Korrelation af HK6 udtryk med tumor tilbagefald og prognose i fremskreden ventrikelkræft

Korrelation af HK6 udtryk med tumor tilbagefald og prognose i fremskreden mavekræft
Abstract
Baggrund
Menneskelig kallikrein gen 6 (KLK6) er et medlem af den menneskelige kallikrein gen familie (kallikreiner, KLKs). Human kallikrein-relateret peptidase 6 (HK6) er en trypsinlignende serinprotease kodes af KLK6, er blevet rapporteret at være stærkt udtrykt i flere kræftformer, herunder mavecancer. I denne undersøgelse undersøgte vi sammenhængen af ​​HK6 udtryk med klinisk-patologiske egenskaber, tumor tilbagefald og prognose i avanceret gastrisk karcinom efter kurativ resektion.
Metoder
Vi retrospektivt analyseret de kliniske data for 129 sager avancerede mavekræft efter kurativ gastrektomi . Udtrykket af HK6 i avancerede gastric cancer væv sammenlignet med tilstødende noncancerous væv blev undersøgt, og forholdet mellem HK6 udtryk og klinisk-patologiske egenskaber blev evalueret. I yderligere, blev disse patienter fulgt op for at undersøge forholdet mellem HK6 udtryk og overlevelsestiden.
Resultater
positive sats på HK6 udtryk var signifikant højere i fremskreden mavekræft væv, end i tilstødende noncancerous og mavesår væv (36,5%, 33,3%, henholdsvis P < 0,001). Der var en tæt sammenhæng mellem HK6 udtryk og TNM stadie (P = 0,005), vaskulær invasion (P = 0,037) og perineurale invasion (P = 0,035). Desuden patienter med HK6 positiv viste signifikant højere recidiv og dårligere prognose end dem med HK6 negativ. Multivariat analyse viste, at HK6 udtryk var en signifikant uafhængig faktor for tumor tilbagefald og samlet overlevelse.
Konklusion
HK6 er overudtrykt i avancerede gastric cancer væv. Dets kliniske anvendelighed kan anvendes som en ugunstig indikator til at forudsige tumor tilbagefald og prognose for avanceret mavekræft efter drift. Denne undersøgelse viser også, at HK6 kunne være en potentiel terapeutisk mål for mavekræft
virtuelle slides
virtuelle slide (er) for denne artikel kan findes her:. Http:. //Www diagnosticpathol logi. diagnomx. eu /vs /8558403578787206
Nøgleord
Mave neoplasmer Menneskelig kallikrein-relaterede peptidase 6 (HK6) gentagelse Tumor markører Introduktion
mavekræft er en af ​​de mest almindelige maligne lidelser og den anden hyppigste årsag af dødsfald blandt alle kræftformer i kliniske [1], og kirurgisk resektion forbliver i øjeblikket den eneste behandling med helbredende. Selv om operationen, har postoperative kemo-strålebehandling immunterapi, målrettet terapi dem tværfaglige collaborative tilstand forbedret overlevelsesraten for mavecancerpatienter. Stadig den postoperative gentagelse sats for mavekræft er høj, især fremskreden mavekræft (Advanced mavekræft henviser til denne tumor invaderer til muscularis propria eller gennem muscularis til serosa og ekstra serosa). Og tidlig diagnose er vanskelig, de specifikke tumormarkører i påvisning af tumor tilbagefald er endnu ikke blevet opdaget.
Den KLKs består af 15 homologe gener, som koder for secernerede serinproteaser, lokaliseret i tandem på kromosom 19q13.4. De KLKs har lignende genomiske organisationer, og viser signifikant homologi på både nukleotid- og proteinniveau. Det samme gen af ​​familien udtrykkes i forskellige væv, og multiple gener almindeligvis udtrykkes i det samme væv [2].
