Aberrant upregulation von 14-3-3ơ Ausdruck dient als minderwertig prognostischer Biomarker für Magen-cancer

Aberrant upregulation von 14-3-3ơ Ausdruck dient als minderwertig prognostischer Biomarker für Magenkrebs
Zusammenfassung
Hintergrund
14-3 -3ơ ein intrazelluläres ist, Phosphoserin-Bindungsprotein und vorgeschlagen in Tumorigenese beteiligt ist. Jedoch sind die Expressions Dynamik 14-3-3ơ und seine clinicopathological /prognostische Bedeutung in menschlichen Tumoren noch umstritten.
Methods
der Methode von Immunhistochemie (IHC) und Western Blot wurden verwendet, um die Protein-Expression von 14 zu untersuchen, -3-3ơ bei Magenkrebs und gepaart normalen benachbarten Magenschleimhaut Gewebe. Erhalten Sie operating characteristic (ROC) Kurvenanalyse wurde verwendet, um einen Cutoff-Score für 14-3-3ơ Ausdruck in einem Trainingssatz (n = 66) zu bestimmen. Zur Validierung wurde der Analyse der Assoziation von 14-3-3ơ Ausdruck der ROC-derived Cutoff-Score mit Patienten-Ergebnis und klinischen Eigenschaften in einem Prüfgerät (n = 86) und insgesamt Patienten (n = 152) unterzogen.
Ergebnisse
Die Expressionsfrequenz und Expressionsniveaus von 14-3-3ơ bei Magenkrebs signifikant höher waren als in normalen Magenschleimhaut Gewebe. Die Korrelationsanalyse zeigte, dass eine hohe Expression von 14-3-3ơ bei Magenkrebs signifikant mit dem klinischen Stadium und Tumorinvasion korreliert. Ferner wird in dem Test-Set und insgesamt Patienten zeigten Kaplan-Meier-Analyse, dass erhöhte 14-3-3ơ Ausdruck schlechtere Gesamtüberlebenszeit vorhergesagt (OS) und das progressionsfreie Überleben (PFS). Wichtig ist, dass hohe 14-3-3ơ Ausdruck auch mit verkürzten Überlebenszeit in der Stufe III und Stufe IV Magenkrebs-Patienten in Verbindung gebracht. Multivariate Analysen zeigten, dass 14-3-3ơ Ausdruck ein unabhängiger prognostischer Parameter bei Magenkrebs war.
Schlussfolgerungen
Diese Ergebnisse belegen, dass eine hohe Expression von 14-3-3ơ in der Tumorprogression von Bedeutung sein können und Server als unabhängige molekulare Marker für die schlechte Prognose von Magenkrebs. Damit die Überexpression von 14-3-3ơ identifiziert bei Patienten mit hohem Risiko und ist ein neuartiges therapeutisches Zielmolekül für diesen Tumor.
Hintergrund
Magenkrebs ist eine der häufigsten Ursachen von Krebs-Todesfälle weltweit [1] , vor allem in Ost-asiatischen Ländern wie China, Japan [2]. Im Jahr 2005 gab es etwa 0,4 Millionen neue Fälle und 0,3 Millionen Todesfälle von Magenkrebs in China [3]. Trotz der jüngsten Fortschritte in der chirurgischen Techniken und die medizinische Behandlung, die insgesamt 5-Jahres-Überlebensrate von Magenkrebs in China bleibt bei etwa 40% gering. Viele Studien haben gezeigt, dass mehrere genetische Veränderungen nachgewiesen, einschließlich Tumor-Suppressor-Gene, Onkogene, Zelladhäsionsmoleküle, Zellzyklusregulatoren und Wachstumsfaktoren, sind verantwortlich für die Entwicklung und das Fortschreiten von Magenkrebs [4]. Studien haben viele aberrant exprimierten Gene in Magenkrebs einschließlich BMI1
[5], COX-2
[6], HER3
[7], RKIP
und STAT3
[8] entwirrt, SPARC
[9] und HER2
[10, 11], die genauer Risikobewertung von Magenkrebs-Patienten machen. Doch viel versprechende Moleküle, die klinisch-pathologischen /prognostische Bedeutung bei Magenkrebs haben bleiben im wesentlichen begrenzt. Es ist notwendig, um weiter die molekularen Mechanismen bei Magenkrebs beteiligt verstehen und wertvoller prognostischer Marker zu identifizieren, um so nicht nur schlechtere Prognose verbessern, sondern auch neue vielversprechende Therapie Targets bereitzustellen.
