Evaluierung und klinische Bedeutung des Magens Altersmodell für die Alterung des Magen einer multizentrischen Studie in China Auswertung

Evaluierung und klinische Bedeutung des Magens Altersmodell für
eine höhere Prävalenz der chronischen atrophischen Gastritis (CAG) Altern des Magen-einer multizentrischen Studie in China
Zusammenfassung
Hintergrund Auswertung erfolgt bei jüngeren Erwachsenen in Asien. Wir haben Magen-Alter, die verschiedenen Mechanismen der CAG zwischen jungen Erwachsenen und älteren Menschen zu untersuchen, und etablierte ein einfaches Modell des Krebsrisikos, die CAG Überwachung angewendet werden kann.
Methods
Magen Alter von FISH Untersuchung der Telomer bestimmt Länge im Magen-Biopsien. Δψm wurde durch Flusszytometrie bestimmt. Sechzig Freiwillige wurden verwendet, um die lineare Beziehung zwischen der Telomerlänge und Alter zu bestätigen, während 120 Probanden ein mathematisches Modell durch eine multivariate Analyse aufzubauen verwendet wurden. Insgesamt wurden 146 Probanden verwendet, um die Gültigkeit des Modells zu bewerten und wurden 1.007 Probanden verwendet, um die Beziehung zwischen Prognose zu bewerten und Δage (aus dem mathematischen Modell berechnet). ROC-Kurven wurden verwendet, um die Beziehung zwischen der Prognose und Δage zu bewerten und die Abschaltpunkt für Δage zu bestimmen.
Ergebnisse
wir, dass eine enge lineare Beziehung zwischen der Telomerlänge und dem Alter etabliert. Die Länge der Telomere war offensichtlich unterschiedlich zwischen Patienten mit und ohne CAG sogar im gleichen Alter. Δψm verringerte sich in Individuen, deren Magen Alter war größer als wahres Alter, vor allem bei jüngeren Erwachsenen. Ein mathematisches Modell des Magen-Alter (real Alter + Δage) wurde erfolgreich konstruiert, die einfach war, in der klinischen Arbeit anzuwenden. Eine höhere Δage wurde mit einem schlechteren Ergebnis korreliert. Das Kriterium der Δage > 3,11 sollte als der Cut-off in Betracht gezogen werden, um die Untergruppe von Patienten auszuwählen, die endoskopische Überwachung erfordern
Schlussfolgerung
Variation im Magen Alter zwischen Individuen der gleichen biologischen Alter wurde bestätigt.. Besondere Aufmerksamkeit sollte mit einem größeren Magen Alter, vor allem bei jüngeren Erwachsenen an Personen gezahlt werden. Die Δage in dem einfachen Modell kann als Kriterium verwendet werden, wurde zur Auswahl CAG Patienten für Magenkrebs Überwachung.
Schlüsselwörter Magen Alter Chronische atrophische Gastritis Magenkrebs Überwachung Modell hintergrund und chronische atrophische Gastritis (CAG) aufgeführt als Präkanzerose für Magenkrebs von der WHO im Jahr 1978. Es wurde beobachtet, dass ein moderat erhöhtes Risiko für Magenkrebs mit der Anwesenheit von CAG nach 10 Jahren Follow-up [1]. Da CAG zu lebenslangen neigt, und spontane Heilung ist selten, [2], ist es kein Zweifel, dass jüngere Erwachsene mit CAG ein höheres Risiko für Magenkrebs aufgrund der langen Dauer der Krankheit haben.
Einige Experten glauben, dass die pathologische degenerative Veränderungen von CAG kann ein halb physiologisches Phänomen sein, besonders in der älteren Bevölkerung [3]. Allerdings ist eine hohe Prävalenz bei jungen Erwachsenen in einigen Hochrisiko-Regionen für Magenkrebs in Asien gefunden [4]. Unsere Forschung versucht, die verschiedenen Ursachen der CAG zwischen den verschiedenen Altersgruppen zu untersuchen.