KLK6 er medlem af KLKs, som koder for humant kallikrein-relaterede peptidase 6 (HK6). Det er en serinprotease, der består af 223 aminosyrer med trypsin-lignende aktivitet. HK6 er blevet klonet uafhængigt af tre grupper, ved anvendelse af en differential display teknik fra primære og metastatiske brystcancercellelinier. Anisowicz et al. [3] isoleres først den fulde længde cDNA af KLK6, opkaldt protease M, som udtrykkes kraftigt på mRNA-niveauet i visse primær brystcancer-cellelinier og i ovariecancer væv og cellelinier. Yamashiro et al. [4] klonet dette samme gen, opkaldt neurosin, fra et cDNA bibliotek fremstillet fra en human colorektal cancer cellelinje (COLO 201). Endelig, Little et al. [5] klonede den identiske cDNA, opkaldt Zyme, fra hjernevæv fra en patient med Alzheimers sygdom, som spillede en vigtig rolle i udviklingen og progressionen af ​​Alzheimers sygdom. Undersøgelse viste, at HK6 var stærkt udtrykt i mavekræft og angivet dårlig prognose [6].
Til vores bedste viden, få studier er blevet undersøgt om den kliniske betydning af HK6 udtryk i fremskreden mavekræft med tilbagefald og prognose. I denne undersøgelse evalueres vi ekspressionen af ​​HK6 i de kirurgiske prøver af fremskreden ventrikelkræft væv, parret tilstødende noncancerous væv og mavesår væv under anvendelse immunohistokemi HRP, og analyseret deres korrelationer med klinisk-patologiske karakteristika og patienter overlevelse at tydeliggøre betydningen af ​​HK6 i avanceret mavekræft efter kurativ kirurgi.
Materialer og metoder
patienter og indsamling af vævsprøver
alt 129 prøver blev opnået fra patienter fra januar 2007 og indtil november 2011, som gennemgik helbredende kirurgi for fremskreden mavekræft i Huizhou Municipal Central Hospital i Guangdong. Resektion prøver blev bekræftet at være primær fremskreden mavekræft ved klinisk patologi, ingen af ​​patienterne modtaget nogen kemoterapi, strålebehandling og andre adjuverende behandling før operation. 52 blokke fra tilstødende noncancerous gastriske væv (mindst 5 cm fra cancer margin) blev opnået fra patienterne. Desuden 36 prøver opnået fra patienter, som gennemgik kirurgi og blev bekræftet at være mavesår anvendes som kontrol i samme periode.
Patienter , klinisk-patologiske karakteristika såsom køn og alder, tumor placering, størrelse, differentiering, T fase, lymfeknude metastaser, TNM stadie og om gentagelse blev retrospektivt revideret. Den gennemsnitlige alder var 60 år (interval: 28 ~ 80 år) med 56 kvinder og 73 mænd. Alle patienter blev iscenesat baseret på TNM klassifikation af amerikanske Blandede Cancer (AJCC, kriterier 7. udgave, 2010) [7] .Tumor placering i gastrisk fundus /mavemunden var 21 tilfælde, gastrisk krop 32 tilfælde, gastrisk antrum 76 sager . Tumor størrelse blev større end 5 cm i 70 sager, og mindre end 5 cm i 59 sager, 16 sager klassificeret som godt eller moderat differentieret (herunder rørformede og papillær adenocarcinom), 113 sager så dårligt differentierede (dårligt differentieret adenocarcinom og andre celletyper sådanne som mucinøs adenocarcinom og signetring celle karcinom og så videre), 19 tilfælde var på T2, 55 sager var på T3 og T4 hhv. N0 /N1 blev fundet i 49 tilfælde, N2 /N3 i 80 sager, 43 sager withi /II etape, 86 tilfælde med III /IV etape, blev skriftligt informeret samtykke opnået fra alle patienter eller deres familier. Undersøgelsen blev godkendt af Institut , s etiske komité for Huizhou Municipal Central Hospital. Alle prøver blev fikseret i 10% neutraliserede maldehyde, indlejret i paraffin, skåret i 3 um tykke snit, og monteret på objektglas til immunhistokemi-analyse.
