Afferent aus der Säure herausgefordert Rattenmagen Signalisierung wird gehemmt und Magensäure-Ausscheidung durch lafutidine

Afferent aus der Säure herausgefordert Rattenmagen wird gehemmt und die Magensäure Beseitigung verbessert durch lafutidine
Zusammenfassung
Hintergrund
Lafutidine Signalisierung verbessert ist eine Histamin-H 2-Rezeptor-Antagonist, der gastroprotektiver Wirkung von denen seiner antisekretorische Aktivität und seine Fähigkeit, in Beziehung steht ein sensorisches Neuron-abhängige Abwehrmechanismus zu aktivieren. Die vorliegende Studie untersucht, ob intragastric Verabreichung von lafutidine (10 und 30 mg /kg) modifiziert Vagus zuführenden Signalisierung, Schädigung der Schleimhaut, intragastrischen Säure und Magenentleerung nach Magensäure Herausforderung.
Methoden
Erwachsene Ratten mit Fahrzeug, lafutidine behandelt wurden (10 bis 30 mg /kg) oder Cimetidin (10 mg /kg) und 30 min später wurden ihre Mägen zu exogenen HCl ausgesetzt (0,25 M). Während des Zeitraums von 2 h nach HCl, intragastric pH-Wert, Magen-Volumen, Magensäure und das Ausmaß der makroskopische Schädigung der Magenschleimhaut festgestellt wurden und die Aktivierung von Neuronen im Hirnstamm von c-Fos Immunzytochemie sichtbar gemacht wurde.
Ergebnisse | Magensäure Herausforderung verstärkt die Expression von c-Fos im Nucleus tractus solitarii sondern verursacht nur eine minimale Schädigung der Magenschleimhaut. Lafutidine reduziert das HCl-evozierte Expression von c-Fos in der NTS und erhöht den intragastrischen pH folgenden intragastric Verabreichung von überschüssigem HCl. Weitere Analysen zeigten, dass die Wirkung von gastroprotektiver lafutidine gegen überschüssige Säure verzögert wurde und ging mit Erleichterung der Magenentleerung parallel gemessen indirekt über Magen-Volumen ändert, und eine Verringerung der Magensäure. Die H 2-Rezeptor-Antagonist Cimetidin hatte ähnliche, aber schwächere Effekte.
Fazit
Diese Beobachtungen zeigen, dass lafutidine den Vagus-zuführenden Signalisierung einer Magensäure hemmt Beleidigung, die eine hemmende Wirkung auf den Säure-induzierten Magenschmerzen zurückgelegt werden . Die Fähigkeit von lafutidine intragastrischen Säure zu verringern, nach Exposition mit überschüssigem HCl nicht durch seine antisekretorische Aktivität erklärt werden, jedoch erscheint Verdünnung zu reflektieren und /oder in das Duodenum des Säurebelastung zu entleeren. Dieses Profil von Maßnahmen betont die Vorstellung, dass H 2-Rezeptor-Antagonisten die Magenschleimhaut von Säure Verletzung Magensäure schützen kann unabhängig von ihrer Fähigkeit, die Sekretion zu unterdrücken.
Hintergrund
Exposition der Magenschleimhaut von Ratten bei Bewusstsein, um überschüssige HCl (0,25 M) wird signalisiert, über vagale Afferenzen, zum Nucleus tractus solitarii (NTS) im Hirnstamm, wobei die neuronale Aktivierung kann durch c-fos mRNA in situ Hybridisierung und c-Fos Immunzytochemie [1, 2] dargestellt werden. Die Analyse der Verhaltensreaktionen auf Magensäure Herausforderung zeigt an, dass vagale afferente Neuronen eine wichtige Rolle in der Magensäure Nozizeption spielen [3]. Die vagale afferente Signal von Magensäure Herausforderung ist bekannt, durch Morphin gehemmt werden [1], durch eine Kombination von Glutamat NMDA und Tachykinin NK 1 und NK 2 -Rezeptorantagonisten [4] und durch antisekretorische Mittel, wie Cimetidin und Omeprazol [2].
wie Cimetidin, ist lafutidine ein Histamin-H 2-Rezeptor-Antagonist, der gezeigt wurde, von säurebedingten Magen-Schädigung bei Nagetieren [5-8] zu schützen. Darüber hinaus gibt es Hinweise, dass die gastroprotektive Wirkung von lafutidine beinhaltet Freisetzung von Neuropeptiden aus afferenten Nervenenden in den Magen [7, 8]. Im Hinblick auf diese pharmakologischen Profil stellte sich die Frage, ob lafutidine Vagus zuführenden Signalisierung von Magensäure Herausforderung für die brainstem ändern würde. Daher war das erste Ziel dieser Studie die Wirkung von lafutidine auf Magensäure hervorgerufenen Expression von c-Fos in der Ratte brainstem zu testen. Darüber hinaus wurde der Magen-pH-Wert aufgezeichnet und der Grad der makroskopischen quantifiziert Magen-Schädigung.