14-3-3-Proteine ​​eine Familie von im Begriff sind, 30 kD dimeren hochkonservierten Proteinen und ubiquitär in allen eukaryotischen Organismen exprimiert [12]. Es gibt sieben eng verwandten Genen (β, γ, ε, η, ζ, O, τ) in 14-3-3 Familie Proteinen. Diese Gene bilden oft Heterodimere oder Homodimere und binden an über 100 verschiedene Proteinliganden [13, 14]. Somit sind 14-3-3 Proteine ​​in vielen verschiedenen zellulären Signalprozesse einschließlich der Zellproliferation, Zellzykluskontrolle, Apoptose und maligne Transformation beteiligt [14, 15]. Unter den sieben Isotypen wurde 14-3-3ơ ursprünglich als humanen Mamma-Epithel-Marker 1 charakterisierten (hme1) und als Tumor suppress Gen identifiziert [12, 16]. Wachsende Beweise zeigten, dass 14-3-3ơ war signifikant verringert oder verloren wegen des Gens über Hyper in mehreren soliden Tumoren zum Schweigen zu bringen [17-22]. Frühere Berichte gefunden, die die Expression von 14-3-3ơ verringert vorhergesagt eine schlechte Überleben in Brust und Nasen-Rachen-Krebs [23, 24]. Jedoch widersprüchlich mit der Tumor-Suppressor-Rolle von 14-3-3σ Überexpression von 14-3-3ơ in Zelle Bauchspeicheldrüsenkrebs führte zu Arzneimittelresistenz, Zellmigration und Invasion [25]. Darüber hinaus war eine hohe Expression von 14-3-3σ ein unabhängiger prognostischer Faktor für das Überleben in schlechten Pankreas- und Darmkrebs [26, 27]. Somit variiert die biologische Rolle von 14-3-3ơ in Tumorigenese und das Fortschreiten von verschiedenen Arten von menschlichen Krebsarten zu spezifischen Tumortyp. Hier wählten wir die Magenkrebs Proben mit strengen Protokoll 14-3-3ơ Ausdruck Dynamik zu erkennen und ihre klinisch-pathologischen /Prognose Wertigkeiten zu analysieren.
Methoden
Patienten
insgesamt 216 primären Magenkrebs-Patienten aus den Archiven von der Abteilung für Pathologie in der dritten und zweiten Affiliated Hospital der Sun Yat-Sen University (Guangzhou, China) wurden in unserer Studie zunächst rekrutiert. Alle Patienten wurden anfängliche chirurgische Resektion von März 2001 bis Januar 2006 haben wir weiter gescreent Patienten eine strenge Zulassungskriterien Protokoll wie folgt: mikroskopisch Adenokarzinom des Magens bestätigt; ohne metastatischen Erkrankungen; keine vorherige Chemotherapie oder Strahlentherapie Geschichte; Empfangen einheitlichen Regime als First-Line-Chemotherapie nach Resektion des Primärtumors (wir als FOLFOX-Schema Unified: Fluorouracil, Leucovorin und Oxaliplatin) und keine Strahlenbehandlung zu keinem der Patienten verabreicht werden; mit mehr als 5-Jahres-Follow-up-Periode. Letztlich 52 Patienten mit Verlust der Follow-up und 12 Patienten mit einem Mangel in der klinischen Merkmale wurden aus dieser Studie, die zu 152 Magenkrebs-Patienten ausgesetzt wird, um weitere klinische und das Überleben Analyse ausgeschlossen. Im Einzelnen umfasste die gesamte Kohorte von 105 männlich und 47 weiblich mit dem Durchschnittsalter von 58,0 Jahre (Bereich: 27-81 Jahr). 103 Patienten wurden als Tod während der letzten 5 Jahren Follow-up-Zeit censused, darunter 5 Fälle von postoperativen Komplikationen gestorben und 98 Fälle von Tumorprogression starben. Von den insgesamt Patienten wurden 66 Patienten zufällig durch einen Computer (SPSS 17.0 Software) auf dem Trainingssatz zugeordnet, und die verbleibenden 86 Patienten wurden randomisiert der Testsatz zugeordnet. Clinicopathological Variablen der beiden Kohorten, wie Alter, Geschlecht, im klinischen Stadium, Tumorinvasion, Knotenstufe und Histologie Differenzierung, wurden in die Studie eingeschlossen. Alle Tumoren wurden klassifiziert und inszeniert nach den von der Internationalen Union gegen Krebs befürwortete überarbeiteten Leitlinien. Wir erhielten vor der Patienten Zustimmung und Genehmigung des Instituts Forschungsethikkommission von Sun Yat-Sen-Universität für die Verwendung von klinischen Materialien in der vorliegenden Studie beschrieben.