Immunhistokemi
Immunhistokemi blev udført under anvendelse af peberrodsperoxidase totrinsfremgangsmåde , som undgår interferens af endogen biotin, og dermed reducere den ikke-specifikke falsk-positive baggrundsfarvning. Immunhistokemi blev udført i otte trin i henhold til instruktionerne: 1 blev paraffinsnit afparaffineret i xylen, rehydreret gennem gradient ethanol. 2, blev antigen-genvinding udført i Tris-EDTA-buffer (pH 9,0) med en trykkoger. 3, Block den endogene peroxidase med 3% hydrogenperoxid. 4 og derefter inkuberet med det oprensede kanin-polyklonale antistof (AP6325a, Abgent, San Diego, USA), blev antigen-genvinding og fortynding bestemt ved indledende forsøg. 5, blev Påvisning af HK6 immunkompleks inkuberet med PV9000 kits (Golden bro Biotechnology Co, Ltd, Beijing, Kina). 6, blev farvet med diaminobenzidin substrat chromogenopløsning (Goldenbridge Biotechnology Co., Ltd.), indtil den optimale farvning opnået. 7, blev Afsnittene modfarvet med hæmatoxylin, differentieret, returnerede blå. 8, Endelig dehydreret gennem gradient alkohol, ryddet i xylen, neutral tyggegummi monteret. Så observeret under det optiske mikroskop.
Immunhistokemisk farvning score
Alle objektglas blev vurderet separat af to højtstående patologer uden forudgående kendskab til klinisk-patologiske parametre, den endelige score for deres gennemsnit. For evaluering af HK6 immunhistokemisk farvning, blev procentdelen af ​​positive celler vurderet kvantitativt 10 områder inden tumoren blev udvalgt tilfældigt, udtryk i 1000 cancerceller (100 celler pr felt) blev evalueret ved hjælp af en high-power magnifcation (400 ×) og en gennemsnitlig blev evalueret kvantitativt og scoret som: 0 for procentdelen af ​​positive celler ≤ 10%, 1 for farvning af 11 ~ 25%, 2 til farvning af 26 ~ 50%, og 3 for farvning af 51 ~ 75%, 4 til farvning af > 75% af cellerne undersøgte [6] farvningsintensitet var henholdsvis gradueret semikvantitativt som følger: 0 noget signal, 1 svag, 2 moderat, og 3 stærk ifølge de foregående litteratur [8], en total farvning score på 4 eller mere blev klassificeret som immunhistokemisk positiv.
Opfølgning
Alle disse patienter fik fluoruracil adjuverende kemoterapi efter operationen. Som en regelmæssig opfølgning, blev alle patienterne kontrolleres hver 3. måned i de første 2 år og hver 6. måned i tredje til femte år, en gang årligt derefter. Medicinsk oparbejdning bestod af historie og fysisk undersøgelse, hæmatologi og biokemiske tests, herunder serum CEA, CA19-9 og CA72-4, og billedbehandling herunder bryst radiografi, barium måltid, abdominal ultralydsundersøgelse (US), computertomografi (CT), og endoskopi ifølge den kliniske situation. Opfølgningen tid havde operationsdagen som udgangspunkt, blev registreret tidspunktet for tumor tilbagefald og død, disse to punkter blev evalueret for prognostisk analyse. Hvis opfølgninger var ufuldstændige, blev patienterne eller deres familier kontaktet telefonisk, fristen for opfølgning var Maj 2012, medianen opfølgningsperiode efter operationen var 25 måneder (interval 4-64 måneder).