Im Zuge dieser Experimente entdeckt wurde, dass lafutidine die Entfernung der exogene Säurebelastung aus dem Magen erleichtert. Da die Sekretion von endogenen Magensäure durch eine exogene Säurebelastung unterdrückt wird, um die Wirkung von lafutidine intragastric pH erhöhen kann nicht durch seine antisekretorische Aktivität erklärt werden aufgrund Histamin-H 2-Rezeptor-Blockade. Als Folge ist dieser Effekt von lafutidine wahrscheinlich Verdünnung und /oder Entleeren der Säurebelastung in das Duodenum zu reflektieren. Diese Überlegung wird durch die Beobachtung gestützt, dass die Exposition des Magens, um überschüssige Säure hemmt die Magenentleerung und verursacht Flüssigkeitssekretion [2, 9]. Das zweite Ziel dieser Studie daher war es zu untersuchen, ob lafutidine den zeitlichen Verlauf der Schädigung des Magens ändert, Magen-Volumen und Magensäure im Anschluss an eine exogene Säurebelastung und ob ein Einfluss von lafutidine auf diese Parameter durch Cimetidin geteilt wird.
Methoden
Tiere
Die Studie mit weiblichen altersangepassten Sprague-Dawley-Ratten (Abteilung für Labortierkunde und Genetik, Institut für Biomedizinische Forschung, Medizinische Universität Wien, Himberg, Österreich) wurde durchgeführt, 170 mit einem Gewicht - 250 g. Die Tiere wurden in Gruppen von 3 pro Käfig unter kontrollierter Temperatur (21 ° C) und einem 12 h Hell /Dunkel-Zyklus gehalten (Licht an 6:00, leuchtet um 18:00 Uhr ausgeschaltet). Alle Experimente wurden von einem Ethikkommission beim Bundesministerium für Wissenschaft und Forschung und durchgeführt gemäß der Richtlinie der Europäischen Gemeinschaften Rates vom 24. November 1986 (86/609 /EWG) genehmigt. Die Versuche wurden so gestaltet, dass die Anzahl der verwendeten Tiere und ihr Leiden minimiert wurde.
Experimentelle Protokolle
Zwei Studien wurden durchgeführt. Sieben Tage vor der Magensäure Laden Experiment wurden die Tiere randomisiert Behandlungsgruppen zugeteilt wurden eine Randomisierung Software (Randomizer für Klinische Studien 1.8.0, Institut für Medizinische Informatik, Statistik und Dokumentation, Medizinische Universität Graz, Österreich) mit. Am Tag vor der Säurebelastung Experiment wurden die Ratten die Nahrung entzogen und fasteten 18 Stunden, um sicherzustellen, dass der Magen war leer, aber freien Zugang zu Wasser hatten. In der ersten Studie wurden die Auswirkungen von zwei Dosierungen von lafutidine (10 und 30 mg /kg) auf Magensäure-evozierte c-Fos-Expression im Hirnstamm der bewussten Ratten wurde zusammen mit Magensäure und Verletzungen untersucht. Lafutidine oder sein Vehikel (0,5% Carboxymethylcellulose) wurde peroral 30 min vor der Magen ausgesetzt wurde auf eine schädliche Konzentration an Säure verabreicht (0,25 M HCl) per Schlundsonde. Nach der intragastrischen Behandlung wurden die Tiere nicht mehr, bis die Aufzeichnung der experimentellen Parameter zu trinken gestattet. Zwei Stunden nach der Magensäure Laden der Anzahl von c-Fos-immunreaktiven Neuronen im Hirnstamm, intragastrischen pH-Wert und dem Ausmaß der makroskopischen Schädigung der Magenschleimhaut wurden bestimmt.
Im zweiten Experiment wurden die Wirkungen einer Einzeldosis von lafutidine (30 mg /kg) oder Cimetidin (10 mg /kg) auf den zeitlichen Verlauf des Magenvolumens, Säure und Schädigung nach Exposition gegenüber einer Belastung exogenen Säure untersucht. Die Medikamente sowie deren Vehikel wurden intragastral per Schlundsonde 30 min verabreicht, bevor der Magen HCl ausgesetzt war. Nach der intragastrischen Behandlung wurden die Tiere nicht mehr, bis die Aufzeichnung der experimentellen Parameter zu trinken gestattet. Magen-Volumen, Säure und Verletzungen wurden bei drei Zeitpunkten nach Verabreichung der intragastric Säurebelastung quantifiziert: 0, 60 und 120 min. Alle Parameter wurden in den gleichen Experimenten aufgezeichnet.