Tissue Microarray-Konstruktion
Die Gewebe-Mikroarrays (TMA) wurden als konstruiert Verfahren zuvor von Xie et al beschrieben [28]. Kurz gesagt wurden die in Paraffin eingebettete Gewebeblöcke und die entsprechenden histologischen Hämatoxylin und Eosin-gefärbten Objektträger für TMA Abtastung überlagert. Interessiert Kerngewebebiopsien (0,6 mm Durchmesser) wurden aus repräsentativen Tumorbereichen und von benachbarten Magenschleimhaut Gewebe von den Blöcken der einzelnen Spendergewebe mit einer Trephine (Dreifachzylinder von Karzinomgewebe und einem Zylinder aus normalen benachbarten Magenschleimhaut Gewebe) ausgestanzt. Die Gewebezylinder wurden dann unter Verwendung eines Gewebegruppierungs Instrument (Beecher Instruments, Silver Spring, MD, USA) an definierten Positionen in einen Empfänger Paraffinblock übertragen.
Immunhistochemischen Analyse und Bewertung
Die TMAs Dias in Xylol entparaffiniert durch abgestufte Alkohol, eingetaucht in 3% Wasserstoffperoxid, rehydratisiert für 10 min endogene Peroxidase-Aktivität zu blockieren, und das Antigen durch Druck wiedergewonnen 3 min Kochen in Tris /EDTA (pH = 8,0). Dann wurden die Objektträger mit dem primären Antikörper inkubiert 14-3-3σ (monoklonaler Maus; 01.50; Santa Cruz, SC-100638) für 1 Stunde bei Raumtemperatur. Nach 30 min mit dem sekundären Antikörper inkubiert worden waren, wurden Proben mit DAB gebeizt (3, 3-Diaminobenzidin). Schließlich wurden die Schnitte mit Hämatoxylin gegengefärbt, entwässert und gelagert. Eine Negativkontrolle wurde durch Ersetzen des primären Antikörpers mit einem normalen Maus-IgG erhalten. Bekannte Immunofärbung-positiv waren kolorektalen Karzinoms Folien als positive Kontrollen verwendet, wie früher berichtet [27]., Die braunen Granulat in Zytoplasma von 14-3-3σ wurden als positive Färbung betrachtet. Wir erzielten die Färbeintensität wie folgt: 0, keine Färbung; 1+, mild-Färbung; 2+, moderate Färbung; 3+, intensive Färbung. Das Gebiet der Färbung wurde wie folgt bewertet: 0, keine Färbung von Zellen in beliebigen mikroskopischen Feldern; 1+, < 30% der Gewebe positiv gefärbt; 2+, zwischen 30% und 60% positiv gefärbt; 3+ > 60% positiv gefärbt. 14-3-3σ Expression wurde durch eine kombinierte Beurteilung der Färbungsintensität und Erweiterung ausgewertet. Die minimale Punktzahl in der Summe (Intensität + Erweiterung) von 0 und das Maximum betrug 6. Die Kriterien in dieser Studie verwendet wurde zuvor weitgehend akzeptiert [24]. Die Expression von 14-3-3σ beurteilt und wurde von zwei unabhängigen Pathologen (Drs. F Tang und ZY Feng), die zu den klinisch-pathologischen Daten geblendet wurden erzielt. Die Vereinbarung dieser beiden Pathologen auf dem IHC-Score erreichte 84% (128 identische Werte insgesamt 152 Fälle), unser Bewertungssystem darauf hindeutet, war sehr solide und reproduzierbar. Wenn die von den beiden Pathologen berichteten Ergebnisse waren konsistent, wurde der Wert ausgewählt. die Interobserver- Meinungsverschiedenheiten (ca. 6% der gesamten Fälle) ein zweites Mal überprüft wurden, durch ein abschließendes Urteil folgte jedoch von beiden Pathologen.