Telomere Erosion als biologische Uhr angesehen werden kann [5]. Als Telomere bei Menschen und vorzeitigem Altern Syndromen mit dem Alter verkürzt werden oft mit verkürzten Telomere verbunden sind, wurde vorgeschlagen, dass die Telomerlänge ein wichtiger Parameter bei der Alterung ist. Telomerlänge Reduktion wurde bei Erkrankungen wie Bluthochdruck [6], Diabetes und koronare Herzkrankheit [7, 8] wurde bestätigt, und es wurde auch in Zellen des menschlichen Schilddrüse und Neben bestätigt [9], sowie Leber, Niere und die Haut [10]. Ob dies jedoch auch der Fall bei CAG ist oder in den Magen Alterungsprozess bleibt unklar.
Diese Fragen zu beantworten, die Quantifizierung der Länge der Telomere ist von wesentlicher Bedeutung. Jüngste Studien haben ein Verfahren zur Fluoreszenz-in situ
Hybridisierung (FISH) beschrieben, die schneller und zuverlässiger als vergleichbare Techniken ist [11-14], die auch angewendet werden kann, um in Paraffin eingebetteten Gewebeproben [15]. Mit FISH konnten wir die Länge der Telomere der Chromosomen in den Magen-Zellen aus Biopsieproben durch Endoskopie erhalten zu messen.
In dieser Studie definieren wir einen neuen Begriff von "Magen Age", die verwendet werden können, die Alterung der zu bewerten der Magen und wird auf der Telomerlänge von Magenzellen basiert. Wir haben versucht, dieses Konzept zu verwenden, um das Phänomen der CAG bei jüngeren Erwachsenen zu erklären und ein einfaches mathematisches Modell zu etablieren Magen Alter zu berechnen, die klinisch zur Prognostizierung angewendet werden kann.
Methoden
Themen Studium und archivierten Gewebeproben zu etablieren der Magen-Age Modell
Gewebeproben wurden aus den Archiven der Pathologie GI Division bei Shanghai Jiao-Tong University School of Medicine, Renji Krankenhaus und acht anderen medizinischen Zentren (Military General Hospital von Peking PLA, Erste Affiliated Hospital der Universität Nanchang erhalten First Affiliated Hospital der Nanjing Medical University, Erste Affiliated Hospital der Universität Anhui, Erste Affiliated Hospital von Soo-Chow-Universität, Qilu Hospital of Shandong University, Second Military Medical University, Changhai Hospital und Changzheng Hospital). Formalin-fixierten und in Paraffin eingebettete Blöcke wurden von 246 Probanden (60 gesunden Probanden und 186 ambulante Patienten an Magen-Darm-Kliniken) abgerufen, die Endoskopie unterzogen. Mindestens zwei Biopsien wurden aus dem Antrum und Corpus genommen sowohl auf der größeren Krümmung und die geringere Krümmung des Magens, und dann in Paraffinblöcken routinemäßig eingebettet, geschnitten und gefärbt. Gewebeschnitte (3-4 &mgr; m) von jeder Probe wurden für die histopathologische Untersuchung und FISH verwendet. Weitere zwei aus dem Antrum Biopsien wurden in flüssigem Stickstoff aufbewahrt und gehalten bei -80 ° C für die Durchflusszytometrie.
Studie Bevölkerung, um die Vorhersagefähigkeit des Magens Alter Modells bewerten
Relevante Informationen von 1.200 Patienten an der Shanghai Jiao -Tong University School of Medicine, wurde Renji Krankenhaus untersucht. An der Grundlinie Zeitpunkt alle Teilnehmer unterzog endoskopische Untersuchung mit Biopsien, die während des Follow-up-Zeitraum bei zukünftigen Besuchen mindestens einmal wiederholt wurden. Die relevanten Informationen in Bezug auf die histologischen Ergebnisse und die Antworten auf den Fragebogen, wie unten beschrieben, wurden zwischen den Altersgruppen erfasst und verglichen.