Statistisk analyse
Statistisk analyse blev udført ved hjælp af SPSS 13.0, blev forholdet mellem HK6 udtryk og patientens klinisk-patologiske karakteristika analyseres med Chi-square (χ 2) og Fishers eksakte test. For overlevelse analyse blev to slutpunkter undersøgt: gentagelse overlevelse (RFS) og samlet overlevelse (OS) hhv. RFS defineres som tidsintervallet mellem datoen for operationen og datoen for første opdaget tilbagefald eller metastaser, og OS er defineret som tidsintervallet mellem datoen for operationen og datoen for død eller datoen for sidste opfølgning for dem der var i live ved slutningen af ​​studiet. Kaplan-Meier-modellen blev anvendt til at undersøge overlevelsen mellem patienter positive og negative HK6 ekspression. Betydningen af ​​forskellen i overlevelseskurverne blev bestemt med log-rank test. Variabler opnår et signifikansniveau på univariate analyse blev efterfølgende indført i en fremadrettet LR proportional risikoanalyse (Cox model) for at identificere de variabler uafhængigt forbundet med overlevelse, blev p-værdi på 0,05 (eller mindre) betragtes som statistisk signifikant.
resultater
HK6 ekspression fremskreden mavekræft væv
forskellige proteiner blev udtrykt i forskellige placering af cellen, såsom cytoplasma, membran, nuklear [9, 10] blev .hK6 positiv farvning hovedsagelig udtrykkes i cytoplasmaet af gastrisk cancer celler som brun eller mørkebrun granulat (figur 1) også blev observeret i de tilstødende noncancerous og mavesår epitelceller ved immunhistokemi. Den positive sats på KLK6 udtryk i mavekræft væv var 77,5% (100/129), betydeligt højere end i tilstødende noncancerous væv (36,5%) og mavesår (33,3%) væv henholdsvis (P < 0,001; tabel 1). Figur 1 Immunohistokemisk farvning af HK6 i fremskreden gastrisk karcinom (A, B) og tilstødende noncancerous (C, D) væv. En HK6 positivt udtryk; B HK6 negative udtryk; C HK6 positivt udtryk; D HK6 negative udtryk.
Tabel 1 udtryk for HK6 i tilstødende noncancerous, mavesår og avancerede mavekræft væv
Group
sager
Positiv
Positiv rate

χ2-value

P-value

GCT
129
100
77.5%
39.201
<0.001a
ANT
52
19
36.5%
0.096
0.757b
GUT
36
12
33.3%
Forkortelse: ANT
, Tilstødende noncancerous væv; GUT
, mavesår væv; GCT mavekræft når GCT forhold til ANT og GUT, P < 0,001, ANT sammenlignet med GUT, P = 0,757.
HK6 ekspression og klinisk-patologiske karakteristika
Korrelationen mellem HK6 ekspressionsniveauer og klinisk-patologiske karakteristika er som opsummeret i tabel 2, HK6 ekspression korrelerede signifikant med TNM fase (P = 0,005) , vaskulær invasion (P = 0,037) og perineural invasion (P = 0,035). HK6 positive tumorer oftere havde senere tidspunkt, en øget forekomst af vaskulære og perineural invasion, på den anden side blev der ikke observeret nogen statistisk signifikant forskel mellem dets ekspression og køn, alder, tumorstedet, størrelse, differentiering, T stadium, lymfe Lodes metastase eller margin (P > 0,05) .table 2 forholdet mellem KLK6 udtryk, tumor tilbagefald og klinisk-patologiske karakteristika
Kendetegn

Cases
Positiv
Positiv kurs

χ2-værdi
P-værdi
Køn
1,214
0,271
Female
56
46
82,1%
Mand
73
54
74,0%
Age
0,067
0,796
< 60 år
65
51
78,5%
≥ 60 år
64
49
76,6%
Tumor websted
3,806
0,149
fundus /Cardia
21
19
90,5%
krop
32
26
81.3%
antrum pylorus
76
55
72,4%
Tumor størrelse
0,540
0,462
< 5 cm
59
44
74,6%
≥5 cm
70
56
80,0%
Differentiering
0,004
0,951
Tja /moderat differentierede 16
16
13
81,3%
Dårligt differentieret
113
87
77,0%
T etape
1,486
0,476
T2
19
13
68,4%
T3
55
45
81,8%
T4
55
42
76,4%
Lymfeknude
1,682
0,195
n0 /N1
49
35
71,4%
N2 /N3
80
65
81.3 %
Vaskulær invasion
4.370
0,037
Fraværende
81
58
71,6%
Præsenter
48
42
87,5%
perineurale invasion
4,439
0,035
Fraværende
76
54
71,1%
Præsenter
53
46
86,8%
Margin
0,211
0,646
Fraværende
110
84
76,4%
Præsenter
19
16
84,2%
TNM stadie
8,029
0.005
I + II
43
27
62,8%
III + IV
86
73
84,9%
HK6 udtryk association med tumor tilbagefald og fattige samlet overlevelse
Som opfølgning sluttede, havde 68 (52,7%) patienter døde, alt 61 patienter døde på grund af tumor progression og 7 på grund af andre årsager. I alt var der 69 (53,5%) patienter udviklede tumor recidiv, 31 af dem udviklet som loco-regional tilbagefald, 19 som fjernmetastaser (11 i lever, 3 i lungerne, og 5 i knogle), 14 som peritoneal gentagelse og 5 som rest; Alle men otte patienter med tumor recidiv døde af det.