Western-Blot-Analyse
Der Magenkrebs und gepaart normalen benachbarten Magenschleimhaut Gewebe wurden gemahlen und mit dem RIPA-Puffer auf Eis lysiert vor einer Western-Blot-Analyse unterzogen werden. Die Proteinkonzentration wurde durch das Bradford-Verfahren mit BSA (Sigma-Aldrich) als Standard nachgewiesen. Gleiche Mengen von Zell- und Gewebeextrakt (40 ug) wurden einer SDS-PAGE unterworfen und auf Nitrocellulose-Membran (Bio-Rad) für die Antikörper-Blotting. Die Membran wurde dann anti-Glycerinaldehyd mit Maus-3-phosphat-Dehydrogenase (GAPDH) Antikörper (Abmart, # M20006) und Maus-anti-14-3-3σ Antikörper (Santa Cruz, SC-100638) blockiert und inkubiert.
Auswahl von Cutoff-Score für 14-3-3σ "positiv" Ausdruck
der ROC-Kurvenanalyse wurde auf die Auswahl der 14-3-3σ Cutoff-Score im Trainingssatz unterworfen, wie zuvor beschrieben [29]. Kurz gesagt, untersucht die Sensitivität und Spezifität für das Ergebnis wird an jeder Kerbe eine ROC-Kurve zu erzeugen, wurde aufgetragen. Die Partitur lokalisiert am nächsten zu dem Punkt, an beiden maximale Empfindlichkeit und Spezifität, der Punkt (0.0, 1.0) auf der Kurve, wurde als Cutoff ausgewählt, um die größtmögliche Anzahl von Tumoren Score führt, die als mit korrekt klassifiziert wurden oder nicht, das Ergebnis haben. ROC-Kurve Analyse, die das Überleben Merkmale wurden dichotomisiert zu erleichtern. Überleben (Tod VS. andere (zensiert, am Leben oder Tod durch andere Ursachen))
Follow-up
Alle Patienten hatten Follow-up-Datensätze für mehr als 5 Jahre. Nach der Beendigung der Therapie wurden die Patienten bei 3 Monats-Intervallen während der ersten 3 Jahren und 6 Monats-Intervallen danach beobachtet. Das Gesamtüberleben als die Zeit von der Diagnose bis zum Zeitpunkt des Todes festgelegt wurde oder wenn zum letzten Termin censused, wenn die Patienten noch am Leben waren. Das progressionsfreie Überleben wurde als die Zeit von der Diagnose bis zum Tag der lokalen Versagen /Fernmetastasen oder dem Zeitpunkt des Todes festgelegt oder wenn zum letzten Termin censused.
Statistische Analyse
Für die Überlebensanalyse optimale Trennwert für 14- 3-3σ Expression wurde durch ROC-Analyse im Trainingssatz (n = 66) erhalten. Zur Validierung, die Beziehungen zwischen 14-3-3σ Ausdruck, die durch ROC-Analyse generierten Cutoff-Punkt klassifiziert wurde, und OS, PFS wurden in der Testsatz (n = 86) und insgesamt Patienten (n = 152) ausgewertet. Der Chi-Quadrat-Test oder der exakte Test nach Fisher wurde die Beziehung zwischen 14-3-3σ Expression und klinisch-pathologischen Variablen zu evaluieren. Die multivariaten Cox-Proportional-Hazards-Modell wurde verwendet, um die Hazard Ratios und 95% Konfidenzintervall für Patienten Ergebnis zu schätzen. Die Beziehungen zwischen 14-3-3σ Ausdruck und OS wurden PFS von Kaplan-Meier-Analyse bestimmt. Die Log-Rank-Tests wurden durchgeführt, den Unterschied in der Überlebenswahrscheinlichkeiten zwischen Patientenuntergruppen zu bewerten. Alle p
angegebenen Werte waren zweiseitig und p
< 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen. Die statistische Analyse wurde mit SPSS v durchgeführt. 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL).
