este concepto para explicar el fenómeno de CAG en adultos más jóvenes y establecer un modelo matemático sencillo para calcular la edad de estómago, que puede ser aplicado clínicamente para el pronóstico.
Métodos
los sujetos de estudio y se archivan las muestras de tejido para establecer el modelo de estómago Edad
las muestras de tejido se obtuvieron de los archivos de patología de la División GI en Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, hospital Renji y otros ocho centros médicos (general hospital Militar de Pekín PLA, primer hospital Afiliado de la Universidad de Nanchang , primer hospital Afiliado de la Universidad médica de Nanjing, primer hospital Afiliado de la Universidad de Anhui, primer hospital Afiliado de la Universidad Soo-Chow, el hospital de la Universidad de Shandong Qilu, Segunda Universidad médica Militar, Changhai y el hospital Changzheng). bloques incluidos en parafina fijados con formalina fueron recuperados de 246 sujetos (60 voluntarios sanos y 186 pacientes ambulatorios en los departamentos clínicos gastrointestinales) que se sometieron a una endoscopia. Al menos dos se tomaron biopsias del antro y corpus tanto en la curvatura mayor y la curvatura menor del estómago, y luego incorporados de forma rutinaria en los bloques de parafina, se seccionaron y se tiñeron. Las secciones de tejido (3-4 M) de cada muestra se utilizaron para el examen histopatológico y FISH. Otros dos biopsias tomadas del antro se conservaron en nitrógeno líquido y se mantuvieron a -80 ° C para la citometría de flujo.
Población de estudio para evaluar la capacidad predictiva del modelo Edad de estómago
información pertinente de 1.200 pacientes en el Shanghai Jiao -Tong Escuela Universitaria de Medicina, se analizó el hospital Renji. En el punto de tiempo de inicio del estudio, todos los participantes se sometieron a examen endoscópico con biopsia, que se repitieron al menos una vez en las subsiguientes visitas durante el período de seguimiento. La información pertinente relativa a los resultados histológicos y las respuestas al cuestionario, se describe a continuación, se registra y se comparó entre los grupos de edad.
Cuestionario
Entrevistamos a todos los participantes utilizando un cuestionario estándar autoadministrado para evaluar las características iniciales. El tiempo medio para completar el cuestionario fue de aproximadamente 15-20 minutos. El cuestionario incluyó los siguientes: 1) los factores demográficos; 2) cualquier historia familiar de enfermedades, incluyendo el cáncer; 3) una historia detallada de medicamentos; 4) los hábitos de sueño y la calidad, y las presiones del trabajo; 5) el número de cigarrillos fumados por día y la duración del hábito de fumar; 6) la frecuencia y cantidad de agua, leche, bebidas, vino y licor fuerte tomada; 7) los hábitos de beber té y café; 8) el consumo de arroz, carne, pescado, verduras, frutas, verduras encurtidas o productos fermentados salados y alimentos deshidratados; y 9) sabores preferidos, los métodos de cocción, y la ingesta de bocadillos nocturnos.
diagnóstico histopatológico y la evaluación de la infección por Helicobacter pylori
Cada muestra teñida se examinó de forma independiente por dos patólogos experimentados que no tenían conocimiento de los datos clínicos del individuo mediante el Sydney actualizado clasificación [16]. Cuando hubo desacuerdos, las biopsias fueron examinados hasta que se alcanzó un acuerdo. Se definieron dos entidades histopatológicas: gastritis no atrófica crónica (CNAG) y CAG. CNAG se definió como cualquier grado de la inflamación sin atrofia tanto en el corpus y el antro. CAG se definió como la atrofia y /o metaplasia intestinal (MI), ya sea en el cuerpo o en el antro. Las características histológicas de las biopsias se registraron como leve, moderada o grave según el sistema de puntuación de Sydney. Los pacientes con no o biopsias inadecuados fueron excluidos del estudio. Helicobacter pylori
infección se detectó por cualquiera de las pruebas de ureasa rápida de muestras de biopsia o [13] 13-C prueba de aliento de la ureasa.
FISH
La hibridación se realizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente, los portaobjetos se desparafinaron y rehidratada a través de una serie de gradientes de etanol, se trató con 0,1% de Tween 20 detergente en agua desionizada, se incubaron en tampón de citrato (Target Solution desenmascaramiento; Vector Laboratories, Burlingame, EE.UU.) en vapor, inmersos en de- ionizado agua y se fijaron en gradientes de etanol, y secado al aire. Se añadieron aproximadamente 10 l de sonda de APN a cada diapositiva. La sonda de APN para las secuencias teloméricas era una sonda lista para su uso incluido en el Kit de telómeros PNA FISH /FITC (K5327, Dako A /S, Dinamarca Glostrup.). Las diapositivas fueron cubreobjetos, se incubaron a 84 ° C durante 5 min, y se hibridaron durante 2 h a temperatura ambiente en la oscuridad. Después de un extenso lavado, primero a 65 ° C y luego a temperatura ambiente con PBST. Los núcleos se tiñeron con DAPI (1 mg /ml, Molecular Probes, Eugene, OR), después se lavan en agua se calmó, los portaobjetos se montaron con antifade medios de montaje (Prolong ™ anti-fade medio de montaje; Molecular Probes, Eugene, OR , EE.UU.).
Microscopía y análisis de datos