Kaplan-Meier overlevelseskurver angivne patienter med positiv HK6 udtryk var mere tilbøjelige til at have både en kortere RFS (p = 0,002, figur 2A) i forhold til patienter med negativ HK6 udtryk. Univariate analyse udtryk med hensyn til RFS, ved hjælp af Cox proportional hazard regressionsmodellen, viste, at HK6 udtryk TNM stadie, tumorstørrelse, T scenen, lymfeknuder lodes, margin og blev påvirke faktorer for RFS, når HK6 udtryk sammen med andre faktorer blev undersøgt i en multivariat model, TNM stadie, HK6 udtryk, tumorstørrelse, margin var uafhængige prædiktorer for tumor tilbagefald (tabel 3), hvilket indikerer HK6 positive patienter er dobbelt mere tilbøjelige til at have en gentagelse end HK6 negative. Figur 2 Kaplan-Meier-overlevelseskurver viser sandsynligheden for at være fri for tilbagefald (A) og samlet overlevelse (B) hos patienter med HK6-negative og HK6-positivt udtryk. Forkortelser:. 95% CI 95% konfidensinterval, HR hazard ratio, OS samlet overlevelse, RFS gentagelse overlevelse
Tabel 3 univariate og multivariate analyse af HK6 og andre klinisk-patologiske karakteristika med hensyn til RFS i fremskreden mavekræft

univariate
Multivariate
Variabel
HR
95% CI
P
HR

95% CI
P
Køn F /M
1,05
0,65 -1 0,69
0,86 -
-
-
Age < 60 /≥60 år
1,30
0.81- 2,08
0,29 -
- -
Tumor websted
- -
0,58
- -
-
krop /fundus
0,68
0,31-1,49
0.33 -
- -
antrum /fundus, krop
0.88
0,45 -1,71
0.70 -
- -
Tumor størrelse < 5 /≥5 cm
2,05
1,25-3,37
0.005
1,80
1,07-3,04
0,027 Turklasse Nå /Dårligt
0,88
0,40 -1,93
0.75 -
- -
T etape -
-
0.10 -
- -
T3 /T2
2,21
0,92-5,30
0,077 -
-
0,58
T4 /T2, T3
2,60
1,08 -6,26
0,032
- -
0,75
N etape N0,N1/N2,N3
2.28
1.34-3.87
0.002
–
–
0.83
Vascular−/+
0.91
0.49-1.70
0.77
–
–
–
Perineural−/+
1.27
0.71-2.25
0.42
–
–
–
Margin−/+
2.42
1.41-4.15
0.001
2.49
1.44– 4.31
0.001
TNM fase I, II /III, IV
3,10
1,69-5,68
0.000
2,25
1,18 -4,30
0,014
hK6- /+
2,77
1,41-5,47
0.003
2,09
1.04 -4.