Ergebnisse 14-3-3σ Expression in Magenkrebs und normalen Magenschleimhaut Gewebe Bei
14-3-3σ erkannt wurde im Zytoplasma und in dem Magenkrebs (1A und 1A ') überexprimiert, während normale paarigen Magenschleimhaut Gewebe nahezu negativen Ausdruck (1B und 1B gezeigt). In Übereinstimmung mit diesem Ergebnis zeigte Western-Blot-Analyse einen ähnlichen Befund bei Magenkrebs und normalen benachbarten Magenschleimhaut Gewebe (Abbildung 1C). Abbildung 1 14-3-3σ Expression in menschlichen primären Magenkrebs und normalen benachbarten Magenschleimhaut Gewebe. (A) 14-3-3σ im Zytoplasma erkannt wurde und im Magenkrebsgewebe (100 ×) überexprimiert. (B) benachbarten, nicht-neoplastischem Gewebe der Magenschleimhaut zeigte fast negativen Expression von 14-3-3σ (100 ×). (A '), (B') gezeigt, die höhere Vergrößerung (400 ×) aus dem Bereich des Feldes in (A) und (B) sind. (C) Western-Blot-Analyse von 14-3-3σ Expression in repräsentativen primären Magenkrebs Gewebe (T) und normalen benachbarten Schleimhautgewebe (N). Gleiche Beladung von Protein durch GAPDH bestimmt.
Zur weiteren Überlebensanalyse zu bewerten und zu vermeiden wurde die Probleme mehrerer Trennwertauswahl, ROC-Kurve Analyse verwendet, um Cutoff-Score für 14-3-3σ Ausdruck bestimmen. Wie in 2A und 2B gezeigt, war die 14-3-3σ Cutoff-Score für OS und PFS im Trainingssatz 3,25 (p
< 0,001) und 3,35 (p = 0,003
) beziehungsweise. Wir haben uns damit einen 14-3-3σ Ausdruck Score von 3 (> 3 VS. ≤ 3) als einheitliche Cutoff-Punkt für das Überleben Analyse im Test-Set. Abbildung 2 receiver operating characteristic (ROC) Kurven Analyse von 14-3-3σ Cutoff-Score im Trainingssatz. (A) 14-3-3σ Cutoff-Punkt für das Gesamtüberleben in der Trainingsmenge. (B) 14-3-3σ Cutoff-Punkt für das progressionsfreie Überleben im Trainingssatz. Bei jedem immunhistochemischen Punktzahl, die Sensitivität und Spezifität für das Ergebnis aufgetragen wurde untersucht, wodurch eine ROC-Kurve zu erzeugen. 14-3-3σ Cutoff-Score für das Gesamtüberleben, das progressionsfreie Überleben betrug 3,25 und 3,35 auf.
14-3-3σ Expression und klinische Merkmale, Die klinischen Merkmale dieser beiden Kohorten von Patienten, einschließlich Alter, Geschlecht , im klinischen Stadium, Tumorinvasion, Knotenstufe, Histologie Differenzierung, 14-3-3σ Expression wurden in Tabelle 1 ROC-derived 14-3-3σ Cutoff-Wert von 3 in der Ausbildung getrennt eingestellt zusammengefasst erfolgreich die in hoch eingestellt Prüfung ( 44/86, 51,2%) und niedriger (42/86, 48,8%) 14-3-3σ Ausdruck Untergruppen. Hohe Expression von 14-3-3σ wurde vor allem in fortgeschrittenen Tumorstadien (77/107 in Stadium III + IV VS. 12/45 in der Stufe I + II, p
= 0,004) gefunden. Darüber hinaus zeigte die Korrelationsanalyse, dass eine hohe 14-3-3σ Expression mit klinischen Stadium (p
< 0,001 für beide gesetzt) ​​korreliert und Tumorinvasion (p
< 0,001 für Trainingssatz und p =
0,005 für den Test-Set) in beiden Sätzen. 14-3-3σ für die Patienten "Alter in der Testsatz (p