Lafutidine und Cimetidin Behandlungen
Lafutidine (Taiho, Tokyo, Japan) und Cimetidin (Sigma, Wien, Österreich) wurden in Carboxymethylcellulose suspendiert (0,5%) bei einer Konzentration von 2 und 6 mg /ml (lafutidine) und 2 mg /ml (Cimetidin). Lafutidine (10 und 30 mg /kg), Cimetidin (10 mg /kg) oder ihr Fahrzeug wurde in einem Volumen von 5 ml peroral mit der Schlundsonde verabreicht /kg 30 min vor dem Magen HCl ausgesetzt war. Die intragastric Verabreichung wurde mit einem weichen Säuglingsernährung Rohr (Außendurchmesser 2,6 mm; SIMS Portex, Hythe, Vereinigtes Königreich) durchgeführt.
Magensäure Laden
HCl (0,25 M) wurde intragastrically bei einem Volumen von 10 ml verabreicht /kg durch die gleichen weichen Säuglingsernährung Röhre, die für die Verabreichung von lafutidine verwendet wurde. Danach intragastric Säure die Tiere Laden länger, bis die Aufzeichnung der experimentellen Parameter zu trinken waren nicht erlaubt.
C-Fos Immunzytochemie
c-Fos-artige Immunreaktivität wurde wie zuvor beschrieben sichtbar gemacht [2, 10]. Zwei Stunden nach der intragastrischen Säure Beladung wurden die Ratten durch intraperitoneale Injektion einer Überdosis von Pentobarbital (200 mg /kg) getötet. Folgende Euthanasie wurden die Tiere transkardial mit gepuffertem Paraformaldehyd (4%, 75 ml) perfundiert, während der absteigenden Aorta eingespannt wurde. Die brainstems wurden entfernt und über Nacht in gepufferten Paraformaldehyd (4%) bei 4 ° C nachfixiert. Dann wurden die Gewebe für 48 h in 20% Saccharose bei 4 ° C, eingefroren durch Eintauchen in Methylbutan auf Trockeneis und Lagerung bei -70 ° C bis zur Verwendung kryogeschützt. Serielle Kranzschnitte von 40 um Dicke wurden aus dem Hirnstamm über die gesamte Länge des Bereichs postrema (AP) mit einem Kryostaten geschnitten.
Immunzytochemie wurde mit freischwimmenden Abschnitte durchgeführt, die zunächst einmal in 0,1 M phosphatgepufferter Kochsalzlösung gewaschen wurden (PBS) gewaschen, dann zweimal in Waschpuffer (WB; 0,1 M PBS mit 0,3% Triton X 100) und in 0,3% H 2 O 2 für 30 min inkubiert. für 40 h bei 4: Nach drei weiteren Waschungen (jeweils 10 min in WB), wurden die Gewebe mit dem primären Antikörper (20000, Santa Cruz Biotech, Santa Cruz, Kalifornien, USA polyklonalen Kaninchen-anti-c-Fos, 1) inkubiert ° C. Dieser Antikörper wurde in 0,1 M PBS, enthaltend 0,3% Triton X 100, 1% Rinderserumalbumin und 2,5% Ziegenserum gelöst. Danach wurden die Schnitte dreimal in WB gewaschen und für 45 min in einer Lösung inkubiert, um die biotinylierten Sekundärantikörper (Ziege-anti-Kaninchen-IgG, Vectastain Elite Kit, Vector Laboratories, Burlingame, Kalifornien, USA) enthält. Nach drei weiteren Waschungen in WB wurden sie für 1 h in Avidin-Biotin-Komplex (Vectastain Elite Kit) inkubiert. Die Gewebe wurden anschließend und entwickelt mit 3,3-Diaminobenzidin (DAB) Substrat (Vectastain Elite Kit) verstärkt mit Nickelsulfat für 200 s gespült. Anschließend wurden die Schnitte auf mit Gelatine überzogenen Objektträger aufgebracht, luftgetrocknet und in Xylol (100%) gelöscht. Die Objektträger wurden mit Entellan (Merck, Darmstadt, Deutschland) eingedeckt. Zu steuern, um die Spezifität des anti-c-Fos-Antikörper-Signal, ein c-Fos blockierende Peptid (Santa Cruz Biotech) wurde zu der primären Antikörperverdünnung zugegeben., Die immunzytochemisch verarbeitet brainstem Schnitte wurden mit einem Lichtmikroskop (Axiophot sucht zu einem computerisierten Bildanalysesystem (MCID-M2, Version 3.0, Rev 1.1, Imaging Research Inc., Brock University, St. Catharines, Ontario, Kanada gekoppelt, Zeiss, Oberkochen, Deutschland)). Die Abschnitte wurden so codiert, dass der Prüfer wissen nicht, welche Behandlung Gruppe sie kamen. Vier Abschnitte aus dem Hirnstamm eines jeden Tieres wurden analysiert, und alle c-Fos-positiven Zellen wurden auf einer Seite der NTS und AP zufällig gezählt. Um zu vermeiden, dass die gleichen Zellen zweimal gezählt wurden, nur jeder zweite Abschnitt wurde zur Analyse entnommen. Alle Zählungen in jedem Abschnitt jedes Tieres wurden gemittelt, um die Anzahl von c-Fos-positiven Zellen in der NTS und AP dieses Tieres zu geben. Diese Durchschnittswerte von jedem Tier wurden dann verwendet, um die mittlere Anzahl von c-Fos-positiven Zellen pro Abschnitt in der unilateral NTS und AP jeder Versuchsgruppe zu berechnen.