Fragebogen
Wir alle Teilnehmer interviewt einen Standard selbst auszufüllenden Fragebogen mit Baseline-Charakteristika zu bewerten. Die mittlere Zeit für das Ausfüllen des Fragebogens war ca. 15-20 Minuten. Der Fragebogen umfasste die folgenden: 1) demografische Faktoren; 2) jede Familiengeschichte von medizinischen Bedingungen, einschließlich Krebs; 3) eine detaillierte medizinische Vorgeschichte; 4) Schlafgewohnheiten und die Qualität und den Job Druck; 5) die Anzahl der gerauchten Zigaretten pro Tag und die Dauer des Rauchens; 6) die Frequenz und die Menge an Wasser, Milch, Getränke, Wein und Schnaps genommen; 7) Tee und Kaffee Trinkgewohnheiten; 8) der Verbrauch von Reis, Fleisch, Fisch, Gemüse, Obst, eingelegtem Gemüse oder gesalzen fermentierten Produkten und getrockneten Lebensmitteln; und 9) Lieblings Aromen, Garmethoden und Aufnahme von Nacht Snacks.
histopathologische Diagnose und Helicobacter-pylori-Infektion Beurteilung
Jede gefärbten Objektträger wurde unabhängig voneinander von zwei erfahrene Pathologen untersucht, die von der individuellen klinischen Details nicht bewusst waren mit dem aktualisierten Sydney Klassifikation [16]. Wenn es Meinungsverschiedenheiten waren, wurden die Biopsien erneut geprüft, bis eine Einigung erreicht wurde. Zwei histopathologischen Entitäten definiert wurden: chronische nicht-atrophische Gastritis (CNAG) und CAG. CNAG wurde wie jeder Grad der Entzündung ohne Atrophie definiert sowohl der Korpus und Antrum. CAG wurde das Corpus oder Antrum definiert entweder als Atrophie oder /und intestinale Metaplasie (IM). Die histologischen Merkmale der Biopsien wurden als gering aufgezeichnet, mittelschwere oder schwere nach dem Punktesystem, Sydney. Patienten mit keiner oder unzureichender Biopsien wurden von der Studie ausgeschlossen. Helicobacter-pylori-Infektion
entweder durch eine rasche Urease-Test von Biopsieproben oder [13] 13-C-Urease-Atemtest.
FISH
Hybridisierung nachgewiesen wurde, wurde gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Kurz gesagt, wurden durch eine Reihe von Ethanol-Gradienten entparaffiniert und rehydratisiert Dias, mit 0,1% Tween 20 Detergens in deionisiertem Wasser behandelt, in Citrat-Puffer inkubiert (Target Unmasking Lösung; Vector Laboratories, Burlingame, USA) in Dampf, in de- getaucht ionisiertes Wasser und in Ethanol-Gradienten fixiert und luftgetrocknet. Etwa 10 &mgr; l von PNA-Sonde wurde zu jeder Folie hinzugefügt. Die PNA-Sonde für Telomer-Sequenzen war eine ready-to-use-Sonde in dem Kit Fisch Telomere PNA enthalten /FITC (K5327; DakoCytomation A /S, Glostrup Dänemark.). Die Objektträger wurden dann einem Deckglas für 5 min bei 84 ° C inkubiert und für 2 h bei Raumtemperatur im Dunkeln hybridisiert. Nach ausgiebigem Waschen, zuerst bei 65 ° C und dann bei Raumtemperatur mit PBST. Die Kerne wurden dann mit DAPI gefärbt (1 ug /ml, Molecular Probes, Eugene, OR), nachdem sie im gestillt Wasser gewaschen wurden die Objektträger mit Antifade Eindeckmedien montiert (Prolong ™ Anti-fade Montage Medien; Molecular Probes, Eugene, OR , USA).