= 0,01), aber nicht in dem Trainingssatz zugeordnet ist. Wir konnten keine Beziehung zwischen 14-3-3σ mit anderen Eigenschaften der Patienten zu erfassen, einschließlich Geschlecht, Knotenstufe und Histologie differentiation.Table 1 Verband der 14-3-3σ Ausdruck mit Patientencharakteristika in primären Magenkrebs
Variable
Alle
Trainingssatz
Fälle (n = 66)
Testing Satz (n = 86)


hoch
Ausdruck
Low
Ausdruck
p
ein
hoch
Ausdruck
Low
Ausdruck
p
ein
Alter (Jahre)
≥ 58.00 b
83
25 (30,1%)
13 (15,7%)
0.627
29 (34,9%)
16 (19,3%)
0,010
< 58.00
69
20 (29,0%)
8 (11,6%)
15 (21,7%)
26 (37,7%)
Geschlecht
Male
105
29(27.6%)
16(15.2%)
0.340
31(29.5%)
29(27.6%)
0.887
Female
47
16(34.0%)
5(10.6%)
13 (27,7%)
13 (27,7%)
Klinische Phase I II

45 +
6 (13,3%)
12 (26,7%)
0.000
6 (13,3%)
21 (46,7%)
0.000
III + IV
107
39 (36,4%)
9 (8,4%)
38 (35,5 %)
21 (19,6%)
Tumorinvasion
T1+T2
23
0(0%)
7(30.4%)
0.000
3(13.0%)
13(56.5%)
0.005
T3+T4
129
45(34.9%)
14(10.9%)
41 (31,8%)
29 (22,5%)
Knoten stage
N0+N1
101
32(31.7%)
15(14.9%)
0.979
24(23.8%)
30(29.7%)
0.105
N2+N3
51
13(25.5%)
6(11.8%)
20 (39,2%)
12 (23,5%)
Histologie-Differenzierung
Well
51
15(29.4%)
11(21.6%)
0.123
11(21.6%)
14(27.5%)
0.395
Poorly
101
31(30.7%)
10(9.9%)
33 (32,7%)
28 (27,7%)
ein x2-Test
b Schnittsalter
14-3-3σ Ausdruck und das Überleben Analyse: univariate Überlebensanalyse
Wie in 3A gezeigt und 3C, Kaplan-Meier-Analyse zeigte, dass eine erhöhte 14-3-3σ Ausdruck stark ein schlechteres OS in der Testsatz vorhergesagt (p
< 0,001) und insgesamt Patienten (p
< 0,001). Darüber hinaus war 14-3-3σ Ausdruck auch ein leistungsfähiges prognostischer Faktor für PFS im Testsatz (p
< 0,001, 3B) und insgesamt Patienten (p
< 0,001, 3D). In Anbetracht der schlechten Ergebnis bei Magenkrebs im Spätstadium, wurde eine weitere Analyse im Hinblick ausgeführt Ausdruck in Untergruppen von Patienten mit Magenkrebs zu 14-3-3σ mit Stadium III und IV. Die Ergebnisse zeigten, dass im Vergleich mit 14-3-3σ niedrigen Ausdruck, hohe Expression von 14-3-3σ einen signifikanten Trend hin zu schlechter OS und PFS bei Magenkrebs-Patienten der Stufe III (p
zeigte = 0,001 für OS und p
= 0,017 für PFS, 4A und 4B) und Stufe IV (p
< 0,001 für OS und p
= 0,001 für PFS, 4C und 4D). Die Ergebnisse in der Gesamt Patienten waren ähnlich denen in der Testsatz (4E-H) gefunden. Abbildung 3 Kaplan-Meier-Überlebensanalyse von 14-3-3σ Ausdruck in der Testsatz und insgesamt Patienten. (A) Höhere 14-3-3σ Ausdruck war eng mit einer schlechten Gesamtüberleben und (B) das progressionsfreie Überleben in der Testsatz korreliert. (C) Bei Patienten mit höheren 14-3-3σ Ausdruck erwarb auch ein schlechteres Gesamtüberleben und (D) das progressionsfreie Überleben in der gesamten Patienten. Im Test-Set und insgesamt Patienten betrug die mediane Gesamtüberlebenszeit für Patienten mit niedrigem und hohe Expression von 14-3-3σ 73,0 VS. 17,0 Monate (p
< 0,001) und 73,0 VS. 14,0 Monate (p
< 0,001). Bzw.