230,039
Ifølge overlevelsesanalyse viste Kaplan-Meier overlevelsesanalyse, at patienter med positiv HK6 udtryk har lavere OS (P = 0,002, figur 2B), univariat analyse viste, at positive HK6 udtryk, TNM stadie, tumorstørrelse, lymfeknude, T scenen, og margin er vigtige faktorer, der påvirker OS satser, når disse faktorer var involveret i en multivariat analyse (tabel 4), TNM stadie og HK6 var uafhængige prognostiske faktorer af OS.Table 4 univariate og multivariate analyse af prognostiske faktorer af OS i fremskreden mavekræft
univariate
multivariate

Variabel
HR
95% CI
P
HR
95% CI
P
Køn F /M
1,35
0,80-2,25
0,26 -
- -
Age < 60 /≥60 år
1,59
0,95-2,67
0,08 -
- -
Tumor websted
- -
0,17
- -
-
krop /fundus
0,47
0,20-1,09
0,078 -
- -
antrum /fundus, krop
0,57
0,29 -1,13
0.11 -
- -
Tumor størrelse < 5 /≥5 cm
1,72
1,02-2,90
0,043 -
-
0,57 Turklasse Nå /Dårligt
0,57
0,26-1,27
0.17 -
- -
T etape -
-
0,004 -
-
0,019
T3 /T2
1,60
0,66-3,89
0,30
0,83
0,33-2,12
0,70
T4 /T2, T3
3,36
1,38-8,15
0,007
1,86
0,73-4,70
0,19
N etape N0,N1/N2,N3
2.87
1.57–5.21
0.001
–
–
0.12
Vascular−/+
1.23
0.65-2.34
0.52
–
–
–
Perineural−/+
1.32
0.71-2.43
0.38
–
–
–
Margin−/+
1.29
0.72-2.31
0.40
–
–
–
TNM fase I, II /III, IV
4,05
2.04- 8.03
<0.001
2.99
1.45–6.16
0.003
hK6−/+
2.88
1.40-5.92
0.004
2.66
1.25–5.63
0.011
Multivariat analyse viste, at HK6 udtryk var et af de uafhængige prognostiske faktorer af samlet overlevelse for patienter med mavekræft siden TNM stadie (P = 0,011).
Diskussion
undersøgelser konstateret, at HK6 blev udskilt til den ekstracellulære matrix og involveret i nedbrydningen af ​​matrixproteiner, herunder fibronectin, laminin, vitronectin, kollagen og induceret E-cadherin ektodomæne udgydelse, reducerede celle-celle-adhæsion [11, 12] og førte til keratinocyt at fremme tumor proliferation, migration, invasion og metastase [13 ]. Det vides, at den menneskelige HK6 er er involveret i flere maligniteter, har flere forskere rapporteret, at HK6 er overudtrykt i ovariecancer [14], uterin serøs papillær kræft [15], kolorektal cancer [16], mavekræft [6] og kræft i spiserøret [17], men underexpressed i spytkirtel tumorer [18] og renalcellecarcinom [19], som afhænger af de typer tumor væv og mikromiljø [20]. HK6 fremmer væksten af ​​de fleste tumorer. Men når HK6 blev overudtrykt i brystcancer MDA-MB-231-celler blev celler resulterede i markant vending af deres malign fænotype, manifesteret ved lavere opformeringsrater og mætningstæthed, mærket inhibering af forankringsuafhængig vækst, nedsat cellemotilitet og evne til at danne tumorer. Mekanismen kan være, at HK6 spille en beskyttende rolle mod tumorudvikling medieret ved inhibering af epitel-til-mesenchymal overgang [21].