Bestimmung des Magenvolumens
Die Ratten wurden durch intraperitoneale euthanasiert Injektion einer Überdosis von Pentobarbital (200 mg /kg) sofort (0 min), 60 oder 120 min nach der intragastrischen Säurebeladung. Nach der Belichtung des Magens durch eine Mittellinie Laparotomie wurden die Cardia und Pylorus geklemmt. Der Magen wurde herausgeschnitten und gewogen (Gewicht 1). Nachdem ihr Inhalt in einem Fläschchen sammeln, der Magen wurde erneut gewogen (Gewicht 2). Das Volumen des Mageninhalt wurde durch die Differenz berechnet Gewicht 2 - Gewicht 1 und, ausgedrückt bezogen auf das Körpergewicht (g /kg Körpergewicht). Darüber hinaus wurde die Magenvolumen gewonnen 60 und 120 min nach der Magensäure-Beladung ebenfalls zu dem Volumen unmittelbar gemessen relativ ausgedrückt (0 min) nach der Magensäure-Beladung.
Intragastric pH
Euthanasie folgend wurde das Abdomen durch einen geöffneten Mittellinie Laparotomie. Der Magen wurde ausgeschnitten und geöffnet, und der intragastric pH-Wert wurde mit einem pH-Meter bestimmt, die mit einem Micro Line pH-Elektrode (ThermoOrion, New Hyde Park, NY, USA) und kalibriert mit Standardpuffer von pH 4,01, 7,00 und 10,00 ausgestattet war.
Titration von Mageninhalt
der Mageninhalt wurden in Röhrchen geleert, kurz bei 5.600 × g (10.000 rpm) zentrifugiert und 1:10 verdünnt, 01.25 oder 01.50 in 5 ml destilliertem Wasser, die Verdünnungsrate abhängig von dem Volumen des Mageninhalts, die wiederhergestellt wurden. Wenn kein Magensaft gewonnen wurde, wurde die entsprechende Menge an Speisebrei verwendet. Titration mit 0,1 M NaOH auf einem Titroline Alpha Titrierapparat (Schott-Geräte GmbH, Hofheim, Deutschland) bis zum Endpunkt der pH-Wert durchgeführt = 7,0 erreicht wurde. Die Menge an Säure-Äquivalenten in den Magen wurde als mmol berechnet und Magensäure 60 und 120 min nach der Magensäure-Beladung gemessen wurde sofort gemessen, um die Acidität relativ ausgedrückt (0 min) nach dem Laden von Magensäure. Gastric Schädigung

die Integrität der Magenschleimhaut wurde auf der makroskopischen Ebene untersucht. Um makroskopisch sichtbare Schäden zu quantifizieren, wurde der Magen gepinnt flach auf einem Silizium-Elastomer-beschichteten Platte und bedeckt mit PBS. Der Magen wurde fotografiert, die auf einen PC übertragen Bild und makroskopische Schädigung des Magens mit computerisierte Planimetrie von einem Beobachter bewertet, die keine Kenntnis von der experimentellen Behandlung war [1]. Die Schleimhaut-Bereich durch sichtbare hämorrhagischen Schäden abgedeckt wurde als Prozentsatz der Gesamtfläche der Drüsenschleimhaut ausgedrückt. Statistik
Die statistische Auswertung der Ergebnisse wurde auf SPSS 15.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) mit Einweg-Varianzanalyse (ANOVA). Diese Tests wurden trotz der Tatsache durchgeführt, dass die Daten einiger Versuchsgruppen nicht das Kriterium der Normalverteilung zu erfüllen, da diese Einschränkung durch die begrenzte Anzahl der Tiere pro Gruppe erklärt wurde, und weil es keinen Grund, eine nicht-normale Verteilung anzunehmen, . Die Homogenität der Varianzen wurde mit dem Levene-Test bewertet. Wenn eine signifikante Wechselwirkung zwischen den Testfaktoren gefunden wurde, Post-hoc-Analyse der Unterschiede zwischen den Gruppen wurde mit dem Tukey HSD (ehrlich signifikante Differenz) Test oder bei der Inhomogenität der Varianzen gemacht, mit der Games-Howell-Test. Alle Daten sind dargestellt als Mittelwert ± SEM, n mit Bezug auf die Anzahl der Ratten in jeder Gruppe. Im Hinblick auf die explorative Charakter der Studie, Wahrscheinlichkeitswerte ≤ 0,1 [11, 12] als statistisch signifikant betrachtet wurden
Ergebnisse | Studie 1:. Auswirkungen von lafutidine auf die c-Fos-Expression im Hirnstamm, intragastric pH-Wert und Schädigung der Magenschleimhaut nach intragastrischen Säurebeladung