Abbildung 4 Kaplan-Meier-Überlebensanalyse von 14-3-3σ Expression in Untergruppen von Patienten mit Magenkrebs im Stadium III und IV (Log-Rank-Test). (A) Wahrscheinlichkeit des Gesamtüberlebens und (B) das progressionsfreie Überleben von Patienten mit Stadium III Magenkrebs in der Testsatz: geringe Expression, n = 17; hohe Expression, n = 26; (C) Wahrscheinlichkeit des Gesamtüberlebens und (D) das progressionsfreie Überleben von Stadium IV Patienten mit Magenkrebs in der Testsatz: geringe Expression, n = 5; hohe Expression, n = 11 (E) Wahrscheinlichkeit des Gesamtüberlebens und (F) das progressionsfreie Überleben von Patienten mit Stadium III Magenkrebs in der Gesamt Patienten: geringe Expression, n = 22; hohe Expression, n = 55; (G) Wahrscheinlichkeit des Gesamtüberlebens und (H) das progressionsfreie Überleben von Stadium IV Patienten mit Magenkrebs in der Gesamt Patienten: geringe Expression, n = 9; hohe Expression, n = 21
Multivariate Cox-Regressionsanalyse
den Einfluss Um zu vermeiden, durch univariate Analyse verursachte, wurde die Expression von 14-3-3σ sowie andere Parameter in der multivariaten Cox-Analyse (Tabelle 2 und Tabelle geprüft 3). Im Testsatz wurde 14-3-3σ in der Tat fand eine signifikante unabhängiger prognostischer Faktor für die schlechte OS zu sein (Hazard Ratio 4,527; 95% CI, 2,274-9,012; p
< 0,001; Tabelle 2) und PFS (Hazard Ratio 3,582; 95% CI, 1,717-7,475; p
= 0,001; Tabelle 2). Ähnliche Ergebnisse wurden auch in der Gesamt Patienten (Hazard-Ratio beobachtet, 5,161; 95% CI, 2,990-8,909; p
< 0,001 für OS und Hazard Ratio 4,416; 95% CI, 2,482-7,856; p <
; 0,001 für PFS; Tabelle 3). Von anderen Parametern wurde der klinischen Phase fand ein unabhängiger prognostischer Faktor für das Überleben der Patienten in der Testsatz zu sein, aber nicht in der Gesamt patients.Table 2: Ergebnisse der multivariaten Cox-Proportional-Gefahrenanalyse in Probierset
Variable
progressionsfreie Überleben für Tod
Für

Risikoverhältnis

95%
Konfidenzintervall

p
Risikoverhältnis
95%
Konfidenzintervall
p


Alter < 58.00
Jahre (VS ≥ 58 Jahre)
1.101
0,637-1,902
0.731
1,056
0,577-1,936
0.859
Geschlecht männlich
(VS Weiblich.)
0.772
0,408-1,461
0.427
1.049
0,525-2,094
0.892
Klinische Phase
IV + III (VS II + I)
3,391
1,156-9,949
0,026
5.220
1,529 bis 17,823
0,008
Tumorinvasion
T 4 + T 3 (VS. T 2 + T 1)
1,066
0,320-3,553
0,917
0.730
0,206-2,585
0.626
Nodal Stufe N 3 + N 2
(VS. N 1 + N 0)
0.705
0,387-1,282
0.251
0.735
0,373-1,448
0.373
Differenzierung
Low (VS. Hoch)
0.862
0,437-1,701
0,668
0.936
0,442-1,982
0.863
14-3-3σ
Positiv (VS. Negative)
4,527
2,274-9,012
0.000
3,582
1,717-7,475
0,001
Tabelle 3 Ergebnisse der multivariaten Cox-proportional-Gefahrenanalyse der Gesamt Patienten
Variable
für das progressionsfreie Überleben Tod
Für

Risikoverhältnis
95%
Konfidenzintervall
p
Risikoverhältnis
95%
Konfidenzintervall
p

Alter < 58.00
Jahre (VS ≥ 58 Jahre)
1.046
0,701-1,562
0.825
1,036
0654-1,642
0,880
Geschlecht männlich
(VS Weiblich.)