Hidtil er det blevet vist, at KLK6 er opreguleret i sådanne gastrointestinale maligniteter såsom pancreas og tyktarmskræft [22]. Ogawa et al. [16] rapporterede, at KLK6 mRNA-ekspression var betydeligt højere i kræft end i tilsvarende noncancerous colorektal væv. Kim et al. [23] gennemgik KLK6 mRNA og dets tilsvarende protein niveauer ved hjælp af RT-PCR og ELISA, fandt, at KLK6 mRNA blev opreguleret med ca. 8 gange, sammenlignet med nontumor regioner, og serum HK6 niveauer fra mavecancerpatienter var 1,7 gange til sunde individer. Når inaktivering KLK6 med lille interferens RNA (siRNA), cellulær invasionsevne faldt med 45%. Han opdagede også, at KLK6 nedbryde ekstracellulære matrixproteiner til tumorindtrængen og metastase. Exogen overekspression af KLK6 førte til nedsat aktivitet af E-cadherin promotoren. Desuden er vores undersøgelse viste den positive rate af HK6 ekspression i fremskreden gastrisk cancer væv var signifikant højere end den tilstødende noncancerous og mavesår væv. Der var imidlertid ingen forskel mellem tilstødende noncancerous væv og mavesår væv. Disse resultater antyder, at HK6 ekspression kan spille en vigtig rolle i gastrisk cancerudvikling.
Ogawa et al. [16] rapporterede, at høje KLK6 mRNA ekspressionsniveauer i kolorektal cancer væv blev korreleret med serøse invasion, levermetastaser, avanceret Duke etape, men begrænsede rapporter foreslog forholdet mellem KLK6 udtryk og klinisk-patologiske karakteristika. Nagahara et al. [6] rapporterede, at overekspression af KLK6 var signifikant associeret med TNM stadie, lymfatisk invasion for patienter med gastrisk cancer. I den aktuelle undersøgelse, for TNM fase, den positive sats på HK6 ekspression var betydeligt højere i senere stadium (stadium III og trin IV: 84.9%) end i tidligere stadium (stadium I og stag II: 62,8%). Forskellen var statistisk signifikant, hvilket viser, at HK6 positivt udtryk var stærkt korreleret med TNM stadie i fremskreden mavekræft. Vores undersøgelse viste også, at der var en sammenhæng mellem HK6 positivt udtryk med vaskulær invasion, som var i overensstemmelse med Nagahara s [6] rapport. Desuden blev det rapporteret, at HK6 positivt udtryk var forbundet med perineural invasion, som ikke er undersøgt i Nagahara s [6] rapport, men det kræver yderligere undersøgelse for at verificere. Vi fandt ingen sammenhæng mellem HK6 udtryk i avanceret mavekræft og patientens køn, alder, tumor site, størrelse, differentiering, T scenen, lymfe lode metastase, hvilket var i overensstemmelse med tidligere resultater [6].
En masser af beviser har vist, at flere medlemmer af KLKs er potentielle kræft biomarkører [24]. Den mest kendte og brugte KLKs er KLK3. KLK3 genet koder prostata-specifikt antigen (hK3), er blevet godkendt af det amerikanske FDA som specifik markør for prostatakræft, som er meget brugt til screening, diagnosticering, bestemme effekten og vurdere prognosen for prostatakræft [25]. KLK2 protein (hK2), betragtes også som en sekundær markør for prostatacancer. Nylige rapporter har indikeret, at HK6 høj ekspression i ovariecancer [26], tyktarmskræft [16, 27], pancreascancer [28], ikke-småcellet lungecancer [29] og intrakranielle tumorer [30] kunne være en uafhængig prognostisk faktor , hvilket tyder på, at HK6 kan være en prognostisk markør for disse tumorer.
Undersøgelser har antydet, at høj KLK6 ekspression blev tæt forbundet med kortere samlet og tilbagefald overlevelse for ovariecancer [31] og kolon kræftpatienter [32]. Det samme resultat blev bekræftet i fremskreden mavekræft i vores undersøgelse. Alle disse antyder, at KLK6 kan være en potentiel biomarkør forudsige tumor tilbagefald og terapeutisk mål for dem. Mange undersøgelser viste konsekvent at TNM fase var den mest pålidelige prognostiske indikator for gastrointestinale neoplasmer såsom gastrisk karcinom, gastrointestinale lymfomer patienter [9, 10, 33, 34], mens andre egenskaber, var der ingen aftale. Jin et al. [33] fundet Ezrin overekspression steget betydeligt i lymfeknude metastaser, Demirag et al. [10] viste PKP3 udtryk og dårlig prognose syntes at korrelere med lymfeknude nummer. Mens der i den foreliggende undersøgelse, vi fandt ikke nogen sammenhæng mellem lymfeknude metastaser og prognose i multivariat analyse.