Exposure der Ratte Magenschleimhaut HCl (0,25 M) erhöhte die Expression von c-Fos im NTS und AP zu einem wesentlichen Teil (1A, B und 2A, B), aber, bezogen auf Salzlösung, verursachen keine signifikante Schäden der Magenschleimhaut (Danzer et al. 2004). Eine ähnliche Beobachtung wurde in der vorliegenden Studie, da im Durchschnitt weniger als 0,2% der Drüsenschleimhaut präsentiert mit makroskopischen Anomalien, meist Petechien (2C) hergestellt. Während der pH-Wert der verabreichten HCl Lösung intragastrically 0,51 war, war der pH-Wert im Magensaft nach 2 h HCl Herausforderung mehr als 2,5 (2D) gestiegen. Figur 1 Magensäure hervorgerufenen Expression von c-Fos im Nucleus tractus solitarii (NTS) und Area postrema (AP) in einem Ratten mit Vehikel (A) behandelt und eine andere Ratte mit lafutidine (B) behandelt. Lafutidine (30 mg /kg) oder deren Vehikel (0,5% Carboxymethylcellulose) wurde peroral 30 min vor der Magen verabreicht einer exogenen Säure Belastung ausgesetzt wurde (0,25 M HCl). Zwei Stunden nach der HCl c-Fos-positiven Zellen im Hirnstamm wurden durch Immunzytochemie visualisiert.
2 Wirkung von lafutidine Figur (10 und 30 mg /kg), bezogen auf Fahrzeug, von der Anzahl der c-Fos-positiven Zellen in (A) der Nucleus tractus solitarii (NTS) und (B) Area postrema (AP), (C) makroskopische Schädigung der Magenschleimhaut (als ein Prozentsatz der Fläche der glandulären Schleimhaut ausgedrückt) und (D) intragastrischen pH 2 h, gemessen nach Exposition des Magens HCl (0,25 M). Lafutidine oder Fahrzeug wurde durch eine Magensonde 30 Minuten vor der Verabreichung von HCl verabreicht. Die Werte stellen Mittelwerte ± SEM, n = 8, wenn nicht anders angegeben. * P ≤ 0,1, ** P ≤ 0,05 gegenüber Fahrzeug.
Intragastric Verabreichung von lafutidine verfolgt (10 und 30 mg /kg) wurde der Bereich der Magen-Schädigung nominell reduziert, aber dieser Effekt erreichte keine statistische Signifikanz (2C) . Im Gegensatz dazu wurde intragastrischen pH-Wert von jeder Dosis von lafutidine erhöht (2D) in signifikantem Ausmaß wie durch one-way ANOVA ergab (F (2,20) = 11,08, P < 0,001) und der post-hoc Test. Die Säure-evozierte Expression von c-Fos in der NTS (Figuren 1A, B und 2A) durch lafutidine reduziert wurde (10 und 30 mg /kg), und eine Einwegoffenbart ANOVA diese Wirkung statistisch signifikant (F (2,19) = 4,30, p = 0,029). . Im Gegensatz dazu wird die Fähigkeit der lafutidine säure evozierten Expression von c-Fos in der AP zu dämpfen erreichte keine statistische Signifikanz (Figuren 1A, B und 2B)
Studie 2: Wirkungen von lafutidine auf dem zeitlichen Verlauf der Magen Volumen, Säure und Verletzung nach intragastric Säurebeladung
Wie in Studie 1, Herausforderung des Magens mit 0,25 M HCl verursacht kleinere makroskopischen Schäden, die im Durchschnitt bedeckt weniger als 0,2% der Fläche der Drüsenschleimhaut (3A). Das Ausmaß der Schäden nicht signifikant zwischen den Zeitpunkten 0, 60 und 120 Minuten nach HCl in fahrzeug- und Cimetidin behandelten Ratten unterscheiden. In lafutidine behandelten Ratten war jedoch das Ausmaß der Schädigung 120 min nach der Säure Herausforderung deutlich kleiner als unmittelbar nach der Magensäure-Beladung (3A). Figur 3 Wirkung von lafutidine (30 mg /kg) und Cimetidin (10 mg /kg), bezogen auf Fahrzeug, auf (A) makroskopische Schädigung der Magenschleimhaut (als ein Prozentsatz der Fläche der glandulären Schleimhaut ausgedrückt), (B) intragastric Acidität (Säureäquivalente in mmol) und (C) Gewicht des Magengehalt (g /kg Körpergewicht), gemessen sofort (0 min), 60 und 120 min nach der Exposition des Magens HCl (0,25 M). Lafutidine, Cimetidin oder Fahrzeug wurde durch eine Magensonde 30 Minuten vor der Verabreichung von HCl verabreicht. Die Werte stellen Mittel + SEM, n = 8. ** P ≤ 0,05 im Verhältnis zur Zeit 0 min unter der gleichen Behandlung, + P ≤ 0,1, ++ P ≤ 0,05 im Verhältnis zur Zeit 60 min unter der gleichen Behandlung, ° P ≤ 0,1, ° ° P ≤ 0,05 gegenüber des Fahrzeuges zur gleichen Zeitpunkt post-HCl.