Las láminas fueron fotografiado usando un microscopio de epifluorescencia (Nikon Eclipse 80i). Los filtros de excitación /emisión de fluorescencia utilizados fueron FITC 490 nm de excitación BP a través de un conjunto de filtros XF38. Las imágenes de fluorescencia fueron capturadas con una cámara de dispositivo de carga acoplada enfriado (Nikon DSRil). Para la sección de tejido, las áreas calculadas fueron identificados de acuerdo con la H & diapositivas antes de la microscopía de fluorescencia, que contenía las células epiteliales y las glándulas (glándulas pilórico en antro y glándulas fúndica en el corpus) E-manchadas. Después de que las áreas calculadas fueron divididos en cinco regiones automáticamente por el software profesional (Image-Pro Plus 6.0). Al menos 1000 núcleos se calcularon en cada región. Cinco regiones de cada sección de tejido se examinaron para el etiquetado de los telómeros; la intensidad de la fluorescencia se utiliza para reflejar esto. señales telómeros se cuantificaron mediante un método validado recientemente en la que la suma de intensidades de los píxeles en el canal FITC para un núcleo de la célula dada se normaliza a la señal DAPI. DAPI tinción proporciona una medida sólida del contenido de ADN, siendo en gran medida insensible a tipo de célula, el estado de proliferación, y el grado de condensación de la cromatina [17-19]. Cada región de la sección de tejido se examinó para el etiquetado de los telómeros de manera independiente por dos técnicos experimentados en diferente tiempo. La correlación se calcularon coeficientes.
La citometría de flujo y la medición de Δψm
Δψm, el voltaje a través de la membrana mitocondrial interna, puede ser alterado por el daño oxidativo, tal como la que se produce durante el proceso de envejecimiento. Los estudios demostraron que Δψm disminuyó gradualmente con la edad [20, 21]. Así que creemos que Δψm se puede utilizar para evaluar el envejecimiento de la estómago y como una medida para validar el término de "estómago Age". Para apoyar nuestro estudio, se determinó el valor de Δψm de esos pacientes. muestras de biopsias del antro se prepararon por primera vez como suspensiones de células individuales utilizando un kit de disociación de tejido de acuerdo con el protocolo del fabricante (KGA829, keygen Biología Co., Ltd, Nanjing, China). Para la tinción, las células se incubaron con JC-1 (Molecular Probes, Invitrogen, Alemania) durante 30 min a 37 ° C en la oscuridad. Después, las células se lavaron en PBS y se analizaron inmediatamente mediante citometría de flujo (FACScan; BD Biosciences, Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE.UU.). Un total de 10.000 células se examinaron para fluorescencia verde utilizando un filtro de 529 nm y la fluorescencia naranja utilizando un filtro de 590 nm. Todos los datos fueron analizados utilizando BD célula de Quest Pro Software (BD Biosciences). El análisis estadístico
análisis estadístico se realizó con el programa SPSS 17,0 software estadístico. El t pareada
se utilizaron test, ensayo y análisis de la varianza de Chi-cuadrado. Todos los datos se presentan como la media ± SE. Las diferencias se consideraron estadísticamente significativas a P Hotel < 0.05. El análisis multivariado se realizó mediante regresión logística utilizando un procedimiento de eliminación hacia atrás para las variables que no están asociados significativamente con la Δage (Estómago Edad: la edad real; P = 0,05
) [22]. La sensibilidad y especificidad de los modelos se calcularon. El rendimiento del modelo de predicción fue evaluada por el área bajo la curva de eficacia diagnóstica (curva ROC). Elegimos el más alto índice de Youden como el punto de corte óptimo [23].
Ética Francia El protocolo de estudio fue aceptado por el Comité de Ética del Hospital Renji (Shanghai, China). Se pidió a cada participante que firme un formulario de consentimiento informado.
Resultados
relación lineal entre la longitud de los telómeros y la edad de las células del estómago
Con el fin de evaluar la Edad de estómago, que tuvo como objetivo establecer los criterios estándar de estómago en Edad Gente saludable. Las biopsias del antro sesenta de voluntarios sanos fueron utilizados para establecer los criterios estándar. Estos incluyeron 30 varones y 30 mujeres de edades 23-76 años, en los que la endoscopia mostró un revestimiento gástrico en general normales y en los que la edad de estómago se considera que es el mismo que su edad real. Cinco regiones de cada sección de tejido se examinaron para la intensidad de etiquetado del telómero; la intensidad media se utilizó para la ecuación de regresión. El coeficiente medio de variación fue de 0.097 que consideramos satisfactoria. características de los voluntarios y la intensidad de fluorescencia se enumeran en la Tabla 1. Como se demuestra en la Figura 1, una relación lineal ajustado (bondad de ajuste: r
2 = 0,8263) existía entre la intensidad de etiquetado de los telómeros y la edad. La ecuación de la recta de regresión calculada es x gratis (años) = (17.719-y
) /0.174. En esta ecuación, y
era el valor de la intensidad de fluorescencia en el pescado y x
era la edad. El coeficiente de correlación entre los datos de pescado y la edad es r = 0.91 = √0.8263. Por lo tanto, hemos demostrado claramente una disminución lineal en la longitud de los telómeros con la edad. Mediante el uso de la ecuación por encima del nivel de envejecimiento biológico del estómago (estómago Edad) de cada uno puede expresarse con precisión en términos de la intensidad de la fluorescencia en el pescado y en comparación individually.Table 1 La intensidad de fluorescencia y características de los voluntarios
Rango de edad ( años)
21-30 31-40

41-50 51-60

61-70

71-80
número total página 6 página 12 página 9
15 página 12 página 6
número de macho página 3
9 página 6 página 9 página 6 página 3 intensidad de fluorescencia
(media ± DE)
14,8 ± 0,69 11,8 ± 0,92
página 9 ± 1,07 7,87
± 1,64 6,18 ± 0,76

6,15 ± 0,04
Ocupación Estudiante
Estrellas: 3
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Profesional
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