Mikroskopie und Datenanalyse
Slides wurden mit einem Epifluoreszenz-Mikroskop (Nikon Eclipse-80i) abgebildet. Die Fluoreszenzanregung /Emissionsfilter verwendet wurden, waren FITC 490 nm BP Anregung über einen XF38 Filtersatz. Fluoreszenzbilder wurden mit einer gekühlten Charge-Coupled Device Kamera (Nikon DSRil) erfasst. Für den Gewebeschnitt wurden die berechneten Flächen nach der H &identifiziert; E-gefärbten Objektträger vor der Fluoreszenzmikroskopie, die die Epithelzellen und die Drüsen (Pylorusdrüsen in Antrum und Fundus Drüsen in Corpus) enthalten ist. Danach werden die berechneten Flächen in fünf Regionen von der professionellen Software (Image-Pro Plus-6.0) automatisch aufgeteilt. Mindestens 1000 Kerne wurden in jedem Bereich berechnet wird. Fünf Bereiche jedes Gewebeschnitt wurden für Telomer Kennzeichnung geprüft; die Intensität der Fluoreszenz wurde verwendet, um dies zu berücksichtigen. Telomere Signale wurden durch ein Verfahren quantifiziert validierten kürzlich in dem die Summe der Pixelintensitäten in dem FITC-Kanal für einen gegebenen Zellkern an das DAPI-Signal normiert wird. DAPI-Färbung stellt eine robuste Maß für den DNA-Gehalt, ist weitgehend unempfindlich gegen Zelltyp, Proliferationsstatus, und der Grad der Chromatin-Kondensation [17-19]. Jede Region des Gewebeschnittes wurde unabhängig zu unterschiedlichen Zeit von zwei erfahrenen Techniker für telomere Kennzeichnung untersucht. Die Korrelationskoeffizienten abgeschätzt.
Durchflusszytometrie und Messung von Δψm
Δψm, die Spannung über die innere Mitochondrienmembran, kann durch oxidative Schädigung geändert werden, wie die, die während des Alterungsprozesses auftritt. Studien zeigten, dass Δψm allmählich mit dem Alter verringert [20, 21]. So glaubt man, daß Δψm verwendet werden kann, die Alterung des Magens und als Maß zur Bewertung der Begriff "Stomach Age" zu bestätigen. Um unsere Studie unterstützen, stellten wir fest, den Wert von Δψm dieser Patienten. Antrum-Biopsie-Proben wurden zunächst als Einzelzellsuspensionen bereit, eine Gewebedissoziation Kit gemäß dem Protokoll des Herstellers (KGA829, keygen Biology Co., Ltd, Nanjing, China). Zur Färbung wurden die Zellen mit JC-1 (Molecular Probes, Invitrogen, Deutschland) für 30 min bei 37 ° C im Dunkeln inkubiert. Die Zellen wurden dann in PBS gewaschen und sofort mittels Durchflusszytometrie (FACScan; BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) analysiert. Insgesamt 10.000 Zellen wurden für grüne Fluoreszenz unter Verwendung eines 529-nm-Filter und für orangefarbene Fluoreszenz unter Verwendung eines 590-nm-Filter untersucht. Die Daten wurden mit BD Cell Quest Pro Software (BD Biosciences).
Statistische Analyse analysiert
Statistische Analyse wurde SPSS 17.0 statistische Software. Die paarigen t
-test, Chi-Quadrat-Test und Varianzanalyse verwendet wurden. Alle Daten wurden als Mittelwert ± SE dargestellt. Die Unterschiede wurden als statistisch signifikant sein bei P
< 0,05. Multivariate Analyse wurde durch logistische Regression eine Rückwärtselimination Verfahren für Variablen nicht signifikant mit dem Δage assoziiert (Magen Age-real Alter; P
= 0,05) [22]. Die Sensitivität und Spezifität der Modelle berechnet. Die Leistung des Vorhersagemodell wurde durch die Fläche unter der Empfängerbetriebskennlinie (AUROC) bewertet. Wir entschieden uns für den höchsten Youden-Index als die optimale Cut-off-Punkt [23].
Ethik
Das Studienprotokoll vom Renji Krankenhaus Ethikkommission (Shanghai, China) angenommen wurde. Jeder Teilnehmer benötigt wurde eine Einwilligungserklärung zu unterschreiben.
Ergebnisse

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