die Menge der Säureäquivalente in das Magenlumen fiel deutlich über den 2 h Intervall post-HCl in allen Behandlungsgruppen (3B). Die meisten der Tropfen in Magensäure trat innerhalb von 60 min post-HCl, und es gab keinen signifikanten Unterschied in der Magensäure Ebenen 0 und 60 min post-HCl zwischen den drei Behandlungsgruppen. In lafutidine behandelten Ratten gab es einen weiteren deutlichen Rückgang der Magensäure während der Zeit von 60 bis 120 min post-HCl, eine Veränderung, die nicht in fahrzeug- und Cimetidin behandelten Ratten (3B) zu sehen war. Die Abnahme der Magensäure 120 min post-HCl in Ratten lafutidine behandelt war signifikant stärker ausgeprägt als in mit Vehikel behandelten Tieren (3B). Wenn Magensäure gemessen 60 und 120 min post-HCl sofort gemessen relativ zu der Säure ausgedrückt wurde (0 min) nach dem Laden von Magensäure wurde gefunden, dass der Tropfen der Magensäure 120 min post-HCl in lafutidine behandelten Ratten beobachtet wurde meisten ausgeprägt, verglichen mit in fahrzeug- und Cimetidin behandelten gesehen Ratten (4A). Figur 4: Wirkung von lafutidine (30 mg /kg) und Cimetidin (10 mg /kg), bezogen auf Fahrzeug, auf (A) intragastrischen Säure und (B) Gewicht von Mageninhalt, gemessen 60 und 120 min nach der Exposition des Magens HCl (0,25 M) und als Prozentsatz der jeweiligen Werte, gemessen unmittelbar nach der Magensäure Beladung ausgedrückt (0 min). Lafutidine, Cimetidin oder Fahrzeug wurde durch eine Magensonde 30 Minuten vor der Verabreichung von HCl verabreicht. Die Werte stellen Mittel + SEM, n = 8. ** P ≤ 0,05 im Verhältnis zur Zeit 0 min unter der gleichen Behandlung, + P ≤ 0,1, ++ P ≤ 0,05 im Verhältnis zur Zeit 60 min unter der gleichen Behandlung, ° P ≤ 0,1, ° ° P ≤ 0,05 im Vergleich zu Fahrzeug auf der gleichen Zeitpunkt post-HCl.
das Gewicht des Mageninhalt, bezogen auf das Körpergewicht (g /kg) wurde als ein indirektes Maß für die Magenentleerung berechnet. Wie in 3C gezeigt, fiel der Mageninhalt Gewicht über die Zeit signifikant in allen Behandlungsgruppen und 60 sowie 120 min post-HCl war deutlich geringer als unmittelbar nach der Magensäure-Belastung. Lafutidine- und Cimetidin behandelten Ratten unterschied sich von mit Vehikel behandelten Ratten in zwei Aspekten. Zunächst unmittelbar nach Säure Herausforderung der Mageninhalt Gewicht war signifikant höher in lafutidine- und Cimetidin behandelten Tieren als bei den Kontrollratten (3C). Zweitens, wenn 120 min post-HCl gemessen in lafutidine- und Cimetidin-behandelten Tieren war diese Parameter signifikant niedriger als die 60 min post-HCl gemessen, wohingegen in Vehikel-behandelten Ratten, die die Mageninhalt Gewichte aufgezeichnet 60 und 120 min post-HCl der Zeitverlauf der Magenvolumenänderungen in der unterschiedlichen Behandlung nicht signifikant voneinander (3C) unterschiedlich waren. Seit der ersten Magenvolumen in lafutidine- und Cimetidin behandelten Tieren
höher war als in den Kontrollratten (3C), Gruppen ist schwierig miteinander zu vergleichen, weil es differentiell durch das Anfangsvolumen beeinflusst werden könnten. Aus diesem Grund erholten sich die Mageninhalt 60 und 120 min post-HCl wurden als Prozentsatz des Volumens sofort gemessen ausgedrückt (0 min) nach der Magensäure-Beladung (Abbildung 4). Auf diese Weise wurde festgestellt, dass der Rückgang der Magen-Volumen 120 min post-HCl in lafutidine behandelten Ratten als ausgeprägter war in der Fahrzeug behandelten Ratten (4B).