Med udviklingen af ​​molekylære og proteomics i mavekræft, har mange proteiner været de potentielle markører for tidlig diagnose, prognose og terapeutisk mål for gastrisk karcinom, blandt dem c-Met [9], pKP2 og PKP3 [10], Ezrin [33], er den kendte ones.Moreover, andre molekylære biomarkører er i øjeblikket i studiet.
få tidligere undersøgelser undersøgt clinicopathologic betydningen af ​​HK6 udtryk i avancerede gastric cancer væv. Således i denne undersøgelse undersøgte vi korrelationen mellem HK6 udtryk med tumortilbagevenden og prognose ved fremskreden gastrisk cancer. Resultaterne tyder på, at ekspressionen af ​​HK6 var signifikant associeret med TNM stadie, vaskulær invasion, perineurale invasion og dårlig prognose for patienter med fremskreden mavekræft. Desuden fandt vi, at patienter med positiv HK6 udtryk var mere tilbøjelige til at have tilbagefald, og lavere RFS og OS satser sammenlignet med dem med negativ HK6 udtryk. Multivariat analyse viste, at HK6 udtryk var en betydelig uafhængig prognostisk faktor RFS og OS hos patienter med fremskreden mavekræft. Vores resultater støtter, at HK6 kan anvendes som en potentiel biomarkør og terapeutisk mål for mavekræft. Endvidere kan positivt udtryk for HK6 i avancerede gastric cancer væv give værdifulde oplysninger til at forstå den biologiske opførsel af mavekræft.
Afslutningsvis viste vores undersøgelse, at HK6 udtryk i fremskreden mavekræft signifikant korreleret med TNM stadie, vaskulær invasion og perineurale invasion samt RFS og OS satser. Dette er en sjælden rapport til evaluering HK6 udtryk og dets overensstemmelse med tumor tilbagefald og dårlig prognose i fremskreden mavekræft. Yderligere undersøgelser vil være nødvendige for at undersøge mulighederne hvorvidt HK6 kan anvendes som et værdifuldt biomarkør forudsige tumor tilbagefald og en terapeutisk mål for mavecancer ved anvendelse af serumprøver fra patienter. Og vi vil også
undersøge KLK6 på mRNA niveau fra væv prøver næste trin. Erklæringer
Tak
Forfatterne vil gerne takke Wenli Zhao, Ming Zhong, Yingxia Liu (Patologisk Institut, Huizhou først Hospital, blev Guangdong-provinsen) og Qingxu Yang, Tongtong Wu (Patologisk institut, Huizhou Municipal Central Hospital, Guangdong-provinsen) som hjælp til den optiske mikroskopisk observation og vævssnit.
Finansiering
undersøgelse finansieret af Natural Science Foundation i Guangdong-provinsen, Kina, (GDNSF, no.1051600101000001).
Forfattere 'oprindelige indsendt filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 13000_2012_773_MOESM1_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 1 13000_2012_773_MOESM2_ESM.tiff Forfatternes oprindelige fil til figur 2 konkurrerende interesser
Forfatterne erklærede, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.
Forfattere bidrag
XL og XY gennemførte patologisk undersøgelse, HX og JL analyzied data, YH udarbejdet manuskriptet. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Promotor methylering og ekspressionen af ​​TIMP3 genet i gastrisk cancer
• Gastrobeskyttende virkning af johannesbrød (johannesbrød L.) mod ethanol-induceret oxidativt stress i rat