0.713
0.474 to1.073
0,105
0.733
0,409-1,278
0.165
Klinische Phase
IV + III (VS II + I)
0.988
0.500 to1.952
0.972
1,355
0,558-3,121
0.476
Tumorinvasion
T 4 + T 3 (VS. T 2 + T 1
) 2,175
0,896-5,278
0.086
1,432
0,547-3,747
0.465
Nodal Stufe N 3 + N 2
(VS. N 1 + N 0)
1,056
0.681 to1.638
0.808
1,243
0,751-2,059
0.397
Differenzierung
Low (VS High)
0.765
0.470 to1.243
0.279
0.810
0.478 to1.375
0.463
14-3-3σ
Positiv (VS. Negative)
5,161
2,990-8,909
0.000
4,416
2,482-7,856
0.000
Diskussion
Magenkrebs ist eine der häufigsten Krebserkrankungen weltweit und es stellt eine der schwersten öffentlichen Gesundheit Problem [1]. Rezidive und Metastasen sind immer noch die wichtigsten Fragen für die Armen das Überleben von fortgeschrittenem Magenkrebs-Patienten [30]. Obwohl frühere Studien, dass viele anomale exprimierten Gene in Magentumor gefunden haben, kann das Risiko von Patienten Ergebnis helfen klassifizieren [5-11], mehr neue molekulare Marker, die Tumorprogression zu identifizieren und vorhersagen, die Prognose individuell sind nach wie vor dringend erforderlich. Die 14-3-3 Familie Proteine ​​haben viel Aufmerksamkeit in den letzten Jahren an Bedeutung gewonnen aufgrund ihrer Beteiligung an der Krebserkrankungen durch Regulation verschiedener zellulärer Prozesse [14, 15]. Unter den sieben Isoformen 14-3-3σ hochreguliert von p53 als Reaktion auf DNA-Schädigung und sequestriert den wesentlichen mitotischen Initiationskomplex, cdc2-Cyclin B1, aus dem Zellkern eintritt, wodurch die Initiierung der Mitose verhindert [31]. Als Ergebnis induziert 14-3-3σ G2-Arrest und ermöglicht Reparatur DNA-Schäden. Somit unterscheidet sich von anderen Mitgliedern der Familie, ist 14-3-3σ als negativer Regulator der Zellzyklus-Kontrollpunkten und einem Potential Tumor-Suppressor-Protein [12] definiert. Allerdings bleibt die biologische Rolle von 14-3-3ơ in Tumorigenese und das Fortschreiten von verschiedenen Arten von menschlichen Tumoren umstritten. Hier, um die biologische Funktion von 14-3-3ơ bei Magenkrebs zeigen, untersuchten wir 14-3-3ơ Dynamik Ausdruck und analysiert ihre klinisch-pathologischen /Prognose Wertigkeiten in 152 Tumorproben.
In dieser Studie, ein Ziel zu entwickeln, 14-3-3σ Cutoff-Punkt für das Überleben Analyse verwendeten wir die ROC-Kurve Analyse ein Cutoff-Score im Trainingssatz zu erzeugen. 14-3-3σ Ausdruck, die als hohe und niedrige Pegel durch den ROC-derived Cutoff-Punkt klassifiziert wurde, wurde vor allem, dass sie höher in fortgeschrittenen Tumorstadien (Stadium III und IV) gefunden, was darauf hinweist, dass 14-3-3σ könnte sein, bei Magenkrebs Progression beteiligt. Die Korrelationsanalyse zeigte weiterhin, dass hohe 14-3-3σ Expression mit klinischen Stadium und Tumorinvasion in Magenkrebs (Tabelle 1) verbunden war. Ferner wird in dem Test-Set und insgesamt Patienten, hohe 14-3-3ơ Ausdruck prognostizierten eine bedeutende OS und PFS Nachteil gegenüber niedrigen 14-3-3ơ Ausdruck Untergruppe (Abbildung 3). Wichtig angibt, schlechter prognostische Auswirkungen der erhöhten 14-3-3σ Expression wurde bei Patienten mit Stadium III und IV Tumoren (Abbildung 4), gezeigt, dass 14-3-3ơ könnte ein neuer Faktor für die Risikodefinition bei Magenkrebs sein. Darüber hinaus analysiert multivariate im Testsatz und insgesamt Patienten ergab, dass 14-3-3ơ Ausdruck ein unabhängiger prognostischer Parameter war.

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