Diskussion, Die wichtigsten Ergebnisse der aktuellen Studie kann wie folgt zusammengefasst werden. Lafutidine hemmt die vagale afferente Signalisierung einer Magensäure Insult, was die Möglichkeit aufwirft, dass lafutidine Magenschmerzen Säure-induzierte hemmt. Die Fähigkeit von lafutidine intragastrischen Säure zu verringern, nach Exposition mit überschüssigem HCl nicht durch seine antisekretorische Aktivität erklärt werden und wird wahrscheinlich Verdünnung zu reflektieren und /oder in das Duodenum des Säurebelastung zu entleeren.
Vagal afferenten Signalisierung eines Insult Magensäure war ein Standardverfahren in der funktionellen Neuroanatomie visualisiert durch c-Fos-Expression in den Mark brainstem, Stimulus-evozierte Aktivierung von Neuronen zu umreißen [13, 14]. Auf diese Weise ist es bisher, dass die Exposition des Rattenmagen, um überschüssige Konzentrationen von HCl stimuliert Neuronen in Hirnstamm gezeigt [1, 2]. Das Aussehen der c-Fos Protein gegeben wurde 2 h post-HCl, gemessen, dass die Übersetzung von c-fos mRNA in c-Fos Protein erreicht ihr Maximum zwischen 1 und 3 h post-Stimulus [2]. Wir beschränken unsere Analyse auf den Hirnstamm, weil die Belastung der Ratte Magen HCl konnte keine c-fos-mRNA und c-Fos Protein im dorsalen Horn des posterior thorakalen Rückenmark zu induzieren, die über spinal afferenten Neuronen Mageneingang empfängt [1, 2]. Diese Daten und die Fähigkeit der chronischen bilateralen subdiaphragmaler Vagotomie Magensäure-evozierte Expression von c-fos mRNA [1] unterdrücken zeigen, dass Magen-Herausforderung mit HCl auf den Hirnstamm über vagale Afferenzen signalisiert wird.
Die Induktion von c-fos-mRNA und c-Fos Protein im NTS, der zentralen Projektionsbereich des vagalen Afferenzen, ist im Zusammenhang mit dem intragastral verabreicht HCl-Konzentration [1, 2]. Eine vergleichende Analyse der Mark c-Fos-Induktion und Magenschädigung anzeigt, dass die afferenten Signal von Magensäure Herausforderung ist nicht direkt zur Bildung einer manifesten Mukosaverletzung Zusammenhang, da c-Fos-Expression in der NTS durch HCl-Konzentrationen (0,15 hervorgerufen werden - 0,35 M), die wenig histologischen Schaden keine nennenswerten makroskopischen Läsionen hervorrufen und verursachen [1, 2]. Weil supraphysiologischen Konzentrationen von HCl (0,15 M oder höher) erforderlich, c-Fos im NTS induziert, wurde gefolgert, daß nur eine massive Zunahme des Protonengradienten über die Säure-tight Magenschleimhaut Barriere der Lage ist, ausreichend Protonen zu fahren die lamina propria, wo sie vagalen afferenten Nervenfasern entweder direkt oder indirekt über neuroaktiven Faktoren anregen kann in das Gewebe freigesetzt [2]. Dieser Versuchsaufbau ist so gedacht pathophysiologischen Bedingungen zu modellieren, wo Rückdiffusion von luminalen Säure Vagus afferents stimuliert. Die Daten der aktuellen Studie zeigen
, die zuvor verabreichten lafutidine sein magen [5 gefunden intragastrically in Dosen (10 und 30 mg /kg) , 6, 15] reduziert die zuführenden Signalisierung einer Magensäure Beleidigung der NTS. Diese Beobachtung ist mit der Fähigkeit eines anderen Histamin H 2 -Rezeptor-Antagonisten, Cimetidin und der Protonenpumpenhemmer Omeprazol konsistente Magensäure-evozierte Expression von c-Fos in der Ratte brainstem [2] zu reduzieren. Da die Verhaltensreaktionen auf Herausforderung Magensäure zeigen, dass die c-Fos-Expression in der NTS ein Korrelat der Magensäure Nozizeption ist [2, 3] kann vorgeschlagen werden, dass lafutidine eine hemmende Wirkung auf die Magen chemonociception hat. Diese antinociceptive Wirkung ist jedoch unwahrscheinlich, dass durch die antisekretorische Aktivität von lafutidine, dass die Exposition der Magenschleimhaut zu überschüssigem exogenen Säure gegeben erklärt werden, wie beispielsweise 0,25 M HCl wird von selbst durch einen negativen Rückkopplungsmechanismus endogene Säuresekretion unterdrücken [16-19 ]. Als Folge davon müssen zwei alternative Erklärungen in Betracht gezogen werden.
Eine Erklärung, die den Sinn kommt, ist, dass lafutidine zu übernehmen, wie Cimetidin [2], stört Vagus zuführenden Wege, die Säure Herausforderung der Magenschleimhaut mit dem brainstem signalisieren. Lafutidine kann dies tun (1) durch die Stimulierung der vagalen afferenten Neuronen durch Säure Hemmen der Magenschleimhaut eindringende, (2) durch eine Signalleitung in vagalen afferenten Neuronen niederdrücken, (3) durch die synaptische Übertragung zwischen den mittleren Enden der vagalen Afferenzen und NTS Blockierungs Neuronen und /oder (4) durch die Erregbarkeit der Neuronen exprimieren brainstem c-Fos in Antwort auf die Eingabe aus dem Magen zu reduzieren.
Welche dieser Möglichkeiten bezieht sich auf die Wirkungen von lafutidine und Cimetidin Identifizierung des Wirkort erfordert wo H 2-Rezeptor-Antagonisten stören afferenten Vagus-Bahnen. Es wurde zuvor gezeigt, dass vagalen afferenten Neuronen, die an den NTS Magensäure Abfragesignal an die neurotoxische Wirkung von Capsaicin unempfindlich sind [1], und dass die Aktivierung dieses Weges durch Säure ist unabhängig von Prostaglandinen [20]. Der Vagus zuführenden System durch lafutidine gehemmt erscheint somit von der Capsaicin-sensitiven afferenten Neuronen Rückengrundlegend verschieden zu sein, die vermutlich die Fähigkeit der lafutidine zu vermitteln, die Magen-Darm-Schleimhaut vor Verletzungen zu schützen [6-8, 15, 21-23]. Während vagale Afferenzen über eine H 2-Rezeptor-abhängigen Mechanismus, Capsaicin-sensitive spinal Afferenzen durch lafutidine aktiviert oder sensibilisiert zu sein scheinen gehemmt, nicht aber andere H 2 -Rezeptor-Antagonisten, die in der Veröffentlichung des Schutz ergibt Bote Calcitonin gene-related peptide [6-8, 15, 21-23]. Prostaglandine können auch eine Rolle bei der Wirkung von gastroprotektiver lafutidine gegen Stress [23] spielen. Eine weitere Erklärung für die hemmende Wirkung von lafutidine auf der Magensäure-evozierte c-Fos-Expression im Hirnstamm
berücksichtigt, dass die deutlich verringerte lafutidine Acidität des exogenen Magensäure Last. Unabhängig von der Art Mechanismus lafutidine die Beseitigung der Magensäure Last erleichtert, wird es auch den Reiz für Vagus zuführenden Signalisierung an den NTS verringern. Welche der beiden Mechanismen - eine direkte Hemmung des Vagus-zuführenden System oder Reduzierung der Reizstärke - ist mehr relevant kann nicht ohne elektro Charakterisierung der Wirkung von H entschieden werden 2-Rezeptor-Antagonisten auf die Vagus-zuführenden System
Ein direkter. Analyse der Wirkung von gastroprotektiver lafutidine in der aktuellen Studie war außerhalb des Bereichs, weil die Last hier verwendete Magensäure (0,25 M HCl) nur minimal Magen-Schäden induziert, die aus gesehen nach intragastric Verabreichung von Kochsalzlösung nicht zu unterscheiden war [2]. Als Folge blieb Magensäure-induzierte Schädigung unverändert durch lafutidine in Studie 1, obwohl es eine Tendenz zur Unterdrückung der Magen Läsionsbildung war. Analyse des Zeitverlaufs der Wirkung von lafutidine in Studie 2 zeigte jedoch, daß lafutidine, anders als Fahrzeug, die Rückgewinnung von HCl-induzierten Magenschaden beschleunigt.
Die gastroprotektive Potential lafutidine ist ferner vorgesehen, aus seiner Wirkung zu verbessern intragastric pH-Wert und Magensäure nach Exposition mit einer exogenen Säurebelastung zu reduzieren. Da, wie oben diskutiert, wird die endogene Sekretion von Magensäure durch eine exogene Säure Last so hoch wie 0,25 M HCl, die Wirkung von lafutidine unterdrückt Magensäure zu verringern, kann das Ergebnis der Verdünnung, Neutralisation oder Entleeren der Säurebelastung in das Duodenum. Es wurde zuvor festgestellt worden, dass die Exposition des Magens zu supraphysiologischen Konzentrationen von sauren Magenentleerung hemmt, und verursacht Flüssigkeitssekretion [2, 9], die in der aktuellen Studie durch die relativ langsame Abnahme des Magenvolumens über die 2 h-Intervall nach gespiegelt wurde

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